一种草莓茎尖组织培养基的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种草莓茎尖组织培养基。在开放有菌的环境中，向MS培养基中添加前胡和丹参植物提取(混合)物，其初代培养基中用量为7～11g/L，继代培养基中用量为11～15g/L，生根培养基中用量为14～18g/L。使用本发明可省去高压灭菌和炼苗等常规环节，降低植株玻璃化率，降低成本。
【专利说明】
一种草莓茎尖组织培养基
技术领域
[0001]本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种草莓茎尖组织培养基。【背景技术】
[0002]近几年，草莓工厂化育苗在我国发展迅速，并取得了显著的经济效益和社会效益。 但是，传统的植物组织培养存在生产成本高、生产过程繁琐、玻璃化率高和污染严重等问题，影响了草莓组培苗规模化生产应用。寻找解决以上问题的组培技术非常重要。
[0003] 为解决以上问题，有报道一种开放式组培方法，其通过向培养基中添加抑(杀)菌剂替代高压灭菌、无菌接种和无菌培养，创造一个方便、快捷、可靠和低成本的组培方法。专利申请号为200910060484.8的“一种开放式植物组织培养育苗方法”是培养基中添加大蒜、黄连、忍冬、甘草、桂花和石蒜提取物，申请号为201110311185.4的“一种开放式培养甘蔗脱毒种苗的方法”是培养基中添加益培隆杀菌剂。以上专利是针对微生物污染、组培苗成本、组培苗生产技术等问题提出的解决方案。
[0004]本发明除了解决以上问题外，还针对植物组织培养过程中玻璃化率高的问题，提供一种可有效降低玻璃化率、提高草莓组培苗成活率的草莓茎尖组织培养基。
【发明内容】
[0005]本发明提供了一种草莓茎尖组织培养基。包括前胡和丹参植物提取(混合)物的制备及初代培养基、继代培养基和生根培养基的配制。
[0006] 前胡提取物的制备:称量干燥的前胡根茎1kg，粉碎后过40目筛，将前胡粉末置于提取罐中，加入5L 50%乙醇，浸泡24h后，搅拌条件下超声30min，冷却至室温，通过板框过滤得到前胡根茎提取液，再经减压浓缩至干，得到前胡提取物，备用。
[0007]丹参提取物的制备:称量干燥的丹参根茎1kg，粉碎后过60目筛，将丹参粉末置于提取罐中，加入3L 80%乙醇，搅拌条件下超声30min，冷却至室温，通过板框过滤得到丹参根茎提取液，再经减压浓缩至干，得到丹参提取物，备用。
[0008]植物提取(混合)物的制备:(1)将备用的前胡提取物和丹参提取物按质量比4? 6: 3?5混合，即得初代培养所需的前胡和丹参植物提取(混合)物；(2)将备用的前胡提取物和丹参提取物按质量比5?8: 5?7混合，即得继代培养所需的前胡和丹参植物提取(混合)物；(3)将备用的前胡提取物和丹参提取物按质量比6?8: 8?9混合，即得生根培养所需的前胡和丹参植物提取(混合)物。
[0009]初代培养基的配制:配制1L MS培养基，加入蔗糖15g、琼脂7g，完全溶解后，添加 500mg/L6-BA 2ml及初代培养所需的前胡和丹参植物提取(混合)物7?llg/L，混匀，调节pH值为5.8?6.0。[〇〇1〇] 继代培养基的配制:配制1L MS培养基，加入蔗糖15g、琼脂7g，完全溶解后，添加500mg/L6-BA lml、500mg/LNAA lml及继代培养所需的前胡和丹参植物提取(混合)物 11?15g/L，混勾，调节pH值为5.8?6.0。
[0011]生根培养基的配制:配制1L 1/2MS培养基，加入蔗糖15g、琼脂7g，完全溶解后，添加500mg/L NAA 2ml、500mg/L烯效唑lml、250mg/L活性炭lml及生根培养所需的前胡和丹参植物提取(混合)物14?18g/L，混匀，调节pH值为5.8?6.0。
[0012]将上述配制好的培养基分装到直径6cm，高5.6cm的透明塑料盒中，培养基厚1cm 左右，封口。[〇〇13]本发明具有良好的抑菌效果，省去高压灭菌、无菌接种和无菌培养等环节；能促进茎尖组织生长、分化和生根，能够培育出抗逆性强、品质好、产量高的草莓组培苗；省去炼苗环节，缩短了培养周期。本发明提高了工作效率，降低了生产成本(13%以上)，利于工厂化育苗。
[0014]本发明与现有技术相比，是在常规培养基中添加前胡和丹参植物提取(混合)物。 本发明除了解决生产成本高、生产过程繁琐和污染严重等问题，还解决了玻璃化率过高的问题。【具体实施方式】
[0015]下面结合实施例对本发明做进一步的阐述。
[0016]实施例
[0017]草莓茎尖组织培养
[0018]草莓茎尖组织培养按照以下步骤进行:
[0019]1、提取物的制备
[0020](1)前胡提取物的制备
[0021]称量干燥的前胡根茎lkg，粉碎后过40目筛，将前胡粉末置于提取罐中，加入5L 50 %乙醇，浸泡24h后，搅拌条件下超声30min，冷却至室温，通过板框过滤得到前胡根茎提取液，再经减压浓缩至干，得到前胡提取物，备用。[〇〇22](2)丹参提取物的制备
[0023]称量干燥的丹参根茎lkg，粉碎后过60目筛，将丹参粉末置于提取罐中，加入3L 80 %乙醇，搅拌条件下超声30min，冷却至室温，通过板框过滤得到丹参根茎提取液，再经减压浓缩至干，得到丹参提取物，备用。
[0024](3)植物提取(混合)物的制备
[0025]①将备用的前胡提取物和丹参提取物按质量比5: 3混合，即得初代培养所需的前胡和丹参植物提取(混合)物；②将备用的前胡提取物和丹参提取物按质量比7: 6混合，即得继代培养所需的前胡和丹参植物提取(混合)物；③将备用的前胡提取物和丹参提取物按质量比7: 9混合，即得生根培养所需的前胡和丹参植物提取(混合)物，备用。
[0026]2、草莓莖尖的培养
[0027](1)植物组织培养基的配制
[0028]a、初代培养基的配制
[0029]配制1LMS培养基，加入蔗糖15g、琼脂7g，完全溶解后，添加500mg/L 6-BA2ml及初代培养所需的前胡和丹参植物提取(混合)物8g，混匀，调节pH值为5.9。
[0030]b、继代培养基的配制
[0031]配制1L MS培养基，加入蔗糖15g、琼脂7g，完全溶解后，添加500mg/L 6-BA 1ml、500mg/L NAA lml及继代培养所需的前胡和丹参植物提取(混合)物13g，混匀，调节pH值为 5.9〇
[0032]c、生根培养基的配制
[0033]配制1L 1/2MS培养基，加入蔗糖15g、琼脂7g，完全溶解后，添加500mg/L NAA 2ml、500mg/L烯效唑lml、250mg/L活性炭lml及生根培养所需的前胡和丹参植物提取(混合)物16g，混勾，调节pH值为5.9。
[0034]d、培养基的分装
[0035]将上述准备好的培养基，在开放有菌的环境中分装到直径6cm，高5.6cm的透明塑料盒中，培养基厚lcm左右，封口，备用。
[0036](2)茎尖组织培养
[0037]a、外植体消毒
[0038]从无病虫害的草莓植株上选取茎尖，采用常规方法消毒。
[0039]b、接种
[0040]初代培养:在开放有菌的环境中，将消毒后的草莓茎尖，切取长0.5?0.8cm含茎尖生长点的外植体，接种到初代培养基上，封口后，放在有菌的自然环境中暗培养5d，再进行光暗培养28d至分化出丛生芽，其中，光照强度18001x，连续光照时间12h/d，温度23? 25。。。
[0041]继代培养:在开放有菌的环境中，将丛生芽切块转接到继代培养基中，封口后，放在有菌的自然环境中培养25d，其中，光照强度1400?18001x，连续光照时间16h/d，温度 25 ?27。。。
[0042]生根培养:在开放有菌的环境中，将继代培养的幼苗转接到生根培养基中，封口后，放在有菌的自然环境中培养20d，其中，光照强度2500?40001x，连续光照时间10h/d，室温培养。
[0043]3、组培苗移栽
[0044]实施例中的生根苗无需炼苗直接采用常规移栽，移栽后25d调查移栽成活率。
[0045]4、应用效果
[0046]经本实施例处理与传统组培相比，草莓组织培养过程中玻璃化率降低了 28.5%， 降低成本13.2%。
【主权项】
1.一种草莓茎尖组织培养基，其特征在于:所述的组织培养基是在常规培养基的基础 上添加前胡和丹参植物提取(混合)物。2.根据权利要求1所述的草莓茎尖组织培养基，其特征在于:所述的植物提取(混合) 物是通过以下提取工艺得到的，(1)前胡提取物:称量干燥的前胡根茎lkg，粉碎后过40目 筛，将粉末置于提取罐中，加入5L 50%乙醇，浸泡24h后，搅拌条件下超声30min，冷却至室 温，通过板框过滤得到前胡根茎提取液，再经减压浓缩至干，得到前胡提取物；(2)丹参提 取物:称量干燥的丹参根莖lkg，粉碎后过60目筛，将粉末置于提取罐中，加入3L 80%乙 醇，搅拌条件下超声30min，冷却至室温，通过板框过滤得到丹参根茎提取液，再经减压浓缩 至干，得到丹参提取物；(3)按照一定比例将上述两种植物提取物混合即为该植物提取(混 合)物。3.根据权利要求1?2所述的草莓茎尖组织培养基，其特征在于:先将所述的前胡提 取物和丹参提取物按质量比4?6: 3?5混合，即得前胡和丹参植物提取(混合)物，其 在初代培养基中用量为7?llg/L。4.根据权利要求1?2所述的草莓茎尖组织培养基，其特征在于:先将所述的前胡提 取物和丹参提取物按质量比5?8: 5?7混合，即得前胡和丹参植物提取(混合)物，其 在继代培养基中用量为11?15g/L。5.根据权利要求1?2所述的草莓茎尖组织培养基，其特征在于:先将所述的前胡提 取物和丹参提取物按质量比6?8: 8?9混合，即得前胡和丹参植物提取(混合)物，其 在生根培养基中用量为14?18g/L。
【文档编号】A01H4/00GK105981646SQ201510061835
【公开日】2016年10月5日
【申请日】2015年2月6日
【发明人】蔡家锟, 赵东平, 高程达, 李金艳, 朱珂佳, 代俊利, 沙晓晴
【申请人】北京阿格瑞斯生物技术有限公司