专利名称：抑制滋养层细胞合胞体融合的免疫学结合分子的制作方法
技术领域：
本发明涉及抑制人滋养层细胞合胞体融合的蛋白质、包含这些蛋白质的药物及其在哺乳动物中用于避孕的用途。
抑制合胞体融合是可用于避孕的作用原理。在本发明中术语“避孕”是按照临床观点如下定义的尽管性接触，但仍然每月按时来月经并且没有开始怀孕。该一般定义也适合于目前临床上最常用的避孕。人和其它哺乳动物的避孕可通过应用各种原理或者物质来实现。已知的方法是或者通过机械的或者通过化学的手段抑制卵细胞和精子的融合。精子例如可通过使用避孕套、子宫内植入物或者杀精于物质使其失活或者阻止其受孕。此外，可以阻止妇女卵巢中卵子的成熟，这可通过激素方法达到。这些方法是本领域普通技术人员已知的。
目前常用的一大类激素类避孕药(“避孕药丸”)影响子宫的粘膜(子宫内膜)，使胚泡的着床不再可能，因为子宫内膜不再接受它。这些避孕的激素方法有许多问题，为了达到希望的效果必须保证精确地按时和按量摄取激素。因为激素本身仅具有短的测定半衰期(数小时至最长数天)，用这种方法成功的避孕只有每天服用或者施用储库制剂才是可能的。所有这些方案都存在问题，即干扰或阻止女性器官激素的内分泌周期内环境稳定。因为子宫内膜是女性器官的组成部分，所以女性器官也是发生不希望的副作用的优先地点。
因此，希望如下的方法和物质a)对植入的胚泡具有其作用点并因此另外可使对女性的器官的副作用最小化。
b)不干扰女性的器官内分泌的自身调节。
图1表示融合测试中的流式细胞计分析的实施例。其中，方框A表示DiI(本身)的荧光，而方框C表示DiO(本身)的荧光。方框B是具有融合引起的双倍荧光的可见细胞。
图1A，B表示对照，其中的细胞各只用一种荧光染料染色并在测试条件下培养。图1A表示只用DiI染色，图1B表示只用DiO染色。对于DiI的测定值在DiO-特异性测量通道中为零；因此，这这些点与X-轴重合。
图1C，D表示克隆PHSK04的融合实验。图1C表示细胞在对照条件下(在非特异性蛋白质的存在下，在相同的表达体系中表达并纯化)的融合速率，图1D表示在100nM PHSK04-蛋白质存在下的融合速率。
图2表示在融合实验中实施例克隆与对照(钙调蛋白质，在相同的表达体系中表达并纯化)相比的相对抑制率。所示的是三次测试的平均值。
图3表示具有SEQ.ID Nos.1-10的本发明优选蛋白质的共有序列。在这里给出的实施方案中，接头是序列QSSRSS。Vl和Vh的共有序列是灰底的单字母表示的克隆的具体序列。因此共有序列本身是水平读的，而对于每一个单字母表示的位置垂直方向所示的是优选替换的氨基酸。在该处的连接线表示在相应位置与共有序列相比也可缺失。X表示在该处不存在对于Vl或Vh的共有序列部分。
在PHSK04-蛋白质存在下融合速率降低。
通过一种与鸡的Vl或Vh至少80％同源并且抑制合胞体融合的蛋白质以及具有来自鸡的Vl或Vh序列的至少12个连续氨基酸的片段实现本发明的目的。在优选的实施方案中，本发明的蛋白质与鸡的Vl或Vh蛋白质至少85％或者至少90％同源。在优选的实施方案中，本发明的片段具有鸡的Vl或Vh序列的至少20个或者30个连续氨基酸。
优选地，本发明的蛋白质Vl具有下述的氨基酸序列X0A L T Q P S S V S A N X1 G X2T V X3X4T C S G X5X6X7X8X9X10Y GW X11Q Q K X12P G S X13P X14T X15I Y X16X17X18X19R P S X20I P S R FS G S X21S G S X22X23T L T I T G F Q A X24D E A V Y X25C G X26X27X28X29X30X31X32X33X34X35X36X37X38F G A G T T L T V L G X39其中X0＝未取代的、单-或二取代的氨基或者一个或多个氨基酸；X1＝P或L或缺失；X2＝G或E或缺失；X3＝K或E或缺失；X4＝I或L或缺失；X5＝G或S或缺失；X6＝S或G或缺失；X7＝G或R或Y或缺失；
X8＝S或R或Y或缺失；X9＝W或S或缺失；X10＝S或K或Y或缺失；X11＝Y或F或缺失；X12＝S或A或缺失；X13＝A或T或缺失；X14＝V或D或缺失；X15＝V或L或缺失；X16＝N或V或S或D或E或缺失；X17＝N或S或缺失；X18＝N或T或D或K或缺失；X19＝K或N或缺失；X20＝D或N或缺失；X21＝K或V或缺失；X22＝T或A或缺失；X23＝A或H或N或缺失；X24＝D或E或缺失；X25＝Y或F或缺失；X26＝N或S或G或缺失；X27＝R或Y或G或缺失；X28＝D或缺失；X29＝W或缺失；X30＝D或K或A或缺失；X31＝S或T或D或缺失；X32＝S或A或G或缺失；X33＝A或G或缺失；X34＝G或R或缺失；X35＝Y或N或缺失；X36＝V或A或T或缺失；X37＝G或A或N或缺失；X38＝I或A或M或缺失；和X39＝羧基、羧基衍生物或者一个或多个氨基酸；
其中任何氨基酸的相互保守交换是允许的，只要保持合胞体融合的抑制作用。
在另一优选实施方案中，本发明的蛋白质在Vh中具有下述序列X0X1V T L D E S G G G L Q T P G X2X3L S L V C K X4S G F X5X6X7X8YX9M X10W X11R Q A P G K G L E X12V X13X14X15X16X17X18X19X20X21X22T X23Y X24X25A V X26G X27X28X29X30X31X32X33X34X35X36X37X38X39X40X41X42X43X44X45X46X47X48X49X50X51X52X53X54X55X56X57X58X59其中X0＝未取代的，单-或二取代的氨基或者一个或多个氨基酸；X1＝A或S或T或缺失；X2＝G或R或缺失；X3＝G或A或T或缺失；X4＝A或G或缺失；X5＝S或T或D或缺失；X6＝F或M或缺失；X7＝S或T或缺失；X8＝S或D或N或缺失；X9＝G或Q或A或T或缺失；X10＝N或A或Q或G或缺失；X11＝I或V或缺失；X12＝F或W或Y或缺失；X13＝A或G或缺失；X14＝G或A或R或缺失；X15＝I或M或缺失；X16＝S或N或G或缺失；X17＝S或R或N或缺失；X18＝G或缺失；X19＝F或T或S或N或缺失；X20＝G或S或A或缺失；X21＝N或S或R或缺失；X22＝R或S或Y或缺失；
X23＝G或A或N或Y或缺失；X24＝G或A或缺失；X25＝S或A或P或缺失；X26＝K或Q或缺失；X27＝R或L或缺失；X28＝A或C或缺失；X29＝T或H或缺失；X30＝I或H或缺失；X31＝S或L或缺失；X32＝R或E或缺失；X33＝D或G或缺失；X34＝N或Q或R或D或K或缺失；X35＝G或R或W或缺失；X36＝Q或A或缺失；X37＝S或E或缺失；X38＝T或H或缺失；X39＝V或S或缺失；X40＝R或E或缺失；X41＝L或A或缺失；X42＝Q或A或缺失；X43＝L或A或缺失；X44＝N或E或S或缺失；X45＝N或Q或缺失；X46＝L或P或缺失；X47＝R或Q或缺失；X48＝A或G或缺失；X49＝E或G或缺失；X50＝D或H或缺失；X51＝T或R或L或缺失；X52＝G或P或缺失；X53＝T或P或缺失；X54＝Y或T或缺失；
X55＝Y或S或缺失；X56＝C或A或缺失；X57＝A或P或缺失；X58＝K或缺失；X59＝羧基、羧基衍生物或者一个或多个氨基酸；并且其中任何氨基酸的相互保守交换是允许的，只要保持合胞体融合的抑制作用。
按照本发明，“保守交换”特别是指极性、非极性、芳族、带电荷的氨基酸之间的交换，例如甘氨酸与丙氨酸或缬氨酸等，精氨酸或赖氨酸与组氨酸等，苯丙氨酸与酪氨酸等。
按照本发明，本发明的蛋白质可通过接头相互连接。该接头优选是由至少五个任意的氨基酸组成的肽链。这些氨基酸优选与Vl或Vh链不具有或仅具有不显著的相互作用。代替肽链，所述接头也可由有机化合物构成。这些有机化合物主要由碳链构成，也可具有杂原子。在这种情况下，接头的长度优选至少为9埃。
本发明蛋白质的序列中D-氨基酸的存在是有利的，因为这可导致降解变慢。
尤其优选具有氨基酸序列SEQ ID Nos.1-10的本发明的蛋白质。
这些蛋白质通过具有序列SEQ ID No.11的共有序列进行描述，该序列同样是本发明所涉及的。
本发明还涉及编码本发明的蛋白质的核酸，尤其是DNA或RNA，以及含有这类核酸的质粒或载体。
本发明还涉及含有至少一种本发明的蛋白质或核酸的药物。
按照本发明，还要求保护至少一种本发明的蛋白质或核酸用于制备用于哺乳动物避孕的药物的用途。按照本发明的药物典型的是按照100ng/kg-1000μg/kg体重的量施用。给药途径优选胃肠外、通过输注或通过肌内或皮下注射。此外，可能的剂型包括鼻喷雾剂、栓剂、阴道施用，例如通过棉塞或其本身为医学领域普通技术人员已知的其它合适的应用形式或通过简单试验可确定的形式。
胚泡成功地植入子宫内膜中不仅取决于子宫内膜的接受性。只有当处于胚泡外层的细胞，所谓的滋养层细胞，相互融合并形成合胞体时植入才是可能的。合胞体的形成是一个仅发生于人体生物学中少数部位的过程，例如已知在骨骼肌纤维形成中和在破骨细胞的形成中。
在成肌细胞的合胞体融合或破骨细胞的形成中，ADAM(aDisintegrinand ametalloproteinase；相关综述参见Huppertz等，2001)组的分子是特别重要的，而人的滋养层利用内源逆转录病毒蛋白质，即syncytin(Mi等，2000)。因此，出发点是通过抑制滋养层细胞的融合达到避孕效果。滋养层融合过程对于滋养层是特异性的，因此，其抑制可用于选择性的滋养层-特异性的避孕。
从功能上看，本发明的蛋白质的特点是其抑制滋养层细胞合胞体融合的能力。它们可被用于在雌性哺乳动物中，尤其是啮齿类动物、宠物，例如狗和猫，和在人类中达到避孕效果。因此本发明主要包括下述组分蛋白质，其可优选以免疫结合分子的形式存在，其a)通过同源性比较可分类为非哺乳动物，尤其是鸡的抗体衍生物；特别是它们的实质特征是提及的氨基酸共有序列；b)功能特征在于抑制哺乳动物滋养层细胞的合胞体融合。
免疫结合分子的结构单元在优选实施方案中，本发明的蛋白质可以免疫结合分子形式存在。在本文描述的实施例中，免疫结合分子是重组分子。在实施例中给出的免疫结合分子是“单链可变片段”抗体(scFv)类型，这种抗体分子只由抗体分子的轻链(Vl)和重链(Vh)的可变区构成，所述抗体分子通过重组插入的一个短的序列(接头)相互连接。因此，scFv可被理解为免疫结合分子的最低限要求实施方案。起决定性的结合信息包含在单个可变区Vl和Vh中，而不在于其连接的方式和类型。本发明其它实施方案涉及所谓的Fab(抗原结合片段)抗体或其它任意构建的抗体分子，并且还任选非重组的天然的抗体分子，其序列中包含至少一个可变区。在也通过实施例说明的scFv实施方案中，可能涉及下述相关的组件的序列Vl-接头-VhVh-接头-Vl对于其它载体构建，同样适合的是在构建体中Vl和Vh的顺序不是确定的，并且构建体本身对于结合性能的贡献不是关键的。本文中所用的“载体构建”是指可在其上装配scFv抗体或这些抗体的部分的那些分子，以可通过最佳方式发现其结合配偶体。
因此，本发明尤其是涉及所有免疫结合分子及其衍生物，其特异性结合区域具有下述Vh和Vl的共有序列或其序列分别与Vl或Vh的共有序列至少80％相同，并且能抑制滋养层细胞的融合。同样，在免疫结合分子的重组表达中是否由于技术原因引入所谓的表位标记(例如用于改进纯化的HIS标记或在免疫检测方法中使用第二抗体的myc标记等)对于本发明是不重要的。这些标记是纯技术性的，不是本发明要保护的序列的组成部分。
免疫结合分子，如本文所描述的那些，可以用鸡通过把鸡的所有免疫组成成分以适当的形式转运至分子生物学文库中而获得。合适的技术例如描述于Barbas CF，Burton DR，Scott JK，Silverman GJ；Phage DisplayA laboratory manual，CSHL Press，New York中，如果这样的文库可获得，可通过已知的技术(例如描述于上述Barbas等的文献中)，通过分离结合可融合的滋养层细胞表面的那些抗体，能富集希望的分子，然后在DNA水平上通过分离克隆这些抗体并在DNA水平上进行序列分析。然后为了检测其融合-抑制作用，必须在融合试验中测试所有抗体并表征。本文所给出的共有序列很可能涵盖了这种由随机文库中分离得到的融合-抑制性抗体的序列。
另外，已知序列的抗体DNA可通过上述方法在噬菌体展示中克隆鸡抗体并对单个克隆随机选取和进行序列分析而制备。鸡抗体的构架序列与本文中的Vh和Vl构架序列是高度同源的并且偏离很少。结合特异性通过“互补决定区”(CDR)确证，一种抗体与另一种抗体的CDR差异很大。应用已知的分子生物学技术，通过有选择性交换各片段，主要是CDR区，也可以这种方法修饰克隆的鸡序列，构建希望序列的抗体。
实施例抗体分子在实施例中给出的scFv抗体存在于载体pAC中，由DNA编码。这一载体是适合于大肠杆菌(E.coli)的表达载体，其由f1起始点，一种阿拉伯糖-控制的pBAD启动子和一种带来氨苄西林抗性的基因组成。将编码所述免疫结合分子的DNA序列插入到该载体中，使其表达受pBAD启动子控制。载体中包含的信号肽引导表达的蛋白质进入大肠杆菌的周质中，并且6xHIS标记与要表达的序列连接，以使通过金属亲和性色谱进行纯化称为可能。所有克隆都在表达前通过序列分析验证，从而确保所用的DNA序列正确地构建到载体中。
所述序列可在任何适合于表达蛋白质的表达体系，例如在大肠杆菌和啤酒糖酵母(Saccharomyces cerevisiae)中，在相应的再克隆后合成为蛋白质。相应的步骤被描述于很多分子生物学和生物技术教科书中，并且原则上所有这些教科书都可适用于本发明的序列。这些技术是本领域普通技术人员已知的。在下面说明通过载体pAC在大肠杆菌(Top Ten菌株，Invitrogen，Groningen，荷兰)中的表达和表达的蛋白质的纯化和表征。
首先通过电穿孔将含有要表达的序列的pAC衍生物转化到大肠杆菌Top Ten中，并将转化的混合物在琼脂板上(LB培养基，50μg/ml氨苄西林)上平板培养并在30℃温育过夜。
在第二天，将每5ml LB培养基(组成参见Sambrook等，1989；含有50μg/ml氨苄西林)用从单个菌落获得的细菌接种。将该培养物于37℃下，在300转数/分钟(rpm)的温育摇动器上温育过夜。第二天，将该过夜预温育的表达培养物以1∶100的稀释度接种并且在37℃下于Fernbach瓶中，在300rpm下培养，直至光学密度(在600nm测定OD600)达到0.5。一般情况下，约2.5小时后达到这种情况。在达到希望的OD600后，通过加入L-阿拉伯糖(至最大浓度0.02％；最佳浓度必须通过在预实验中对于每一克隆确定)诱导表达。此时在26℃和300rpm下表达4-6小时。细菌的生长行为通过取样和测量OD600记录。表达期完成后，在4℃和4000xg离心该培养物20min，将沉淀重新悬浮于2ml TES缓冲液中(0.2M Tris-HCl，pH8.0；0.5mM EDTA；0.5M蔗糖)。此时，向该混悬液中慢慢加入3ml 1/5TES缓冲液(1体积份TES缓冲液+4体积双蒸水)，进行混合并在冰上温育30min，然后将该样品分装到1.5ml反应容器中并在4℃和10,000xg离心10分钟，上清液含有周质蛋白质，因此也含有希望的表达产物。
对于后处理，将该上清液在4℃下对等渗的磷酸盐缓冲盐水(pH7.4，含有10mM咪唑)透析过夜。此时借助于用于镍亲和性色谱的可商购的试剂盒(例如Qiagen GmbH，Hilden，德国)可纯化希望的蛋白质。纯化通过凝胶电泳检测并测定蛋白质浓度(Harlow和Lane，1988)。摩尔浓度通过浓度测定和由序列导出的分子量确定。
然后，在融合试验中，在等摩尔条件下检验纯化并定量分析的蛋白质是否能够抑制人滋养层细胞的融合。
下面列举了在实施例中表达和分析的克隆以及对比给出由DNA序列翻译的氨基酸序列。
融合实验，操作和结果抑制融合作用的验证是应用自发融合的人滋养层细胞系AC-1M17进行的。这一细胞系的细胞在接种于新的培养容器后立刻显示出初始的融合速率为20-30％。
使这一细胞系的细胞首先增殖至足够数量，然后分成两部分，用不同的商购荧光染料(DiI和DiO，按照供应商Molecular ProbesBV，Leiden，Netherlands的说明染色)染色。
在对细胞进行充分洗涤(5×10分钟)，以洗去任何可能附着的没有整合到细胞膜中的染料残余物之后，将两部分细胞混合并一起，并且共同在低细胞密度、标准培养条件(5％二氧化碳，38℃，湿度大于90％)下于Ham′s F12(10％胎牛血清和抗生素)中温育24小时。在培养期后，用胰蛋白质酶将细胞从培养瓶底分离下来，悬浮，并用流式细胞计测定存在多少细胞通过融合而具有双倍的荧光。图1示出这种融合实验评价的实例，图2概述了在实施例中测定的对于各个scFv克隆，这些滋养层细胞的融合的抑制率。该图同样显示了在各种克隆中融合抑制作用的浓度依赖性。
文献列表Harlow E，Lane D(1988)AntibodiesA laboratory manual.Cold Spring HarborLaboratory，Cold Spring Harbor，NYHuppertz B，Tews DS，Kaufmann P(2001)Apoptosis and syncytial fusion inhuman placental trophoblast and skeletal muscle.Int Rev Cytol 205215-253Mi S，Lee X，Li X，Veldman GM，Finnerty H，Racie L，LaVallie E，Tang X-Y，Edouard P，Howes S，Keith JC，McCoy JM(2000)Syncytin is a captiveretroviral envelope protein involved in human placental morphogenesis.Nature403785-789Sambrook J，Fritsch EF，Maniatis T(1989)Molecular cloninga laboratorymanual，2nd ed.edn.Cold Spring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor，N.Y
权利要求
1.一种与鸡的V1或Vh至少80％同源并且抑制合胞体融合的蛋白质以及具有来自鸡的V1或Vh序列的至少12个连续氨基酸的片段。
2.按照权利要求1的蛋白质，其中V1具有下述序列X0ALTQPSSVSANX1GX2TVX3X4TCSGX5X6X7X8X9X10YGWX11QQKX12PGSX13PX14TX15IYX16X17X18X19RPSX20IPSRFSGSX21SGSX22X23TLTITGFQAX24DEAVYX25CGX26X27X28X29X30X31X32X33X34X35X36X37X38FGAGTTLTVLGX39其中X0＝未取代的，单-或二取代的氨基或者一个或多个氨基酸；X1＝P或L或缺失；X2＝G或E或缺失；X3＝K或E或缺失；X4＝I或L或缺失；X5＝G或S或缺失；X6＝S或G或缺失；X7＝G或R或Y或缺失；X8＝S或R或Y或缺失；X9＝W或S或缺失；X10＝S或K或Y或缺失；X11＝Y或F或缺失；X12＝S或A或缺失；X13＝A或T或缺失；X14＝V或D或缺失；X15＝V或L或缺失；X16＝N或V或S或D或E或缺失；X17＝N或S或缺失；X18＝N或T或D或K或缺失；X19＝K或N或缺失；X20＝D或N或缺失；X21＝K或V或缺失；X22＝T或A或缺失；X23＝A或H或N或缺失；X24＝D或E或缺失；X25＝Y或F或缺失；X26＝N或S或G或缺失；X27＝R或Y或G或缺失；X28＝D或缺失；X29＝W或缺失；X30＝D或K或A或缺失；X31＝S或T或D或缺失；X32＝S或A或G或缺失；X33＝A或G或缺失；X34＝G或R或缺失；X35＝Y或N或缺失；X36＝V或A或T或缺失；X37＝G或A或N或缺失；X38＝I或A或M或缺失；和X39＝羧基、羧基衍生物或者一个或多个氨基酸；并且其中任何氨基酸的相互的保守交换是允许的，只要保留抑制合胞体融合的作用。
3.按照权利要求1的蛋白质，其中Vh具有下述序列X0X1VTLDESGGGLQTPGX2X3LSLVCKX4SGFX5X6X7X8YX9MX10WX11RQAPGKGLEX12VX13X14X15X16X17X18X19X20X21X22TX23YX24X25AVX26GX27X28X29X30X31X32X33X34X35X36X37X38X39X40X41X42X43X44X45X46X47X48X49X50X51X52X53X54X55X56X57X58X59其中X0＝未取代的，单-或二取代的氨基或者一个或多个氨基酸；X1＝A或S或T或缺失；X2＝G或R或缺失；X3＝G或A或T或缺失；X4＝A或G或缺失；X5＝S或T或D或缺失；X6＝F或M或缺失；X7＝S或T或缺失；X8＝S或D或N或缺失；X9＝G或Q或A或T或缺失；X10＝N或A或Q或G或缺失；X11＝I或V或缺失；X12＝F或W或Y或缺失；X13＝A或G或缺失；X14＝G或A或R或缺失；X15＝I或M或缺失；X16＝S或N或G或缺失；X17＝S或R或N或缺失；X18＝G或缺失；X19＝F或T或S或N或缺失；X20＝G或S或A或缺失；X21＝N或S或R或缺失；X22＝R或S或Y或缺失；X23＝G或A或N或Y或缺失；X24＝G或A或缺失；X25＝S或A或P或缺失；X26＝K或Q或缺失；X27＝R或L或缺失；X28＝A或C或缺失；X29＝T或H或缺失；X30＝I或H或缺失；X31＝S或L或缺失；X32＝R或E或缺失；X33＝D或G或缺失；X34＝N或Q或R或D或K或缺失；X35＝G或R或W或缺失；X36＝Q或A或缺失；X37＝S或E或缺失；X38＝T或H或缺失；X39＝V或S或缺失；X40＝R或E或缺失；X41＝L或A或缺失；X42＝Q或A或缺失；X43＝L或A或缺失；X44＝N或E或S或缺失；X45＝N或Q或缺失；X46＝L或P或缺失；X47＝R或Q或缺失；X48＝A或G或缺失；X49＝E或G或缺失；X50＝D或H或缺失；X51＝T或R或L或缺失；X52＝G或P或缺失；X53＝T或P或缺失；X54＝Y或T或缺失；X55＝Y或S或缺失；X56＝C或A或缺失；X57＝A或P或缺失；X58＝K或缺失；X59＝羧基、羧基衍生物或者一个或多个氨基酸；并且其中任何氨基酸的相互的保守交换是允许的，只要保留抑制合胞体融合的作用。
4.按照权利要求1的蛋白质，其中所述蛋白质具有通过接头相互连接的权利要求2和3的序列。
5.按照权利要求4的蛋白质，其中所述接头是由至少5个任意氨基酸组成的肽链。
6.按照权利要求1-5任一项的蛋白质，其中在所述序列中包含D-氨基酸。
7.按照权利要求1-6任一项的蛋白质，其具有氨基酸序列SEQ IDNos.1至10。
8.一种蛋白质，其具有序列SEQ ID No.11(共有序列)。
9.一种编码权利要求1-8任一项的蛋白质的核酸，尤其是DNA或RNA。
10.含有权利要求9的核酸的质粒或载体。
11.一种药物，其含有至少一种权利要求1-8任一项的蛋白质或至少一种权利要求9的核酸。
12.至少一种权利要求1-8任一项的蛋白质或至少一种权利要求9的核酸用于制备用于哺乳动物避孕的药物的用途。
全文摘要
本发明涉及抑制合胞体融合、与鸡的V1或Vh至少80％同源的蛋白质，以及具有来自鸡的V1或Vh序列的至少12个连续氨基酸的片段。
文档编号C12N15/63GK1656120SQ02813510
公开日2005年8月17日 申请日期2002年7月3日 优先权日2001年7月4日
发明者H·－G·弗兰克, P·考夫曼, U·施密茨 申请人:阿普拉根有限责任公司