专利名称：商陆茎节快速繁殖的方法
技术领域：
本发明涉及植物组织培养领域，具体涉及一种利用植物器官直接诱导其形成完整植株 的快速繁殖植物的方法。
背景技术：
商陆是具有多种功能的多年生草本植物。随着商陆的深入应用，人们对商陆的认识和研 究已经到达分子水平,希望通过分子生物学方法来定向改良商陆的性状，以获取更大利益。例 如通过转基因降低或去除其毒性、筛选抗病毒高产植株和色素高产植株等。然而，无论是 植物的转基因研究还是筛选某种代谢产物的高产植株都是以此种植物的快速繁殖为基础的。
目前，国内外植物的快速繁殖多采用组织培养和细胞培养的方法来实现，以组织培养应 用更多。但是有关商陆通过组织培养来快速繁殖的研究则凤毛麟角。虽然有人试图通过茎尖 繁殖来到达快繁的目的，但是对于一株植物来说茎尖数量终归用限，很难达到短时间内大规 模快速繁殖的目的。也有人想通过培养愈伤组织诱导分化来进行商陆的快繁，但最终没有取 得成功。
发明内容
为了解决商陆快速繁殖这一技术问题，本发明提供一种商陆快繁方法。此方法能快速有 效的诱导商陆茎节腋芽的形成，然后诱导腋芽生根，并最终形成一个完整的商陆植株。
本发明所依据的原理是植物细胞具有全能性即任何具有完整细胞核的植物细胞，都 拥有形成一个完整植珠所必须的全部遗传信息和发育成完整植株的能力。这就是植物组织 培养的基本原理，而快速繁殖则是植物组织培养中的一种方式，即利用植物的某种器官直 接或间接诱导其发芽和生根，并最终形成一个完整的植株。
本发明所采用的技术方案是用商陆无菌苗的茎节作为外植体，将其接种在腋芽分化 增殖培养基上诱导发芽和增殖，然后将长到一定高度的分化芽切下插入生根培养基进行诱 导生根，待根系发达后，进行炼苗和移栽，进而获得完整的商陆植株。上述方法中所说的腋芽分化增殖培养基成分如下-基本培养基为MS、 1/2MS、 B5、 H或LS; 激素为6-BA: 0.5 2.0mg/L， IBA: 0 1.0mg/L; 蔗糖20g/L;
琼脂7g/L。
上述方法中所说的生根培养基成分如下 基本培养基为MS或1/2MS;
激素为IBA: 0 1.0mg/L;
蔗糖20g/L; 琼脂7g/L。
本发明建立了商陆快速繁殖的方法，大大缩短了商陆繁殖的时间，改变了传统的繁殖 方式。填补了没有关于商陆快繁研究的空白。
具体实施例方式
在本发明中所使用的术语，除非有另外说明， 一般具有本领域普通技术人员通常理解的 含义。
下面结合具体的实施例，并参照数据进一步详细地描述本发明。应理解，这些实施例只 是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。所用 试剂的来源、商品名以及有必要列出其组成成分者，均在首次出现时标明，其后所用相同 试剂如无特殊说明，均以首次标明的内容相同。
实施例
按如下成分配制主要培养基
初始培养基
基本培养基为MS; 蔗糖20g/L;
4琼脂7g/L。 腋芽分化增殖培养基
基本培养基为MS、 1/2MS、 B5、 H或LS; 激素为6-BA: 0.5 2.0mg/L， IBA: 0 1.0mg/L;
蔗糖20g/L; 琼脂7g/L。 生根培养基
基本培养基为MS或1/2MS;
激素为IBA: 0 1.0mg/L;
蔗糖20g/L; 琼脂7g/L。
上述培养基用lmol/L的NaOH或HCl调至pH为5.8，高压灭菌(15镑，12rC，20min)。
各种激素采用过滤灭菌，在培养基高压灭菌后加入。
1、 种子的表面消毒和无菌苗的培养
取成熟饱满的商陆种子，在流水中冲洗3h，然后在浓硫酸中浸泡15min,然后用无菌 水冲洗5 8次，最后接种到初始培养基(MS+20g/L蔗糖+7g/L琼脂)上。于26士rC下暗 培养1W，然后转入26士rC， 2000LUX光照培养，光/暗周期为16hr/8hr， 2W后获得商陆
无菌实生苗。
2、 商陆茎节腋芽增殖的诱导
待商陆成苗后,在超静工作台中切取茎节部分大约0.5cm作为外植体，将其接种于腋芽分 化增殖培养基(MS+20g/L蔗糖+7g/L琼脂+0.5mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA)上，于温度为26 士rC，光照强度为2000LUX培养,光/暗周期为16hr/8hr培养一个月，统计腋芽增殖情况。
3、 商陆腋芽生根的诱导
当腋芽生长到1 2cm高的时候，将芽切下，接种到生根培养基上(MS+20g/L蔗糖+7g/L琼脂+0.2mg/LIBA)诱导腋芽生根。然后将其置于温度为26± 1'C ，光照强度为2000LUX 培养，光/暗周期为16hr/8hr培养一个月，统计腋芽的生根情况。
4、 商陆的炼苗培养
当将商陆分化苗培养到10cm高，根系发达后，逐步将培养瓶的盖子打开对其进行炼苗 培养。炼苗大约需要3 5天。
5、 商陆分化苗的移栽
当炼苗完成后，将小苗从培养瓶中取出，洗去根部残留的培养基，然后将生根的分化 苗移栽到含有培养土的花钵中。钵外套上透光性好的塑料薄膜以保证湿度，然后将其置于 组培箱中按培养分化苗的条件进行培养。 一周后，去除塑料薄膜，并把小商陆植株置于温 室中培养。此时植株可正常生长发育，完成了整个生长过程。
6、数据处理以及统计方法
(1) 腋芽分化率(％)=(分化的外植体数/外植体总数^100%
(2) 腋芽增殖倍数=外植体分化出的腋芽数/外植体总数
(3) 生根频率(％)=(生根的分化苗数/分化苗总数)400%
(4) 平均根数=分化苗总根数/生根的分化苗数
通过数据统计处理，我们得到结果，采用上述方法处理我们成功的诱导了茎节腋芽的 分化和增殖，诱导一个月后的腋芽分化率可达到100%，芽增殖倍数为2.4。而诱导生根的 状况更佳，通过上述培养基的诱导生根，2W后分化芽开始生根， 一个月后根生长成熟。统 计结果为其根的诱导率可达100%，根系发达，平均根数为4。在此根系发达的基础上进行 炼苗和移栽都进行的非常顺利，最终我们成功的完成了商陆分化苗的整个生长过程。
权利要求
1、一种商陆茎节快速繁殖的方法，其特征在于，是用商陆无菌苗的茎节作为外植体，将其接种在腋芽分化增殖培养基上诱导发芽和增殖，然后将长到一定高度的分化芽切下插入生根培养基进行诱导生根，待根系发达后，进行炼苗和移栽，进而获得完整的商陆植株。
2、 根据权利要求1所说的商陆茎节快速繁殖的方法，其特征在于，其中所说的腋芽分 化增殖培养基成分如下基本培养基为MS、 1/2MS、 B5、 H或LS; 激素为6-BA: 0.5 2.0mg/L， IBA: 0 1.0mg/L;蔗糖20g/L; 琼脂7g/L。
3、 根据权利要求1所说的商陆茎节快速繁殖的方法，其特征在于，其中所说的生根培 养基成分如下基本培养基为MS或1/2MS;激素为IBA: 0 1.0mg/L;蔗糖20g/L; 琼脂7g/L。
全文摘要
本发明涉及植物组织培养领域，具体涉及一种商陆茎节快速繁殖的方法。本发明用商陆无菌苗的茎节作为外植体，将其接种在腋芽分化增殖培养基上诱导发芽和增殖，然后将长到一定高度的分化芽切下插入生根培养基进行诱导生根，待根系发达后，进行炼苗和移栽，进而获得完整的商陆植株，完成了商陆的整个生长过程。本发明建立了商陆快速繁殖的方法，大大缩短了商陆繁殖的时间，改变了传统的繁殖方式。填补了没有关于商陆快繁研究的空白。
文档编号C12N5/04GK101438678SQ20081024323
公开日2009年5月27日 申请日期2008年12月26日 优先权日2008年12月26日
发明者郑铁松, 静 陈 申请人:南京师范大学