专利名称：酸枣仁汤活性部位及其制备工艺、新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中成药活性部位，特别是涉及酸枣仁汤活性部位及其制备工艺、新用途。
现代在继承前人临证经验的基础上，进一步扩大了本方的应用范围，顽固性失眠是酸枣仁汤在精神神经系统中应用最为广泛的疾病之一；此外，心脏β受体亢进症、先天性非溶血性黄疸、因精神紧张、情绪激动、饮酒等原因导致的皮肤科疾病、血精症、复发性口腔溃疡、十二指肠溃疡、崩漏、自汗、盗汗、嗜酸症、乙型病毒性肝炎、梅尼埃病、眩晕等病症都有所应用。
一种酸枣仁汤活性部位，包括B多糖260-300重量份、E黄酮4-7重量份。该活性部位是通过以下方法制备的酸枣仁汤药材，用8-11倍量(重量的倍数)水浸泡20-40min后，水蒸汽蒸馏0.8-1.5小时，收集馏出液，过滤，药渣用7-9倍量水水蒸汽蒸馏0.3-0.5小时，收集馏出液，过滤；合并滤液及馏出液，得滤液I及馏出液I；滤液I继续蒸馏至总体积的60-85％时，得馏出液II和滤液I剩余部分—滤液II；馏出液II重蒸馏至原体积的40-60％时，停止蒸馏；滤液II减压浓缩至时生药重与体积比为1∶1，加入95％乙醇调至醇度为55-65％，3-5℃放置22-26小时，抽滤，得母液I及沉淀I；母液I继续加乙醇调至醇度为75-85％，3-5℃放置22-26小时，抽滤，得母液II及沉淀II；沉淀I及沉淀II合并，得B多糖部分；母液I及母液II合并，减压浓缩至生药重与体积比为4∶1，乙醚萃取，得乙醚萃取液及水溶液；水溶液浓缩至生药重与体积比为10∶1，上样，聚酰胺柱层析；分别用水、30％乙醇、50％乙醇、95％乙醇洗脱；检识，合并相同部位；30％乙醇洗脱液盐酸-镁粉检识反应阳性部分，减压干燥，得E黄酮部分。
本发明的酸枣仁汤的活性部位，还可由A、B、C、D、E、F六个部分组成；该六个部位是由如下方法制备的∶酸枣仁汤药材，用8-11倍量(重量的倍数)水浸泡20-40min后，水蒸汽蒸馏0.8-1.5小时，收集馏出液，过滤，药渣用7-9倍量水水蒸汽蒸馏0.3-0.5小时，收集馏出液，过滤；合并滤液及馏出液，得滤液I及馏出液I；滤液I继续蒸馏至总体积的60-85％时，得馏出液II和剩余部分—滤液II；馏出液II重蒸馏至原体积的40-60％时，停止蒸馏；重蒸液用沸点为30℃～60℃的石油醚萃取，回收石油醚，得A挥发油部分(A为挥发油，因量太少，故溶于500ml石油醚定容以用于配方)；滤液II减压浓缩至时生药重与体积比为1∶1，加入95％乙醇调至醇度为55-65％，3-5℃放置22-26小时，抽滤，得母液I及沉淀I；母液I继续加乙醇调至醇度为75-85％，3-5℃放置22-26小时，抽滤，得母液II及沉淀II；沉淀I及沉淀II合并，得260-300重量份B多糖部分；母液I及母液II合并，减压浓缩至生药重与体积比为4∶1，无醇味，乙醚萃取，得乙醚萃取液及水溶液；乙醚萃取液减压回收乙醚，得3-4.5重量份C乙醚萃取部分部分；水溶液减压浓缩至生药重与体积比为10∶1，上样；分别用水、30％乙醇、50％乙醇、95％乙醇洗脱；检识，合并相同部位；水洗脱部分、30％乙醇洗脱液盐酸-镁粉检识反应阴性且醋酐-浓硫酸反应阳性部分、50％乙醇洗脱部分合并，减压干燥，得300-340重量份D皂苷及苷元部分；30％乙醇洗脱液盐酸-镁粉检识反应阳性部分，减压干燥，得4-7重量份E黄酮部分；95％乙醇洗脱液，减压回收，得1-3重量份F(95％乙醇洗脱部分)。
以上所述检识是采用以下方法A，茴香醛-浓硫酸反应阳性；B，Molish反应阳性；C，Molish反应阴性，醋酐-浓硫酸反应阳性，盐酸-镁粉反应阳性；D，Molish反应阳性，醋酐-浓硫酸反应阳性，盐酸-镁粉反应阴性；E，盐酸-镁粉反应阳性；F，以上反应均呈阴性。分别提示含有挥发油、多糖类、苷元及黄酮类成分、皂苷及苷元类成分、黄酮类以及混杂类成分。
按药剂学方法，可以将本发明酸枣仁汤的活性部位制备成多种临床药物剂型，包括口服制剂或非肠道给药的剂型。所说的口服制剂选自于片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂当中的一种；所说的非肠道给药剂型选自于注射剂、气雾剂、栓剂或皮下给药剂型当中的一种。本发明药物还可加入常规的药物赋形剂，如溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂等。
本发明酸枣仁汤的活性部位及酸枣仁汤具有抗焦虑的作用。
在高架十字迷宫(elevated plus-maze，EPM)焦虑模型中，酸枣仁汤组分有效配方SZRT6(B+E)可显著升高大鼠(7.5g/kg)和小鼠(20g/kg)进入开放臂次数比(0E％)和在开放臂停留时间比(OT％)(p＜0.05)，且大鼠在开放臂中head-dips次数显著升高(p＜0.05)；但大鼠、小鼠开放臂和封闭臂总的进入次数(total arm entries)与水煎液全部成分对照组相比无显著差异(p＞0.05)。上述指标，SZRT6与可基本代表SZRT水煎液全部成分的SZRT1无显著差异(p＞0.05)。结果表明在该剂量下，SZRT6具有确切的抗焦虑作用，且与镇静催眠作用无关。其效应与可基本代表SZRT水煎液全部成分的SZRT1相当。结论本发明酸枣仁汤的活性部位与酸枣仁汤水煎液作用相当，药效成份更为明确。在抗焦虑的作用中有很好的效果。
以下实验例进一步说明本发明。实验例为探讨SZRT(酸枣仁汤)水提物中有关组分与抗焦虑作用的关系，在SZRT水提物的初步分离出组分基础上，采用国际通用的焦虑动物模型elevated plus-maze(EPM，高架十字迷宫)，先后分别考察SZRT的组分及其不同配伍对大鼠和小鼠焦虑模型的影响。
1.材料1.1动物昆明种小鼠，雄性，体重28±3g，中国医学科学院实验动物研究所提供，动物合格证号SCXK11-00-0066；Wistar大鼠，雄性，体重250±20g，中国药品生物制品鉴定所实验动物中心提供，动物合格证号SCXK11-00-0010。
所有动物提前两周购入，本室动物室自然饲养。室温21±2℃。
1.2药物与试剂1.2.1 DZP(diazepam，地西泮，安定)混悬液原料DZP片剂(2.5mg×20片)，京卫药准字(1996)第154011号，生产批号0204090，北京益民制药厂生产。DZP片研磨，加入2％CMC-Na适量，用蒸馏水配成0.2mg/ml(小鼠用)和0.1mg/ml(大鼠用)两种混悬液。4℃保存备用，使用时摇匀。1.2.2酸枣仁汤的组分配方SZRT提取分离出的6部分(A、B、C、D、E、F)由研究一方法制得。
1.3仪器1.3.1小鼠高架十字迷宫(EPM)制作高架十字迷宫由两个相对的开放臂(open arm，长×宽×高分别为30×5cm)和两个相对的封闭臂(enclosed arm，close arm，长×宽×高分别为30×5×15cm)组成，一个连接四只臂的中央平台(centralplatform，5cm×5cm)(即开放臂—中央平台—开放臂或封闭臂—中央平台—封闭臂，此二者互相垂直成为“十”(plus)形状)。本迷宫由国产有机玻璃制作(0.5cm厚)，除四个臂的底板及中央平台为黑色外，其余部位均为无色透明。开放臂周围设有0.25cm高的边缘。有机玻璃部分整体固定于(由黑色等长宽的“十”字形木架和不锈钢底座组成的)支架上，迷宫底板距实验室地面60cm处。
1.3.2大鼠高架十字迷宫(EPM)制作大鼠高架十字迷宫由两个相对的开放臂(open arm，长×宽分别为50cm×10cm)、两个相对的封闭臂(enclosed arm，close arm，长×宽×高分别为50cm×10cm×40cm)、一个连接四只臂的中央平台(centralplatform，10cm×10cm)(即开放臂—中央平台—开放臂或封闭臂—中央平台—封闭臂，此二者互相垂直成为“十”(plus)形状)和围绕在开放臂边缘的1cm高的矮挡板组成(目的是防止动物在探究过程中不慎滑下迷宫)。本迷宫由国产有机玻璃制作(0.5cm厚)，除四个臂的底板及中央平台为黑色外，其余部位均为无色透明。有机玻璃部分整体固定于(由黑色等长宽的“十”木架和不锈钢可升降底座组成的)支架上，使迷宫底板调节到到距实验室地面50cm处。
2.方法2.1组分配方按L8(27)正交表[5]分别进行组分配方(见附表)SZRT1(A+B+C+D+E+F)、SZRT2(A+B+C)、SZRT3(A+D+E)、SZRT4(A+F)、SZRT5(B+D+F)、SZRT6(B+E)、SZRT7(C+D)、SZRT8(C+E+F)共8个配方，各配方中的组分配伍用量是根据该组分相当的药材量和原方配伍比例计算而得，用蒸馏水或混悬液(加入吐温-80)配制，4℃保存备用，使用时摇匀。
SZRT组分配方L8(27)正交表SZRT A B C D E F组分配方1 2 3 4 5 6 711 1 1 1 1 1 121 1 1 2 2 2 231 2 2 1 1 2 241 2 2 2 2 1 152 1 2 1 2 1 262 1 2 2 1 2 172 2 1 1 2 2 182 2 1 2 1 1 2表中1水平代表有，2水平代表无。
2.2动物分组及处置小鼠每笼10只，大鼠每笼7～8只，不限食水。光照节律12L∶12D(700～1900)，室温(21±2)℃，动物室保持安静。
小鼠随机分为10组，即对照组、DZP组、SZRT1组、SZRT2组、SZRT3组、SZRT4组、SZRT5组、SZRT6组、SZRT7组、SZRT8组，共10组，每组20只。其中SZRT1组～SZRT8组分别按相当于全方生药20g/kg体重给予SZRT1～SZRT8灌胃，DZP组按每日2.0mg/kg给以DZP混悬液灌胃，正常组给予等容积蒸馏水灌胃，每次灌胃体积为0.1ml/10g体重。
大鼠随机分为4组，即对照组、DZP、SZRT1组、SZRT6组，每组14只；其中SZRT1组、SZRT6组分别按按相当于全方生药7.5g/kg体重给以SZRT1、SZRT6灌胃，DZP组按每日1.0mg/kg灌胃，正常组给予等容积的蒸馏水灌胃，每次灌胃体积为1ml/100g体重。
试验期间，隔日800～930AM称重，动物给药后重新放回原饲养盒中。小鼠、大鼠连续给药10日，中药组动物于第10日灌胃后1.5h，DZP组和对照组动物于腹腔注射后0.5h做行为学测试。所有动物提前2小时进入实验室，行为测试结束后，动物断头取血，快速取出脑组织。
2.3指标测试2.3.1测试环境实验室内光线昏暗(以1.5m距离处能区分小鼠细微活动的最低亮度为准)并保持恒亮，室温保持在(21±2)℃，安静。小鼠、大鼠EPM置于实验室一角，周围布以2m高黑色单调背景。实验过程中只有一名参与日常处理人员给药以及搬运动物。由2名事先进行过实验记录培训但不熟悉分组情况的人员在距离测试箱1.5m处分别观察记录动物的活动。小鼠行为学测试均于800～1530之间进行，大鼠行为学测试均于800～1230之间进行。每只动物测试5min，中间先湿布擦拭迷宫，继用干布擦净后再进行下一只动物测试。
2.3.2小鼠行为学观测指标每只小鼠置于EPM的中央平台处，使其头部正对其中一个开放臂，释放后即开始记录5min内下述指标(1)进入开放臂次数(open arm entry，OE)进入到任一开放臂的次数，以小鼠四个爪子均进入到臂内为准，中途一个爪子从该臂中完全退出则为该次进入活动完成；(2)开放臂时间(open arm time，OT)进入开放臂的时间，单位秒；(3)进入封闭臂次数(close arm entry，CE)进入到任一封闭臂的次数，以小鼠四个爪子均进入到臂内为准；(4)封闭臂时间(close armtime，CT)进入封闭臂的时间，单位秒；(5)向下探究次数(head-dips)小鼠置身于开放臂时，一边用前爪握住迷宫边缘一边把头部和肩部伸出开放臂的边缘向迷宫下面探究的行为次数。
由(1)～(4)分别计算出①开放臂和封闭臂的总的进入次数(total armentries)，即OE+CE，表示小鼠的运动活力(locomotor activity)；开放臂进入次数比例(OE％)，即开放臂进入次数/(开放臂进入次数+封闭臂进入次数)×100％；开放臂停留时间比例(OT％)，即开放臂停留时间/(开放臂进入时间+封闭臂进入时间)×100％。
2.3.3大鼠行为学观测指标观测指标、计算方法及实验处理同上。
2.4数据处理各组数据用x±S表示，多组间的显著性检验采用q检验[6]。所有数据均用软件SPSS 10.0 for windows(one-way ANOVA)进行处理。SZRT汤不同组分配方对OE％和OT％的影响，采用有重复的L8(27)正交实验分析用表，用F检验评定各因素对OE％和OT％的影响，所有数据均用软件SPSS 10.0 forwindows(General Linear Model)进行处理。
3.结果3.1SZRT不同组分配方对小鼠EPM模型行为学的影响3.1.1SZRT不同组分配伍对小鼠OE％和OT％的影响结果见表1。从表1中可以看出，与对照组相比，DZP组OE％、OT％均显著高于对照组(P＜0.01)。SZRT1组、SZRT3组、SZRT5组、SZRT66组小鼠OE％均显著高于对照组(P＜0.05)；SZRT1组、SZRT6组OT％均显著高于对照组(P＜0.05)。SZRT组分配方各组间OE％、OT％均无显著差异(P＞0.05)。表一SZRT组分配方SZRT1～SZRT8对EPM焦虑模型小鼠开放臂进入次数比(OE％)和开放臂停留时间比(OT％)的影响(x±S)GroupDose(/kg)N OE％OT％Vehicle 019 0.101±0.118 0.061±0.102DZP 2mg 20 0.326±0.159** 0.358±0.203**SZRT115g 18 0.203±0.129*0.225±0.168*SZRT215g 20 0.151±0.099 0.079±0.072SZRT315g 18 0.220±0.206*0.200±0.258SZRT415g 19 0.193±0.136 0.163±0.146SZRT515g 20 0.214±0.175*0.139±0.168SZRT615g 20 0.222±0.159*0.241±0.202*SZRT715g 19 0.168±0.142 0.151±0.186SZRT815g 18 0.130±0.133 0.152±0.178
*P＜0.05，**P＜0.01，compared with vehicle-treated group.
3.1.2SZRT不同组分配伍对小鼠Head-dips行为的影响结果见表2。从表2可以看出，与对照组比较，DZP组head-dips次数显著增加(P＜0.01)。SZRT各组小鼠在开放臂head-dips次数均无显著增加，但SZRT1组、SZRT6组head-dips次数有升高趋势。3.1.3SZRT不同组分配伍对小鼠开放臂和封闭臂总的进入次数(total armentries)结果见表2。从表2可看出，DZP组小鼠开放臂和封闭臂总的进入次数与对照组比没有显著差异(P＞0.05)。SZRT组分配方各组小鼠开放臂和封闭臂总的进入次数与对照组比没有显著差异(P＞0.05)。表二SZRT组分配方SZRT1～SZRT8对EPM焦虑模型小鼠开放臂低头探索次数(Head-dips)和运动能力(Total arm entries)的影响(x±S)Group Dose(/kg) NHead-dips Total arm entriesVehicle019 3.63±8.27 16.00±2.77DZP2mg 20 21.40±13.91** 20.85±6.10SZRT115g 18 20.16±19.3515.15±3.86SZRT215g 20 3.45±3.76 15.05±6.51SZRT315g 18 3.94±5.96 12.94±3.56SZRT415g 19 6.90±8.56 15.70±3.95SZRT515g 20 5.65±9.22 15.05±5.21SZRT615g 20 19.60±21.0014.05±3.46SZRT715g 19 1.95±2.95 14.65±5.08SZRT815g 18 5.58±10.61 14.11±4.47**P＜0.01，compared with vehicle-treated group.
3.2SZRT组分有效配方SZRT1、SZRT6对大鼠EPM模型行为学的影响3.2.1SZRT组分有效配方SZRT1、SZRT6对大鼠OE％和OT％的影响结果见表3。从表3可以看出，与对照组比较，DZP组大鼠OE％和OT％值明显升高，有极显著性差异(P＜0.01)；SZRT1、SZRT6组大鼠OE％和OT％值明显升高，有显著性差异(P＜0.05)。SZRT1、SZRT6组OE％和OT％值无显著性差异(P＞0.05)。表三SZRT组分有效配方SZRT1和SZRT6对EPM焦虑模型大鼠开放臂进入次数比(OE％)和开放臂停留时间比(OT％)的影响(x±S)GroupDose(/kg) N OE％ OT％Vehicle 0 12 0.378±0.082 0.451±0.083DZP 1mg 13 0.547±0.128**0.622±0.134**SZRT17.5g12 0.480±0.074* 0.553±0.118*SZRT67.5g13 0.455±0.043* 0.537±0.074**P＜0.05，**P＜0.01，compared with vehicle-treated group.
3.2.2SZRT组分有效配方SZRT1、SZRT6对大鼠head-dips行为的影响结果见表4。从表4可以看出，与对照组比较，DZP组head-dips次数增加，有极显著性差异(P＜0.01)；SZRT1、SZRT6组head-dips次数增加，有显著性差异(P＜0.05)。但SZRT1组、SZRT6组间head-dips次数无显著差异(P＞0.05)。表四SZRT组分有效配方SZRT1和SZRT6对EPM焦虑模型小鼠开放臂低头探索次数(Head-dips)和运动能力(Total arm entries)的影响(x±S)Group Dose(/kg) N Head-dips Total arm entriesVehicle0 1216.92±4.1921.00±3.93DZP1mg1330.31±9.51** 21.77±5.39SZRT17.5g 1223.00±7.08* 22.83±3.79SZRT67.5g 1324.23±5.70* 20.92±5.35*P＜0.05，**P＜0.01，compared with vehicle-treated group.
3.2.3SZRT不同组分配伍对大鼠开放臂和封闭臂总的进入次数(totalarm entries)结果见表4。从表4可看出，DZP组和SZRT各组大鼠开放臂和封闭臂总的进入次数与对照组比没有显著差异(P＞0.05)。
3.1.4 SZRT汤不同组分对小鼠OE％和OT％的影响3.1.4.1SZRT汤不同组分对OE％的影响的正交分析结果见表5。从表5可以看出，SZRT各组分仅C对小鼠OE％有显著影响(P＜0.05)，其余各组分均未有显著影响。用C时，其OE％为0.163±0.017，不用时OE％为0.212±0.017。表五SZRT不同组分对EPM焦虑模型小鼠开放臂进入次数比(OE％)的影响SourceSum of squaresDf MSF Sig.
A 0.002610.00260.1140.736B 0.014510.01450.6450.423C 0.092010.09204.0830.045*D 0.028010.02801.2420.267E 0.005710.00570.2530.615F 0.00086 10.00086 0.0380.845Error 3.221 143 0.0225*P＜0.05，与其他各组比较。
3.1.4.2SZRT汤不同组分对OT％影响的正交分析结果见表6。从表6可以看出，SZRT各组分仅E对小鼠OT％有显著影响(P＜0.05)，其余各组分均未有显著影响。用E时，其OT％为0.205±0.21，不用时OT％为0.133±0.20。表六SZRT不同组分对EPM焦虑模型小鼠开放臂停留时间比(OT％)的影响SourceSum of Df MSF Sig.
squaresA 0.000951 0.000950.0300.863B 0.000591 0.000590.0180.892C 0.042961 0.042961.3460.248D 0.014141 0.014140.4430.507E 0.195 1 0.195 6.1110.015*F 0.000281 0.000280.0090.926Error 4.565 1430.03193*P＜0.05，与其他各组比较。
4.结论本实验观察到，在各组分配伍的8个配方中，SZRT1与SZRT6对大鼠、小鼠主要行为指标(OE％、OT％)均有显著影响，而并不影响大鼠、小鼠的运动能力，表明该二个配方有显著的抗焦虑作用。在小鼠EPM中，SZRT1与SZRT6有升高小鼠在开放臂(非保护区)的低头探索次数(head-dips)的趋势；在大鼠EPM中，SZRT1与SZRT6能升高大鼠在开放臂(非保护区)的低头探索次数(head-dips)，一定程度上支持其抗焦虑作用。先前的研究表明，SZRT水煎液小鼠20g/kg、大鼠7.5g/kg具有显著的抗焦虑作用，本次也观察到，相当剂量的、含括原方全部组分配方SZRT1也具有相同作用，提示在SZRT水煎液的提取分离过程中，原方中抗焦虑作用的有效部分没有明显丢失，研究一中拟定的关于酸枣仁汤的提取分离方案是合理的。
实验观察到，SZRT组分各配方中的SZRT1、SZRT3、SZRT5和SZRT6均有不同程度的抗焦虑作用，SZRT2、SZRT4、SZRT7和SZRT8则几乎没有抗焦虑作用。在四组有效的SZRT1、SZRT3、SZRT5和SZRT6组中，各组的作用指标有所不同，如SZRT1、和SZRT6对OE％、OT％有效；而SZRT3、和SZRT5则仅对OE％有效。提示实验中SZRT所含组分及其不同配方与抗焦虑效用的关联性有所不同，其中SZRT6与抗焦虑作用关系最为密切。
结论由B、E两组分配伍的配方具有显著的抗焦虑作用，其作用强度与酸枣仁汤全方相当。
下列实施例均能实现上述实验例的效果。实施例1活性部位B、E的提取酸枣仁汤2484g，用10倍量水浸泡30min后，水蒸气蒸馏1小时，收集馏出液，过滤，药渣用8倍量水水蒸气蒸馏0.4h，收集馏出液，过滤；合并滤液及馏出液，得滤液I及馏出液I；滤液I继续蒸馏至总体积的4/5时，得馏出液II和剩余部分—滤液II；馏出液II重蒸馏至原体积的1/2时，停止蒸馏；滤液II减压浓缩至时生药重与体积比为1∶1，加入95％乙醇调至醇度为60％，4℃放置24h，抽滤，得母液I及沉淀I；母液I继续加乙醇调至醇度为80％，4℃放置24h，抽滤，得母液II及沉淀II；沉淀I及沉淀II合并，得285.40g B多糖部分；母液I及母液II合并，减压浓缩至生药重与体积比为4∶1，乙醚萃取，得乙醚萃取液及水溶液；水溶液浓缩至生药重与体积比为10∶1，上样；分别用水、30％乙醇、50％乙醇、95％乙醇洗脱，(柱内径10cm，柱高50cm)；检识，合并相同部位；30％乙醇洗脱液盐酸-镁粉检识反应阳性部分，减压干燥，得5.41g E黄酮部分。实施例2活性部位A、B、C、D、E、F的提取酸枣仁汤2484g，用10倍量水浸泡30min后，水蒸气蒸馏1h小时，收集馏出液，过滤，药渣用8倍量水水蒸气蒸馏0.4h，收集馏出液，过滤；合并滤液及馏出液，得滤液I及馏出液I；滤液I继续蒸馏至总体积的4/5时，得馏出液II和滤液I剩余部分—滤液II；馏出液II重蒸馏至原体积的1/2时，停止蒸馏；重蒸液用沸点为30℃~60℃的石油醚萃取，回收石油醚，得A挥发油部分；滤液II减压浓缩至时生药重与体积比为1∶1，加入95％乙醇调至醇度为60％，4℃放置24h，抽滤，得母液I及沉淀I；母液I继续加乙醇调至醇度为80％，4℃放置24h，抽滤，得母液II及沉淀II；沉淀I及沉淀II合并，得B(多糖，285.40g)部分；母液I及母液II合并，减压浓缩至适当体积，无醇味，乙醚萃取，得乙醚萃取液及水溶液；乙醚萃取液减压回收乙醚，得C(乙醚萃取部分，3.71g)部分；水溶液浓缩至适当容积，上样；分别用水、30％乙醇、50％乙醇、95％乙醇洗脱(柱内径10cm，柱高50cm)；检识，合并相同部位；水洗脱部分、30％乙醇洗脱液盐酸-镁粉检识反应阴性且醋酐-浓硫酸反应阳性部分、50％乙醇合并，减压干燥，得D(皂苷及苷元部分，330.51g)；30％乙醇洗脱液盐酸-镁粉检识反应阳性部分，减压干燥，得E(黄酮，5.41g)部分；95％乙醇洗脱液，减压回收，得F(95％乙醇洗脱部分，1.62g)部分。实验例3胶囊剂的制备本发明有效部位B(多糖，285.40g)、E(黄酮，5.41g)，药用淀粉1000g，混合均匀，装入1号胶囊，每粒0.2g，每次口服2-3粒，每日两次。实验例4胶囊剂的制备本发明有效部位A(A为挥发油，因量太少，故溶于500ml石油醚定容以用于配方)、B285.40g、C3.71g、D330.51g、E5.41g、F1.62g，药用淀粉1000g，混合均匀，装入1号胶囊，每粒0.2g，每次口服2-3粒，每日两次。实施例5片剂的制备本发明有效部位B300g、E6g，药用淀粉200g，糊精50g，混合均匀，用适量乙醇制粒，经整粒机整粒，压片，每片0.25g，口服，每次2片，每日两次。
权利要求
1.一种酸枣仁汤的有效部位，其特征在于该有效部位包括B多糖260-300重量份、E黄酮4-7重量份；该活性部位是通过以下方法制备的酸枣仁汤药材，用药材重量的8-11倍量水浸泡20-40min后，水蒸气蒸馏0.8-1.5小时，收集馏出液，过滤，药渣用7-9倍量水水蒸气蒸馏0.3-0.5小时，收集馏出液，过滤；合并滤液及馏出液，得滤液I及馏出液I；滤液I继续蒸馏至总体积的60-85％时，得馏出液II和滤液I剩余部分—滤液II；馏出液II重蒸馏至原体积的40-60％时，停止蒸馏；滤液II减压浓缩至时生药重与体积比为1∶1，加入95％乙醇调至醇度为55-65％，3-5℃放置22-26小时，抽滤，得母液I及沉淀I；母液I继续加乙醇调至醇度为75-85％，3-5℃放置22-26小时，抽滤，得母液II及沉淀II；沉淀I及沉淀II合并，得B多糖部分；母液I及母液II合并，减压浓缩至生药重与体积比为4∶1，乙醚萃取，得乙醚萃取液及水溶液；水溶液浓缩至生药重与体积比为10∶1，上样；分别用水、30％乙醇、50％乙醇、95％乙醇洗脱；检识，合并相同部位；30％乙醇洗脱液盐酸-镁粉检识反应阳性部分，减压干燥，得E黄酮部分。
2.如权利要求1所述的有效部位，其特征在于酸枣仁汤，用10倍量水浸泡30min后，水蒸气蒸馏1小时，收集馏出液，过滤，药渣用8倍量水水蒸气蒸馏0.4h，收集馏出液，过滤；合并滤液及馏出液，得滤液I及馏出液I；滤液I继续蒸馏至总体积的4/5时，得馏出液II和滤液I剩余部分—滤液II；馏出液II重蒸馏至原体积的1/2时，停止蒸馏；滤液II减压浓缩至时生药重与体积比为1∶1，加入95％乙醇调至醇度为60％，4℃放置24h，抽滤，得母液I及沉淀I；母液I继续加乙醇调至醇度为80％，4℃放置24h，抽滤，得母液II及沉淀II；沉淀I及沉淀II合并，得285.40重量份B多糖部分；母液I及母液II合并，减压浓缩至生药重与体积比为4∶1，乙醚萃取，得乙醚萃取液及水溶液；水溶液浓缩至生药重与体积比为10∶1，上样；分别用水、30％乙醇、50％乙醇、95％乙醇洗脱，柱内径10cm，柱高50cm；检识，合并相同部位；30％乙醇洗脱液盐酸-镁粉检识反应阳性部分，减压干燥，得5.41重量份E黄酮部分。
3.如权利要求1所述的有效部位，其特征在于该有效部位由A、B、C、D、E、F六个部分组成；该六个部位是由如下方法制备的酸枣仁汤药材，用药材重量的8-11倍量水浸泡20-40min后，水蒸气蒸馏0.8-1.5小时，收集馏出液，过滤，药渣用7-9倍量水水蒸气蒸馏0.3-0.5小时，收集馏出液，过滤；合并滤液及馏出液，得滤液I及馏出液I；滤液I继续蒸馏至总体积的60-85％时，得馏出液II和剩余部分—滤液II；馏出液II重蒸馏至原体积的40-60％时，停止蒸馏；重蒸液用沸点为30℃～60℃的石油醚萃取，回收石油醚，得A挥发油部分；滤液II减压浓缩至时生药重与体积比为1∶1，加入95％乙醇调至醇度为55-65％，3-5℃放置22-26小时，抽滤，得母液I及沉淀I；母液I继续加乙醇调至醇度为75-85％，3-5℃放置22-26小时，抽滤，得母液II及沉淀II；沉淀I及沉淀II合并，得260-300重量份B多糖部分；母液I及母液II合并，减压浓缩至生药重与体积比为4∶1，无醇味，乙醚萃取，得乙醚萃取液及水溶液；乙醚萃取液减压回收乙醚，得3-4.5重量份C乙醚萃取部分部分；水溶液浓缩至生药重与体积比为10∶1，上样；分别用水、30％乙醇、50％乙醇、95％乙醇洗脱；检识，合并相同部位；水洗脱部分、30％乙醇洗脱液盐酸-镁粉检识反应阴性且醋酐-浓硫酸反应阳性部分、50％乙醇合并，减压干燥，得300-340重量份D皂苷及苷元部分；30％乙醇洗脱液盐酸-镁粉检识反应阳性部分，减压干燥，得4-7重量份E黄酮部分；95％乙醇洗脱液，减压回收，得1-3重量份F部分。
4.如权利要求3所述的有效部位，其特征在于酸枣仁汤用10倍量水浸泡30min后，水蒸气蒸馏1h小时，收集馏出液，过滤，药渣用8倍量水水蒸气蒸馏0.4h，收集馏出液，过滤；合并滤液及馏出液，得滤液I及馏出液I；滤液I继续蒸馏至总体积的4/5时，得馏出液II和滤液I剩余部分—滤液II；馏出液II重蒸馏至原体积的1/2时，停止蒸馏；重蒸液用沸点为30℃～60℃的石油醚萃取，回收石油醚，得A挥发油部分；滤液II减压浓缩至时生药重与体积比为1∶1，加入95％乙醇调至醇度为60％，4℃放置24h，抽滤，得母液I及沉淀I；母液I继续加乙醇调至醇度为80％，4℃放置24h，抽滤，得母液II及沉淀II；沉淀I及沉淀II合并，得285.40重量份B多糖部分；母液I及母液II合并，减压浓缩至生药重与体积比为4∶1，无醇味，乙醚萃取，得乙醚萃取液及水溶液；乙醚萃取液减压回收乙醚，得3.71重量份C乙醚萃取部分部分；水溶液浓缩至生药重与体积比为10∶1，上样；分别用水、30％乙醇、50％乙醇、95％乙醇洗脱，柱内径10cm，柱高50cm；检识，合并相同部位；水洗脱部分、30％乙醇洗脱液盐酸-镁粉检识反应阴性且醋酐-浓硫酸反应阳性部分、50％乙醇合并，减压干燥，得330.51重量份D皂苷及苷元部分；30％乙醇洗脱液盐酸-镁粉检识反应阳性部分，减压干燥，得5.41重量份E黄酮部分；95％乙醇洗脱液，减压回收，得1.62重量份F部分。
5.如权利要求1-4所述的有效部位，其特征在于所述检识是采用茴香醛-浓硫酸反应，Molish反应，醋酐-浓硫酸反应，盐酸-镁粉反应来分别提示含有的成分。
6.如权利要求5所述的有效部位，其特征在于还可加入药学上可接受的敷料或赋形剂。
7.如权利要求5所述的有效部位，其特征在于可制成临床可接受的剂型。
8.如权利要求7所述的有效部位，其特征在于可制成的剂型为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂、注射剂、气雾剂、栓剂或皮下给药剂型当中的一种。
9.如权利要求5所述的有效部位在制备治疗焦虑症药物中的应用。
10.酸枣仁汤在制备治疗焦虑症药物中的应用。
全文摘要
本发明公开酸枣仁汤活性部位，该活性部位包括B和E两部分。该活性部位制备方法为酸枣仁汤用水浸泡，蒸馏，收集馏出液，药渣蒸馏，收集馏出液；合并滤液及馏出液，得滤液I及馏出液I；滤液I继续蒸馏得馏出液II和滤液I剩余部分——滤液II；馏出液II重蒸馏；滤液II减压浓缩醇沉得母液I及沉淀I；母液I加乙醇沉淀得母液II及沉淀II；沉淀I及沉淀II合并，得B多糖部分；母液I及母液II合并液减压浓缩至生药重与体积比为4∶1，乙醚萃取，得乙醚萃取液及水溶液；水溶液浓缩，上样；分别用水、乙醇洗脱；合并相同部位；30％乙醇洗脱液盐酸－镁粉检识反应阳性部分，减压干燥，得E黄酮部分。本发明酸枣仁汤的活性部位及酸枣仁汤具有抗焦虑的作用。
文档编号A23L2/39GK1457702SQ0313772
公开日2003年11月26日 申请日期2003年6月20日 优先权日2003年6月20日
发明者谢鸣 申请人:谢鸣