2)的作用。C+:阳性对照（提取物）；C_:阴性对照（水）；2:棕榈 酸；3 :S-羧甲基半胱氨酸；4 :反式乌头酸；5 :葡萄糖。组合物的浓度：3+4、3+5 = 0. 25 g/L (组合物中的每种活性化合物）；3+4+5 =组合物中的每种活性化合物0. 17 g/L。（B)-使用 蒸馏水恢复测定后对不同市售化合物及其组合物的作用的评估。C+:阳性对照（提取物）； 2 :棕榈酸；3 :S-羧甲基半胱氨酸；4 :反式乌头酸；5 :葡萄糖。组合物的浓度：3+4、3+5、4+5 =0.25 g/L (组合物中的每种活性化合物）；3+4+5 =组合物中的每种活性化合物0.17 g/ L0
[0022] 发明详述 本发明为着眼于检测植物提取物中存在的可能的天然线虫毒性化合物所进行的研究 工作的结果。这样的化合物构成了替代导致对自然和人损伤的线虫毒性合成试剂的备选方 案。本发明所述的线虫毒性组合物由使用植物提取物中所检测到的一些物质作为活性化合 物进行线虫毒性生物测定时所获得的意外结果产生。这些生物测定的结果证明存在出人意 料的协同线虫毒性效应。
[0023] 在本文中，本发明描述了一种具有协同效应的线虫毒性组合物，其包含： 反式乌头酸， 葡萄糖和任选地 S-羧甲基半胱氨酸 作为活性化合物。
[0024] 作为选择，本发明所述的线虫毒性组合物可包含制剂成分。所述（存在或不存在 制剂成分的）组合物，可为溶液、乳液、可湿性粉末、悬液、粉末、粉剂、糊剂、可溶性粉末、颗 粒、悬液-乳液浓缩物、浸渍所述活性化合物的天然和合成材料以及在聚合物质中微胶囊 化的形式。
[0025] 可用作制剂成分的化合物尤其为：液体载体/液体溶剂和/或固体载体和/或表 面活性剂和/或增稠剂和/或染料。若使用的制剂成分为水，还可以使用助溶剂例如有机 溶剂。
[0026] 在适合用于本发明的液体载体/液体溶剂中，可特别提及芳族溶剂、氯代芳族溶 剂或氯代脂肪烃、脂肪烃、石油馏分、矿物油、植物油、醇及其醚和酯、酮、强极性溶剂和水。
[0027] 优选地，本发明所用的芳族溶剂选自二甲苯、甲苯或烷基萘。在本发明组合物中使 用氯代芳族溶剂或氯代脂肪烃的情况下，其优选选自氯苯、氯乙烯或二氯甲烷。脂肪烃优选 选自环己烷或石蜡。在使用醇的备选情况下，其优选选自乙醇、丙醇、丁醇或乙二醇。对于 使用酮的情况，其优选选自丙酮、甲乙酮、甲基异丁基酮或环己酮。强极性溶剂优选选自二 甲基甲酰胺和二甲基亚砜。
[0028] 在适合用于本发明的固体载体中，可提及铵盐、磨碎的天然矿物和磨碎的合成矿 物。
[0029] 优选地，当磨碎的天然矿物用作固体载体时，其选自高岭土、粘土、滑石、白垩、石 英、绿坡缕石、蒙脱石和硅藻土。当使用磨碎的合成矿物时，其优选选自二氧化硅、氧化铝和 硅酸盐。当本发明的线虫毒性组合物以颗粒形式呈现时，使用合适的固体载体。这些合适 的固体载体优选选自磨碎的天然岩石、合成颗粒和有机材料颗粒。
[0030] 或者，表面活性剂可用作本发明组合物的制剂成分。相应的表面活性剂选自乳化 剂和/或分散剂和/或泡沫生成剂。本发明的线虫毒性组合物中可使用不同的乳化剂/泡 沫生成剂，包括阳离子、非离子和阴离子乳化剂。当使用非离子和阴离子乳化剂时，其优选 选自聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪醚、烷基磺酸盐、烷基硫酸盐、芳基磺酸盐和蛋白水 解物。在本发明中使用分散剂例如表面活性剂的情况下，其优选选自甲基纤维素和木质素 亚硫酸盐废弃物。
[0031] 或者，本发明组合物中还可使用其它制剂成分。这些成分尤其包括增稠剂例如羧 甲纤维素以及呈粉末、颗粒或乳胶形式的天然和合成聚合物，例如阿拉伯树胶、聚乙烯醇和 聚乙酸乙烯酯。也可用作制剂成分的其它成分为矿物和植物油、天然磷脂例如脑磷脂、卵磷 脂和合成磷脂。
[0032] 或者，本发明的线虫毒性组合物还可包含染料例如无机颜料如氧化铁、氧化钛和 普鲁士蓝以及有机染料如茜素染料、偶氮染料和金属酞菁染料作为制剂成分。
[0033] 在本发明一个备选的实施方案中，具有协同效应的线虫毒性组合物可进一步包含 其它活性化合物。当使用时，这些其它活性化合物选自杀虫剂、诱惑剂、消毒剂、杀菌剂、杀 螨剂、杀真菌剂、生长调节物质、除莠剂和安全剂。
[0034] 在本发明另一个备选的实施方案中，协同的线虫毒性组合物为包含活性化合物的 水性组合物。在本发明一个优选的具体组合物中，线虫毒性组合物为包含棕榈酸和反式乌 头酸（每种浓度0.25 g/L)的水性组合物。在本发明第二个优选的具体组合物中，线虫毒性 组合物为包含棕榈酸和葡萄糖（每种浓度0.25 g/L)的水性组合物。在本发明第三个优选 的具体组合物中，线虫毒性组合物为包含棕榈酸、反式乌头酸和葡萄糖（每种浓度0.17 g/ L)的水性组合物。在本发明第四个优选的具体组合物中，线虫毒性组合物为包含棕榈酸、反 式乌头酸和S-羧甲基半胱氨酸（每种浓度0.17 g/L)的水性组合物。在本发明第五个优 选的具体组合物中，线虫毒性组合物为包含棕榈酸、葡萄糖和S-羧甲基半胱氨酸（每种浓 度0.17 g/L)的水性组合物。在本发明第六个优选的实施方案中，线虫毒性组合物为包含 棕榈酸、葡萄糖、S-羧甲基半胱氨酸和反式乌头酸（每种浓度0.125 g/L)的水性组合物。
[0035] 本发明的另一目标为将前述具有协同效应的线虫毒性组合物用于控制植物线虫 的用途。特别地，所述用途通过将本发明组合物施用到植物和/或其部分和/或土壤产生。
[0036] 将本发明的协同线虫毒性组合物施用到植物和/或其部分和/或土壤可直接进 行，或通过普通处理方法例如通过浸没、喷射、蒸发、喷雾、扩散等让化合物在其附近、环境 或储存空间作用进行。
[0037] 在本发明一个特别的实施方案中，本文所述具有协同效应的线虫毒性组合物的用 途为控制南方根结线虫。
[0038] 进行的实验和获得的结果： 最初，在着眼于检测有效抗南方根结线虫的第二阶段幼虫（J2)的化合物的生物测定 中检验了获自拮抗植物种子的水性提取物。
[0039] 在所检验的提取物中，直生刀豆，一种起源于中美洲的豆科植物，显示出最高 的杀线虫活性（85%)(图1)。通过透析将此材料分级，导致分离出小于3.5 kDa的分子 (外部透析液-DE)和大于3. 5 kDa的分子（内部透析液-DI)。在这种情况下，与DI相 比，DE显示出最有希望的结果，例如：a)较高的线虫毒性活性（图2) ;b)热稳定性（图 3) ;c)对南方根结线虫的J2的高特异性（表l);d)无抗真菌（植物病原性胶孢炭疽 菌（phitopathogenic Collectotrichum gloeosporioides，登录号 1915)、腐皮镜刀菌 (Fusarium solani，登录号 1624)、菜豆壳球抱菌（Macrophomina phaseolina，登录号 14%) 和烟草疫霉（Phytophthora tabacum))、细菌（枯草芽抱杆菌（Bacillus subtilis))和昆 虫幼虫（棉铃象（Antonomus grandis)和草地贪夜蛾（Spodoptera frugiperda))的活性 (表l);e)不存在抗自由生活线虫的活性（图4) ;f)对哺乳动物红细胞无有害的细胞毒 性作用（图5)和g)在使用番茄植物温室中进行的生物测定中使南方根结线虫卵块减少 80%以上（图6)。
[0040] 此外，通过光学显微镜观察直生刀豆DE中存在的化合物对南方根结线虫的J2产 生的作用，显示正常解剖结构被破坏（图7-A、B、C和D)，并且沿着僵硬的线虫体形成各种 不同的空泡。此改变提示该植物寄生物的肠组织变性。
[0041] 表1 -通过使用不同浓度的直生刀豆DE体外进行的对真菌、细菌、昆虫幼虫和 线虫的特异性测定所获得的结果。该生物测定一式三份进行。A =真菌，B =细菌，C =昆 虫幼虫，D =线虫
使用反相柱（C18)经由HPLC纯化DE使得能够分离三种杀线虫级分和两种抑线虫级 分。所有的步骤通过评估线虫毒性活性的生物测定监测（图8 A、B和C)。活性级分通过 使用气相色谱偶联质谱（GC-MS)、液相色谱偶联质谱（LC-MS)和核磁共振（1H RMN)技术通 过代谢产物谱法分析。这些技术所产生的数据加上大量的文献研究使得能够鉴定出9种具 有线虫毒性作用的化合物。
[0042] 在本文中，在抗南方根结线虫幼虫的生物测定中检验了市售获得的经文献调研后 鉴定的并且存在于直生刀豆的线虫毒性级分中的具有生物学功能的化合物（图9A)。在暴 露48小时之后10% (W/V)的葡萄糖溶液能够使大部分线虫瘫痪（图9A)。恢复测定之后， 87%的J2恢复移动性，证明了所施用浓度的葡萄糖的抑线虫活性（图9A)。然而，20% (W/ V)的葡萄糖溶液显示出杀线虫作用，在暴露48小时之后杀死90%以上的J2 (图9B)。分别 使用8〇μ8/30〇μL和15〇μ8/30〇μL的浓度，在暴