专利名称：：一种能深度脱除油品有机硫的脱硫菌及制备方法和用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种能深度脱除油品有机硫的脱石危菌，名称为烟曲霉hpe，'77zw/咖/g"Z7i1Fresen.T:L-1，属生物工禾呈领域。本发明还涉及该脱硫菌的制备方法和用途。技术背景随着世界经济的发展和多年的持续开发，现存低硫化石燃料日益枯竭，高硫燃料的开采成为必然。由于硫可使某些催化剂中毒，部分含硫化合物本身具有腐蚀性，以及石油产品中硫燃烧后均生成S02等硫氧化物而导致腐蚀设备和污染环境，所以硫含量是衡量油品质量的主要标准之一。北京现拥有机动车280余万辆且有继续增多的趋势，其燃料油中的硫化物燃烧生成、排放的硫氧化物严重影响北京的大气环境。目前欧美等发达国家对汽、柴油的硫含量都进行了严格的限制，如对汽油中的硫含量限制目前已由300lag/g左右调至30jLig/g以下；对柴油的碌u含量限制已由150~350yg/g调至50jag/g左右。国内汽油标准中要求辟^含量低于800ug/g,柴油标准规定的硫含量远远大于欧美标准中的规定值。我国规划汽油质量到2010年与国际标准接轨，故充分利用有限的石油资源，降低石油产品中的硫含量、获得低硫清洁能源是目前烃加工工业所面临的迫切问题。目前，油品的工业脱硫普遍使用的脱硫方法是加氢脱硫。加氢脱硫是指高温高压下吸附在催化剂上的H2与硫化物中的硫发生催化反应，生成H2S来脱除硫。但是加氲脱硫工艺难以满足含硫量进一步降低的要求，而且当所达到的硫含量越低时，脱辟u费用越大，脱硫效率越低；现有的脱石克装置，即通过加氲处理，把柴油中的硫含量降低到350yg/g已十分困难，所以寻找一种操作筒单、投资少、脱硫效率高的成品油脱硫方法，成为目前炼油科研工作者致力研究的主要课题。近年来，生物技术的快速发展为石油产品深度脱硫技术的发展和应用提供了广阔的空间。生物脱石克，又称生物4IM匕剂脱碌b,BiocatalyticDcsulfurizationBDS,主要是利用自然界存在的微生物脱除疏而不破坏有燃料价值的烃类。生物催化脱除石油及产品中有机硫的技术多数还处在实验室研究阶段，尚未投入工业化生产。二苯并p塞吩是公认的脱有机硫模式化合物，据此分离出来的菌种可有效脱有机硫，且不破坏C-C结构从而保留了燃料的热值。迄今为止，已分离出的菌种包括假单胞菌i^e^湖o/M^^,红球菌v/w^co"w^/,棒杆菌C。/y/7e&"er/腳5^,短杆菌i9reF/6a"er/"迈Si,戈登氏菌Co/d,s/,诺卡氏菌^cartf/aM等，其中，1989年美国天然气研究所分离得到的^o^coccww力o^c力ro^/.GTS8是研究最多的菌种。1998年，JeHwanChang等人分离得到戈登氏菌Gordinasp.CYKSl，除了二苯并噻吩外，该菌株还可以分解20种其他有机硫化合物，包括硫醇,.亚硫酸盐及"塞吩等；实验证明该菌林可以脱去柴油中60%硫(0.15°/到0.06。/。W/W)及汽油中15%硫。2000年，S.Maghsoudi等人从石油样品中分离得到一林脱硫棒杆菌Cor/ae^Wer/fmsp.P32C1，该菌株在发酵罐中培养27h就可以将0.25mol/L二苯并噻吩全部转化成2-羟基联苯(2-HBP)，对数生长期后期的休止细胞可在30min内完全转化0.5mol/L二苯并瘗吩，最大的2-HBP比生产速率达到37画l/KgDCW.h,与IGTS8相比，P32C1具有更强的脱硫能力。目前生物脱硫的研究主要集中在新菌种的开发；生物催化剂制备、性能的改善；脱硫代谢途径、机理的研究；传质过程的研究；脱硫工艺研究；脱硫生物反应器的设计以及生物脱硫派生产品的开发利用等方面。目前能用于生物脱硫的菌种很多为遗传稳定性较差的原核微生物，且都是以二苯并噻吩为模型化合物来进行脱硫过程研究，由于酶催化反应的专一性，这些菌种普遍对二苯并噻吩的脱除效果较好，但成品油中还含其它有机硫化合物，包括二苯并瘗吩衍生物(二苯并參汾s)、BT及其苯并瘗吩衍生物(BTs)等，菌种对这些有机疏化合物脱除较困难。
发明内容本发明的目的正是为了克服上述已有技术存在的缺点与不足而提供一林选择性宽、高活性、遗传稳定、以"4S，，氧化方式脱硫，且能深度脱除油品中多种复杂有机石克的脱碌u菌，为实现油品生物脱硫技术工业化提供生物催化剂。本发明的目的是通过下列技术方案实现的一种能深度脱除油品有机硫的脱硫菌，其特征在于该脱硫菌名称为烟曲霉，拉丁文为^/ergi77^/〃迈/^s^;Fresen.TL-l，于2006年11月1日保藏在"中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物保藏中心，，，保藏号为CGMCCNO.1855。该脱-克菌的菌落在麦芽汁琼脂培养基上，25°C7天直径7080mm，质地丝绒状，分生孢子结构大量，暗灰绿色，无渗出液，菌落反面黄褐色，分生孢子头球形，孢梗茎直径400~850x3.78.1jLim，表面光滑，顶嚢烧瓶形，直径18~52pm,表面1/2或3/4可育，产孢结构单层，瓶救7.6~8.5x2.0~2.9pm，分生孢子球形或近球形，浅褐色，表面粗糙，直径2.3~3.0jum，由图1所示。该脱辟u菌以F63-R635为引物，扩增此菌LSUrRNA基因的Dl/D2区域，序列如下CrCG(::丁('C'A(;(;CAGGCC'GCATTGCAC'CX'TCGC;CTATAAC:AC:A(:CCCOACJAC'C('CAC(Xi(KiAAGTAC.'A('CGGCACGA八TGCCCKiC:TGAAC;CX'C;(J(;(JG(K:c;AGK'TG(;TC'(;('AAACGCTTCC('TTTCAACAATTTCAC(:;丁GCTOT.rrAACTC:'J.CTInCAAA(;T('.;rT(TTCATCTTTCGA丁CACTCTACTTG丁G('GCTA丁CG(;T('T(;t'C_i(jC(V、(''TATTTA(K:TrrAGA.rC}AAATTTAC(:ACX'CAm-ACJAUC"IC;CA'rC(—(.C(:('.'、GAC'(;(;riATTrTCA('CCTCTATGACGGCCCG]TCCAGGGCAC.rrA(iACGGGCiOCTCK'ACCC'GAAGCATCCTCTGCAAATTACAACGCGGACmGAAGGC;(;C(:'A(.;CTTTCAAA'ITTGAGCTCTTGCCGCTTCA(國'TCCiCCGT'lACT(iAG(;C.VAR'r('TCrnTK—nTTC'ITTTCCTCCGCTTATTGATATGCTTAACrrTCAGCA有机硫的脱硫菌的制备方法，其特征在于它按下述步骤进行(a)菌种驯化将净皮原油污染的土i裏5g溶于200tnL生理盐水中，取上清液lOmL接种于80mL含400u/mL青霉素和2mg/mL链霉素的无机盐培养基和lOmL含苯并噻吩0.lmmol/L、二苯并噻吩0.lmmol/L、4，6-二甲基二苯并噢吩0.lmmol/L和苯硫醚0.l鹏ol/L10mL的原油混合液中，混合液置于恒温振荡器中，在U0r/min、30。C条件下，振荡培养48h为1个周期，取振荡培养后水相液体10mL,重新接种于80mL上述的无才几盐i告养液和lOmL原油混合液中，在120r/rain、30。C条件下，振荡培养48h;如此重复10个周期480h驯化，驯化10个周期结束后，以无菌操作在内含400u/mL青霉素、2mg/mL链霉素和二苯并噻吩1000ng/g的琼脂平板上画线分离后，置于30。C恒温培养箱内培养，待琼脂平板长出孤立菌落后接种于内含400u/mL青霉素，2mg/nL链霉素和二苯并參吩1000jig/g斜面培养基上，置于3(TC恒温培养箱内培养，待斜面2/3长满菌落后，4"C冰箱保存待筛选；(b)菌抹的筛选(1)以无菌操作将保存在斜面培养基上的菌落接种于lOOmL含"0u/mL青霉素和2mg/mL链霉素富集培养基中，置于恒温振荡器内，在120r/min、30。C条件下，振荡培养24h后；使用离心机，在6000r/min,15"C条件下离心分离收集菌体，0.5g湿菌体悬于lmL无机盐培养基中，制备O.5g/mL菌悬液备用；(2)分别取浓度为2.72mmol/L和5.44mmol/L的二苯并噻吩正十六烷溶液lOmL,与90mL0.5g/mL菌悬液混合，置于恒温振荡器内，在120r/tnin、3(TC条件下，振荡培养12h和24h后，测定有机相中二苯并瘗吩的含量。测得的二苯并噻吩浓度最小时，即为初步获得的脱硫菌种；(3)初步获得的脱硫菌种接种于80mL含400u/mL青霉素和2mg/mL链霉素的无机盐培养基和10mL含苯并嚷吩0.lranol/L、二苯并p塞吩0.lmmol/L、4，6-二曱基二苯并p塞卩分0.lmmol/L和苯硫醚0.lmmol/L10mL的催化裂化柴油混合液中，混合液置于恒温振荡器中，在120r/min、30。C条件下，振荡培养2他后；取振荡培养后水相液体10mL，重新接种于80mL无机盐培养液和lOmL催化裂化柴油混合液中，在120r/min、30C条件下，振荡培养24h;如此重复7个周期168h的再次驯化，再次驯化结束后，重复初步获得脱辟u菌种过程，最终获得了具有脱石克能力的菌种。有机硫的脱辟u菌的用途，其特征在于该脱硫菌用于深度脱除油品中有积J充化合物，其方法是将烟曲霉菌林接种于内含400u/mL青霉素和2mg/mL链霉素的富集培养基中，在30C，120r/min条件下振荡培养24h后，15°C、6000r/min离心收集菌体，制备0.5g/mL菌悬液，取此菌悬液与被脱石危油品混合，菌悬液与被脱硫油品混合体积比为80-85:15~20,将混合液置于恒温振荡器内，在120r/min、30C条件下振荡培养12h后，分离油相；将分离获得的油相，与新制备的0.5g/mL菌悬液按上述的体积比混合后，置于恒温振荡器内，在120r/min，，30t:条件下振荡培养12h;如此三个周期，同时进行以24h为一个周期的平行实验。三个周期结束后，完成对油品中有机硫的深度脱硫。本发明提供的烟曲霉J"erg/77^尸w迈/卵fzwFresen.TL-1是以天津大港油田被原油污染土壤为菌源，采用苯并噻吩、二苯并噢吩、4,6-二甲基二苯并噢吩和苯硫醚的混合物为限制性底物，进行的微生物驯化，初次驯化用原油和无机盐混合液，再次驯化用催化裂化柴油和无机盐混合液，再筛选出的具有脱硫能力的菌林。本发明提供的烟曲霉A/e/^/7/w/"咖/'^/"irFresen,TL-1，通过选取温度，pH值、盐浓度为主要影响因素试验可知，其在30匸，pH值为7，NaCl浓度为10g/L的条件下，生长状况较好，菌株耐受pH值的范围是3~11，可以耐受27g/L以下的渗透压，该菌抹在环境pH值和渗透压改变较大时，仍能维持正常的生命活动，对环境的适应能力较强。本发明提供的烟曲霉h/7e/^7/zw尸湖/卵"sFresen.TL-1,利用高效液相色语仪和气相色谦仪确定了该菌林在代谢二苯并嚷吩过程中有二苯并噻吩砜和2-羟基联苯生成，是循"4S"氧化途径脱石克的菌株。本发明提供的烟曲霉菌抹接种内含400u/mL青霉素和2mg/mL链霉素富集培养基，在30。C，120r/min条件下振荡培养24h后，15°C、6000r/min离心收集菌体，菌体接种于二苯并嚷吩浓度为1000pg/g的无机盐培养液lOOmL中，其中十六烷占10%，30t:,120r/min，振荡培养24h后，使用高效液相色谙仪和气相色i普仪确定有才M目中物质的保留时间，对比正十六烷溶解二苯并嚷吩砜标准品的高效液相色i普图和正十六烷溶解二苯并噢吩、2-羟基联苯标准品的气相色谱图，分析观察确定了本发明提供的烟曲霉菌林，代谢二苯并噻吩的主要中间产物和终产物是二苯并瘗吩砜和2-羟基联苯。同时向上述振荡24h后培养液中加入BaCl2溶液，看到有不溶于稀硝酸的白色沉淀出现，确定有SO、存在。通过此实验确定了本发明提供的烟曲霉菌株代谢二苯并嚷吩循"4S"氧化途径。二苯并嚷吩的定量采用高效液相色i普法。高效液相色镨仪的使用条件及方法调节高效液相色傳检测波长为254nm，流动相为90%的甲醇水溶液，流速为lmL/min,柱温为25X:的C18色i普柱，进才羊量20inL。在4吏用条件下，测定各标准二笨并噻吩溶液浓度对应的峰面积，由色i昝工作站绘制成二苯并噻吩浓度与对应峰面积的标准曲线，通过测定各样品中二苯并汆吩的峰面积即可确定二笨并噻吩的量。有斜目中硫含量采用微库仑法测定。微库仑仪操作条件汽化段温度为600C燃烧段温度为800t:，稳定段温度700t:，氮气流量为150mL/min，氯气流量为150mL/min，偏压E为130mV,增益K为1000，电阻R为2KQ。通过分析硫标准溶液，计算总硫的转化率，消除了三氧化硫未参加反应带来的误差；对未知试样进行测定，并进行计算后，可求得未知样品中硫的含量。由于采取上述技术方案使本发明技术与己有技术相比具有如下优点及效果(a)本发明提供烟曲霉，选择性宽、高活性、遗传稳定、以"4S"氧化方式可脱除复杂有才几硫化合物中的硫，且可直接应用于油品的深度脱vf危，具有广泛的实际应用和理论研究价值；(b)本发明提供的烟曲霉，通过成品油的深度脱硫实验，确定了菌株可以直接应用于油品的脱硫，有较高的脱J危效率，脱硫率可达47.99~85.61%;(c)在富集培养基接种的烟曲霉菌抹，在30。C,pH值为7,NaCl浓度为10g/L条件下，生长状况较好；菌林耐受pH值的范围是311，可以耐受27g/L以下的渗透压；该菌株在环境pH值和渗透压改变较大时，仍能维持正常的生命活动，对环境的适应能力较强；(d)能脱除多种含疏化合物中的硫，且有较大范围的环境耐受能力。图1本发明的烟曲霉的显微形态图具体实施方式实施例1将4皮原油污染的土壤5g溶于200mL生理盐水中，取上清液10mL接种于80mL含400u/mL青霉素和2mg/mL链霉素的无机盐培养基和10mL含苯并噻吩0.lramol/L、二苯并嚷吩0.lmmol/L、4，6-二甲基二苯并噢汾0.l咖ol/L和苯硫瞇0.l咖ol/L10mL的原油混合液中，混合液置于恒温振荡器中，在120r/min、3(TC条件下，振荡培养48h为1个周期，取振荡培养后水相液体10mL,重新接种于80mL上迷的无机盐培养液和10mL原油混合液中，在120r/min、30"C条件下，振荡培养48h;如此重复10个周期480h驯化，驯化10个周期结束后，以无菌操作在内含400u/mL音霉素、2mg/mL链霉素和二苯并噢喻1000ng/g的琼脂平板上画线分离后，置于30X:恒温培养箱内培养，待琼脂平板长出孤立菌落后接种于内舍400u/mL青霉素，2mg/mL链霉素和二苯并嚷喻1000Mg/g斜面培养基上，置于30'C恒温培养箱内培养，待斜面2/3长满菌落后，4'C冰箱保存待筛选；以无菌操作将保存在斜面培养基上的菌落接种子100mL舍400u/mL青霉素和2mg/mL链霉素富集培养基中，置于恒温振荡器内，在120r/min、30"C条件下，,振荡培养24h后；使用离心机，在6000r/min，15X:条件下离心分离收集菌体，0.5g湿菌体悬于lmL无机盐培养基中，制备0.5g/mL菌悬液备用；分别取浓度为2.72咖ol/L和5.44咖ol/L的二苯并漆哈正十六烷溶液10mL，与90mL0.5g/迈L菌悬液混合，置于恒温振荡器内，在120r/min、30"C条件下，振荡培养12h和24h后，测定有机相中二苯并噢吩的含量。测得的二笨并噻吩浓度最小时，说明微生物脱减效果越好，即为初步获得的脱硫菌种初步获得的脱硫菌种接种于80mL含400u/mL青霉素和2mg/mL链霉素无机盐培养基和10mL含苯并噢吩0.2mmol/L、二苯并漆吩0.2咖ol/L、4，6-二甲差-二苯并噻吩0.2mmol/L和苯硫醚().2mmol/L的催化裂化柴油混合液中，混合液置于恒温振荡器中，在120r/min、30t:条件下，振荡培养24h为1个周期；取振荡培养后水相液体lOmL,重新接种于80mL无机盐培养液和10mL催化裂化柴油混合液中，在120r/min、30X:条件下，振荡培养24h;如此重复7个周期168h再次驯化。再次驯化结束后，重复初步获得脱石克菌种过程，最终获得了具有脱疏能力的菌种。菌种经中国科学院微生物研究所鉴定为"/7er^r7勿s/^zw>WmFresen.TL-l;该菌株于2006年11月1日保藏在"中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物保藏中心"，保藏号为CGMCCNO.1855。该菌林培养及显微形态为菌落在麦芽汁琼脂培养基上，25X:7天直径70-80咖，质地丝绒状，分生孢子结构大量，暗灰绿色，无渗出液菌落反面黄褐色。分生孢子头球形；孢梗茎直径400850x3.78.1jam，表面光滑；顶嚢烧瓶形，直径1852ym，表面l/2或3/4可育；产孢结构单层，瓶梗7.6~8.5x2.0~2.9jim;分生孢子球形或近球形，浅褐色，表面粗糙，直径2.3-3.0jam,由图1所示，该菌株以F63-R635为引物，扩增此菌LSUrRNA基因的Dl/D2区域，序列进行Blast比较，与^/er^7/w;尸咖/卵&s相似性分别达100%，基因的Dl/D2区域序列为CiGCCACiTATTTACiCTTTAGATGAAATTTACCACCCATTTAGAGCTGCATU'CCAAT('('('T(iTTGGTTTC'rTTTCCTCCGCTTATTGATA'rGCTTAAGTTCAGCA实施例2将烟曲霉菌抹接种于内含400u/mL青霉素和2mg/mL链霉素的富集培养基.中，在30。C，120r/min条件下振荡培养24h后，15。C、6000r/min离心收集菌体，制备0.5g/fflL菌悬液，取此菌悬液80niL与93#汽油20mL混合，将混合液置于恒温振荡器内，在120r/min、30t:条件下振荡培养12h后，分离油相；将分离获得的油相，与新制备的0.5g/mL菌悬液80mL混合，置于恒温振荡器内，在120r/rain、30"C条件下振荡培养12h;如此三个周期，同时进行以2化为一个周期的平行实验。三个周期结束后，完成对汽油中有机硫的深度脱疏，其结果见表l表l93*汽油脱硫结杲<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>实施例3将烟曲霉菌株接种于内含400u/mL青霉素和2mg/mL链霉素的富集培养基.中，在3(TC，120r/min条件下振荡培养24h后，15"C、6000r/min离心收集菌体，制备0.5g/mL菌悬液，取此菌悬液85mL与柴油15mL混合，将混合液置于恒温振荡器内，在120r/min、30。C条件下振荡培养12h后，分离油相；将分离获得的油相，与新制备的0.5g/mL菌悬液80mL混合，置于恒温振荡器内，在120r/min、30t:条件下振荡培养12,h;如此三个周期，同时进行以2仆为一个周期的平行实验。三个周期结束后，完成对柴油中有机硫的深度脱疏，其结果见表2。表2柴油脱硫结杲试验编号12h三周期后脱硫率(W24h三周期后脱硫率(%)176.0182.72279.7185.61377.4383.54实施例4按实施例3条件对催化裂化柴油深度脱辟u，其结果见表3表3催化裂化柴油脱硫结果试验编号12h三周期后脱石危率(0/。)2仆三周期后脱碌u率(％)174.1980.09274.5481.33376.3282.1权利要求1.一种能深度脱除油品有机硫的脱硫菌，其特征在于该脱硫菌名称为烟曲霉，拉丁文为AspergillusfumigatusFresen.TL-1，2006年11月1日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物保藏中心”，保藏号为CGMCCNo.1855。2、根据权利要求1所述的有机硫的脱硫菌，其特征在于该脱硫菌的菌落在麦芽汁琼脂培养基上，25°C7天直径为70~80鹏，质地丝绒状，分生孢子结构大量，暗灰绿色，无渗出液，菌落反面黄褐色，分生孢子头球形，孢梗茎直径400-850x3.7-8.lpm，表面光滑，顶嚢烧瓶形，直径1852)am，表面1/2或3/4可育；产孢结构单层，瓶梗7.6~8.5x2.0~2.9jam，分生孢子球形或近球形，浅褐色，表面粗糙，直径2.3~3.0jura。3、根据权利要求1所述的有机硫的脱硫菌，其特征在于该脱硫菌以F63-R635为引物,扩增此菌LSUrRNA基因的Dl/D2区域，序列如下(、t'CACG(X;(;AAGTAC'ACCGGCACC3AATG'CCCitiCTGAACC(X'(JCXKKK:'GA(Jl'CT(;(.-'TCC5('AAACGCTTC('('TTTCAA(，A,VrTTCACXn—GCT(TITI.AACTCTC'rIII<_.■AAA(;TrirTn'丁CATCTTTCGATCACTC'rACTTG丁GCGtTA丁CGC;T('TCCCi(」CC,、C;TATTTAGCT.n—AGA丁GAAAT丁丁ACCACCC.ATT.JAUA(JCI(」CAir(乂CAAA('AAC.rCG八C'rCGTCGA八GGAGCTT(:.AC'AC:(;GACGCA(iACACC('C(i'r(-「CAC;A(-(國i(iGATTrTf:AC(.'CTCTATGACGGCCCG—JTCCAGGGCAC丁TAGACGGG(i(iC'r(JCACCCGAAGCATCCTCTGCAAATTACAACGCG(iA(:(:(X'C3」、A(,GG(;('CA(;(、Ti~r('AAA.r-TGAGCTC.nx;ccGcrrcAC'rcciCcxiTTACr(iA(iG('AAr(:r("l(;—「TG(Trn(、TTTTCCTCCGCT丁,VTTGAT八T(;(TT八AGTTCA(画;CA4、如根据要求l、2或3所述的有机硫的脱疏菌的制备方法，其特征在于它按下述步骤进行(a)菌种驯化将4皮原油污染的土i裒5g溶于200mL生理盐水中，取上清液10mL接种于80mL含40Gu/mL青霉素和2tng/tnL链霉素的无机盐培养基和10mL含苯并瘗吩0,lmmol/L、二苯并"塞吩0.l咖ol/L、4，6-二甲基二苯并p塞吩0.lmraol/L和^5克醚0.l咖ol/L10mL的原油混合液中，混合液置于恒温振荡器中，在120r/min、30。C条件下，振荡培养48h,l个周期，取振荡培养后7jc相液体10mL，重新接种于80mL上述的无机盐培养液和lOmL原油混合液中，在120r/min、3(TC条件下，振荡培养48h;如此重复10个周期，4隐驯化，驯化10个周期结束后，以无菌操作在内含400u/mL青霉素、2mg/mL链霉素和二苯并嚷吩1000jagg^的琼脂平板上画线分离后，置于30。C恒温培养箱内培养，待琼脂平板长出孤立菌落后接种于内含400u/mL青霉素，2mg/mL链霉素和二苯并瘗吩1000jig/g斜面培养基上，置于3(TC恒温培养箱内培养，待斜面2/3长满菌落后，4。C冰箱保存待筛选；(b)菌株的筛选(1)以无菌操作将保存在斜面培养基上的菌落接种于100mL含400u/mL青霉素和2mg/mL链霉素富集培养基中，置于恒温振荡器内，在120r/min、3(TC条件下，振荡培养24h后；使用离心机，在6000r/min，15。C条件下离心分离收集菌体，0.5g湿菌体悬于lmL无机盐培养基中，制备O.5g/tnL菌悬液备用；(2)分别取浓度为1"mmol/L和5."mmol/L的二苯并噢吩正十六烷溶液10mL,与90mL0.5g/mL菌悬液混合，置于恒温振荡器内，在120r/min、30。C条件下，振荡培养12h和2化后，测定混合液油相中二苯并噢吩的含量，测得的二苯并瘗吩浓度最小时，即为初步获得的脱硫菌种；(3)初步获得的脱硫菌种接种于80mL含400u/mL青霉素和2mg/mL链霉素的无才几盐培养基和lOmL含苯并瘗吩0.lmmol/L、二苯并噢p分0.lmmol/L、4，6-二甲基二苯并p塞吩0.lmmol/L和苯錄u醚0.lmmol/L10mL的催化裂化柴油混合液中，混合液置于恒温振荡器中，在120r/fflin、30。C条件下，振荡培养24h后；取振荡培养后水相液体lOmL，重新接种亍80mL无机盐培养液和10mL催化裂化柴油混合液中，在120r/min、30。C条件下，振荡培养24h;如此重复7个周期168h的再次驯化，再次驯化结束后，重复初步获得脱硫菌种过程，最终获得了具有脱石克能力的菌种。5、如权利要求4所述的有机硫的脱疏菌的用途，其特征在于该脱硫菌用于深度脱除油品中有机疏化合物。6、根据权利要求5所述的有机硫的脱硫菌的用途，其特征在于将烟曲霉菌抹接种于内含400u/mL青霉素和2mg/mL链霉素的富集培养基中，在30°C,120r/min条件下振荡培养24h后，15°C、6000r/min离心收集菌体，制备0.5g/mL菌悬液，取此菌悬液与被脱疏油品混合，菌悬液与被脱硫油品混合体积比为15~20:80~85,将混合液置于恒温振荡器内，在120r/min、30。C条件下振荡培养12h后，分离油相；将分离获得的油相，与新制备的0.5g/mL菌悬液按上述的体积比混合后，置于恒温振荡器内，在120r/min、30。C条件下振荡培养12h;如此三个周期，同时进行以24h为一个周期的平行实验。三个周期结束后，完成对油品中有机碌u的深度脱碌u。全文摘要本发明涉及一种能深度脱除油品有机硫的脱硫菌，其特征在于该脱硫菌名称为烟曲霉，拉丁文为AspergillusfumigatusFresen.TL-1，于2006年11月1日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物保藏中心”，保藏号为CGMCCNo.1855，烟曲霉具有选择性宽、高活性、遗传稳定、以“4S”氧化方式可脱除复杂有机硫化合物中的硫，且可直接应用于油品的深度脱硫，有较高的脱硫效率，脱硫率可达47.99～85.61％，对环境的适应能力较强，能脱除多种含硫化合物中的硫，且有较大范围的环境耐受能力的优点及效果。文档编号C12N15/31GK101240245SQ200710003499公开日2008年8月13日申请日期2007年2月9日优先权日2007年2月9日发明者录刘,沈齐英申请人:北京石油化工学院