专利名称：从虎杖中提取制备高纯度白藜芦醇新工艺的制作方法
技术领域：
本发明属于从植物中提取白藜芦醇工艺，更具体涉及一种从虎杖中提取制备高纯度白藜 芦醇新工艺。
背景技术：
虎杖(Rhizoma Polygoni Cuspidati)为蓼禾斗Polygonaceae植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc.，的干燥根茎和根。虎杖含有蓼甙、有机酸、葡萄糖甙、多糖 类，含芪类化合物白藜芦醇(resveratrol)即是3， 4' ， 5-三羟基芪(3， 4' ， 5 — tri —hydroxystilbene)，虎杖甙(Polydatin)即白藜戸醇3-0-P -D-葡萄糖甙( rerveratrol-3-0-e-D-glucoside)，有清热解毒、清凉解署、健胃清食作用。白藜芦醇被 认为是一种植物抗毒素，在植物受到病原性进攻和环境恶化时产生的。其药理作用为抗菌 、抗氧化、预防心脏病、抗癌、抗血小板凝聚、保护肝脏、雌激素作用、防辐射、免疫调节 、抗艾滋病活性等。白藜芦醇已被喻为继紫杉醇之后又一新的绿色抗癌药物，它在食品、医 药等方面应用也越来越广。现有技术从虎杖提取白藜芦醇有酶解提取、溶剂提取、微波提取 等等，但是由于提取方式单一以及采用的提取条件等，存在提取率不高，提取的产物纯度不 高、提取成本高等缺点。
发明内容
本发明的目的是提供一种从虎杖中提取制备高纯度白藜芦醇新工艺，解决现有技术中从 虎仗中提取白藜芦醇的提取率不高，提取的产物纯度不高、提取成本高等问题，本工艺提取 率高、产品纯度高、提取成本低，工艺步骤简单。
本发明的从虎杖中提取制备高纯度白藜芦醇新工艺方法将虎杖原料粉碎后，进行真空 爆破(即先用极限压力，然后卸压，产生瞬间真空，使物料的细胞壁破坏)，再用溶剂提取 ，合并提取液，浓縮后进行酶解发酵分解，酶分解后的白藜芦醇液用稀酸调整PH值，经大孔 树脂吸附、洗涤，再浓縮后结晶，得到高纯度白藜芦醇。
本发明的显著优点
(1) 本发明采用将虎杖粉碎后在进行真空爆破，使虎杖充分粉碎，为后续的提取达到 更好的效果，使提取更充分。
(2) 本发明将提取液浓縮后进行酶解，使虎杖中的白藜芦醇苷等物质在酶解作用下脱
4去葡萄糖基而转化为白藜戸醇，显著提高白藜戸醇的提取率。
(3)本发明在酶解后大孔树脂吸附、洗涤，结晶，使虎杖中的白藜芦醇纯化效果更佳 ，各步骤前后相互结合，形成一个作用整体，使虎仗中的白藜芦醇的提取率在95%以上，白 藜芦醇纯度在98%以上，縮短了提取时间，大大降低生产成本，大幅度提高产品的品质，具 有显著经济效益，适合大规模的工业化推广应用。
具体实施例方式
原料虎杖为蓼科植物虎杖的干燥根茎和根。 提取步骤如下
(1) 虎杖原料粉碎虎杖粉碎粒度为10-100目。
(2) 真空爆破(瞬间真空膨胀，即先用极限压力，然后卸压，产生瞬间真空，使物料 的细胞壁破坏。)
(3) 溶剂提取真空爆破后溶剂提取步骤中，溶剂与虎杖的质量比为5: 1-20 : i，提
取温度在10-5(TC，提取次数为l-5次，每次提取时间2-5小时；所述溶剂为水或醇类或醇类 和水的任意比混合物。所述的醇类为甲醇或乙醇中的一种。(4)合并提取液，浓縮控制
浓縮提取液的温度在8(TC以下，浓縮至密度为1.03-1.08 g/cm3。
(5) 后进行酶解发酵分解所用酶为糖化酶，添加量为浓縮液质量的O. 1%-1.0%，发酵 温度在25-5(TC，反应时间为24-96小时。
(6) 酶分解后的白藜芦醇液用稀酸调整pH值，所述调节酶解液的稀酸为稀盐酸或稀硫 酸，稀硫酸或稀盐酸重量浓度为O. 5-10%，调节酶解液pH值为3-5。
(7) 经大孔树脂吸附、洗涤吸附后的大孔树脂用清水洗至中性，先用体积浓度 10-40%的乙醇除杂后，再用体积浓度80%以上的乙醇把白藜戸醇洗脱下来，洗脱液进行再浓 縮控制浓縮洗脱液的温度在8(TC以下，浓縮至密度为1.03-1.08 g/cm3。
(8) 结晶在白藜芦醇洗脱浓縮液中加入结晶溶液，所述结晶溶液为氯仿或丙酮或二 者按照任意比例的混合液，冷冻结晶，温度为-30-(TC，结晶时间为5-12小时， 一次或多次 重结晶；结晶溶液与白藜芦醇洗脱浓縮液的用量按照体积比为2-10 : 1.
以上步骤得到含量98%左右的白藜芦醇，白藜芦醇收率达到90%以上，
以下是本发明的几个实施例，进一步说明本发明，但是本发明不仅限于此。 实施例l将虎杖原料粉碎至30目后，真空爆破，室温下，用甲醇提取3次，甲醇与虎杖的质量比 为5:1，提取温度在1(TC，每次提取时间5小时；合并提取液，控制浓縮提取液的温度在80 。C以下，浓縮至密度为1.03 g/cm3。加入浓縮液质量的O. 3%糖化酶分解，温度控制在4(TC， 发酵时间72小时，将酶分解后的白藜芦醇液用重量浓度O. 5。/。稀盐酸调PH值至4. 0，经大孔树 脂吸附，吸附后的大孔树脂用清水洗至中性，用体积浓度30%的乙醇洗杂质后，用体积浓度 80%的乙醇把白藜戸醇洗脱，将洗脱液浓縮(控制浓縮洗脱液的温度在8(TC以下，浓縮至密 度为1.03g/cm3)后，加入洗脱浓縮液2倍量(体积比)的结晶溶液(氯防丙酮=3 : l的混 合溶液)溶解，冷冻结晶，温度为-3(TC，结晶时间为12小时，得纯度为98.3%产品，白藜芦 醇的收率能够达到93. 2%.
实施例2
将虎杖原料粉碎至10目后，真空爆破，室温下，用乙醇提取5次，乙醇与虎杖的质量比 为20:1，提取温度在5(TC，每次提取时间2小时；合并提取液，控制浓縮提取液的温度在 8(TC以下，浓縮至密度为1.08 g/cm3。加入浓縮液质量的1.0%糖化酶分解，温度控制在25。C ，发酵时间96小时，将酶分解后的白藜芦醇液用重量浓度10。/。稀硫酸调PH值至5，经大孔树脂 吸附，吸附后的大孔树脂用清水洗至中性，用体积浓度10%的乙醇洗杂质后，用体积浓度80% 的乙醇把白藜芦醇洗脱，将洗脱液浓縮(控制浓縮洗脱液的温度在8(TC以下，浓縮至密度为 1.03g/cm3)后，加入洗脱浓縮液10倍量(体积比)的氯仿溶解，冷冻结晶，温度为-(TC， 结晶时间为12小时，得纯度为98.0%产品，白藜芦醇的收率能够达到92.4%。
实施例3
将虎杖原料粉碎至100目后，真空爆破，室温下，用乙醇提取3次，乙醇与虎杖的质量 比为15:1，提取温度在2(TC，每次提取时间3小时；合并提取液，控制浓縮提取液的温度在 8(TC以下，浓縮至密度为1.05 g/cm3。加入浓縮液质量的O. 1%糖化酶分解，温度控制在4(TC ，发酵时间24小时，将酶分解后的白藜芦醇液用重量浓度5。/。稀硫酸调PH值至3，经大孔树脂 吸附，吸附后的大孔树脂用清水洗至中性，用体积浓度40%的乙醇洗杂质后，用体积浓度 80%的乙醇把白藜戸醇洗脱，将洗脱液浓縮(控制浓縮洗脱液的温度在8(TC以下，浓縮至密 度为1.05g/cm3)后，加入洗脱浓縮液5倍量(体积比)的丙酮溶解，冷冻结晶，温度为-20 °C，结晶时间为10小时，得纯度为97. 5%产品，白藜芦醇的收率能够达到91.4%。实施例4
将虎杖原料粉碎至80目后，真空爆破，室温下，用甲醇提取4次，甲醇与虎杖的质量比 为10:1，提取温度在3(TC，每次提取时间4小时；合并提取液，控制浓縮提取液的温度在 8(TC以下，浓縮至密度为1.07 g/cm3。加入浓縮液质量的0.8%糖化酶分解，温度控制在45。C ，发酵时间80小时，将酶分解后的白藜芦醇液用重量浓度6。/。稀盐酸调PH值至3，经大孔树脂 吸附，吸附后的大孔树脂用清水洗至中性，用体积浓度30%的乙醇洗杂质后，用体积浓度80% 的乙醇把白藜芦醇洗脱，将洗脱液浓縮(控制浓縮洗脱液的温度在8(TC以下，浓縮至密度为 1.07g/cm3)后，加入洗脱浓縮液8倍量(体积比)的氯仿和丙酮按任意比的混合溶液溶解， 冷冻结晶，温度为-25'C，结晶时间为8小时，得纯度为98.7%产品，白藜芦醇的收率能够达 到93. 8%。
实施例5
将虎杖原料粉碎至30目后，真空爆破，室温下，用甲醇提取2次，甲醇与虎杖的质量比 为8:1，提取温度在25'C，每次提取时间4小时；合并提取液，控制浓縮提取液的温度在80 'C以下，浓縮至密度为1.06g/cm3。加入浓縮液质量的0.6%糖化酶分解，温度控制在45'C， 发酵时间65小时，将酶分解后的白藜芦醇液用重量浓度2。/。稀硫酸调PH值至4. 5，经大孔树脂 吸附，吸附后的大孔树脂用清水洗至中性，用体积浓度25%的乙醇洗杂质后，用体积浓度 80%的乙醇把白藜戸醇洗脱，将洗脱液浓縮(控制浓縮洗脱液的温度在8(TC以下，浓縮至密 度为1.06g/cm3)后，加入洗脱浓縮液5倍量(体积比)的氯仿和丙酮按4: l的混合溶液溶解 ，冷冻结晶，温度为-15°C，结晶时间为6小时，得纯度为99.2%产品，白藜芦醇的收率能够 达到93. 7%。
权利要求
1.一种从虎杖中提取制备高纯度白藜芦醇新工艺方法，其特征在于将虎杖原料粉碎后，进行真空爆破，再用溶剂提取，合并提取液，浓缩后进行酶解发酵分解，酶分解后的白藜芦醇液用稀酸调整pH值，经大孔树脂吸附、洗涤，洗涤液再浓缩后结晶，得到高纯度白藜芦醇。
2 根据权利要求l所述的从虎杖中提取制备高纯度白藜芦醇新工艺方 法，其特征在于所述虎杖粉碎粒度为10-100目。
3 根据权利要求l所述的从虎杖中提取制备高纯度白藜芦醇新工艺方 法，其特征在于所述真空爆破为瞬间真空膨胀，即先用极限压力，然后卸压，产生瞬间真 空，使物料的细胞壁破坏。
4 根据权利要求l所述的从虎杖中提取制备高纯度白藜芦醇新工艺 方法，其特征在于所述真空爆破后溶剂提取步骤中，溶剂与虎杖的质量比为5 : 1-20 : 1， 提取温度在10-5(TC，提取次数为l-5次，提取时间2-5小时；所述溶剂为水或醇类或醇类和 水的任意比混合物。
5 根据权利要求4所述的从虎杖中提取制备高纯度白藜芦醇新工艺方 法，其特征在于所述的醇类为甲醇、乙醇中的一种。
6 根据权利要求l所述的从虎杖中提取制备高纯度白藜芦醇新工艺方 法，其特征在于所述浓縮为控制浓縮提取液的温度在8(TC以下，浓縮至密度为 U3—一3。
7 根据权利要求l所述的从虎杖中提取制备高纯度白藜芦醇新工艺方 法，其特征在于所述酶解发酵分解步骤为所用酶为糖化酶，添加量为浓縮液质量的 0. 1%-1.0%，发酵温度在25-5(TC，反应时间为24-96小时。
8 根据权利要求l所述的从虎杖中提取制备高纯度白藜芦醇新工艺方 法，其特征在于所述调节酶解液的稀酸为稀盐酸或稀硫酸，稀硫酸或稀盐酸的重量浓度为 0.5-10%，调节酶解液pH值为3-5。
9.根据权利要求l所述的从虎杖中提取制备高纯度白藜芦醇新工艺方 法，其特征在于调节PH值后的酶解液经大孔树脂吸附，吸附后的大孔树脂用清水洗至中性 ，先用体积浓度为10-40%的乙醇除杂后，再用体积浓度为80%以上的乙醇把白藜戸醇洗脱下 来，得到白藜芦醇洗脱液；洗脱液进行再浓縮控制浓縮洗脱液的温度在8(TC以下，浓縮至 密度为1.03-1.08gA:m3 。
10.根据权利要求l所述的从虎杖中提取制备高纯度白藜芦醇新工艺 方法，其特征在于所述结晶为在白藜芦醇洗脱浓縮液中加入结晶溶液，所述结晶溶液为氯仿或丙酮或二者按照任意比例的混合液，冷冻结晶，温度为-30-(TC，结晶时间为5-12小时 ， 一次或多次重结晶；结晶溶液与白藜芦醇洗脱浓縮液的用量按照体积比为2-10 : 1.
全文摘要
本发明提供一种从虎杖中提取制备高纯度白藜芦醇的新工艺，属于从植物中提取白藜芦醇技术领域，解决现有技术中从虎仗中提取白藜芦醇的提取率不高，提取的产物纯度不高、提取成本高等问题。生产工艺将虎杖原料粉碎后，采用真空爆破手段，再用溶剂提取，合并提取液，浓缩后进行酶解发酵，把酶分解后的白藜芦醇液用稀酸调pH值，经大孔树脂吸附、洗涤，结晶，得到含量98％以上的白藜芦醇。本工艺可使白藜芦醇收率达到90％以上，大大降低生产成本，适合工业化推广。
文档编号C12P7/02GK101643754SQ200910306409
公开日2010年2月10日 申请日期2009年8月31日 优先权日2009年8月31日
发明者峰 余, 敏 赵, 陈燕梅 申请人:三明华健生物工程有限公司