本发明涉及杏鲍菇菌种发酵技术领域，具体涉及一种高活性杏鲍菇液体菌种的发酵方法。
背景技术：
杏鲍菇是集食用、药用、食疗于一体的珍稀食用菌新品种。杏鲍菇菌肉肥厚，质地脆嫩，特别是菌柄组织致密、结实、乳白，可全部食用，且菌柄比菌盖更脆滑、爽口，被称为“平菇王”、“干贝菇”，具有愉快的杏仁香味及如鲍鱼的口感，适合保鲜、加工。
目前国内外杏鲍菇栽培以固体菌种为主，而液体菌种相对于固体菌种具有生产周期短、菌龄一致、出菇齐、便于管理、菌种成本低、接种方便且快速等优点，有利于食用菌生产的规模化、工厂化。近年来由于工厂化栽培技术的迅猛发展，为缩短菌种制备周期，提高菌种质量和生产效率，国内外生产厂家研究开发液体菌种用于替代目前杏鲍菇生产中普遍使用的固体菌种，并在实际生产中开始应用。
目前，杏鲍菇液体菌种的发酵方法是由通用培养基以摇瓶接种载无菌空气发酵培养，种子罐培养周期为6天，单个种子罐循环需要7-8周天。种子罐循环周期较长、需求量大，增加了种子罐的购买成本，且种子罐使用时间过长，还会增加潜在的污染概率，不利于菌种的生长。
技术实现要素：
针对以上问题，本发明提供了一种高活性杏鲍菇液体菌种的发酵方法，该发酵方法工艺简单、易于操作，相较现有技术大大缩短了种子罐的循环周期，减少了种子罐的需求量，同时降低了种子罐被杂菌污染的风险，且制得的液体菌种具有较高的活性。
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：
一种高活性杏鲍菇液体菌种的发酵方法，包括以下步骤：
s1：将保存的杏鲍菇斜面菌种接种于平板培养基活化，培养瓶选择生长速度为6-7mm/d的菌丝做为母种，接于摇瓶，静置48h转至恒温摇床培养72h得到摇瓶菌种，接入装液量为100l的150l种子罐中，并在24.5℃下培养48-52h；
s2：将发酵培养液1000l倒入1300l的发酵罐中121℃灭菌45分钟，接着再通过内置冷却系统冷却至25℃，将种子罐菌种以10%的接种量接种于发酵罐中，加载无菌空气系统，通气量为7l/min，恒温培养36小时即可得到高活性杏鲍菇液体菌种。
优选的，s1中所述种子罐与摇瓶中培养基组成为：玉米粉8-10%，白糖6-8%，葡萄糖2-3%，豆粕1-2%，磷酸二氢钾0.5-0.8%，硫酸镁0.2-0.3%，消泡剂0.05-0.08%，活性剂0.01-0.02%，vb11片/10l，余量为水。
优选的，s2中所述发酵培养液组成为：玉米粉10-12%，白糖7-9%，葡萄糖3-5%，豆粕2-3%，磷酸二氢钾0.5-0.8%，硫酸镁0.2-0.5%，消泡剂0.06-0.09%，活性剂0.03-0.05%，vb11片/10l，余量为水。
优选的，所述活性剂的制备方法，包括以下步骤：
a）将杏鲍菇渣1000g、杏仁500g、牛黄450g、鲜姜450g、金银花300g一同加入到水中研磨成粉液；
b）向粉液中加入醋酸调节ph至5，接着按酶-底质量比1：36加入复合酶溶液，并于45℃下酶解48h，酶解液高温灭酶并过滤，所得滤液真空干燥，制得上述活性剂。
优选的，步骤a）中粉液的固液比为1：3。
优选的，步骤b）中复合酶溶液的浓度为0.045-0.050umol/l，且所述复合酶溶液是由葡萄糖酶与果胶酶解按浓度比1：1.5混合而成。
优选的，步骤b）中滤液在真空度0.092-0.100mpa，45-50℃下进行干燥。
与现有技术相比较，本发明的有益效果如下：
1）本发明提供的发酵工艺简单、易于操作，相较现有技术生产周期缩短约30%，大大缩短了种子罐的循环周期，减少了种子罐的需求量，同时降低了种子罐被杂菌污染的概率，具有较好的应用前景。
2）本发明通过合理的工艺设置与培养基组分的选择，缩短了菌种的萌发时间，有效提高了杏鲍菇液体菌种的密度与菌丝干重，增强了菌株对后续栽培环境的适应性，提升了杏鲍菇液体菌种的抗应激性、抗病性和免疫能力。
3）本发明培养基中活性剂的加入能够有效激发杏鲍菇菌种的增殖能力与增殖密度，加速了菌种的萌发，提升了菌种的活性；活性剂中中药组分的科学配伍能够显著提升菌种的抗应激性、抗病性与免疫能力；活性剂制备过程中通过酶解实现了药物中有效物质的充分提取，真空低温干燥方式能够避免活性剂中有效成分被破坏，保证了活性剂的功效。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
一种高活性杏鲍菇液体菌种的发酵方法，包括以下步骤：
s1：将保存的杏鲍菇斜面菌种接种于平板培养基活化，培养瓶选择生长速度为6-7mm/d的菌丝做为母种，接于摇瓶，静置48h转至恒温摇床培养72h得到摇瓶菌种，接入装液量为100l的150l种子罐中，并在24.5℃下培养48-52h；
s2：将发酵培养液1000l倒入1300l的发酵罐中121℃灭菌45分钟，接着再通过内置冷却系统冷却至25℃，将种子罐菌种以10%的接种量接种于发酵罐中，加载无菌空气系统，通气量为7l/min，恒温培养36小时即可得到高活性杏鲍菇液体菌种。
s1中种子罐与摇瓶中培养基组成为：玉米粉8%，白糖8%，葡萄糖3%，豆粕2%，磷酸二氢钾0.8%，硫酸镁0.3%，消泡剂0.08%，活性剂0.01%，vb11片（0.2g）/10l，余量为水。
s2中发酵培养液组成为：玉米粉11%，白糖9%，葡萄糖3%，豆粕3%，磷酸二氢钾0.7%，硫酸镁0.4%，消泡剂0.09%，活性剂0.04%，vb11片（0.2g）/10l，余量为水。
活性剂的制备方法，包括以下步骤：
a）将杏鲍菇渣1000g、杏仁500g、牛黄450g、鲜姜450g、金银花300g一同加入到水中研磨成粉液，其中粉液的固液比为1：3；
b）向粉液中加入醋酸调节ph至5，接着按酶-底质量比1：36加入复合酶溶液，并于45℃下酶解48h，酶解液高温灭酶并过滤，所得滤液在真空度0.092-0.100mpa，45-50℃下进行干燥，制得上述活性剂。
步骤b）中复合酶溶液的浓度为0.045-0.050umol/l，且复合酶溶液是由葡萄糖酶与果胶酶解按浓度比1：1.5混合而成。
实施例2：
一种高活性杏鲍菇液体菌种的发酵方法，包括以下步骤：
s1：将保存的杏鲍菇斜面菌种接种于平板培养基活化，培养瓶选择生长速度为6-7mm/d的菌丝做为母种，接于摇瓶，静置48h转至恒温摇床培养72h得到摇瓶菌种，接入装液量为100l的150l种子罐中，并在24.5℃下培养48-52h；
s2：将发酵培养液1000l倒入1300l的发酵罐中121℃灭菌45分钟，接着再通过内置冷却系统冷却至25℃，将种子罐菌种以10%的接种量接种于发酵罐中，加载无菌空气系统，通气量为7l/min，恒温培养36小时即可得到高活性杏鲍菇液体菌种。
s1中种子罐与摇瓶中培养基组成为：玉米粉9%，白糖7%，葡萄糖2%，豆粕1%，磷酸二氢钾0.6%，硫酸镁0.2%，消泡剂0.06%，活性剂0.02%，vb11片（0.2g）/10l，余量为水。
s2中发酵培养液组成为：玉米粉12%，白糖8%，葡萄糖4%，豆粕2%，磷酸二氢钾0.6%，硫酸镁0.5%，消泡剂0.06%，活性剂0.05%，vb11片（0.2g）/10l，余量为水。
活性剂的制备方法，包括以下步骤：
a）将杏鲍菇渣1000g、杏仁500g、牛黄450g、鲜姜450g、金银花300g一同加入到水中研磨成粉液，其中粉液的固液比为1：3；
b）向粉液中加入醋酸调节ph至5，接着按酶-底质量比1：36加入复合酶溶液，并于45℃下酶解48h，酶解液高温灭酶并过滤，所得滤液在真空度0.092-0.100mpa，45-50℃下进行干燥，制得上述活性剂。
步骤b）中复合酶溶液的浓度为0.045-0.050umol/l，且复合酶溶液是由葡萄糖酶与果胶酶解按浓度比1：1.5混合而成。
实施例3：
一种高活性杏鲍菇液体菌种的发酵方法，包括以下步骤：
s1：将保存的杏鲍菇斜面菌种接种于平板培养基活化，培养瓶选择生长速度为6-7mm/d的菌丝做为母种，接于摇瓶，静置48h转至恒温摇床培养72h得到摇瓶菌种，接入装液量为100l的150l种子罐中，并在24.5℃下培养48-52h；
s2：将发酵培养液1000l倒入1300l的发酵罐中121℃灭菌45分钟，接着再通过内置冷却系统冷却至25℃，将种子罐菌种以10%的接种量接种于发酵罐中，加载无菌空气系统，通气量为7l/min，恒温培养36小时即可得到高活性杏鲍菇液体菌种。
s1中种子罐与摇瓶中培养基组成为：玉米粉10%，白糖6%，葡萄糖2%，豆粕1%，磷酸二氢钾0.5%，硫酸镁0.2%，消泡剂0.05%，活性剂0.01%，vb11片（0.2g）/10l，余量为水。
s2中发酵培养液组成为：玉米粉10%，白糖7%，葡萄糖3%，豆粕2%，磷酸二氢钾0.5%，硫酸镁0.2%，消泡剂0.06%，活性剂0.03%，vb11片（0.2g）/10l，余量为水。
活性剂的制备方法，包括以下步骤：
a）将杏鲍菇渣1000g、杏仁500g、牛黄450g、鲜姜450g、金银花300g一同加入到水中研磨成粉液，其中粉液的固液比为1：3；
b）向粉液中加入醋酸调节ph至5，接着按酶-底质量比1：36加入复合酶溶液，并于45℃下酶解48h，酶解液高温灭酶并过滤，所得滤液在真空度0.092-0.100mpa，45-50℃下进行干燥，制得上述活性剂。
步骤b）中复合酶溶液的浓度为0.045-0.050umol/l，且复合酶溶液是由葡萄糖酶与果胶酶解按浓度比1：1.5混合而成。
实施例4：
一种高活性杏鲍菇液体菌种的发酵方法，包括以下步骤：
s1：将保存的杏鲍菇斜面菌种接种于平板培养基活化，培养瓶选择生长速度为6-7mm/d的菌丝做为母种，接于摇瓶，静置48h转至恒温摇床培养72h得到摇瓶菌种，接入装液量为100l的150l种子罐中，并在24.5℃下培养48-52h；
s2：将发酵培养液1000l倒入1300l的发酵罐中121℃灭菌45分钟，接着再通过内置冷却系统冷却至25℃，将种子罐菌种以10%的接种量接种于发酵罐中，加载无菌空气系统，通气量为7l/min，恒温培养36小时即可得到高活性杏鲍菇液体菌种。
s1中种子罐与摇瓶中培养基组成为：玉米粉9%，白糖7%，葡萄糖2%，豆粕1%，磷酸二氢钾0.5%，硫酸镁0.3%，消泡剂0.08%，活性剂0.02%，vb11片（0.2g）/10l，余量为水。
s2中发酵培养液组成为：玉米粉10%，白糖7%，葡萄糖5%，豆粕3%，磷酸二氢钾0.8%，硫酸镁0.3%，消泡剂0.08%，活性剂0.04%，vb11片（0.2g）/10l，余量为水。
活性剂的制备方法，包括以下步骤：
a）将杏鲍菇渣1000g、杏仁500g、牛黄450g、鲜姜450g、金银花300g一同加入到水中研磨成粉液，其中粉液的固液比为1：3；
b）向粉液中加入醋酸调节ph至5，接着按酶-底质量比1：36加入复合酶溶液，并于45℃下酶解48h，酶解液高温灭酶并过滤，所得滤液在真空度0.092-0.100mpa，45-50℃下进行干燥，制得上述活性剂。
步骤b）中复合酶溶液的浓度为0.045-0.050umol/l，且复合酶溶液是由葡萄糖酶与果胶酶解按浓度比1：1.5混合而成。
实施例5：
一种高活性杏鲍菇液体菌种的发酵方法，包括以下步骤：
s1：将保存的杏鲍菇斜面菌种接种于平板培养基活化，培养瓶选择生长速度为6-7mm/d的菌丝做为母种，接于摇瓶，静置48h转至恒温摇床培养72h得到摇瓶菌种，接入装液量为100l的150l种子罐中，并在24.5℃下培养48-52h；
s2：将发酵培养液1000l倒入1300l的发酵罐中121℃灭菌45分钟，接着再通过内置冷却系统冷却至25℃，将种子罐菌种以10%的接种量接种于发酵罐中，加载无菌空气系统，通气量为7l/min，恒温培养36小时即可得到高活性杏鲍菇液体菌种。
s1中种子罐与摇瓶中培养基组成为：玉米粉8%，白糖7%，葡萄糖3%，豆粕2%，磷酸二氢钾0.7%，硫酸镁0.2%，消泡剂0.07%，活性剂0.02%，vb11片（0.2g）/10l，余量为水。
s2中发酵培养液组成为：玉米粉11%，白糖8%，葡萄糖4%，豆粕3%，磷酸二氢钾0.8%，硫酸镁0.4%，消泡剂0.06%，活性剂0.03%，vb11片（0.2g）/10l，余量为水。
活性剂的制备方法，包括以下步骤：
a）将杏鲍菇渣1000g、杏仁500g、牛黄450g、鲜姜450g、金银花300g一同加入到水中研磨成粉液，其中粉液的固液比为1：3；
b）向粉液中加入醋酸调节ph至5，接着按酶-底质量比1：36加入复合酶溶液，并于45℃下酶解48h，酶解液高温灭酶并过滤，所得滤液在真空度0.092-0.100mpa，45-50℃下进行干燥，制得上述活性剂。
步骤b）中复合酶溶液的浓度为0.045-0.050umol/l，且复合酶溶液是由葡萄糖酶与果胶酶解按浓度比1：1.5混合而成。
菌种测试：
1.试验菌种：以本发明实施例1-5制备的液体菌种和一市售液体菌种为试验菌种，其中市售液体菌种为对照组；
2.接种方法：各实施例和对照组以相同的接种量和接种密度采用常规方法接种，分别接种500瓶；
3.生产管理：各实施例和对照组采用同样的管理方法
3.1发菌管理
接种后将菌瓶放在恒温培养室内，避光培养。温度控制在20-22℃，相对湿度65％-68％，co2浓度300ppm以下。待所有菌瓶菌丝浓白后再持续培养15d，使养分彻底分解，菌丝达到生理成熟。
3.2开瓶、搔菌
菌瓶后熟期过后，按常规方法进行开瓶、搔菌处理。搔菌完成后将菌瓶移入出菇房，菌瓶倒置，使菌丝恢复生长。待菌丝恢复后，温度控制在14℃-18℃，相对湿度为60-95％（前期湿度大，后期湿度小），光照250-500lux，co2浓度2000ppm以下（2小时通气10分钟），待现蕾出菇。
3.3子实体生长管理
温度控制在15-18℃，空气湿度保持在80％-85％，co2浓度在1000ppm以下。当菇盖基本展开，孢子尚未弹射时采收一潮菇。
4.质量及产量指标测定
观察记录各实施例和对照组栽培瓶的菌丝浓度、菌丝颜色、发菌时间、杂菌感染状况，测量子实体菌柄长度、菌盖大小和菌柄直径，并统计计算杂菌感染率、一级菇率和生物转化率，结果如表1-3：
表1
以上结果表明：本发明制备的高活性杏鲍菇液体菌种相较市售菌种，具有活性高，生长速度快，菌丝产量高、抗杂菌能力强的优点。
表2
以上结果表明：本发明制备的高活性杏鲍菇液体菌种栽培后的子实体菌盖与菌柄相较对比组，生长比例合适，质量等级高，一级菇率提高5％以上。
表3
【其中：生物转化率＝子实体产量/栽养料干重×100％】
以上结果表明：本发明的高活性杏鲍菇液体菌种相较市售菌种栽培后的子实体产量高，生物转化率高，具有较好的经济效益，适宜进一步推广应用。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。