本发明属于医药领域，涉及白藜芦醇的一种药物新用途，具体涉及白藜芦醇在制备治疗肠易激综合征药物中的应用。
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：：肠易激综合征(irritablebowelsyndrome，IBS)是常见的胃肠道功能性疾病，以腹痛或腹部不适、伴排便习惯和大便性状异常为特征，人群患病率约为11％。由于疾病呈慢性和反复发作性，IBS患者生活质量普遍下降，其高患病率和漫长的病程造成了极大的社会和经济负担。然其发病机制尚未完全阐明。肠道动力异常和内脏高敏感是两大主要的病理生理基础。白藜芦醇(Resveratrol)是一种存在于天然植物中的多酚类物质，主要来源于葡萄(红葡萄酒)、虎杖、花生、桑椹等植物。白藜芦醇具有脂溶性，易通过血脑屏障等特点。本发明通过白藜芦醇对IBS动物模型进行实验，结合肠道动力和内脏敏感性等检测，发现白藜芦醇可作为有效成分用于制备治疗肠易激综合征的药物中。技术实现要素：本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供白藜芦醇的一种药物新用途，即：白藜芦醇在制备治疗肠易激综合征药物中的应用。通过白藜芦醇在制备治疗肠易激综合征药物中的应用，可有效降低IBS患者的肠道高敏感性并可显著逆转肠道动力的减弱，白藜芦醇可应用于脑肠双靶点作用的治疗IBS的安全有效的药物。附图说明图1是白藜芦醇对IBS模型小鼠体重的影响。图2是白藜芦醇对IBS模型小鼠内脏敏感性的影响。图3是白藜芦醇对IBS模型小鼠食用色素推进百分率的影响。具体实施方式下面结合具体的药理实验及结果，对本发明做进一步说明。一、材料与方法(一)实验材料1.实验动物雄性ICR小鼠，体重26-33g。小鼠饲养于美国纽约州立大学布法罗校区动物房。饲养条件如下：温度23～25℃,湿度40％～50％,自然光照,自由进食、进水。所有小鼠先于饲养环境中适应3天,然后再开始动物实验。动物实验按要求获得相关医学伦理委员会同意。2.实验药品白藜芦醇(resveratrol)、咯利普兰(rolipram)、去甲丙咪嗪(despramin)和地西泮(diazepam)均购自美国Sigma公司。所有试剂均溶于5％DMSO的生理水溶液中。其中，抑郁相关的阳性对照药是丙咪嗪，焦虑相关的阳性对照药是地西泮，咯利普兰是磷酸二酯酶4(PDE4)的抑制剂，后者将进一步作为机理靶点进行初步对照研究。3.实验器材导尿管。(二)实验方法A.动物选择与分组ICR小鼠随机分成8组，每组12只。正常对照组、慢急性联合应激模型组、白藜芦醇作用组(分低、中、高三个不同剂量，分别为2.5、5、10mg/kg，灌胃)以及阳性对照组(咯利普兰，1.25mg/kg，腹腔注射、去甲丙咪嗪，10mg/kg，腹腔注射、地西泮，0.5mg/kg，腹腔注射)。除正常对照组外，其余组别均进行慢急性联合应激，即建立经典的慢急性联合应激小鼠模拟IBS模型。B.实验步骤1.建立慢急性联合应激肠易激综合征模型(chronicacutecombiningstress,CACS)IBS大鼠模型采用钱家鸣团队建立的慢急性联合应激模型(chronicacutecombiningstress,CACS)，该模型是在慢性不可预知性应激模型基础上予以急性束缚应激，模拟IBS患者在长期慢性的应激下因个别突发事件加剧的情形，相比于母婴分离等其他动物模型，能更好地模拟肠道动力和心理行为等多方面IBS病症。建立经典的慢急性联合应激IBS模型(CACS)：给予慢性不可预知性温和应激共21天，下述每7项为一周期。在第13天和21天慢性不可预知性温和应激结束后的第2天,再予束缚应激6h。慢性不可预知性温和应激程序:(1)4℃冰屋15分钟；(2)食物剥夺4小时；(3)倾斜笼子4小时；(4)水剥夺4小时；(5)潮湿垫料2小时；(6)12℃水温游泳5分钟；(7)束缚应激2小时；(8)压尾5分钟；(9)食物和水剥夺6小时；(10)电击3分钟；(11)12℃水温游泳10分钟；(12)光照过夜；(13)潮湿垫料4小时；(14)压尾10分钟；(15)束缚应激3小时；(16)潮湿垫料6小时；(17)电击6分钟；(18)束缚应激4小时；(19)潮湿垫料过夜。造模期间，正常对照组和模型组给予5％DMSO的生理水溶液，其他组按照分组给予相应的药物，连续26天。2.内脏敏感性实验内脏敏感性检测：扩张动物结直肠，会引起其腹壁收缩，称为腹壁撤退反射(abdominalwithdrawalreflex,AWR)。AWR是和内脏运动反射相似的不自主运动反射，可反映内脏敏感程度，由于其无创性被广泛用来进行动物内脏敏感性评分。也有采取腹壁包埋电极的方法进行检测，然而这种检测虽然可以获得客观数据，但由于是侵入性、有创性检测，对于功能性疾病研究来说，我们还是倾向于采取AWR进行评分。小鼠实验前禁食不禁水12h，使其排出残余粪便。小鼠用乙醚浅麻醉后，自肛门内置入诱发刺激直肠扩张(CRD)扩张导尿管(6Fr,2毫米外径)。小鼠苏醒适应一小时后，通过注射器注气增加球囊压力，分别通过注射器给予0.25ml,0.35ml,0.5ml，0.65ml的空气进入导尿管的气囊，每个不同压力分别重复三次，观察并记录小鼠的腹壁撤退反射，见表1。表1：小鼠腹部撤退反射评分表3.肠道动力学实验肠道动力检测：由于IBS往往表现出肠道动力异常，我们采用碳末法检测肠道动力情况。所有小鼠检测前，禁食24小时。小鼠以食用色素灌胃，30分钟后处死小鼠。打开腹腔，剪开肠系膜，拉直肠管，测量幽门至直肠的长度及食用色素移动距离。食用色素推进百分率(％)＝(食用色素前端与幽门的距离/小肠全长)×100％。统计学分析采用GraphPadPrism6.0统计软件包进行统计学处理，数据以mean±SEM表示。正常对照组与应激组间采用t检验分析，药物作用及其组间差异采用One-wayANOVA中的Dunnett’st检验进行分析。二、结果1.白藜芦醇对IBS模型小鼠体重的影响与正常对照组相比，IBS模型小鼠体重无显著性差异(P＞0.05)。给予白藜芦醇(2.5、5和10mg/kg)后，用药组小鼠体重与应激组相比，无显著性差异，见表1和图1。表1白藜芦醇对IBS模型小鼠体重的影响ControlStressREV2.5REV5REV10RolDespraminDiazepam33±0.797730.4±1.06731.45±0.679132.45±0.593432.18±0.961232.27±0.675432.82±0.87232.09±0.8029图1为白藜芦醇对IBS模型小鼠体重的影响，与正常对照组相比，IBS模型小鼠体重无显著性差异。IBS小鼠经白藜芦醇处理后，体重得到改善，但无统计学差异。咯利普兰、去甲丙咪嗪和地西泮处理的应激小鼠给药后，其体重相对IBS模型鼠无显著性差异(P＞0.05)。n＝12,Mean±SEM.2.白藜芦醇对IBS模型小鼠内脏敏感性的影响结果表明，与正常对照组相比，IBS模型小鼠的肠道敏感性在给予0.5ml和0.65ml空气时显著升高(P＜0.0001，P＜0.0001)。而在给予IBS模型小鼠白藜芦醇(2.5、5和10mg/kg)后，小鼠的内脏敏感性降低。并且在给予0.35m、0.5ml、0.65ml空气检测时，白藜芦醇各组的作用显著降低IBS模型小鼠的内脏敏感性。表2.白藜芦醇对IBS模型小鼠内脏敏感性的影响gasvol(ml)ControlStressREV2.5REV5REV100.250.3333±0.12310.6061±0.16090.3889±0.069010.3889±0.09020.3889±0.22030.351.083±0.01311.455±0.13690.9444±0.0803*0.9722±0.06431±0.19250.51.722±0.09912.545±0.1293####1.722±0.135***1.833±0.0962**1.889±0.1319*0.652.389±0.09023.818±0.0525####3.417±0.10953±0.1589***3.056±0.0803**表2.白藜芦醇对IBS模型小鼠内脏敏感性的影响(续)gasvol(ml)RolDespraminDiazepam0.250.5278±0.17140.1667±0.06490.3333±0.071070.351.139±0.2150.75±0.1015**0.8611±0.0643*0.52.472±0.23011.889±0.1553*1.778±0.06268**0.653.194±0.207*2.667±0.1692****2.75±0.117****图2为白藜芦醇对IBS模型小鼠内脏敏感性的影响，A、B、C、D分别表示给予0.25ml、0.35ml、0.5ml、0.65ml空气时，小鼠的肠道敏感性。n＝12,Mean±SEM.***P＜0.001vsnon-stressedvehiclegroup；#P＜0.05，###P＜0.001vsvehicle-treatedstressedgroup.3.白藜芦醇对IBS模型小鼠肠道动力学的影响结果表明，与正常对照组相比，IBS模型中食用色食用色素推进百分率明显减少(##P＜0.01)。在给予白藜芦醇23天后，5和10mg/kg白藜芦醇处理的IBS模型小鼠相比IBS模型小鼠，其食用色素推进百分率显著增加(P＜0.01，P＜0.001)。经咯利普兰、去甲丙咪嗪、地西泮处理后，其使用色素推进百分率显著增加(P＜0.001，P＜0.05，P＜0.0001)。表3.白藜芦醇对IBS模型小鼠食用色素推进百分率的影响ControlStressREV2.5REV5REV10RolDespraminDiazepam62.95±3.68147.31±3.101##52.6±5.97968.04±3.919**72.72±3.963***70.38±1.233***65.46±3.823*71.55±4.29****图3为白藜芦醇对IBS模型小鼠食用色素推进百分率的影响，n＝12,Mean±SEM.##P＜0.01vsnon-stressedvehiclegroup；*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，****P＜0.0001vsvehicle-treatedstressedgroup.三、研究小结上述研究表明，在内脏敏感性方面，在肠道给予稍大量空气后显著升高，高中低三个剂量的白藜芦醇均可降低IBS模型小鼠的肠道高敏感性。在肠道动力方面，IBS模型小鼠表现出肠道动力的减弱，中高剂量白藜芦醇显著逆转肠道动力的减弱。说明IBS小鼠存在肠道高敏感性和肠道动力减慢，而白藜芦醇可以逆转上述这些变化。本研究为白藜芦醇作为治疗IBS的安全有效的药物提供了实验依据。当前第1页1 2 3 当前第1页1 2 3