专利名称：营养血液培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种营养血液培养基，其主要成分是牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂粉、硫酸镁、对氨苯甲酸、无菌脱纤维O型人血(或无菌脱纤维羊血或兔血)、小牛血清经一定的工艺制成。用以供一般标本和已使用过抗生素及磺胺药的病人标本分离培养用。利用培养试验鉴别细菌的种类，其关键在于准确、快速、简便。而细菌接种分离培养好坏，会直接影响检测结果。往往需要将样本通过不同方法进行分离培养，来进行细菌种类的鉴别，这是目前微生物实验室最常用的手段。由于目前培养条件的应用范围所限，供一般标本的分离培养用的培养基没有特效的，存在所分离培养基营养不足、培养时间长、易出现假阳性或假阴性等问题。随着生物研究的进展，国内外对细菌鉴别的增菌培养基研究也在不断的发展中。生物工作者一直希望能有一种能克服上述不足的分离培养的培养基----营养血液培养基。
背景技术：
本发明的目的在于提供一种能克服已有鉴别培养基不足的营养血液培养基。与其它同类培养基相比具备下列特点所需接种量小，少量细菌即可迅速繁殖，在通常室温下或37℃培养5-6小时即可观察结果；不易出现假阳性和假阴性；能破坏标本中存在的抑菌物质，使细菌生长不受抑制。
发明内容
本发明的要点在于选择合适的组分，并进行合理混配，经加温、溶解、混合、冷却、分装、高温灭菌等工艺而成一种营养血液培养基。
本发明选择的配方如下(组分及其重量百分比％)牛肉膏(0.3-0.5)、蛋白胨(1.0-1.5)、氯化钠(0.4-0.6)、琼脂粉(2.1-2.3)、49.3％硫酸镁6-8ml、0.5％对氨苯甲酸6-8ml、无菌脱纤维O型人血(或无菌脱纤维羊血或兔血)6-8ml、小牛血清6-8ml、蒸馏水加至100ml。
本培养基含有丰富的营养成分，如牛肉膏、蛋白胨、小牛血清、血液是培养基中的营养和支持成分，对观察链球菌，葡萄球菌的溶血比较满意；分离脑膜炎球菌及嗜血杆菌属好。氯化钠用于调整渗透压；磷酸二氢钾用于调节pH。。标本接种后即计算时间，在通常室温下或37℃培养，培养12小时后，即用划线法移种到选择性培养基上以分离致病菌。加入血液时温度必须适宜，否则不利于与琼脂混匀及观察溶血情况。
本发明产品的制备方法是1)、将牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂粉、硫酸镁、对氨苯甲酸、蒸馏水置于三角烧瓶内，混合并使液体浸湿琼脂粉；2)、加热溶解，趁热矫正pH至7.4，以绒布过滤，分装于试管或烧瓶内，后置于压力蒸气灭菌器内，以1.05kg30分钟；3)、取出后冷至50℃左右，以无菌手续加入无菌脱纤维O型人血(或无菌脱纤维羊血或兔血)和小牛血清，轻轻摇匀，倾注平板.凝固后，抽样于37℃培养18~24小时，如无细菌生长，冷藏备用。
本发明具有以下优点(1)所需接种量小，培养时间短，少量细菌即可迅速繁殖，在通常室温下或37℃培养8-12小时即可观察结果；(2)不易出现假阳性或假阴性；(3)能破坏病人标本中存在的抗生素及磺胺药的抑菌作用。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明按照下表所列数据(重量百分比％)及其所述步骤进行配置配方一牛肉膏 0.3-0.5蛋白胨 1.0-1.5氯化钠 0.4-0.6琼脂粉 2.1-2.3硫酸镁(49.3％) 6-8ml对氨苯甲酸(0.5％)6-8ml无菌脱纤维O型人血(或无菌脱纤维羊血或兔血)6-8ml小牛血清 6-8ml蒸馏水 加至100ml
配方二牛肉膏 0.3-0.4蛋白胨 1.0-1.4氯化钠 0.4-0.5琼脂粉 2.1-2.2硫酸镁(49.3％) 6-7ml对氨苯甲酸(0.5％)6-7ml无菌脱纤维O型人血(或无菌脱纤维羊血或兔血)6-7ml小牛血清 6-7ml蒸馏水 加至100ml
配方三牛肉膏 0.4-0.5蛋白胨 1.2-1.5氯化钠 0.5-0.6琼脂粉 2.2-2.3硫酸镁(49.3％) 7-8ml对氨苯甲酸(0.5％)7-8ml无菌脱纤维O型人血(或无菌脱纤维羊血或兔血)7-8ml小牛血清 6-8ml蒸馏水 加至100m1
配方四牛肉膏 0.35-0.45蛋白胨 1.1-1.4氯化钠 0.5-0.55琼脂粉 2.2-2.3硫酸镁(49.3％) 6.5-7.5ml对氨苯甲酸(0.5％)6.5-7.5ml无菌脱纤维O型人血(或无菌脱纤维羊血或兔血)6.5-7.5ml小牛血清 6.5-7.5ml蒸馏水 加至100ml
权利要求
1.一种营养血液培养基，是以牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂粉、硫酸镁、对氨苯甲酸、无菌脱纤维O型人血(或无菌脱纤维羊血或兔血)、小牛血清为主要成分；其特征在于具有如下配方(组分及其重量百分比％)牛肉膏(0.3-0.5)、蛋白胨(1.0-1.5)、氯化钠(0.4-0.6)、琼脂粉(2.1-2.3)、49.3％硫酸镁6-8ml、0.5％对氨苯甲酸6-8ml、无菌脱纤维O型人血(或无菌脱纤维羊血或兔血)6-8ml、小牛血清6-8ml、蒸馏水加至100ml。
2.一种权利要求1所述营养血液培养基的制备方法，其特征在于具有如下的步骤1)、将牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂粉、硫酸镁、对氨苯甲酸、蒸馏水置于三角烧瓶内，混合并使液体浸湿琼脂粉；2)、加热溶解，趁热矫正pH至7.4，以绒布过滤，分装于试管或烧瓶内，后置于压力蒸气灭菌器内，以1.05kg30分钟；3)、取出后冷至50℃左右，以无菌手续加入无菌脱纤维O型人血(或无菌脱纤维羊血或兔血)和小牛血清，轻轻摇匀，倾注平板.凝固后，抽样于37℃培养18~24小时，如无细菌生长，冷藏备用。
全文摘要
本发明涉及一种营养血液培养基，其主要成分是牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂粉、硫酸镁、对氨苯甲酸、无菌脱纤维O型人血(或无菌脱纤维羊血或兔血)、小牛血清经一定的工艺制成。用以供一般标本和已使用过抗生素及磺胺药的病人标本分离培养用。本培养基含有丰富的营养成分，如牛肉膏、蛋白胨、小牛血清、血液是培养基中的营养和支持成分，对观察链球菌，葡萄球菌的溶血比较满意；分离脑膜炎球菌及嗜血杆菌属好。氯化钠用于调整渗透压；磷酸二氢钾用于调节pH。标本接种后即计算时间，在通常室温下或37℃培养，培养12小时后，即用划线法移种到选择性培养基上以分离致病菌。加入血液时温度必须适宜，否则不利于与琼脂混匀及观察溶血情况。本发明具有以下优点(1)所需接种量小，培养时间短，少量细菌即可迅速繁殖，在通常室温下或37℃培养8－12小时即可观察结果；(2)不易出现假阳性或假阴性；(3)能破坏病人标本中存在的抗生素及磺胺药的抑菌作用。
文档编号C12N1/20GK101089190SQ200610044869
公开日2007年12月19日 申请日期2006年6月16日 优先权日2006年6月16日
发明者阚方琦, 曲奕 申请人:阚方琦, 曲奕