专利名称：一种小鼠血小板的提取方法
技术领域：
本发明涉及一种小鼠血小板的提取方法，所提取的血小板作为抗原用于免 疫豚鼠，豚鼠免疫血清将被用于制备小鼠特发性血小板减少性紫癜动物模型。
背景技术：
特发性血小板减少性紫癜(ITP)的发病机制与免疫有密切关系，免疫法所 致ITP模型在病理特征和愈合机理方面与人类ITP高度相似，故实验研究主要 采用免疫法建立动物模型，'小鼠ITP模型对各种抗ITP药物敏感性较高，因此 成功制备小鼠ITP模型是抗ITP药物研究的关键技术之一。但是，此种造模方 法的一个显著问题是抗原的纯度不够，即从纯系小鼠全血中分离出血小板的纯 度不易控制，如果血小板悬液中混有红细胞，所得的抗血清中会含有大量的抗 红细胞抗体，再注射给造模动物会引起动物死亡。
发明内容
鉴于传统血小板提取方法的不足，本专利提供一种小鼠血小板的提取方法， 以解决提取的血小板浓度不够和纯度不佳的问题。 具体实验方案小鼠眶静脉取血，置于抗凝离心管中，静置30min后离心，800rpm离心 10min，上清液即为富含血小板的血浆。吸出上清液置于干净试管中，3500rpm 离心10min，弃去上清液，管底沉淀物为血小板。向试管中滴加50 100W质量 浓度为1%的草酸铵溶液，以玻璃棒轻轻搅拌，再加入质量浓度为1%草酸铵溶 液2 3ml，静置5min，使红细胞溶解。3500rpm离心10min，弃去上清，加入 血小板洗涤液并反复吹打，使成为血小板混悬液，3300rpm离心10min，弃去上 清，加入少量血小板洗涤液并反复吹打使之成为混悬液。血细胞计数板镜下检 测血小板的浓度及纯度，并根据结果将质量浓度调至1 X 109 3 X 109。该方法通过3批次重复实验证明，此方法操作简单，所得血小板浓度和纯 度高，用该血小板免疫豚鼠，制备免疫血清，给小鼠投与豚鼠免疫血清，制备 小鼠特发性血小板减少性紫癜动物模型，成模率在95% 98%之间。
具体实施例方式以下结合实施例对本发明的具体实施方式
做详细说明。实验实施例一
2007年10月10日 10月25日，80只SPF级BALB/c小鼠，应用该方法 提取血小板，血小板纯度达97°/。，浓度1X1010，使用该血小板制备免疫血清后， 制备过敏性紫癜模型，95%成模，并用该模型评价了抗过敏性紫癜中药的疗效及 作用机制。
实验实施例二
2008年4月15日 4月30日，100只SPF级BALB/c小鼠，应用该方法 提取血小板，血小板纯度达95%，浓度3X101 使用该血小板制备免疫血清后， 制备过敏性紫癜模型，96%成模，并用该模型评价了抗过敏性紫癜中药的疗效及 作用机制。
实验实施例三
2008年6月12日 6月27日，120只SPF级BALB/c小鼠，应用该方法 提取血小板，血小板纯度达98%，浓度5X101 使用该血小板制备免疫血清后， 制备过敏性紫癜模型，98%成模，并用该模型评价了抗过敏性紫癜中药的疗效及 作用机制。
权利要求
1、一种小鼠血小板的提取方法，其特征在于小鼠眶静脉取血，置于抗凝离心管中，静置30min后离心，800rpm离心10min，上清液即为富含血小板的血浆，吸出上清液置于干净试管中，3500rpm离心10min，弃去上清液，管底沉淀物为血小板，向试管中滴加50～100μl质量浓度为1％草酸铵溶液，以玻璃棒轻轻搅拌，再加入质量浓度为1％草酸铵溶液2～3ml，静置5min，使红细胞溶解，3500rpm离心10min，弃去上清，加入血小板洗涤液并反复吹打，使成为血小板混悬液，3300rpm离心10min，弃去上清，加入少量血小板洗涤液并反复吹打使之成为混悬液，血细胞计数板镜下检测血小板的浓度及纯度，并根据结果将质量浓度调至1×109～3×109。
全文摘要
一种小鼠血小板的提取方法，小鼠眶静脉取血，置于抗凝离心管中，静置30min后离心，800rpm离心10min，上清液即为富含血小板的血浆。吸出上清液置于干净试管中，3500rpm离心10min，弃去上清液，管底沉淀物为血小板。向试管中滴加50～100μl质量浓度为1％草酸铵溶液，以玻璃棒轻轻搅拌，再加入质量浓度为1％草酸铵溶液2～3ml，静置5min，使红细胞溶解。3500rpm离心10min，弃去上清，加入血小板洗涤液并反复吹打，使成为血小板混悬液，3300rpm离心10min，弃去上清，加入少量血小板洗涤液并反复吹打使之成为混悬液。该血小板将作为抗原免疫豚鼠后，取豚鼠血清给小鼠注射，制备过敏性紫癜模型。此方法操作简单，可以得到高浓度的血小板，并很好地解决血小板纯度不佳的问题。
文档编号C12N5/06GK101402940SQ20081022872
公开日2009年4月8日 申请日期2008年11月12日 优先权日2008年11月12日
发明者才丽平, 怡 曲, 曲道炜, 阳 李, 林庶茹, 颖 范, 宁 蒋 申请人:辽宁中医药大学