技术特征：
1.一种高抗病性赤芍的组织培养方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)获取外植体选取芍药的带芽茎段，用无菌水冲洗1-2遍，再用75wt％的乙醇浸泡10-20s，取出后再用0.5wt％的升汞溶液浸泡5-10min，取出后将带芽茎段切割为2-3cm长的小段；(2)制备愈伤组织将步骤(1)得到的小段置于萌发培养基中进行愈伤组织的诱导萌发，所述萌芽培养基以1/2ms培养基为基础培养基，另添加终浓度为500-600mg/l的cacl2、0.8-1.5mg/l的6-ba、0.3-0.5mg/l的naa，0.2-0.5mg/l的ga3、0.8-1.5g/l的pvp、10-15g/l的琼脂和30-40g/l的葡萄糖；首先暗培养7-10d，温度为25
±
2℃，然后进行光照培养23-28d，所述光照培养条件是光照时间13-14h/d，光照强度1400-1500lux；(3)感染处理将步骤(2)中诱导得到的愈伤组织从外植体上切下置于感染培养基中进行感染处理，所述感染培养基以1/2ms培养基为基础培养基，另添加终浓度为500-600mg/l的cacl2、0.8-1.5mg/l的6-ba、0.3-0.5mg/l的naa，0.2-0.5mg/l的ga3、0.8-1.5g/l的pvp、10-15g/l的琼脂和30-40g/l的葡萄糖；首先，向步骤(2)制备得到的愈伤组织喷洒处理菌液，第一次喷洒2-4ml，间隔12小时后再次喷洒5-8ml，然而，控制温度为25
±
2℃，进行光照培养12-15d，所述光照培养条件是光照时间13-14h/d，光照强度1800-2000lux；(4)诱导不定芽将步骤(3)中得到的愈伤组织切块置于分化培养基进行不定芽的分化，所述分化培养基以1/2ms培养基为基础培养基，另添加终浓度为600-700mg/l的cacl2、4-8mg/l的6-ba、0.4-0.8mg/l的naa，0.4-0.6mg/l的ga3、8-15g/l的琼脂和30-40g/l的蔗糖；进行光照培养25-30d，所述光照培养条件是光照时间10-14h/d，光照强度1300-1500lux；(5)增殖培养将步骤(4)诱导得到的不定芽切割后置于增殖培养基中进行增殖继代培养25-30d，得到无根苗，所述增殖培养基以1/2ms培养基为基础培养基，另添加终浓度为500-600mg/l的cacl2、3-5mg/l的tdz、0.3-0.8mg/l的iba，0.1-0.2mg/l的ga3、0.5-1.5g/l的pvp、5-10g/l的琼脂和30-40g/l的蔗糖；进行光照培养，所述光照培养条件是光照时间10-14h/d，光照强度1800-2000lux；(6)生根壮苗将步骤(5)得到的无根苗置入生根培养基中进行培养，所述生根培养基以1/2ms培养基为基础培养基，另添加终浓度为600-800mg/l的cacl2、3-5mg/l的tdz、0.3-0.8mg/l的iba，0.1-0.2mg/l的ga3、0.5-1.5g/l的pvp、5-10g/l的琼脂和30-40g/l的蔗糖；(7)炼苗待不定根长满瓶底，植株整体生长稳健时，打开瓶口虚盖炼苗3-5d，待组培苗适应后，完全开瓶口3-5d，组培苗完全适应外部环境；将组培苗拔出，将根浸泡在生根制剂中浸泡20-30min；(8)移栽将步骤(7)的组培苗移栽入穴盘内，穴盘内填充基质体积比为进口泥炭:珍珠岩:蛭石:
生物炭:细沙＝6:1:1:3:2，少量浇水，放置于大棚内进行生长，大棚内温度为20
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2℃，湿度为85
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5％。2.根据权利要求1所述的一种高抗病性赤芍的组织培养方法，其特征在于：所述步骤(1)中，在乙醇浸泡或升汞浸泡结束后，用无菌水清洗4-5次。3.根据权利要求1所述的一种高抗病性赤芍的组织培养方法，其特征在于：所述步骤(2)中，光照选用红光进行照射。4.根据权利要求1所述的一种高抗病性赤芍的组织培养方法，其特征在于：所述步骤(3)中，所述处理菌液含有黑腐病、黑斑病、叶斑病、褐斑病与枯萎病病菌其中的一种或多种。5.根据权利要求4所述的一种高抗病性赤芍的组织培养方法，其特征在于：所述处理菌液的制备方法包括以下步骤：将感染病菌的芍药叶片剪碎置于容器中，加入叶片质量的1-2倍的2-3wt％葡萄糖溶液，升温至35℃浸泡30-45min，过滤除杂后向滤液中加入滤液质量20倍的水，然后加入叶片质量的1-2倍的艾叶提取液共同加热到50℃保温20min，过滤得到处理菌液。6.根据权利要求1所述的一种高抗病性赤芍的组织培养方法，其特征在于：所述步骤(3)中，光照选用红光进行照射。7.根据权利要求1所述的一种高抗病性赤芍的组织培养方法，其特征在于：所述步骤(4)中，光照选用红光进行照射。8.根据权利要求1所述的一种高抗病性赤芍的组织培养方法，其特征在于：所述步骤(5)中，光照选用红光进行照射。9.根据权利要求1所述的一种高抗病性赤芍的组织培养方法，其特征在于：所述步骤(6)中的生根培养基中添加生根培养基重量0.5-1％的活性炭。10.根据权利要求1所述的一种高抗病性赤芍的组织培养方法，其特征在于：所述步骤(7)中的生根制剂为微生物促生根剂。
技术总结
本发明提供一种高抗病性赤芍的组织培养方法通过对芍药外植体的表面消毒、愈伤组织的培养、以及对不同阶段培养基的组成进行优化调整，解决了生根难、污染、褐化、继代培养后抗性缺失、难以与母本品质一致等问题，且在赤芍组织培养与快速繁殖的过程中，对生长素和细胞分裂素的种类和组成进行及时调整，提高了组织培养的效率，促进赤芍组培苗的生长，避免出现褐化和污染现象；以及在愈伤组织喷洒处理菌液以避免带芽茎段受到菌液中致病细菌的感染死亡，为之后的赤芍愈伤组织分化与植株的驯化奠定良好基础，且操作简单、成本低廉，有着良好的市场前景，能为芍药的育种和生长提供良好的帮助。助。
技术研发人员：张秀娟 白朕卿 随洋 王瑞利
受保护的技术使用者：内蒙古科学技术研究院
技术研发日：2022.09.21
技术公布日：2022/12/6