专利名称：化学方法
技术领域：
本发明涉及制备3-苯基-2-芳基烷硫基丙酸衍生物中的某些的方法，所述的化合物具有治疗临床疾病，包括脂质障碍(血脂异常)的应用，无论所述的疾病是否与胰岛素耐受性和其它代谢综合征表现相关。本发明还涉及用于该方法的某些新的中间体。
WO 03/051826中披露了式A的化合物及其旋光异构体和外消旋物及其药学上可接受的盐、前体药物。溶剂合物和晶形 其中R1表示氯、氟或羟基，这些化合物为选择性PPARα调节剂。这些化合物用于治疗临床疾病，包括脂质障碍(血脂障碍)的应用，无论所述的疾病是否与胰岛素耐受性和其它代谢综合征表现相关。用于制备A化合物的某些方法披露在该文件中。还发现了用于制备式A化合物的改进的方法。相关化合物披露在共同待决的申请WO 2004/113282、WO 2004/113283和WO 2004/113284中。外消旋方法披露在共同待决的申请WO 2004/113285中。
Bioorganic and Medicinal Chemistry 7(1999)821-830中披露了产生拆分的酸的3-[4-[2-[N-(2-苯并唑基)-N-甲氨基]乙氧基]苯基]-2-甲氧基丙酸甲酯的选择性德列马根霉(Rhizopus delemar)脂肪酶催化的酯水解。
2-烷氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸酯类的选择性酶促水解描述在WO01/11072和WO 01/11073中。
通过酶促拆分合成光学纯的(S)-2-乙酰硫基-3-苯丙酸披露在Tetrahedron Letters 43(42)7585-7587，2002中。
然而，不能预先预测哪些酶会对特定的酯底物产生选择性水解而哪些不会。这对在羧基的α碳上具有高度支化度的底物而言尤其确实。令人意外地发现某些酶用于水解酯类而以高对映体纯度产生WO03/051826中披露的化合物。
本发明提供了制备对映体富集的式I的化合物及其药学上可接受的盐的方法 其中R1表示氯、氟或羟基，该方法包括在10-60℃，优选20-40℃范围的温度下在反应介质中用酶水解式II的化合物， 其中R1如最初定义，X为O或S且R2为C1-10烷基、C1-6卤代烷基、C2-6链烯基、芳基、芳基C1-6亚烷基，并且具有或没有杂取代，所述的酶选自a)米黑毛霉(Mucor miehei)脂肪酶、皱落假丝酵母(Candidarugosa)脂肪酶、Candida cylindracia脂肪酶、Thermomyces lanuginosa脂肪酶、爪哇毛霉(Mucor javanicus)脂肪酶和德列马根霉(Rhizopusdelemar)脂肪酶，此时X为O；或b)洋葱假单胞菌(Pseudomonas cepacia)脂肪酶，此时X为S。
术语具有额外的杂取代意指R2上的烷基和亚烷基被氮或氧打断，由此在R2上提供氨基和醚键。在一个实施方案中，R2为C1-10烷基、C1-6卤代烷基、芳基、芳基C1-6亚烷基，并且具有或没有杂取代。在另一个实施方案中，R2为C1-10烷基、C1-6卤代烷基、芳基或芳基C1-6亚烷基。
本发明在另一个方面中提供了制备对映体富集的式I的化合物及其药学上可接受的盐的方法， 其中R1表示氯、氟或羟基，该方法包括在有反应介质存在下用酶水解式II的化合物， 其中R1如最初定义，X为O且R2为C1-10烷基，所述的酶选自米黑毛霉脂肪酶、皱落假丝酵母脂肪酶、Candida cylindracia脂肪酶、Thermomyces lanuginosa脂肪酶、爪哇毛霉脂肪酶和德列马根霉脂肪酶，此时X为O。
本发明在另一个方面中提供了制备对映体富集的式I的化合物或药学上可接受的盐的方法， 其中R1表示氯、氟或羟基，该方法包括在有反应介质存在下用洋葱假单胞菌脂肪酶水解式II的化合物，
其中R1如最初定义，X为S且R2为C1-10烷基。
本发明在另一个方面中提供了制备式III的化合物或药学上可接受的盐的方法， 包含使式IV的化合物与一种lipozyme反应， 其中R2如最初定义，所述的lipozyme选自米黑毛霉脂肪酶、皱落假丝酵母脂肪酶、Candida cylindracia脂肪酶、Thermomyces lanuginosa脂肪酶、爪哇毛霉脂肪酶和德列马根霉脂肪酶。
本发明在另一个方面中提供了制备式III的化合物或药学上可接受的盐的方法，
包含在反应介质中将式V的化合物与洋葱假单胞菌脂肪酶反应， 其中R2如最初定义。
当用合适的水解酶处理时，式I的酯进行(S)-异构体的优先反应而产生相应的(S)-酸或新的(S)-酯，由此对(S)-对映体进行有效分离。可以回收未反应的(R)-酯、使其外消旋化并且再循环。在某些情况中，能够进行动态动力学拆分，其中在‘原位’对(R)-酯进行外消旋化并且再循环。
所述的酶为能够进行对映选择性水解的蛋白质，诸如脂肪酶、酯酶、酰胺酶或蛋白酶。该酶作为纯的液体或固体使用，将其用惰性载体稀释，支持在惰性基质上(例如大孔聚合物、离子交换树脂、Celite、陶瓷)或作为惰性不溶性制品(例如交联酶晶体(CLEC)或交联酶聚集物(CLEA))，作为包囊制品使用或与膜结合或在膜内。
反应介质可以为水；水-溶剂混合物；含有缓冲盐或添加的碱的单相或双相的溶剂-溶剂混合物；或多种专用介质，如离子液体或超临界二氧化碳(SC-CO2)。合适的溶剂的实例包括C1-6链烷醇类(例如丙醇、异丙醇、丁醇、叔丁醇、戊醇(pentanol)、戊醇(amyl alcohol)或异戊醇)、丙酮、甲基异丁基酮、四氢呋喃或乙腈。
优选的反应介质为有机溶剂与水的混合物，它有助于溶解度和增加酶的对映选择性。
在一个方面中，洋葱假单胞菌脂肪酶为CLEC(交联酶晶体)。
本发明还提供了制备对映体富集的式II的化合物的方法， 其中R1表示氯、氟或羟基，X表示O或S，且R2表示C1-6烷基、C2-6链烯基或苯基C1-6烷基，例如选自正丁基、正丙基、正辛基、烯丙基或苄基的基团，该方法包括在分别有C1-6链烷醇、C2-6链烯醇或苯基C1-6链烷醇存在下并且任选在10-50℃，优选20-40℃范围温度下和有反应介质存在下用酶使式II的化合物酯交换， 其中R1如最初定义，X为O或S且R2为C1-6烷基或卤代烷基，并且具有或没有烯不饱和度，所述的酶选自a)米黑毛霉脂肪酶、皱落假丝酵母脂肪酶、Thermomyces lanuginosa脂肪酶、爪哇毛霉脂肪酶和德列马根霉脂肪酶，此时X为O；或b)洋葱假单胞菌脂肪酶，此时X为S；所述的链烷醇或链烯醇例如分别为正丁醇、正丙醇、正辛醇、丙-2-烯-1-醇或苄醇。
本发明在另一个方面中提供了制备对映体富集的式IVa的化合物的方法，
其中X为O或S且R2表示C1-6烷基或卤代烷基，具有或没有烯不饱和正丁基，该方法包括在有正丁醇和碱存在下并且任选在10-50℃，优选20-40℃范围温度下在反应介质存在下用CLEC洋葱假单胞菌脂肪酶使式IVb的化合物酯交换， 其中R2为C1-2烷基，所述的碱例如为三辛胺或其它具有类似pKa的叔胺类，例如三乙胺或三丁胺，它们作为液体或固相支持的形式使用。
可以通过使用手性中心不会外消旋化的条件下的水解将式II和IVa对映体富集的化合物转化成对映体富集的式I的化合物，所述的水解为例如酸性或适度碱性水解，使用合适的水解酶的水解，使用路易丝酸裂解或对酯类的适度理解裂解的方式，例如对烯丙酯类用Pd，对苄酯类使用氢化。
备选手段为使用反向工作的水解酶和使用合适的醇-，例如甲醇、正丙醇、正丁醇、丙-2-烯-1-醇或苄醇手性酯化外消旋酸。可以分离手性酸和酯并且可以如上所述裂解酯。
本发明在一个方面中提供了制备式I的化合物的方法，该方法包括下列步骤
a)使式VI的化合物 与式VII的化合物在0℃-150℃范围温度下和有碱存在下的惰性溶剂中反应， 其中R5表示C1-6烷基且R6表示对-甲苯基，所述的惰性溶剂例如为乙腈和/或甲苯，所述的碱例如为碳酸钾或碳酸钠，从而得到式VIII的化合物， 其中R5如最初定义；b)使式VIII的化合物与酸HA反应，其中HA表示HCl、HBr或三氟乙酸，从而得到式IX的盐， 其中HA如最初定义；c)在-5℃-10℃范围温度下和有盐酸存在下使式IX的化合物重氮化而得到重氮盐溶液，并且任选在有催化剂存在下的含水反应介质中使该重氮盐溶液与丙烯酸反应，且使获得的产物与氨反应而得到式X的化合物，所述的催化剂例如为铜(I)盐，例如碘化亚铜(I)； d)使式X的化合物与酸且然后与式R2OH的醇任选在有水清除系统，例如浓硫酸或原酸酯，例如原甲酸三甲酯或原甲酸三乙酯或共沸蒸馏存在下反应而得到式XI的化合物， 其中R2如最初定义；e)使式XI的酯与式XII的化合物在有碱，例如甲醇钠存在下反应， 其中R1如最初定义且R4为甲基或苯基，从而得到式XIII的化合物，
其中R1、R2和X如最初定义；和f)使式XIII的化合物与酶在10-50℃，优选20-40℃范围温度下和合适的反应介质中反应，所述的酶选自a)米黑毛霉脂肪酶、皱落假丝酵母脂肪酶、Candida cylindracia脂肪酶、Thermomyces lanuginosa脂肪酶、爪哇毛霉脂肪酶和德列马根霉脂肪酶，此时X为O；或b)洋葱假单胞菌脂肪酶，此时X为S，从而得到式I的化合物， 其为对映体富集的；和g)任选使式I的化合物与叔丁基胺在合适的反应介质中反应而得到式I化合物的叔丁基铵盐。
本发明在另一个方面中提供了制备式III的化合物的方法，该方法包括下列步骤a)使式VI的化合物 与式VII的化合物在20℃-150℃范围的温度下和有碱存在的惰性溶剂中反应，所述的惰性溶剂例如为乙腈和/或甲苯，所述的碱例如为碳酸钾或碳酸钠， 其中R5表示C1-6烷基且R6表示对-甲苯基，从而得到式VIII的化合物， 其中R5如最初定义；b)使式VIII的化合物与三氟乙酸(THF)反应而得到式IX的盐 c)在-5℃-10℃范围温度下和有盐酸存在下使式IX的化合物重氮化而得到重氮盐溶液，并且任选在有催化剂存在下的含水反应介质中使该重氮盐溶液与丙烯酸反应，所述的催化剂例如为铜(I)盐，例如碘化亚铜(I)，且使获得的产物与氨反应而得到式X的化合物， d)使式X的化合物与酸反应，且然后任选在有水清除系统，例如浓硫酸或原酸酯，例如原甲酸三甲酯或共沸蒸馏存在下与式R2XH的醇反应，而得到式XI的化合物， 其中R2如最初定义；e)使式XI的酯与式XIIa的化合物在有碱，例如甲醇钠存在下反应， 其中R1如最初定义并且R4为甲基或苯基，从而得到式XIIIa的化合物， 其中R2如最初定义；和f)使式XIIIa的化合物与酶反应，所述的酶选自米黑毛霉脂肪酶、皱落假丝酵母脂肪酶、Candida cylindracia脂肪酶、Thermomyceslanuginosa脂肪酶、爪哇毛霉脂肪酶和德列马根霉脂肪酶，从而得到式III的化合物，
和任选g)使式III的化合物与叔丁基胺在合适的反应介质，例如在有惰性溶剂存在下反应而得到式III化合物的叔丁基铵盐。
本发明在另一个方面中提供了套接方法(telescoped process)，该方法包括下列步骤a)使式X的化合物， 与酸且然后任选在有水清除系统，例如浓硫酸或原酸酯，例如原甲酸三甲酯或原甲酸三乙酯或共沸蒸馏存在下与式R2OH的醇反应而得到式XI的化合物， 其中R2如最初定义；b)使式XI的酯与式XII的化合物在有碱，例如甲醇钠存在下反应，
其中R1如最初定义且R4为甲基或苯基，从而得到式XIII的化合物， 其中R1、R2和X如最初定义；和c)使式XIII的化合物与酶在10-50℃，优选20-40℃范围温度下和合适的反应介质中反应，所述的酶选自a)米黑毛霉脂肪酶、皱落假丝酵母脂肪酶、Candida cylindracia脂肪酶、Thermomyces lanuginosa脂肪酶、爪哇毛霉脂肪酶和德列马根霉脂肪酶，此时X为O；或b)洋葱假单胞菌脂肪酶，此时X为S，从而得到式I的化合物， 其为对映体富集的；和d)任选使式I的化合物与叔丁基胺在合适的反应介质反应而得到式I化合物的叔丁基铵盐。
本发明在另一个方面中提供了套接方法，该方法包括下列步骤a)使式X的化合物反应，
b)使式X的化合物与酸且然后与式R2OH的醇任选在有水清除系统，例如浓硫酸或原酸酯，例如原甲酸三甲酯或原甲酸三乙酯或共沸蒸馏存在下反应而得到XI的化合物， 其中R2如最初定义；c)使式XI的酯与式XIIa的化合物在有碱，例如甲醇钠存在下反应， 其中R1如最初定义且R4为甲基或苯基，从而得到式XIIIa的化合物， 其中R2如最初定义；和
d)使式XIIIa的化合物与酶反应，所述的酶选自a)米黑毛霉脂肪酶、皱落假丝酵母脂肪酶、Candida cylindracia脂肪酶、Thermomyceslanuginosa脂肪酶、爪哇毛霉脂肪酶和德列马根霉脂肪酶；从而得到式III的化合物， 和任选e)使式III的化合物与叔丁基胺在合适的反应介质，例如惰性溶剂存在下反应而得到式III化合物的叔丁基铵盐。
术语套接方法用于指在不分离中间体的情况下进行几个工艺步骤，由此减少因物质转移产生的浪费。优选套接方法如单罐方法进行。
本发明的另一个方面提供了制备2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸的基本上外消旋的C1-8烷基酯的方法，其包括在15-150℃温度下使富含一种对映体的2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸C1-8烷基酯与支持在惰性基质上的DBU或四甲基胍或类似的碱在惰性溶剂，例如甲苯中反应。任选可以通过水解，例如通过碱水解将外消旋酯转化成对应的酸，且然后任选与氨反应而得到外消旋铵盐，然后可以使其在该方法中进一步反应而得到想要的化合物。这种外消旋和再循环方法通过消除物质的浪费而提高了方法的效率。
认为通式的某些化合物为新的并且在本文中请求保护为本发明的另一个方面。
式IIa的化合物
其中i)X为O且R2为乙基；ii)X为O且R2为正丙基；iii)X为O且R2为正丁基；iv)X为S且R2为甲基；v)X为S且R2为乙基；vi)X为S且R2为正丙基；或vii)X为S且R2为正丁基；viii)X为S且R2为正己基；ix)X为S且R2为正辛基；包括各化合物的(R)和(S)对映体以及(R)和(S)对映体的所有混合物，包括外消旋形式的化合物，并且当x)X为O且R2为甲基时，为(S)和(R)形式。
式VIII的化合物 其中R5如最初定义。
式IX的化合物，其为 及其盐，特别是盐酸盐、氢溴酸盐或三氟乙酸盐。
式X的化合物
式XI的化合物 其中R2为乙基、正丙基或正丁基。
式XII的化合物 其中R1如最初定义。
式XIII的化合物 其中R1、R2和X如最初定义。
式XIV的化合物
这些新的化合物具有为固体的优点，由此能够在所述方法过程中的合适的点时过滤，这对在该方法过程中除去不需要的杂质而言非常有益。这些固体也易于控制和在容器彼此之间移动。
应理解将上述各方法方案中各自和每一单个步骤在本文中请求保护为本发明的其它方面。
术语对映体富集的化合物意指一种对映体所占的比例优于另一种并且该化合物具有旋光性。例如该化合物可以含有＞60％的一种对映体，例如70-99.9％，特别是80-99.9％，例如85-99.9％，90-99.9％或95-99.9％的一种对映体。在一个实施方案中，占优势的对映体为S对映体。
合适的溶剂的实例包括C1-6链烷醇类(例如丙醇、异丙醇、丁醇、叔丁醇、戊醇(pentanol)、戊醇(amyl alcohol))、异戊醇、酮类(例如丙酮和甲基异丁基酮)、醚类(例如四氢呋喃和甲基叔丁基醚)、烃类(例如甲苯)或腈类(例如乙腈或丁腈)。
实施例一般操作步骤HPLC条件。按照下列条件，使用Hewlett Packard 1100仪器，通过反相HPLC分析反应混合物和产物。手性方法-柱，Genesis C-18，100mm×3.0mm i.d.；洗脱液A，含有0.1％v/v甲酸的95∶5水∶乙腈；洗脱液B，含有0.1％v/v甲酸的95∶5乙腈∶水；时间表(洗脱液A 100％，在0分钟；洗脱液B 100％，在13分钟；洗脱液B 100％，在15分钟；此后进行5分钟)；流速0.75mL/分钟；波长220nm；注射体积5μL；柱温35℃；运行时间15分钟。手性方法-柱，ChiralPak AD-H，250mm×4.6mm i.d.；洗脱液，含有0.1％v/v甲酸的甲醇；流速1.0mL/分钟；波长225nm；注射体积5μL；柱温45℃；运行时间18分钟。典型保留时间为-(S)-酸，7.8分钟；(S)-酯，12.4分钟；(R)-酸，13.7分钟；(R)-酯15.6分钟。
一般条件。使用Griffin熔点仪(铝加热块)测定熔点且未校准。分别在400和100.6MHz下在Varian Inova 400分光计上记录1H和13CNMR光谱，其中化学位移以与δ＝0时的TMS相比的ppm给出。使用Micromass Platform LC测定电喷射(ES+)质谱。
本文使用的e.e.意指对映体过量并且如下计算e.e.＝[(S)-(R)]/[(S)+(R)]×100％(或对于R-对映体，R-S)；(S)+(R)始终＝100。由此，例如91％e.e.＝95.5％(S)-对映体和4.5％(R)-对映体；93％e.e.＝96.5％(S)-对映体和3.5％(R)-对映体。或者，在这些实例中，可以使用分别为95.5和96.5％的(S)-对映体的手性纯度。
实施例1a)甲磺酸4-{2-[4-(叔丁氧羰基氨基)苯基]乙氧基}苯酯在氮气环境中将甲磺酸4-羟基苯酯(7.04g@82％浓度，30.6mmol，(通过对醌醇甲磺酰化制备))溶于乙腈(72mL)的溶液加入到4-甲基苯磺酸2-[4-(叔丁氧羰基氨基)苯基]乙酯(如WO 99/62871中所述制备)(12.0g，30.6mmol)和碳酸钾(6.42g的-325目，46.0mmol)的混合物中并且缓慢搅拌所得混合物。加入乙腈(36mL)和水(12mL)，增加搅拌速率并且使该反应混合物在回流状态下(80℃)沸腾11-24小时。在冷却回60℃后，通过在减压下蒸馏使溶剂体积减少6个体积(～72mL)。加入甲苯(108mL)和水(24mL)并且将该化合物在60℃下搅拌5分钟。通过CeliteTM(和/或5％w/w活性炭)过滤该溶液并且使其在60℃下返回到反应容器中。使各相分离并且放出下部的水相且弃去。加入稀氢氧化钠水溶液(10.2mL的2.5％，0.625M)并且将该混合物在60℃下搅拌5分钟。使各相分离并且放出下部水相且弃去。加入水(24mL)并且在60℃下搅拌5分钟，此后使各相分离并且放出下部水相且弃去。通过在常压下蒸馏减少溶剂体积，直到获得～110℃的蒸馏头温度。加入新制的甲苯使总体积达8个体积(96mL)。将该溶液冷却至60℃，过滤且然后冷却至45℃。在1小时内滴加异-己烷(143mL)，将温度维持在45℃，且然后以1℃/分钟将该溶液冷却至20℃。通过过滤分离所得固体，通过用异-己烷(29mL)置换洗涤并且在50℃下真空烘箱内干燥而得到标题化合物，为浅黄色固体(9.9g，79％)。HPLC(Rt 10.9分钟)；m.p.117-118℃；1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ9.22(～1H，s)，7.36(2H，d，J＝8.0Hz)，7.23(2H，d，J＝8.8Hz)，7.17(2H，d，J＝8.4Hz)，6.98(2H，d，J＝9.2Hz)，4.13(2H，t，J＝6.6Hz)，3.29(3H，s)，2.93(2H，t，J＝6.6Hz)，1.44(9H，s)；13C NMR(100.6MHz，d6-DMSO)δ157.18，152.77，142.44，137.80，131.62，129.04，124.01，123.28，118.15，115.45，78.83，68.69，36.89，34.14和28.10；MS(ES+)425(M+NH4+，5％)，308(10％)，120(100％)。
b)甲磺酸4-[2-(4-氨基苯基)乙氧基]苯酯在20℃下将三氟乙酸(7.95mL，11.8g，102mmol)在5分钟内加入到甲磺酸4-{2-[4-(叔丁氧羰基氨基)苯基]乙氧基}苯酯(17.6g@95％，40.8mmol)在甲苯(176mL)中的淤浆中且然后加热至60℃而形成深棕色溶液。加入纯产物的晶种(0.05％重量)并且将该反应混合物在60℃下加热17小时，在此过程中致密固体结晶。将该反应混合物冷却至20℃并且通过过滤分离固体，通过用甲苯(26mL)置换洗涤并且在40℃下真空烘箱内干燥而得到标题化合物，为致密的浅黄色固体(16.1g，94％)。HPLC(Rt 6.0分钟)；m.p.131-133℃；1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ7.35(2H，d，J＝8.4Hz)，7.26(2H，dt，J＝10.8，3.0Hz)，7.13(2H，d，8.0Hz)，7.05(2H，dt，J＝10.8，3.0Hz)，4.19(2H，t，J＝6.6Hz)，3.31(3H，s)，3.02(2H，t，J＝6.6Hz)，2.9-4.7(br)；13C NMR(100.6MHz，d6-DMSO)δ157.12，142.46，135.56，133.65，130.04，123.31，121.02，115.45，68.43，36.92和34.14；MS(ES+)308(M+H+，100％)。
实施例22-氯-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸铵在氮气环境中将甲磺酸4-[2-(4-氨基苯基)乙氧基]苯酯(15.9g，37.7mmol)加入到适当处理的反应容器中，随后加入碘化亚铜(I)(0.36g，1.9mmol)、丙酮(103mL)和水(2.5mL)并且搅拌而形成流动的淤浆。一次加入浓盐酸(9.3mL的37％w/w，113mmol)而形成棕色溶液，随后一次加入丙烯酸(19.4mL，283mmol)并且将所得溶液冷却至3℃。在至少10小时内将亚硝酸钠(2.95g，41.5mmol)溶于水(6.3mL)的溶液平缓地加入到反应混合物中，将反应温度保持在3℃。在至少1.5小时内加入水(1.0mL)洗涤管线，然后将该反应混合物在3℃下搅拌3小时，此后在10小时内升温至20℃。一旦氯化重氮全部消耗完(如通过HPLC测定的＜0.1％)，就加入脲的水溶液(2.0mL，在水中20％w/w)并且将该反应混合物搅拌30分钟。向该反应混合物中加入乙酸乙酯(32mL)、甲苯(63mL)、盐水(63mL)和水(32mL)，将该体系搅拌20分钟，使其沉降并且分离下部的绿色水层且弃去。向剩余的有机相中加入盐水(63mL)和水(32mL)。将该化合物搅拌20分钟，使其沉降并且分离下部的无色水层且弃去。重复水/盐水洗涤。向有机相中加入水(63mL)，搅拌20分钟，使其沉降并且分离下部的无色水层且弃去。重复4次水洗涤。加入水(127mL)，随后谨慎地分部分加入碳酸钠水溶液(59mL，在水中10％w/w的溶液)，搅拌并且使各相分离(可以将该溶液快速加热至40℃以便改善分离)。取出上部的有机相并且弃去且使下部的水相返回到容器中。加入乙酸乙酯(127mL)，随后分部分加入浓盐酸(8.8mL的37％w/w溶液，107mmol)以便酸化该溶液(可能放出CO2)。在搅拌20分钟后，分离各相并且弃去下部的水相(可以将该溶液快速加热至40℃以便改善分离)。如上所述用水(63mL)洗涤有机相，且然后通过在常压下共沸蒸馏干燥以便除去水(在这一规模上收集的106mL蒸馏物；乙酸乙酯溶液的残留的含水量为0.5％w/w)。将该溶液冷却至20℃并且在22℃下在90分钟内平缓地加入在二烷中的氨(85mL的0.5M溶液，42.7mmol)，在此期间形成流动的淤浆。在22℃下最少4小时后，将该反应混合物冷却至0℃下75分钟，并且通过在氮气环境中通过过滤分离固体。通过用冷却的(0℃)乙酸乙酯(30mL)置换洗涤产物并且在40℃下的真空烘箱中干燥而得到标题化合物，为浅黄色固体(对58.9％浓度校准为9.2g)。HPLC(Rt 9.5分钟)；m.p.148-150℃；1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ6.9-7.8(～3H，vbs)，7.25(2H，d，J＝9.2Hz)，7.22(2H，d，J＝8.4Hz)，7.17(2H，d，J＝8.0Hz)，7.02(2H，d，J＝9.2Hz)，4.16-4.22(3H，m)，3.31(3H，s)，3.26(1H，dd，J＝14.0，5.6Hz)，3.00(2H，t，J＝7.0Hz)，2.88(1H，dd，J＝14.0，8.8Hz)；13C NMR(100.6MHz，d6-DMSO)δ170.54，157.15，142.45，136.66，135.89，129.20，128.58，123.28，115.48，68.56，63.91，41.37，36.89和34.44；MS(ES+)416(M+NH4+，60％)。
实施例2b2-氯-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸或者，如下分离游离酸。用MgSO4干燥来自实施例2a的乙酸乙酯萃取物并且浓缩至得到油状物。将该物质溶于热甲苯(64mL)和乙酸乙酯(32mL)，蒸馏出乙酸乙酯并且冷却该溶液；或溶于回流状态下的甲苯(32mL)，冷却至22℃并且加入异-己烷(32mL)；或从热茴香醚(159mL)中结晶；从而在每种情况中得到标题化合物，为乳白色固体。HPLC(Rt 9.5分钟)；m.p.88-89℃；1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ7.21-7.28(6H，m)，7.01(2H，d，J＝8.8Hz)，4.67(1H，t，J＝7.4Hz)，4.19(2H，t，J＝7.0Hz)，3.31(3H，s)，3.27(1H，dd，J＝14.0，6.8Hz)，3.05(1H，dd，J＝14.0，8.0Hz)，3.01(2H，t，J＝6.6Hz)；13C NMR(100.6MHz，d6-DMSO)δ170.05，157.15，142.45，136.79，134.38，129.31，128.87，123.31，115.48，68.48，58.09，39.08-40.11(在DMSO信号中)，36.92和34.44。
实施例3硫代苯甲酸2-(4-羟基苯基)乙酯在或低于60℃下在1小时内将亚硫酰氯(5.5mL，75.5mmol)平缓地加入到4-羟基苯基乙醇(10.0g，70.9mmol)和三乙胺(10.5mL，74.5mmol)溶于甲苯(37.2mL)和乙腈(10.0mL)中的澄清溶液中，随后用甲苯(1.4mL)洗涤管线。产生淡黄色至淡棕色溶液，将其保持在60℃下2小时，在此过程中放出一定的SO2。在60℃下谨慎加入碳酸氢钠饱和水溶液(20mL)，搅拌15分钟，使其沉降并且取出下部的水相且弃去。重复进行碳酸氢盐洗涤，随后进行水洗涤(20mL)。在Dean和Stark条件下将有机相加热至甲苯回流至恒定顶部温度，以便除去残留的溶解的气体和水。测定总蒸馏物并且加入新制的甲苯以便取代它(在这一规模上为30mL)。将将该反应混合物冷却回80℃并且从温热的测量容器中缓慢加入硫代苯甲酸(10.5g，74.5mmol)(或者，可以将硫代苯甲酸溶于组成所述体积所需的新鲜甲苯)。在30分钟内平缓地加入三乙胺(10.5mL，74.5mmol)，随后用甲苯洗涤管线(11.4mL)，并且将该反应混合物在80℃下搅拌8小时。加入稀盐酸水溶液(20mL，0.5M)，剧烈搅拌15分钟，使其沉降并且取出下部的水相且弃去。使用水(20mL)重复该操作步骤。将有机相冷却至60℃并且进行第二次水洗涤。在1小时内向甲苯相中加入异-己烷(65mL)，并且在4小时内将所得溶液平缓地冷却至0℃，同时进行充分搅拌。使产物在～33℃下结晶。将所得淤浆在0℃下冷却至少1小时，此后通过过滤进行分离并且通过用再循环的母液(作为容器冲洗)且然后用新的异-己烷(20mL)置换进行洗涤，从而得到标题化合物，为淡黄色固体(14.7g，77％)。HPLC(Rt 10.1分钟)；m.p.90-91℃；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.96(2H，d，J＝7.2Hz)，7.57(1H，t，J＝7.4Hz)，7.44(2H，t，J＝7.8Hz)，7.13(2H，d，J＝8.8Hz)，6.79(2H，d，J＝8.4Hz)，5.0(1H，bs)，3.28(2H，t，J＝7.6Hz)，2.90(2H，t，J＝7.8Hz)；13C NMR(100.6MHz，CDCl3)δ192.26，154.23，137.09，133.51，132.23，129.78，128.59，127.19，115.35，34.99，30.71；MS(ES+)259(M+H+，100％)，182((M+H-Ph)+，60％)。
实施例42-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸甲酯在30分钟内将浓硫酸(2.2mL，60.0mmol)平缓地加入到2-氯-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸铵(15.0g@91.4％浓度，33.0mmol)在甲醇(60mL)和原甲酸三甲酯(10.9mL，39.6mmol)中的淤浆中，随后用甲醇(7.5mL)洗涤管线。将该反应混合物加热至60℃下2小时，以便形成深色溶液，且然后冷却回50℃。一次加入硫代苯甲酸2-(4-羟基苯基)乙酯(10.4g@97.9％，39.6mmol)，并且用氮气清洗反应容器。在3o分钟内平缓地加入甲醇钠(19.0mL的甲醇中25％浓度的溶液，82.4mmol)，随后用甲醇洗涤管线(7.5mL)，并且将该反应物在50℃下搅拌5小时，在此过程中形成适度混浊的沉淀。将该反应混合物冷却至35℃，在剧烈搅拌下加入水(98mL)，随后加入甲基叔丁基醚(MTBE)(98mL)，将该混合物搅拌15分钟，使其沉降并且取出下部的水相且弃去。用稀盐酸水溶液(0.03mL的在49mL水中32％w/w)且然后用水(49mL)均在35℃下洗涤剩余的MTBE相。通过LC检测MTBE溶液中产物酯的量并且无需进一步纯化而用于下一步。HPLC(Rt 10.9分钟)；m.p.油状物；1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ9.20(1H，s)，7.15-7.24(6H，m)，7.00(2H，d，J＝8.8Hz)，6.97(2H，d，J＝8.4Hz)，6.66(2H，d，J＝8.4Hz)，4.18(2H，t，J＝7.0Hz)，3.66(1H，dd，J＝9.2，6.4Hz)，3.58(3H，s)，3.31(3H，s)，3.05(1H，dd，J＝14.0，8.8Hz)3.00(2H，t，J＝6.8Hz)，2.85(1H，dd，J＝14.0，6.8Hz)，2.77(2H，t，J＝7.2Hz)，2.61-2.71(2H，m)；13C NMR(100.6MHz，d6-DMSO)δ172.07，157.14，155.71，142.45，136.37，135.93，130.19，129.35，128.89，128.81，123.29，115.47，115.02，68.48，51.87，46.99，36.90，36.79，34.40，34.35和32.68；MS(ES+)548(M+NH4+，70％)，531(M+H+，90％)，471(M-CO2Me+，100％)。
实施例5(S)-(-)-2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸通过蒸馏将2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸甲酯的溶液(93mL在MTBE中0.17mg/mL的溶液，15.8g，29.8mmol)的体积减少至～3个体积(在这种情况中47mL)。加入叔丁醇/水的溶液(95mL的9∶1溶液，6个体积)并且持续蒸馏以便再除去4个体积的蒸馏物(在这种情况中～63mL)，此后冷却至25℃。再加入1个体积的叔丁醇/水(16mL的9∶1溶液)，随后加入Lipozyme RM IM(1.6g的固定化酶，占起始酯的10％w/w)。将该反应混合物加热至35℃并且缓慢搅拌16小时以上，直到出现～30-35％的转化率。通过过滤除去酶并且用叔丁醇/水(16mL的9∶1溶液)洗涤固体。通过LC检测(S)-酸产物在叔丁醇/水溶液中的量并且无需进一步纯化用于下一步(通过HPLC测定5.3g，占起始酯的35％)。HPLC(Rt 9.8分钟)；手性HPLC(一般在溶液中91-93％e.e.)。
实施例6(S)-(-)-2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸叔丁基铵通过常压蒸馏将(S)-(-)-2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸的溶液(100mL在9∶1叔丁酶/水中0.053g/mL的溶液，5.3g，10.3mmol)体积减少一半(在这种情况中为50mL)。加入甲苯(100mL)并且持续蒸馏至蒸馏头温度达到109℃(在这种情况中收集80mL蒸馏物)。将该溶液冷却至60℃并且加入新的甲苯(80mL)和水(50mL)，随后加入碳酸钠溶液(18mL在水中10％w/w的溶液)。将该溶液在60℃下搅拌10分钟，随后沉降并且取出下部的水层且保留；除去上部含有2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸(R)-甲酯的的有机相。使水相返回到容器中，随后加入丁腈(20mL)并且剧烈搅拌20分钟。使各相分离并且取出颜色明显的上部有机相且弃去。加入丁腈(100mL)，随后在50℃充分搅拌下在10分钟内平缓地加入盐酸水溶液(35mL的1.0M溶液)，此后使其沉降并且取出下部的水相且弃去。在50℃下加入水(25mL)，剧烈搅拌5分钟，使其沉降并且取出下部的水相且弃去。然后通过在常压下共沸蒸馏干燥丁腈溶液以便除去水(在这一规模上收集5.5mL；测定丁腈溶液中残留的含水量为0.1％)，此后冷却至20℃。加入叔丁基胺(0.83g，1.19mL，11.3mmol)，将该溶液升温至45℃并且加入晶种(6mg，0.1％w/w)。将该溶液在45℃下搅拌86小时且然后以0.1℃/小时平缓地冷却到20℃，在此过程中，固体结晶。通过过滤收集固体，通过用丁腈(10.6mL)和MTBE(10.6mL)置换依次洗涤且在50℃下真空烘箱内干燥而得到标题化合物，为白色固体(4.7g，占起始(S)-酸的88％)。HPLC(Rt 9.8分钟)；手性HPLC(一般为95％e.e.)；m.p.132-134℃；1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ7.19(2H，d，J＝8.8Hz)，7.21(2H，d，J＝9.2Hz)，7.10(2H，d，J＝9.2Hz)，6.95(2H，d，J＝8.8Hz)，6.88(2H，d，J＝8.0Hz)，6.59(2H，d，J＝8.4Hz)，4.10(2H，t，J＝6.8Hz)，3.25(3H，s)，3.20(1H，dd，J＝8.4，6.0Hz)，3.02(1H，dd，J＝13.6，8.8Hz)，2.92(2H，t，J＝6.8Hz)，2.44-2.72(5H，m)，1.13(9H，s)；13C NMR(100.6MHz，d6-DMSO)δ173.86，157.15，155.71，142.44，138.39，135.39，130.84，129.18，128.95，128.45，123.27，115.45，114.96，68.63，51.21，49.93，36.88，34.80，34.45，32.65，27.65；MS(ES+)534(M+NH4+，40％)，517(M+H+，27％)，471(M-CO2H+，100％)。
实施例7(S)-(-)-2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸叔丁基铵在30分钟内将浓硫酸(2.2mL，60.0mmol)平缓地加入到2-氯-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸铵(15.0g@91.4％浓度，33.0mmol)在甲醇(60mL)和原甲酸三甲酯(10.9mL，39.6mmol)中的淤浆中，随后用甲醇洗涤管线(7.5mL)。将该反应混合物加热至60℃下2小时以便形成深色溶液，且然后冷却回50℃。一次加入基硫代苯甲酸2-(4-羟基苯基)乙酯(10.4g@97.9％，39.6mmol)并且用氮气充分清洗反应容器。在30分钟内平缓地加入甲醇钠(19.0mL的在甲醇中25％浓度的溶液，82.4mmol)，随后用甲醇洗涤管线(7.5mL)，并且将该反应物在50℃下搅拌5小时，在此过程中形成轻度混浊的沉淀。将该反应混合物冷却至35℃，在剧烈搅拌的同时加入水(98mL)，随后加入MTBE(98mL)，将该化合物搅拌15分钟，使其沉降并且取出下部的水相且弃去。用稀盐酸水溶液(0.03mL的在49mL水中32％w/w)且然后用水(49mL)均在35℃下洗涤剩余的MTBE相。通过蒸馏使MTBE溶液的体积减少至～3个体积(在这种情况中为47mL)。加入叔丁醇/水(95mL的9∶1溶液，6个体积)并且持续蒸馏以便再除去4个体积的蒸馏物(在这种情况中～63mL)，此后冷却至25℃。再加入1个体积的叔丁醇/水(16mL的9∶1溶液)，随后加入Lipozyme RM IM(1.6g的固定化酶，占起始酯的10％w/w)。将该反应混合物加热至35℃并且缓慢搅拌16小时以上，直到出现～30-35％的转化率。通过过滤除去酶并且用叔丁醇/水(16mL的9∶1溶液)洗涤固体。对产物(S)-酸溶液的手性HPLC一般为91-93％e.e。通过常压蒸馏使产物(S)-酸溶液的体积减少一半(在这种情况中为50mL)。加入甲苯(100mL)并且持续蒸馏至蒸馏头温度达到109℃(在这种情况中再收集80mL蒸馏物)。将该溶液冷却至60℃并且加入新的甲苯(80mL)和水(50mL)，随后加入碳酸钠溶液(18mL的在水中10％w/w的溶液)。将该溶液在60℃下搅拌10分钟，随后沉降并且取出下部的水层且保留；除去上部含有(R)-酯的有机相。使水相返回到容器中，随后加入丁腈(20mL)并且剧烈搅拌20分钟。使各相分离并且取出颜色明显的上部有机相且弃去。加入丁腈(100mL)，随后在50℃充分搅拌下在10分钟内平缓地加入盐酸水溶液(35mL的1.0M溶液)，此后使其沉降并且取出下部的水相且弃去。在50℃下加入水(25mL)，剧烈搅拌5分钟，使其沉降并且取出下部的水相且弃去。然后通过在常压下共沸蒸馏干燥丁腈溶液以便除去水(在这一规模上收集5.5mL；测定丁腈溶液中残留的含水量为0.1％)，此后冷却至20℃。加入叔丁基胺(0.83g，1.19mL，11.3mmol)，将该溶液升温至45℃并且加入晶种(6mg，0.1％w/w)。将该溶液在45℃下搅拌86小时且然后以0.1℃/小时平缓地冷却到20℃，在此过程中，固体结晶。通过过滤收集固体，通过用丁腈(10.6mL)和MTBE(10.6mL)置换依次洗涤且在50℃下真空烘箱内干燥而得到标题化合物，为白色固体(4.7g，占起始盐的24％)。HPLC(Rt 9.8分钟)；手性HPLC(一般为95％e.e.)；m.p.132-134℃；1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ7.19(2H，d，J＝8.8Hz)，7.21(2H，d，J＝9.2Hz)，7.10(2H，d，J＝9.2Hz)，6.95(2H，d，J＝8.8Hz)，6.88(2H，d，J＝8.0Hz)，6.59(2H，d，J＝8.4Hz)，4.10(2H，t，J＝6.8Hz)，3.25(3H，s)，3.20(1H，dd，J＝8.4，6.0Hz)，3.02(1H，dd，J＝13.6，8.8Hz)，2.92(2H，t，J＝6.8Hz)，2.44-2.72(5H，m)，1.13(9H，s)；13C NMR(100.6MHz，d6-DMSO)δ173.86，157.15，155.71，142.44，138.39，135.39，130.84，129.18，128.95，128.45，123.27，115.45，114.96，68.63，51.21，49.93，36.88，34.80，34.45，32.65，27.65；MS(ES+)534(M+NH4+，40％)，517(M+H+，27％)，471(M-CO2H+，100％)。
实施例8(S)-(-)-2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸叔丁基铵在71℃下将2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸叔丁基铵粗品(11.7g，19.8mmol)在温的无水乙醇(53.8mL)中搅拌至达到完全溶解。将所得溶液通过1μm滤膜筛入第二个容器，随后用温乙醇(4.7mL)洗涤管线并且将该溶液冷却至60℃。加入作为在乙醇(0.5mL)中的淤浆的晶种(60mg，0.5％w/w)并且将该溶液在60℃下保持30分钟，此后以0.1℃/分钟冷却至51℃。将该溶液在51℃下保持3小时，在此过程中，又形成晶种。将该淤浆以0.1℃/分钟冷却至46℃并且保持3小时；然后以0.1℃/分钟冷却至41℃并且保持3小时；然后以0.1℃/分钟冷却至31℃并且保持2小时；然后以0.17℃/分钟冷却至17℃并且保持至少5-6小时。通过过滤分离固体，通过用无水乙醇(11.7mL)置换洗涤并且在50℃下的真空烘箱内干燥以便产生标题化合物，为白色固体(10.2g，87％)。HPLC(Rt 9.8分钟)；手性HPLC(一般为98％e.e.)；mp 137-139℃；MS(ES+)534(M+NH4+，20％)，517(M+H+，30％)，471(M-CO2H+，100％)。需要注意的是上述阶段粗品的其它数据。
实施例9获得(S)-2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸及其叔丁基铵盐的外消旋/再循环方法如下通过外消旋、水解和盐结晶方法使2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸(R)-甲酯再循环而进一步得到2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸将1，8二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)(1.5mL，10.2mmol)加入到2-{[2-(4-羟基苯基)乙基硫基]-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸(R)-甲酯(10.8g，20.4mmol)在甲苯(200mL)中的溶液中并且在50℃下搅拌17小时。此后手性HPLC测定为0％(±2)。加入水(22mL)并且将该溶液冷却至40℃。加入氢氧化钠水溶液(2.9mL，32％w/w，30.5mmol)并且将该溶液在40℃下搅拌2小时。加入第二次添加的氢氧化钠溶液(1.0mL，10.2mmol)并且将该溶液在40℃下搅拌1小时。加入第三次添加的氢氧化钠溶液(1.0mL，10.2mmol)并且将该溶液在40℃下搅拌17小时，此后冷却至20℃。分离下部的水相并且保留；弃去上部的甲苯相。向水相中加入MTBE(108mL)，随后加入硫酸水溶液(40mL的10％w/w，40.7mmol)，同时搅拌10分钟。分离下部的水相并且弃去；用水(39mL)洗涤上部的有机相，分离且然后通过在常压下共沸蒸馏干燥以便除去残留的水(在这一规模下收集2.4mL)。向干燥的MTBE溶液中依次加入甲醇(19mL)、原甲酸三甲酯(6.7mL，61.1mmol)和浓硫酸(0.45mL，0.4mmol)且然后在回流状态下加热17小时，此后冷却至25℃。加入水(22mL)和碳酸钠水溶液(21mL的10％w/w，20.4mmol)，搅拌5分钟并且分离下部的水相且弃去。向有机相至加入水(39mL)，搅拌5分钟，使其沉降并且分离下部的水相且弃去。重复这一水洗涤。通过蒸馏将外消旋2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸甲酯的MTBE溶液的体积减少至～5个体积(即54mL；在这种情况中收集54mL蒸馏物)。加入叔丁醇/水(66mL的9∶1溶液，6.1个体积)并且持续蒸馏以便再除去4个体积的蒸馏物(在这种情况中为～45mL)，此后冷却至20℃。再加入1个体积的叔丁醇/水(11mL的9∶1溶液)，随后加入Lipozyme RM IM(1.08g的固定化酶，占外消旋酯的10％w/w)。将该反应混合物加热至35℃并且缓慢搅拌16小时以上，直到出现～30-35％的转化率。通过过滤除去酶并且用叔丁醇/水(5mL的9∶1溶液)洗涤固体。通过LC检测在叔丁醇/水溶液中的(S)-2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸((S)-酸)的量并且无需纯化而用于下一步(通过LC测定在49mL溶液中有2.8g的(S)-酸)。如实施例6中所述将该酸转化成(S)-(-)-2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸叔丁基铵。
产率(在这一规模上为21％2.5g)。手性HPLC(一般为95％e.e.)。
实施例102-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸叔丁基铵(外消旋物)在氮气环境中向反应容器中加入2-氯-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸铵(90％，1.55g，25.0mmol)和硫代苯甲酸2-(4-羟基苯基)乙酯(98％，8.57g，32.5mmol，1.3eq)。加入四氢呋喃(THF)(60mL，5vol)并且就将混合物升温至30℃。以0.25mL/分钟的速率向所得混悬液中加入甲醇钠(在甲醇中25％wt/vol)(17mL，74mmol，3eq.)。将所得灰色混悬液加热至40℃下2小时并且在不进行搅拌下使其在环境温度下静置过夜。将该混合物重新加热至40℃并且通过HPLC监测反应进程。4小时后，得到97％的转化率并且通过添加甲苯(50mL，5vol)和水(10mL，1vol)使该混合物猝灭，且将该混合物剧烈搅拌至获得均为澄清的两相。通过添加盐酸(～4mL@6N)将下部水相的pH从～12调节至～10.0并且使该混合物沉降。分离下部的水相并且保留；用水(10mL)重新萃取甲苯相。用甲苯洗涤合并的水相(两次，10mL)(在沉降时该步骤产生三相含产物的下部油相，澄清的中间水相，上部的甲苯相)。收集下部的相，弃去中部和上部的相，并且使该相静置过夜(正如通过HPLC判定的，未观察到降解)。通过添加6N盐酸将水相酸化至pH～1.0并且将产物萃取入丁腈(2×30mL，1×20mL)。通过在减压下共沸蒸馏干燥丁腈溶液(45℃，60mbar)。将所得澄清棕色溶液(75mL，7.5vol)保持在45℃下并且加入叔丁基胺(2.9mL，27.5mmol，1.1eq.)，此后用标题物质的可信样品种晶(100mg)。当所得混悬液浓稠时，加入乙酸叔丁酯(40mL)并且使该混合物沉降过夜。在过滤后，用乙酸叔丁酯(2×10mL)、1∶1异己烷/乙酸叔丁酯(20mL)和异-己烷(25mL)洗涤滤饼。在40℃下的真空中干燥产物而得到标题化合物，为乳白色固体(13.41g，91％)。HPLC(Rt 9.8分钟)；m.p.125-129℃。其它物理和光谱数据与如上所述的一致。
实施例112-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙硫羟酸S-乙酯将外消旋2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸(45g@80％浓度，含有8％wt/wt苯甲酸，70mmol)在乙酸乙酯(225mL，5vol)中的溶液冷却至0-5℃。在1.5小时内以4等份加入固体氯化氯代亚甲基-二甲基铵(Vilsmeier试剂@95％浓度，20.6g，161mmol，2.3eq)，将温度维持在0-5℃。将所得混浊混合物在相同温度下搅拌2.5小时且随后将其滴加到冰冷的剧烈搅拌的乙硫醇溶液(7.8mL，105mmol，1.5eq.)在磷酸盐缓冲水溶液(pH7，200mL)中的溶液中。一直监测pH并且通过同时添加32％NaOH溶液使其保持在6-7.5。在低温下30分钟后，将该批量升温至环境温度下过夜。分离有机相，干燥(MgSO4)并且在真空中浓缩至得到粗产物，为棕色油状物(43.82g，114％)。通过急骤色谱法纯化化合物粗品(20∶80到50∶50EtOAc∶异-己烷；二氧化硅)而得到标题化合物，为浅黄色油状物(31.5g，81％)。HPLC(Rt 11.6分钟)；m.p.油状物；1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ9.19(1H，s)，7.18-7.28(4H，m)，7.14(2H，d，J＝8.1Hz)，7.00-6.94(4H，m)，6.65(2H，d，J＝8.4Hz)，4.15(2H，t，J＝6.8Hz)，3.87-3.83(1H，m)，3.29(3H，s)，3.08(1H，dd，J＝14.0，8.4Hz)2.98(2H，t，J＝6.8Hz)，2.87(1H，dd，J＝14.0，7.0Hz)，2.80-2.67(4H，m)，2.66-2.60(2H，m)，1.08(3H，t，J＝7.2Hz)；13C NMR(100.6MHz，d6-DMSO)δ198.14，157.15，155.73，142.45，136.37，135.52，130.14，129.34，129.22，129.07，123.28，115.39，115.04，68.51，55.29，37.14，36.88，34.41，34.34，32.78，22.98和14.53。
使用上述方法或稍加修改制备下列类似的硫醇酯类
实施例122-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸甲酯的拆分将外消旋2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸甲酯(0.4g)溶于9∶1t-BuOH-水(70mL)。将该储备溶液分成1mL的整分试样以用于筛选反应。加入5-10mg生物催化剂并且将该反应体系在40℃下恒温和300rpm的定轨摇床中加温。在该反应过程后进行反相HPLC且通过手性HPLC进一步分析显示出可接受的转化率的实验。下面列出了显示出可接受的转化率的生物催化剂。催化水解的所有酶均为(S)-选择性的。
(S)-酸＝(S)-2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸实施例132-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸甲酯的酯交换将外消旋2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸甲酯(0.1g)溶于1∶1叔丁基甲基醚(TBME)-n-BuOH(含有3％v/v水)。向该溶液中加入米黑毛霉脂肪酶催化剂(Roche L9C-2；5mg)，并且将该混合物温至40℃。2天后，HPLC显示45％转化成(S)-2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸正丁酯。
实施例14外消旋2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙酸硫代酸酯的水解制备浓度～20mg/ml的外消旋2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙硫羟酸S-乙酯在9∶1t-BuOH-水中的溶液。将该储备溶液分成1mL的整分试样。加入5-10mg生物催化剂并且将该反应体系在40℃下恒温和300rpm的定轨摇床中加温。在该反应过程后进行反相HPLC，并且以100mg/ml浓度重复表现出可接受转化程度的反应。下面列出了表现出可接受的活性的生物催化剂。催化水解的所有酶均为(S)-选择性的。
实施例15使用洋葱假单胞菌脂肪酶PS-S拆分外消旋乙基硫代酸酯将外消旋2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙硫羟酸S-乙酯(20mg)溶于9∶1叔丁醇(t-BuOH)-水并且加入脂肪酶PS-S(4mg)。将该反应体系以300rpm在定轨摇床中温至40℃。通过反相和手性HPLC监测该反应体系。18小时后，酯转化成酸的转化率为29％，得到100∶0(S)-(R)比例的酸。加入三辛基胺的整分试样(15μL)以使残留的酯外消旋化并且持续监测反应。再经过48小时后，酯转化成酸的转化率为72％，再次得到100∶0(S)∶(R)比例的酸。再加入一份三辛基胺(15μL)。再经过18小时后，酯转化成酸的转化率为～80％，得到100∶0(S)∶(R)比例的酸。
实施例16a使用洋葱假单胞菌CLEC和在陶瓷上的洋葱假单胞菌使外消旋2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙硫羟酸S-乙酯去外消旋化将外消旋2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙硫羟酸S-乙酯(200mg)溶于9∶1t-BuOH-水(4mL)。向该溶液中加入三辛基胺(48.3μL)。将该溶液分成1mL整分试样。
向一个容器中加入洋葱假单胞菌CLEC(11mg)；向第二个容器中加入在陶瓷颗粒上的洋葱假单胞菌(Amano PS-C)(40mg)。维持第三个容器作为不添加生物催化剂的对照以便评价背景水解率。将该反应体系置于在38℃下恒温和300rpm下的定轨摇床中。在第6天时，向各反应体系中再加入一份三辛基胺(15μL)。通过反相和手性HPLC监测反应。
实施例16b使用洋葱假单胞菌粉末使外消旋2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙硫羟酸S-乙酯去外消旋化将外消旋2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙硫羟酸S-乙酯(20mg)溶于9∶1t-BuOH-水(1mL)。向该溶液中加入洋葱假单胞菌脂肪酶粉末(5mg，Amano PS-S)。将该反应体系置于在38℃下恒温和300rpm下的定轨摇床中。18小时后，加入三辛基胺(15μL，34.2μmol)。在3天后，再加入一份三辛基胺；并且在第6天时再加入一份三辛基胺。通过反相和手性HPLC监测反应。
实施例17外消旋2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙硫羟酸S-乙酯的酯交换将外消旋2-{[2-(4-羟基苯基)乙基]硫基}-3-[4-(2-{4-[(甲基磺酰基)氧基]苯氧基}乙基)苯基]丙硫羟酸S-乙酯(20mg)溶于1∶1叔丁基甲基醚∶正-丁醇(1mL；+3％水，+催化剂三辛基胺)。向该溶液中加入洋葱假单胞菌CLEC或在陶瓷颗粒上的洋葱假单胞菌(Amano PS-C)。将该反应体系置于在38℃下恒温和300rpm下的定轨摇床中。通过反相和手性HPLC监测反应。14天后，分别产生76％和60％转化率的相应丁基氧代酯且＞95∶5e.r.；还产生了～10％产率和100∶0e.r的某种酸。
权利要求
1)制备对映体富集的式I的化合物及其药学上可接受的盐的方法， 其中R1表示氯、氟或羟基，该方法包括在10-60℃范围内的温度下和有反应介质存在下用酶水解式II的化合物 其中R1如最初定义，X为O或S且R2为C1-10烷基、C1-6卤代烷基、C2-6链烯基、芳基、芳基C1-6亚烷基，并且具有或没有另外的杂取代，所述的酶选自a)米黑毛霉(Mucor miehei)脂肪酶、皱落假丝酵母(Candida rugosa)脂肪酶、Candida cylindracia脂肪酶、Thermomyceslanuginosa脂肪酶、爪哇毛霉(Mucor javanicus)脂肪酶和德列马根霉(Rhizopus delemar)脂肪酶，此时X为O；或b)洋葱假单胞菌(Pseudomonas cepacia)脂肪酶，此时X为S。
2)制备对映体富集的式I的化合物及其药学上可接受的盐的方法， 其中R1表示氯、氟或羟基，该方法包括在有反应介质存在下用酶水解式II的化合物， 其中R1如最初定义，X为O且R2为C1-10烷基，所述的酶选自米黑毛霉脂肪酶、皱落假丝酵母脂肪酶、Candida cylindracia脂肪酶、Thermomyces lanuginosa脂肪酶、爪哇毛霉脂肪酶和德列马根霉脂肪酶，此时X为O。
3)制备对映体富集的式I的化合物或其药学上可接受的盐的方法， 其中R1表示氯、氟或羟基，该方法包括在反应介质存在下用洋葱假单胞菌脂肪酶水解式II的化合物， 其中R1如最初定义，X为S且R2为C1-10烷基。
4)制备式III的化合物或其药学上可接受的盐的方法， 其包括使式IV的化合物与脂肪酶(lipozyme)在反应介质中反应，所述式IV的化合物为 其中R2如权利要求1中所定义，所述的脂肪酶选自米黑毛霉脂肪酶、皱落假丝酵母脂肪酶、Candida cylindracia脂肪酶、Thermomyceslanuginosa脂肪酶、爪哇毛霉脂肪酶和德列马根霉脂肪酶。
5)制备式III的化合物或其药学上可接受的盐的方法， 其包括使式V的化合物与洋葱假单胞菌脂肪酶在反应介质中反应， 其中R2如权利要求1中所定义。
6)制备对映体富集的式II的化合物的方法， 其中R1表示氯、氟或羟基，X表示O或S，且R2表示C1-6烷基、C2-6链烯基或苯基C1-6烷基，该方法包括在分别有C1-6链烷醇基、C2-6链烯醇基或苯基C1-6链烷醇基存在下，并且任选在10-50℃范围温度下和有反应介质存在下用酶使式II的化合物酯交换， 其中R1如最初定义，X为O或S且R2为具有或没有烯不饱和度的C1-6烷基或卤代烷基，所述的酶选自a)米黑毛霉脂肪酶、皱落假丝酵母脂肪酶、Thermomyces lanuginosa脂肪酶、爪哇毛霉脂肪酶和德列马根霉脂肪酶，此时X为O；或b)洋葱假单胞菌脂肪酶，此时X为S。
7)制备对映体富集的式IVa的化合物的方法， 其中X为O或S且R2表示具有或没有烯不饱和度的C1-6烷基或卤代烷基，该方法包括在有正丁醇存在下和作为液体或固相支持的形式的碱存在下并且任选在10-50℃范围温度和反应介质存在下用CLEC洋葱假单胞菌脂肪酶使式IVb的化合物酯交换， 其中R2为C1-2烷基。
8.)制备式I的化合物的方法，其包括下列步骤a)使式VI的化合物 与式VII的化合物在0-150℃范围的温度下和有碱存在的惰性溶剂中反应， 其中R5表示C1-6烷基且R6表示对-甲苯基，从而得到式VIII的化合物， 其中R5如最初定义；b)使式VIII的化合物与酸HA反应，其中HA表示HCl、HBr或三氟乙酸而得到式IX的盐 其中HA如最初定义；c)在-5℃-10℃范围温度下和有盐酸存在下使式IX的化合物重氮化而得到重氮盐溶液，并且任选在有催化剂存在下的含水反应介质中使该重氮盐溶液与丙烯酸反应，且使获得的产物与氨反应而得到式X的化合物， d)使式X的化合物与酸反应，且然后任选在有水清除系统存在下与式R2OH的醇反应而得到式XI的化合物， 其中R2如权利要求1中所定义；e)使式XI的酯与式XII的化合物在有碱存在下反应， 其中R1如权利要求1中所定义并且R4为甲基或苯基，从而得到式XIII的化合物， 其中R1、R2和X如权利要求1中所定义；和f)使式XIII的化合物与酶在10-50℃范围温度下和合适的反应介质中反应，所述的酶选自a)米黑毛霉脂肪酶、皱落假丝酵母脂肪酶、Candida cylindracia脂肪酶、Thermomyces lanuginosa脂肪酶、爪哇毛霉脂肪酶和德列马根霉脂肪酶，此时X为O；或b)洋葱假单胞菌脂肪酶，此时X为S，从而得到式I的化合物， 其为对映体富集的；和g)任选使式I的化合物与叔丁基胺在合适的反应介质中反应而得到式I化合物的叔丁基铵盐。
9)套接方法，其包括下列步骤a)使式X的化合物 与酸反应且然后任选在有水清除系统存在下与式R2OH的醇反应而得到式XI的化合物， 其中R2如权利要求1所定义；b)使式XI的酯与式XII的化合物在有碱，例如甲醇钠存在下反应， 其中R1如权利要求1所定义并且R4为甲基或苯基，从而得到式XIII的化合物， 其中R1、R2和X如权利要求1所定义；和c)使式XIII的化合物与酶在10-50℃范围温度下和合适的反应介质中反应，所述的酶选自a)米黑毛霉脂肪酶、皱落假丝酵母脂肪酶、Candida cylindracia脂肪酶、Thermomyces lanuginosa脂肪酶、爪哇毛霉脂肪酶和德列马根霉脂肪酶，此时X为O；或b)洋葱假单胞菌脂肪酶，此时X为S，从而得到式I的化合物， 其为对映体富集的；和d)任选使式I的化合物与叔丁基胺在合适的反应介质中反应而得到式I化合物的叔丁基铵盐。
10)式IIa的化合物 其中i)X为O且R2为乙基；ii)X为O且R2为正丙基；iii)X为O且R2为正丁基；iv)X为S且R2为甲基；v)X为S且R2为乙基；vi)X为S且R2为正丙基或vii)X为S且R2为正丁基；viii)X为S且R2为正己基ix)X为S且R2为正辛基；包括各化合物的(R)和(S)对映体以及(R)和(S)对映体的所有混合物，包括外消旋形式的化合物，并且当x)X为O且R2为甲基时，为(S)和(R)形式。
11)式VIII的化合物 其中R5表示C1-6烷基。
12)式IX的化合物，其为 及其盐。
13)式X的化合物
14)式XI的化合物 其中R2为乙基、正丙基或正丁基。
15)式XII的化合物 其中R1如权利要求1中所定义。
16)式XIII的化合物 其中R1、R2和X如权利要求1中所定义。
17)式XIV的化合物
全文摘要
描述了制备3－苯基－2－芳基烷硫基丙酸衍生物中的某些的酶促和化学方法，所述的化合物具有治疗临床疾病，包括脂质障碍(血脂异常)的应用，无论所述的疾病是否与胰岛素耐受性和其它代谢综合征的表现相关，还描述了用于这些方法中的某些新的中间体。
文档编号C12P41/00GK101080495SQ200580043506
公开日2007年11月28日 申请日期2005年12月14日 优先权日2004年12月16日
发明者D·布朗, J·P·吉尔迪, P·A·霍普斯, J·D·莫斯利, E·W·斯纳普, A·韦尔斯 申请人:阿斯利康(瑞典)有限公司