专利名称：用杂交合成和应激敏感基因检测选育白猪的方法
技术领域：
本发明是猪新品种的选育方法，属于生物技术领域。
随着广大消费者对猪肉质量的要求越来越高，充分利用中国猪种资源，采用先进的育种技术和测试手段，培育瘦肉型猪新品种(系)，已成为国内外猪育种工作的热点。但是，由于国外猪种生长速度快、瘦肉率高，而繁殖性能和肉质差；中国猪种生长速度慢、瘦肉率低，而产仔数多和肉质好。如何把国外猪种与中国猪种的优良基因有机结合，扬长避短，尤其是瘦肉率越高的猪种，其肉质越差(PSE肉越多)，是困扰当代猪育种的一个难题。
国外著名猪种其应激敏感阳性发生率一般较高，尤其是长白猪和皮特兰猪其发生率最高(50-100％)。中国自七、八十年代以来，培育的瘦肉型猪新品种(系)，如三江白猪、湖北白猪、南昌白猪，都是以母系作为选育方向，其瘦肉率仍较低(58％左右)。
本发明的目的是利用我国的三江白猪与引进的施格猪杂交，从其后代选育日增重高，瘦肉率也高，且耗料低的瘦肉型猪父系新品种。
本发明是一种瘦肉型猪父系的选育方法，以中国的三江白猪为母系、比利时的施格猪为父系杂交，回交2代，采用群体继代选育和应激敏感基因DNA检测技术，选育出军牧1号父系瘦肉型猪。
本发明的优点和积极效果为军牧1号白猪毛色全白、体躯长、肩宽、背平、肢蹄粗壮、臀部丰突。母猪窝产活仔10.85头；生长肥育期平均日增重711g，170日龄达90kg，每kg增重耗料3.04kg；90kg体重屠宰，胴体瘦肉率达62.03％，肉质良好；适应性较强。
经试验，军牧1号白猪平均日增重(697克)，明显高于长白猪(587克)和约克夏猪(608克)，差异极显著。军牧1号其胴体瘦肉率(61.95％)，也明显高于长白猪(54.1％)和约克猪(56.1％)。军牧1号、长白猪和约克夏猪每千克增重需要配合饲料分别为3.06、3.41、3.32Kg。
军牧1号不论作为父系，还是作为母系杂交效果都较好。尤其是用“军牧1号”公猪与地方母猪或杂种母猪杂交，杂交后代均为白色，生长速度快，臀部突出，瘦肉率高，明显高于长白猪、约克夏猪及其杂交后代，深受配种站(户)和饲养场欢迎。
图1为本发明的军牧1号选育路线图。
下面详细叙述
具体实施例方式本发明是利用中国的三江白猪和比利时的施格猪为育种素材，采用杂交合成、群体继代方式选育，利用应激敏感基因DNA检测技术，判断留种个体应激敏感基因的基因型，选育出我国第一个作为杂交父系的瘦肉型猪军牧1号。
一、杂交合成1988-1991年引进三江白猪母猪50头，施格公猪16头，测定三江白猪与施格猪杂交一代、回交二代、回交三代的生产性能。确定以三江白猪与施格猪回交二代为主的供选群，选择优秀杂交个体(8公40母)，组成0世代选育基础群。
二、群体闭锁继代选育
1992-1997年，从0世代开始，采用8公40母闭锁群继代选育，每年一个代。
1、主选性状由于新品种猪的选育方向是作为父系选育，生长肥育性状和胴体瘦肉率作为主选方向。于是本发明申请人确定了活体背膘厚、日增重、外貌体尺作为主选性状。由于活体背膘h2=0.5、日增重h2=0.35、外貌体尺h2=0.4，都是中等或高遗传力性状。因此，我们确定了以个体本身性状测定结果为依据，进行多性状综合指数选择。
2、选留阶段断奶根据窝产仔数、断奶窝重、个体外貌(毛色、阴囊疝等)进行第一次选留，即从大窝中选留。
四月龄淘汰个别体型外貌、体质较差的个体。
六月龄根据个体多性状综合选择指数选留。选留重点是六月龄。
八月龄淘汰个别配种能力差和不能受胎的个体。
3、综合选择指数制订依据主选性状日增重P1、活体背膘P2、外貌评分P3，其遗传力h21=0.35,h22=0.5,h23=0.4；其经济加数值w1=0.4(突出生长速度)，W2=0.3,W3=0.3。公式I=1.17 P1/P1-1.25 P2/P2+P3/P3在外貌评分上侧重了臀围的选择，以突出其臀部突出的特点。
4、选配方法继代群的8公40母，避免全同胞交配，一般9、10月份配种，第二年1、2月份产仔，保证每年一个世代。
三、应激敏感基因DNA检测猪应激综合症(Porcine Stress Syndrome,PSS)是猪的一种应激和药物诱导性遗传缺陷(Louis,C.F.et al.1990)。PSS由外显不完全常染色体隐性基因控制，其基因座位(SS基因座位)含2个等位基因，即应激敏感基因(streess susceptible gene,SS或n)和应激抗性基因(stressresistance gene,SR或N)(Mabry,J.w.et al.1981；Smith,C.et al 1977)。SS基因与猪的许多生产性状有关，例如生长速度、繁殖性状、胴体性状，尤其是肉质性状和应激致死。利用SS基因的DNA检测技术，可判断个体的基因型，以指导种猪的选留。
1、材料①主要药品三羟甲基氨基甲烷(Tris):Sigma Chemicals Co.；明胶(gelatin):Difco Laboratories；dNTP(dATP；dCTP；dGTP):Boehringer MannheimGmbH,W-germany；Tween 20；Triton X-100；NP 40:Sino-AmeriCanBiotechnology Company；矿物油(mineral oil):Sigma Chemicals Co.,蔗糖(Sucrose)A.R.；天津市化学试剂厂，琼脂糖(Agrose)上海药物研究所实验药厂等。
②酶类和DNA标尺蛋白酶K(Proteinase K):MERCK Co.Germany；Taq DNA Polymerase:Sino-American Biotechnology Company和中国农业大学生物技术国家重点实验室提取；Hha I限制性内切酶10000u/ml,Promega CorporationUSA；BsiHKA I限制性内切酶10000u/ml,Biolabs.USA；DNA Marker:1 kb ladder；PGEM+7zf(+)/HaeⅢ。
③试剂剂配制用水除特殊说明外均为双蒸馏水；试剂配制方法除特定注明均参考Sambrook,.J.et al,《Molecular Cloning Alaboratory amnual》,2nd.1989。
④主要仪器Gene Amp PCR System 4800,PERKIN ELMER；电泳仪DYY-IIJ2稳压电泳仪，北京六一仪器厂；台式高速微量离心机LQ15-W，北京医用离心机厂。
⑤猪样本采样由断奶仔猪选留测试猪群，用耳号钳逐头采取耳组织。
2、方法①特异性扩增引物为Forward primer:5’-TCCAGTTTGCCACCAGGTCCTACCA-3’Reverse primer:5’-ATTCACCGGAGTGGAGTCTCTTGAG-3’引物由中国农业大学农业生物技术国家重点实验室合成②PCR过程a．反应液的组成组分 数量DNA template(100-500ng)1μl10×Taq Buffer(15mMOL/L MgCl)-＞2) 5μldNTP(2.5mMOL/L)2μlPrimes(10u MOL/L) 1μlTaq polymerase(5u/ul) 0.5μlddwater39.5μlTotal 50μlb．PCR程序温度时 间循环数94℃min 194℃65sec65℃65sec72℃65sec3572℃7min 1③限制性内切酶消化在1.5 ml微量离心管中加入待切PCR产物，然后依次加入酶、10×buffer、水或其它成份(例如BsiKAI酶切反应中需加入BSA)。大批量酶切反应可以先把除待消化DNA以外的反应组分按要求比例混合，然后进行等量分装于微量离心管中，然后加入适量的PGR产物。
④电泳酶切产物在3％琼脂糖凝胶电泳。
3、留种群对应激敏感基因的选择从三世代起，根据个体综合选择指数值的大小，结合其应激敏感基因基因型进行选留；在五世代，组建了抗应激品系。
权利要求
1.一种瘦肉型猪父系的选育方法，其特征在于以中国的三江白猪为母系、比利时的施格猪为父系杂交，回交2代，采用群体继代选育和应激敏感基因DNA检测技术，选育出军牧1号父系瘦肉型猪。
全文摘要
一种瘦肉型猪父系的选育方法,以中国的三江白猪为母系、比利时的施格猪为父系杂交,回交2代,采用群体继代选育和应激敏感基因DNA检测技术,选育出军牧1号父系瘦肉型猪。军牧1号白猪的特点是:毛色全白、体躯长、肩宽、背平、肢蹄粗壮、臀部丰突,母猪窝产活仔10.85头,生长肥育期平均日增重711克,170日龄达90公斤,每公斤增重耗料3.04公斤;90公斤体重屠宰,胴体瘦肉率达62.03%,肉质良好,适应性较强。
文档编号A01K67/027GK1210670SQ9810334
公开日1999年3月17日 申请日期1998年7月30日 优先权日1998年7月30日
发明者侯万文, 许志锁, 李来记, 田家良, 谢忠忱, 宋新安, 孙博兴, 吴春昌, 姜斌, 李慕, 高宏伟 申请人:中国人民解放军农牧大学