一种在高寒草甸原生态条件下制备冬虫夏草菌种的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及涉及生物医药技术领域，具体地说，是一种在高寒草甸原生态条件下制备冬虫夏草菌种的方法。
【背景技术】
[0002]冬虫夏草是一种虫生子囊真菌，寄生于鳞翅目Lepidoptera蝠蛾科Hepialidae钩蝠蛾属Thitarodes昆虫的幼虫，其无性型为中国被毛孢Hirsutella sinensis Liu, Guo,Yu&Zengo冬虫夏草寄主钩蝠蛾属Thitarodes昆虫的一个世代包括卵、幼虫、蛹和成虫四个发育阶段，幼虫营地下隧道式穴居生活，杂食性，喜食圆穗寥、头花寥、小大黄和珠芽寥等高寒植物的幼嫩根茎。
[0003]冬虫夏草分布于青藏高原高海拔区域，该区域高寒缺氧，其气温常年具有高山低温的特点。利用青藏高原高寒草甸原有生态环境条件进行原生态冬虫夏草道地药材产业化研究，可有效保持冬虫夏草道地产区的原生态属性，同时也可以最大程度节省能源消耗，达到清洁生产的目的。
[0004]目前采用常规冬虫夏草菌种侵染寄主钩蝠蛾昆虫幼虫仍存在侵染率低、耗费时间长等问题。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种在高寒草甸原生态条件下制备冬虫夏草菌种的方法，该方法利用那曲地区羌塘草原高寒草甸原有植被及生态条件，通过构建冬虫夏草菌中国被毛孢与活体高寒植物组织的共生体，增大高寒植物组织中国被毛孢的共生量，激活中国被毛孢的侵染活性，得到对寄主钩蝠蛾幼虫具有高侵染活性的冬虫夏草菌种，达到高效侵染寄主钩蝠蛾幼虫的目的。
[0006]本发明通过下述技术方案实现:一种在高寒草甸原生态条件下制备冬虫夏草菌种的方法，在那曲地区羌塘草原冬虫夏草适生地区域的高寒草甸及生态环境下，利用其原有高寒植被植株，以10?20mX 10?20m大小为建设单位，建立高寒植物苗培育园，利用原生态温湿度及光照条件，通过适合高原的农业园艺栽培技术进行水肥管理，栽培并获得冬虫夏草寄主钩蝠蛾幼虫取食的高寒植物苗；将冬虫夏草菌源接种到培育园栽培的高寒植物苗组织上，利用每年5?11月原生态温湿度条件，遮阴使冬虫夏草菌中国被毛孢与活体高寒植物共生培育，形成菌物-植物共生体，将菌丝检测结果为中国被毛孢的菌物-植物共生体作为对寄主钩蝠蛾幼虫具有高侵染活性的冬虫夏草菌种。
[0007]为更好的实现本发明，进一步的，所述高寒植物苗培育园内采用通常农业园艺规划方法进行分区建垄，垄面大小为50?90cmX 500?1900cm，在垄面中间上方高40?90cm处铺设水肥管理管路，垄间设立宽25?30cm深7?1cm的区域便于排水和管理人员行走，培育园四周留下约50?60cm的空区。
[0008]为更好的实现本发明，进一步的，所述通过适合高原的农业园艺栽培技术进行水肥管理是:每年5?11月，每个月喷淋水一至四次，使15cm深度的土壤含水量保持在28?43%，每个月在一次喷水中按水:尿体积比为100: 6?100: 18浓度加入牛羊尿或人尿；每年5月施放一次有机牛粪肥或羊粪肥，施放为干重每平方米160?240g。
[0009]为更好的实现本发明，进一步的，从冬虫夏草适生地采集新鲜冬虫夏草或其子囊孢子，采用合适嗜低温菌物的工业微生物方法进行分离纯化，经分子生物学方法或形态学方法鉴定为中国被毛孢，通过常规低温发酵法在13±5°C条件下发酵为冬虫夏草菌中国被毛孢菌丝体及分生孢子或芽生孢子，并进一步将菌丝体及分生孢子或芽生孢子按发酵物与水体积比1: 150?1: 900稀释成悬浮液，作为冬虫夏草菌源；或直接采用冬虫夏草的新鲜子囊孢子稀释制成每毫升含有150?900个子囊孢子的悬浮液，作为冬虫夏草菌源。
[0010]为更好的实现本发明，进一步的，所述栽培并获得冬虫夏草寄主钩蝠蛾幼虫取食的高寒植物苗的方法为:利用原生态温湿度及光照条件，促进培育园内原有的高寒植物苗旺盛生长；或者再将高寒植物苗培育园以外的钩蝠蛾幼虫食料植物和/或其种子移栽补充到培育园中栽培，或者再将快速扩繁的高寒植物组培苗移栽到高寒植物苗培育园中，使之与高寒植物苗培育园内原有植被一同旺盛生长获得高寒植物苗。
[0011]为更好的实现本发明，进一步的，所述“将冬虫夏草菌源接种到培育园栽培的高寒植物苗组织上，利用每年5?11月原生态温湿度条件，遮阴使冬虫夏草菌中国被毛孢与活体高寒植物共生培育”的接种及共生培育的方法是:将制备的冬虫夏草菌源喷淋接种到高寒植物苗培育园栽培的高寒植物苗上，每平方米喷施300?500ml菌悬液，连续喷施I?7天，每天喷施I?3次，共生培育的时间为7?30天，温湿度条件为当地青藏高原5?11月自然温湿度值，共生培育时遮阴培育。
[0012]与现有技术相比，本发明具有以下有益效果:
本发明利用那曲地区羌塘草原高寒草甸原有植被及生态条件，通过构建冬虫夏草菌中国被毛孢与活体高寒植物组织的共生体，增大高寒植物组织中国被毛孢的共生量，激活中国被毛孢的侵染活性，得到对寄主钩蝠蛾幼虫具有高侵染活性的冬虫夏草菌种，达到高效侵染寄主钩蝠蛾幼虫的目的。
【具体实施方式】
[0013]下面结合实施例对本发明作进一步说明，本发明的实施方式包括但不限于下列实施例。
[0014]实施例1:
一种在高寒草甸原生态条件下制备冬虫夏草菌种的方法，在那曲地区羌塘草原冬虫夏草适生地区域的高寒草甸及生态环境下，利用其原有高寒植被植株，以10?20mX 10?20m大小为建设单位，建立高寒植物苗培育园，利用原生态温湿度及光照条件，通过适合高原的农业园艺栽培技术进行水肥管理，栽培并获得冬虫夏草寄主钩蝠蛾幼虫取食的高寒植物苗；将冬虫夏草菌源接种到培育园栽培的高寒植物苗组织上，利用每年5?11月原生态温湿度条件，遮阴使冬虫夏草菌中国被毛孢与活体高寒植物共生培育，形成菌物-植物共生体，将菌丝检测结果为中国被毛孢的菌物-植物共生体作为对寄主钩蝠蛾幼虫具有高侵染活性的冬虫夏草菌种。
[0015]实施例2: 本实施例是在上述实施例的基础上进一步优化，为更好的实现本发明，进一步的，所述高寒植物苗培育园内采用通常农业园艺规划方法进行分区建垄，垄面大小为50?90cm X 500?1900cm，在垄面中间上方高40?90cm处铺设水肥管理管路，垄间设立宽25?30cm深7?1cm的区域便于排水和管理人员行走，培育园四周留下约50?60cm的空区。
[0016]实施例3:
本实施例是在上述任一实施例的基础上进一步优化，为更好的实现本发明，进一步的，所述通过适合高原的农业园艺栽培技术进行水肥管理是:每年5?11月，每个月喷淋水一至四次，使15cm深度的土壤含水量保持在28?43%，每个月在一次喷水中按水:尿体积比为100: 6?100: 18浓度加入牛羊尿或人尿；每年5月施放一次有机牛粪肥或羊粪肥，施放为干重每平方米160?240g。
[0017]实施例4:
本实施例是在上述任一实施例的基础上进一步优化，为更好的实现本发明，进一步的，从冬虫夏草适生地采集新鲜冬虫夏草或其子囊孢子，采用合适嗜低温菌物的工业微生物方法进行分离纯化，经分子生物学方法或形态学方法鉴定为中国被毛孢，通过常规低温发酵法在13±5°C条件下发酵为冬虫夏草菌中国被毛孢菌丝体及分生孢子或芽生孢子，并进一步将菌丝体及分生孢子或芽生孢子按发酵物与水体积比1: 150?1: 900稀释成悬浮液，作为冬虫夏草菌源；或直接采用冬虫夏草的新鲜子囊孢子稀释制成每毫升含有150?900个子囊孢子的悬浮液，作为冬虫夏草菌源。
[0018]实施例5:
本实施例是在上述任一实施例的基础上进一步优化，为更好的实现本发明，进一步的，所述栽培并获得冬虫夏草寄主钩蝠蛾幼虫取食的高寒植物苗的方法为:利用原生态温湿度及光照条件，促进培育园内原有的高寒植物苗旺盛生长；或者再将高寒植物苗培育园以外的钩蝠蛾幼虫食料植物和/或其种子移栽补充到培育园中栽培，或者再将快速扩繁的高寒植物组培苗移栽到高寒植物苗培育园中，使之与高寒植物苗培育园内原有植被一同旺盛生长获得高寒植物苗。
[0019]实施例6:
本实施例是在上述任一实施例的基础上进一步优化，为更好的实现本发明，进一步的，所述“将冬虫夏草菌源接种到培育园栽培的高寒植物苗组织上，利用每年5?11月原生态温湿度条件，遮阴使冬虫夏草菌中国被毛孢与活体高寒植物共生培育”的接种及共生培育的方法是:将制备的冬虫夏草菌源喷淋接种到高寒植物苗培育园栽培的高寒植物苗上，每平方米喷施300?500ml菌悬液，连续喷施I?7天，每天喷施I?3次，共生培育的时间为7?30天，温湿度条件为当地青藏高原5?11月自然温湿度值，共生培育时遮阴培育。
[0020]实施例7:
本实施例是在上述任一实施例的基础上进一步优化，一种在高寒草甸原生态条件下制备冬虫夏草菌种的方法，具体步骤为:
1、在那曲地区羌塘草原冬虫夏草适生地区域的高寒草甸，利用其原有高寒植被植株，以10?20mX 10?20m大小为建设单位，建立冬虫夏草寄主钩蝠蛾幼虫食料植物的高寒植物苗培育园；采用通常农业园艺规划方法进行分区建垄，垄面大小为50?90cmX500?1900cm，在垄面中间上方高40?9