专利名称：制备发酵人参浓缩物或粉末的方法
技术领域：
本发明涉及制备发酵人参浓缩物或粉末的方法。
背景技术：
人参(Panaxginseng C. A. Meyer (五加科))是在亚洲国家(包括中国、韩国和日本)长期用来治疗各种疾病的一种药用植物。特别是，已知人参的主要活性成分人参皂甙(人参皂苷)具有各种生理活性，例如在中枢神经系统、心血管系统和免疫系统中的抗衰老活性、消炎活性、抗氧化活性((Wu等，J. Immunol.，148 1519-25，1992 ；Lee, Facts about Ginseng, the Elixir of Life. , Hollyn International.新泽西州，1992 ;Huang, The Pharmacology of Chinese Herbs. CRC Press.佛罗里达州，1999)；抗糖尿病活性 (Chang, Pharmacology and Application of Chinese Material Medica. Vol. 1, World Scientific.新加坡，1986)和抗肿瘤活性(Sato 等，Biol. Pharm. Bull. 17 :635_9，1994 ； Mochizuki 等，Biol. Pharm. Bull. 18 :1197_1202，1995)。此外，在摄入后人参皂甙在人体肠道内由细菌代谢，其代谢产物已知具有各种生理活性(Karikura 等，Chem. Pharm. Bull. ,39 :2357_61，1991 ；Kanaoda 等，J. Tradit. Med. 11 :241-5，1994 ；Akao 等，Biol. Pharm. Bull. ,21 :245_9，1998)。例如，原人参二醇型人参皂甙Rbl、Rb2和Rc通过人肠道菌代谢为IH-901 (20-0- β -D-吡喃葡糖基-20 (S)-原人 #二酉享)(Hasegawa 等，Planta Medica 63 463-40,1997 ；Tawab 等，Drug Metab. Dispos.， 31 :1065-71，2003)，而原人参三醇型人参皂甙Re和Rgl代谢为人参皂甙Rhl或人参皂甙 Fl (Hasegawa 等，Planta Medica 63 :463_40，1997 ；Tawab 等，Drug Metab. Dispos. ,31 1065-71,2003)，其中代谢物IH_901、Rhl和Fl显示出各种生理活性。具体而言，IH-901因其抗糖尿病(Choi 等，J. Ginseng Res. 31 (2) =79-85,2007) 和免疫增强活性而众所周知。此外，已知IH-901通过抵挡肿瘤入侵或防止染色体突变和肿瘤形成而引起抗转移或抗癌效果(Wakabayashi等，Oncol. Res.，9 -All-T, 1998 ；Lee等， Cancer Lett.，144 39-43,1999)。已有若干研究者尝试通过采用如化学合成、微酸性水解和碱性消化等方法生产纯正的原皂甙元或皂甙元(Han 等，Planta Medica 44 146-9,1982 ；Chen 等，Chem. Pharm. Bull. 35 1653-5,1987 ；Elyakov Synthesis of the Ginseng Glycosides and Their Analogs,Proc. 6th Int. Ginseng Symp.，韩国首尔，74-83，1993)。然而，上述方法已知会引起各种副反应，如差向异构、水合和羟基化。因此，已研究了许多采用酶(Ko 等，Biosci. Biotechnol. Biochem. 64 :2739-43， 2000 ；Ko 等，Planta Med. 69 :285_6，2003)或肠道菌(Hasegawa 等，Planta Medica 63 463-40,1997 ；Bae 等，J. Microbial. Biotechnol. 13 :9_14，2003)在温和条件下转化人参皂甙的方法。具体而言，已开发了通过用柚皮苷酶水解二醇型人参皂甙来制备IH-901的方法，以及通过让大鼠口服二醇型人参皂甙然后使其在结肠中消化来制备IH-901的方法。然而，发现上述制备方法具有某些缺陷IH-901的产率极低并且产生了各种二次代谢物，使得难以获得高纯度的 IH-901 (Karikura 等，Chem. Pharm. Bull. 38 :2859，1990)。近来，已研究了通过使各种酶与人参皂甙反应以制备IH-901的其他方法(韩国专利申请公报第2003-94757号；韩国专利第418604号和第377546号)，但发现采用这些方法生产的IH-901的量过低而没有任何显著效果。而且，上述方法涉及繁杂的步骤，不适合制备具有高含量IH-901的发酵人参浓缩物。本发明旨在克服现有技术的这些缺陷。
发明内容
本发明涉及一种制备发酵人参浓缩物的方法。所述方法首先涉及用溶剂对人参进行提取从而获得人参提取物。接下来，在能够有效发酵所述人参提取物的条件下将果胶酶和半乳糖苷酶添加至所述人参提取物中。然后，将发酵的人参提取物浓缩以制得发酵人参浓缩物。本发明还涉及一种制备发酵人参浓缩物的方法。所述方法首先涉及将人参悬浮在第一溶剂中，从而获得人参溶液。接下来，在能够有效发酵所述人参溶液的条件下将果胶酶和β-半乳糖苷酶添加至所述人参溶液中。然后，用第二溶剂对发酵的所述人参溶液进行提取，从而获得发酵人参提取物。最后，浓缩所述发酵人参提取物，从而制得发酵人参浓缩物。本发明的另一方面涉及通过上述方法制备的发酵人参浓缩物和发酵人参粉末，以及包含所述发酵人参浓缩物和粉末的食品组合物或功能食品组合物。本发明的制备发酵人参浓缩物和发酵人参粉末的方法涉及简单的步骤并能够生产具有高ΙΗ-901含量的发酵人参浓缩物或粉末。因其高ΙΗ-901含量，根据本发明的方法制备的发酵人参浓缩物或粉末可有效用于功能食品组合物中。
图1是描述本发明的发酵人参浓缩物的高压液相色谱分析结果的图。图2是显示服用本发明的发酵人参浓缩物的对象的ΙΗ-901平均血浆浓度随时间变化的图。图3是显示各对象的ΙΗ-901最大血浆浓度(Cmax)的图。图4是显示各对象达到ΙΗ-901最大血浆浓度的时间(Tmax)的图。图5是显示各对象的血浆浓度时间曲线(AUC)下的面积的图。
具体实施例方式本发明涉及制备发酵人参浓缩物的方法。本发明首先涉及用溶剂对人参进行提取，从而获得人参提取物。人参的实例可包括但不限于参须、白参、鲜参、干参、红参、太极参、高丽参、中国参、日本参、亚洲参、西洋参、它们的提取物、它们的粉末以及它们的混合物。人参提取中所用的溶剂可以是任何溶剂，例如水性溶剂(如水)、有机溶剂或其混合物，只要其不影响所述方法中所用的酶的活性即可。在一些实施方式中，有机溶剂可包括但不限于乙腈、二噁烷、二甲亚砜、甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇及其混合物。
在一些实施方式中，可以使用任何公知的溶剂提取方法用上述溶剂对人参进行提取。在某些实施方式中，水和有机溶剂的适当混合物可用于提取，其中混合物中的有机溶剂可增加人参中不溶于水的成分和/或酶促反应所产生的中间体的溶解性，使得最终产物 (即，发酵人参浓缩物或粉末)中的IH-901含量总体增加。接下来，在能够有效发酵所述人参提取物的条件下将果胶酶和β -半乳糖苷酶添加至所述人参提取物中。在一些实施方式中，可以在添加果胶酶和半乳糖苷酶之前用溶剂稀释人参提取物。在一些实施方式中，将果胶酶和半乳糖苷酶一起或同时添加至人参提取物中。在另一些实施方式中，将果胶酶和半乳糖苷酶分别或在不同的时间添加至人参提取物中。在一些实施方式中，可以将果胶酶和β-半乳糖苷酶以约100 1 约1 100，约 50 1 约 1 50，约 20 1 约 1 20，约 10 1 约 1 10，约 5 1 约 1 5， 约3 1 约1 3或约2 1 约1 2的相对比例添加至人参提取物中。在另一些实施方式中，可以将果胶酶和β-半乳糖苷酶以约100 1、约50 1、约20 1、约10 1、 约 5 1、约 3 1、约 2 1、约 1 2、约 1 3、约 1 5、约 1 10、约 1 20、约 1 50 或约1 100的相对比例添加至人参提取物中。在一些实施方式中，基于人参提取物或人参的总重量，添加至人参提取物中的果胶酶和β -半乳糖苷酶的总量可以为约0. 01重量％ 约50重量％，约0. 05重量％ 约50 重量％，约0. 1重量％ 约50重量％，约0. 5重量％ 约50重量％，约1重量％ 约50重量％，约2重量％ 约50重量％，约5重量％ 约50重量％，约10重量％ 约50重量％， 约25重量％ 约50重量％，约0. 01重量％ 约0. 05重量％，约0. 01重量％ 约0. 1重量％，约0.01重量％ 约0.5重量％，约0.01重量％ 约1重量％，约0.01重量％ 约2 重量％，约0. 01重量％ 约5重量％，约0. 01重量％ 约10重量％，约0. 01重量％ 约25 重量％，约0. 05重量％ 约0. 1重量％，约0. 1重量％ 约0. 5重量％，约0. 5重量％ 约 1重量％，约1重量％ 约2重量％，约2重量％ 约5重量％，约5重量％ 约10重量％， 约10重量％ 约25重量％。在另外的实施方式中，基于人参提取物或人参的总重量，添加至人参提取物中的果胶酶和β -半乳糖苷酶的总量可以为约0. 01重量％、约0. 05重量％、 约0. 1重量％、约0. 5重量％、约1重量％、约2重量％、约5重量％、约10重量％、约25重量％或约50重量％。在一些实施方式中，将果胶酶和半乳糖苷酶添加至人参提取物中，其中反应在下述ρΗ进行约3 约8，约4 约8，约4. 5 约8，约5 约8，约6 约8，约3 约 4，约3 约4. 5，约3 约5，约3 约6，约4 约4. 5，约4. 5 约5或约5 约6。在另外的实施方式中，反应在约3、约4、约4. 5、约5、约6或约8的ρΗ进行。然而，只要果胶酶和半乳糖苷酶的活性能保持，反应可以在任何PH进行。可通过向人参提取物溶液中添加例如但不限于磷酸盐溶液、柠檬酸溶液和柠檬酸钠缓冲溶液来调节ρΗ。将果胶酶和β -半乳糖苷酶添加至人参提取物中的反应温度可以是任何温度，只要果胶酶和半乳糖苷酶的活性能保持即可。在一些实施方式中，反应温度可以为约 10°C 约70°C，约30"C 约70V，约40V 约70V，约50V 约70V，约60V 约70V，约 10°C 约30°C，约10°C 约40°C，约10°C 约50°C，约10°C 约60 V，约30 V 约40 V， 约40°C 约50°C或约50°C 约60°C。在另一些实施方式中，反应温度可以是约10°C、约30°C、约 40°C、约 50°C、约 60°C或约 70°C。此外，反应时间可以是任何长度的时间，只要果胶酶和β -半乳糖苷酶的活性能保持即可。在一些实施方式中，反应时间可以是约1小时 约72小时，约12小时 约72 小时，约24小时 约72小时，约48小时 约72小时，约60小时 约72小时，约1小时 约12小时，约1小时 约24小时，约1小时 约48小时，约1小时 约60小时，约12小时 约24小时，约24小时 约48小时或约48小时 约60小时。在另外的实施方式中， 反应时间可以是约1小时、约12小时、约24小时、约48小时、约60小时或约72小时。最后，将发酵的人参提取物浓缩以制得发酵人参浓缩物。在一些实施方式中，发酵人参提取物的浓缩可涉及首先进行发酵人参提取物的离心，然后仅对分离出的上清液进行浓缩。在另外的实施方式中，发酵人参提取物的浓缩可涉及不进行任何前处理步骤而对发酵人参提取物进行浓缩。可使用常用的设备对发酵人参提取物进行浓缩，所述设备例如但不限于真空减压浓缩器。在一些实施方式中，本发明的方法还可包括干燥所制备的发酵人参浓缩物(可能是液体形式)从而生产发酵人参粉末。干燥可以通过任何常规的干燥方法进行，例如但不限于减压干燥、热风干燥、喷雾干燥、流化床干燥、流化床造粒和冷冻干燥或冻干。本发明还涉及一种制备发酵人参浓缩物的方法。所述方法首先涉及将人参悬浮在第一溶剂中，从而获得人参溶液。接下来，在能够有效发酵所述人参溶液的条件下将果胶酶和半乳糖苷酶添加至所述人参溶液中。然后，用第二溶剂对发酵的人参溶液进行提取， 从而获得发酵人参提取物。在一些实施方式中，第一溶剂和第二溶剂可以是水性溶剂(例如水)、有机溶剂或其混合物。最后，将发酵人参提取物浓缩，从而制得发酵人参浓缩物。关于本方法中所用的各种条件(例如关于果胶酶和半乳糖苷酶的添加、提取和浓缩)的说明已在上文进行了描述，在此不必赘述。本发明的另一方面涉及通过上述方法制备的发酵人参浓缩物和发酵人参粉末。本发明的上述方法涉及在能够有效发酵人参提取物或人参溶液的条件下将果胶酶和半乳糖苷酶直接添加至人参提取物或人参溶液中，因此是制备具有高ΙΗ-901含量的发酵人参浓缩物或粉末的简单方法。由于通过本发明的上述方法制备的发酵人参浓缩物和粉末具有高ΙΗ-901含量，因此它们可有效用作功能食品组合物。本发明的另一方面涉及包含上述发酵人参浓缩物或粉末的食品组合物，以及包含治疗有效量的上述发酵人参浓缩物或粉末的功能食品组合物。本发明的发酵人参浓缩物和粉末可包含大量ΙΗ-901，ΙΗ-901已知具有免疫增强、 抗糖尿病、抗癌、抗衰老和抗氧化活性。本领域技术人员可根据使用功能食品组合物的目的来适当确定本发明的发酵人参浓缩物或粉末的添加量。通常，基于功能食品组合物的总重量，添加至功能食品组合物中的本发明的发酵人参浓缩物或粉末的量可以是约0. 1重量％ 约100重量％。在某些实施方式中，例如当长期服用功能食品组合物以进行健康管理时，添加至功能食品组合物中的本发明的发酵人参浓缩物或粉末的量可低于上述范围。 不过，由于没有安全问题，本发明的发酵人参浓缩物或粉末可以非常大量地使用。在一些实施方式中，本发明的食品组合物或功能食品组合物可通过不进行任何前处理而添加本发明的发酵人参浓缩物或粉末、或其混合物来制备。在另外的实施方式中，本发明的发酵人参浓缩物或粉末可首先通过公知方法处理，然后可添加其他食品成分。可添加至本发明的食品组合物或功能食品组合物中的食品成分可以根据食品组合物或功能食品组合物的类型而不同且没有任何限制，只要当其与本发明的发酵人参浓缩物或粉末混合时不引起任何副作用即可。本发明的食品组合物或功能食品组合物可以是适合口服的形式，例如通过常规方法制成的软胶囊或硬胶囊、片剂、锭剂、飞散性散剂或颗粒、乳剂、悬浮剂以及由干粉组成的茶包。在一些实施方式中，可将功能食品组合物添加至各种食品中，例如但不限于饮料、口香糖、糖果、点心、维生素复合物、健康功能食品等，以提供免疫增强、抗糖尿病、抗癌、抗氧化和/或抗衰老效果。实施例提供下述实施例以说明本发明的实施方式，但并非旨在限制本发明的范围。实施例1-采用果胶酶和β -半乳糖苷酶制备发酵人参浓缩物<1-1>采用参须和白参制备发酵人参浓缩物在80°C、以3小时时间间隔用水和乙醇的混合物(混合比1 1，与原料相比相当于500%的量)提取5g参须和5g白参四次，从而获得7g人参提取物。向人参提取物中添加IOOml水，然后添加0. 3. g果胶酶和Ig β -半乳糖苷酶，反应混合物在50°C、ρΗ 4 5 保持48小时。过滤反应物并在80°C减压浓缩，从而获得6. 3g本发明的发酵人参浓缩物。<1-2>采用参须和白参制备发酵人参浓缩物如上述实施例<1_1>所述制备7g人参提取物。向人参提取物中添加IOOml水，然后添加Ig β _半乳糖苷酶，反应混合物在50°C保持24小时，然后通过将混合物在80°C保持3小时使酶失活。冷却反应物并用柠檬酸将pH调节至4 5。然后，向其中添加0. 3g果胶酶，并使混合物反应24小时。随后，过滤反应混合物并在80°C减压浓缩，从而获得5. 9g 本发明的发酵人参浓缩物。<1-3>采用参须和白参制备发酵人参浓缩物用水和乙醇的混合物(混合比1 1，与原料相比相当于500%的量)提取5g参须和5g白参，从而获得7g人参提取物。向人参提取物中添加IOOml水，然后添加0. 5g果胶酶和0. 7g β -半乳糖苷酶，反应混合物在50°C、pH 4 5保持48小时。过滤反应物并在80°C减压浓缩，从而获得6. 2g本发明的发酵人参浓缩物。<1-4>采用参须和白参制备发酵人参浓缩物用水和乙醇的混合物(混合比1 1，与原料相比相当于500%的量)提取5g参须和5g白参，从而获得7g人参提取物。向人参提取物中添加IOOml水，然后添加0.9g果胶酶和0. 6g β -半乳糖苷酶，反应混合物在50°C、pH 4 5保持48小时。过滤反应物并在80°C减压浓缩，从而获得5. 9g本发明的发酵人参浓缩物。<1-5〉采用参须和白参制备发酵人参浓缩物用水和乙醇的混合物(混合比1 1，与原料相比相当于500%的量)提取5g参须和5g白参，从而获得7g人参提取物。向人参提取物中添加IOOml水，然后添加1. 2g果胶酶和0. 2g β -半乳糖苷酶，反应混合物在50°C、pH 4 5保持48小时。过滤反应物并在80°C减压浓缩，从而获得6. 3g本发明的发酵人参浓缩物。<1-6>采用参须制备发酵人参浓缩物用IOOml水提取IOg参须，从而获得7g人参提取物。用柠檬酸将提取物的pH调节至3 4。向人参提取物中添加0. 3g果胶酶和Ig β -半乳糖苷酶，使混合物在50°C反应48小时。然后，以与上述实施例<1_1>所述相同的方法过滤反应物并进行浓缩，从而获得6. 5g本发明的发酵人参浓缩物(I)。作为替代，采用与上述实施例<1_1>所述相同的方法用水和乙醇的混合物提取 IOg参须，从而获得7. 2g人参提取物。用柠檬酸将提取物的PH调节至3 4。向人参提取物中添加0. 3g果胶酶和Ig β -半乳糖苷酶，以与上述实施例<1_1>所述相同的方法过滤混合物并进行浓缩，从而获得6. 8g本发明的发酵人参浓缩物(II)。<1-7>采用参须制备发酵人参浓缩物用IOOml水提取IOg参须，从而获得7g人参提取物。向人参提取物中添加IOOml 水，然后添加Ig β-半乳糖苷酶，反应混合物在50°C保持24小时，然后通过将混合物在 80°C保持3小时使酶失活。冷却反应物并用柠檬酸将pH调节至4 5。然后，向其中添加 0. 3g果胶酶，并在50°C反应24小时。随后，过滤反应物并在80°C减压浓缩，从而获得6. 5g 本发明的发酵人参浓缩物。<1-8>采用白参制备发酵人参浓缩物用5L乙醇提取Ikg白参，从而获得540g人参提取物。将7g提取物浓缩，然后悬浮在水中。向其中添加0.3g果胶酶和Ig β-半乳糖苷酶，以与上述实施例<1_1>所述相同的方法使混合物反应、过滤并浓缩，从而获得5. 2g本发明的发酵人参浓缩物。<1-9>采用白参制备发酵人参浓缩物用5L乙醇提取Ikg白参，从而获得540g人参提取物。将7g提取物浓缩，然后悬浮在水中。向其中添加0.5g果胶酶和0.5g β-半乳糖苷酶，以与上述实施例<1-1>所述相同的方法使混合物反应、过滤并浓缩，从而获得5. Ig本发明的发酵人参浓缩物。<1-10>采用白参制备发酵人参浓缩物用5L乙醇提取Ikg白参，从而获得540g人参提取物。将7g提取物浓缩，然后悬浮在水中。向其中添加1.5g果胶酶和0.2g β-半乳糖苷酶，以与上述实施例<1-1>所述相同的方法使混合物反应、过滤并浓缩，从而获得6. 2g本发明的发酵人参浓缩物。<1_11>采用鲜参制备发酵人参浓缩物将6g鲜参切片并灭菌。在将参片悬浮在水中后，用柠檬酸将PH调节至3 4. 5， 并向其中添加0.3g果胶酶和Ig β-半乳糖苷酶，使混合物在50°C反应72小时。用通过与上述实施例<1_1>所述相同的方法配制的水和乙醇的混合物将反应物在80°C提取4小时， 提取四次。然后，将提取物过滤并浓缩，从而获得3. 5g本发明的发酵人参浓缩物。<1_12>采用鲜参制备发酵人参浓缩物将6g鲜参切片并灭菌。在将参片悬浮在水中后，向其中添加Ig β-半乳糖苷酶， 混合物在50°C反应24小时，并在80°C保持3小时使其灭活。冷却反应物并用柠檬酸将pH 调节至4 5。然后，向其中添加0.3g果胶酶，并在50°C反应24小时。随后，过滤反应物， 然后用通过与上述实施例<1_1>所述相同的方法配制的水和乙醇的混合物在80°C提取4小时，提取四次。然后，在80°C减压浓缩提取物，从而获得2. 9g本发明的发酵人参浓缩物。<1_13>采用鲜参制备发酵人参浓缩物将6g鲜参切片并灭菌。在将参片悬浮在水中后，用柠檬酸将pH调节至3 4。然后，向其中添加0.7g果胶酶和0.6g β-半乳糖苷酶，使混合物在50°C反应72小时。随后，
9过滤反应物并进行浓缩，从而获得2. 9g本发明的发酵人参浓缩物。<1_14>采用鲜参制备发酵人参浓缩物将6g鲜参切片并灭菌。在将参片悬浮在水中后，向其中添加0.7g β-半乳糖苷酶，混合物在50°C反应24小时，并在80°C保持3小时使其失活。冷却反应物并用柠檬酸将 pH调节至4 5。然后，向其中添加0.6g果胶酶，并在50°C反应24小时。随后，过滤反应物，然后用通过与上述实施例<1_1>所述相同的方法配制的水和乙醇的混合物在80°C提取 4小时，提取四次。然后，在80°C减压浓缩提取物，从而获得2. 3g本发明的发酵人参浓缩物。<1_15>采用鲜参制备发酵人参浓缩物将6g鲜参切片并灭菌。在将参片悬浮在水中后，用柠檬酸将PH调节至3 4. 5。 然后，向其中添加0. 9g果胶酶和0. 5g β -半乳糖苷酶，使混合物在50°C反应72小时。随后，过滤反应物并进行浓缩，从而获得2. 5g本发明的发酵人参浓缩物。<1_16>采用鲜参制备发酵人参浓缩物将6g鲜参切片并灭菌。在将参片悬浮在水中后，用柠檬酸将PH调节至3 4. 5。 然后，向其中添加2g果胶酶和0.2g β-半乳糖苷酶，使混合物在50°C反应72小时。随后， 过滤反应物并进行浓缩，从而获得3. 3g本发明的发酵人参浓缩物。<1_17>采用鲜参制备发酵人参浓缩物将6g鲜参切片并灭菌。在将参片悬浮在水中后，向其中添加0.5g β-半乳糖苷酶，混合物在50°C反应24小时，并在80°C保持3小时使其失活。冷却反应物并用柠檬酸将 pH调节至4 5。然后，向其中添加1.5g果胶酶，并在50°C反应24小时。随后，过滤反应物，然后用通过与上述实施例<1_1>所述相同的方法配制的水和乙醇的混合物在80°C提取 4小时，提取四次。然后，在80°C减压浓缩提取物，从而获得3. Ig本发明的发酵人参浓缩物。<1-18>采用人参粉末制备发酵人参浓缩物将7g人参粉末悬浮在水中。用柠檬酸将pH调节至3 4. 5。通过与上述实施例 <1-1>所述相同的方法使悬浮的人参粉末与0. 3g果胶酶和Ig β -半乳糖苷酶反应并进行提取，然后过滤并浓缩，从而获得3. 7g本发明的发酵人参浓缩物。比较例1——仅采用果胶酶制备发酵人参浓缩物将IOOml水添加至通过与上述实施例<1_1>所述相同的方法制备的7g人参提取物中。然后，向提取物中添加1.3g果胶酶，随后通过与上述实施例<1-1>所述相同的方法进行反应和减压浓缩，从而获得5. 6g本发明的发酵人参浓缩物。比较例2——仅采用β -半乳糖苷酶制备发酵人参浓缩物将IOOml水添加至通过与上述实施例<1_1>所述相同的方法制备的7g人参提取物中。然后，向提取物中添加1. 3g β -半乳糖苷酶，随后通过与上述实施例<1_1>所述相同的方法进行反应和减压浓缩，从而获得5. 4g本发明的发酵人参浓缩物。实验例1—本发明的发酵人参浓缩物中的IH-901含量为了分析通过上述实施例<1_1>所述的方法制备的发酵人参浓缩物中的 IH-901 (20-0-β-D-吡喃葡糖基-20 (S)-原人参二醇)的含量，取Ig所获得的发酵人参浓缩物并用60ml水饱和丁醇提取四次。浓缩丁醇流分，从而获得120mg浓缩物，并将浓缩物溶解在甲醇中以通过超高效液相色谱(UPLC)分析IH-901含量。UPLC分析的结果示于图1 中。也以上述同样方式测量上述实施例<1_1>中所制备的人参提取物中的IH-901含量。
此外，以上述同样方式分析上述比较例1或比较例2中所述方法制备的发酵人参浓缩物中的IH-901含量。上述分析结果总结于下表1中。表 1
Im 各成分含量~ 实施例"""实施例1-1 I比较例1 ~比较例2的 1-1的人的发酵人的发酵人发酵人参 __参提取物参浓缩物参浓缩物浓缩物人参皂甙 Rbl 17.6 mg/g 1.2mg/g 6.3 mg/g3.2 mg/g ‘人参皂甙 Rb2~~ 14.6 mg/g “ 1.1 mg/g ‘ 7.1 mg/g5.7 mg/g
人参皂甙 Re— 18.9 mg/g_ 0.1 mg/g _ 9.3 mg/g6.3 mg/g “
—人参皂甙 Rd “ 7.9 mg/g .4 mg/g ~2.2 mg/g4.2 mg/g
IH-901 0 mg/g 36 mg/g 24 mg/g10 mg/g如上表1所示，本发明的发酵人参浓缩物与人参提取物相比含有大量IH-901。而且，本发明的发酵人参浓缩物中的IH-901含量是仅采用β _半乳糖苷酶制备的发酵人参浓缩物的3. 6倍，是仅采用果胶酶制备的发酵人参浓缩物的1. 5倍。实验例2-本发明的发酵人参浓缩物的ΙΗ-901的身体吸收研究用24名年龄为20岁 45岁、体重在理想体重20%内的健康男性志愿者作为研究对象(随机选取，2 X 2交叉设计)。每个志愿者接受发酵人参提取物或人参提取物以进行药代动力学特征评价。在施用发酵人参提取物或人参提取物后的第0、0. 5、1、1. 5、2、3、4、5、6、7、8、10、12和24小时取血样并通过LC-MS/MS进行分析。ΙΗ-901的平均血浆浓度随时间的变化示于图2。测得的平均最大血浆浓度(Cmax)、达到最大血浆浓度的平均时间(Tmax)和血浆浓度时间曲线(AUC) 下的面积值示于下表2中，其中Cmax是与时间无关的各对象的最大血浆浓度平均值，Tfflax是各对象的对应于Cmax值的时间平均值。各对象的Cmax、Tfflax和AUC值示于图3 图5。表 2
CmaxTmaxAUC
发酵人参浓缩物 325. 00 + 91. 97ng/ml 3. 29 小时 2083. 09 + 524. 68ng/ml
人参浓缩物13. 88 + 7. 24ng/ml12. 04 小时 134. 5 + 63. 10ng/ml如上表2所示，发酵人参提取物中的IH-901的Cmax、AUC和Tmax分别是人参提取物的约24倍高、约15倍高和约1/3. 7。因此，发现当服用人参浓缩物时，各个个体对于将人参皂甙代谢为IH-901具有不同的能力，并且人体仅吸收了少量的IH-901。另外，服用人参浓缩物时，各个个体显示出达到最大血浆浓度的平均时间不同。相反，当服用发酵人参浓缩物时，各个个体吸收的IH-901的量和达到最大血浆水平的平均时间是恒定的。另外，当服用发酵人参浓缩物时，人体吸收了大量的IH-901。因此，上述结果表明当对象服用发酵人参浓缩物时，可预期获得稳定、恒定的效果 (个体差异很小)。实施例2——根据本发明制备发酵人参粉末<2_1>采用参须和白参制备发酵人参粉末将IOOml水添加至通过与上述实施例<1_1>所述相同的方法制备的7g人参提取物。然后，向提取物中添加0.3g果胶酶和Ig β-半乳糖苷酶，随后在50°C、pH 4 5反应 24小时。在80°C减压干燥反应过的提取物，从而获得4. 23g本发明的发酵人参粉末。<2-2>采用人参粉末制备发酵人参粉末将7g人参粉末悬浮在水中，然后将pH调节至3 4. 5。接下来，向悬浮液中添加 0. 3g果胶酶和Ig β -半乳糖苷酶，随后在50°C反应24小时，并用通过与上述实施例<1_1> 所述相同的方法配制的水和乙醇的混合物在80°C提取4小时，提取四次。然后减压干燥提取物，从而获得2. 6g本发明的发酵人参粉末。虽然出于说明的目的详细描述了本发明，但应当理解，这些细节仅为此目的，本领域技术人员在不背离下述权利要求所定义的本发明的实质和范围的情况下可对本发明做出变化。
权利要求
1.一种制备发酵人参浓缩物的方法，所述方法包括用溶剂对人参进行提取从而获得人参提取物；在能够有效发酵所述人参提取物的条件下将果胶酶和β“半乳糖苷酶添加至所述人参提取物中；和将发酵的所述人参提取物浓缩以制得发酵人参浓缩物。
2.如权利要求1所述的方法，其中，所述人参是参须、白参、鲜参、干参、红参、太极参、 高丽参、中国参、日本参、亚洲参、西洋参、它们的提取物、它们的粉末以及它们的混合物中的一种或多种。
3.如权利要求1所述的方法，其中，所述溶剂是水性溶剂、有机溶剂及其混合物中的一种或多种。
4.如权利要求1所述的方法，其中，所述添加步骤包括将所述果胶酶和所述半乳糖苷酶一起添加。
5.如权利要求1所述的方法，其中，所述添加步骤包括将所述果胶酶和所述半乳糖苷酶分别添加。
6.如权利要求1所述的方法，其中，所述添加步骤包括将所述果胶酶和所述半乳糖苷酶以约100 1 约1 100的相对比例添加，其中，基于所述人参提取物或人参的总量，所述果胶酶和β -半乳糖苷酶的量为约0. 01重量％ 约50重量％。
7.如权利要求1所述的方法，其中，所述添加步骤包括在约10°C 约70°C的温度将所述果胶酶和所述β“半乳糖苷酶添加至所述人参提取物中。
8.如权利要求1所述的方法，其中，所述添加步骤包括将所述果胶酶和所述半乳糖苷酶添加至所述人参提取物中约1小时 约72小时的时间。
9.如权利要求1所述的方法，所述方法还包括在所述浓缩步骤后干燥所述发酵人参浓缩物以制得发酵人参粉末。
10.如权利要求9所述的方法，其中，所述干燥步骤通过减压干燥、热风干燥、喷雾干燥、流化床干燥、流化床造粒或冷冻干燥进行。
11.一种通过权利要求1所述的方法制备的发酵人参浓缩物。
12.一种包含权利要求11所述的发酵人参浓缩物的食品组合物。
13.一种包含治疗有效量的权利要求11所述的发酵人参浓缩物的功能食品组合物。
14.一种通过权利要求9所述的方法制备的发酵人参粉末。
15.一种包含权利要求14所述的发酵人参粉末的食品组合物。
16.一种包含治疗有效量的权利要求14所述的发酵人参粉末的功能食品组合物。
17.一种制备发酵人参浓缩物的方法，所述方法包括将人参悬浮在第一溶剂中，从而获得人参溶液；在能够有效发酵所述人参溶液的条件下将果胶酶和β“半乳糖苷酶添加至所述人参溶液中；用第二溶剂对发酵的所述人参溶液进行提取，从而获得发酵人参提取物；和浓缩所述发酵人参提取物，从而制得发酵人参浓缩物。
18.如权利要求17所述的方法，其中，所述人参是参须、白参、鲜参、干参、红参、太极参、高丽参、中国参、日本参、亚洲参、西洋参、它们的提取物、它们的粉末以及它们的混合物中的一种或多种。
19.如权利要求17所述的方法，其中，所述添加步骤包括将所述果胶酶和所述β-半乳糖苷酶一起添加。
20.如权利要求17所述的方法，其中，所述添加步骤包括将所述果胶酶和所述β-半乳糖苷酶分别添加。
21.如权利要求17所述的方法，其中，所述添加步骤包括将所述果胶酶和所述β-半乳糖苷酶以约100 1 约1 100的相对比例添加，其中，基于所述人参溶液或人参的总量，所述果胶酶和β-半乳糖苷酶的量为约0.01重量％ 约50重量％。
22.如权利要求17所述的方法，其中，所述添加步骤包括在约10°C 约70°C的温度将所述果胶酶和所述β“半乳糖苷酶添加至所述人参溶液中。
23.如权利要求17所述的方法，其中，所述添加步骤包括将所述果胶酶和所述β-半乳糖苷酶添加至所述人参溶液中约1小时 约72小时的时间。
24.如权利要求17所述的方法，其中，所述第一溶剂和第二溶剂是水性溶剂、有机溶剂及其混合物中的一种或多种。
25.如权利要求17所述的方法，所述方法还包括在所述浓缩步骤后干燥所述发酵人参浓缩物以制得发酵人参粉末。
26.如权利要求25所述的方法，其中，所述干燥步骤通过减压干燥、热风干燥、喷雾干燥、流化床干燥、流化床造粒或冷冻干燥进行。
27.一种通过权利要求17所述的方法制备的发酵人参浓缩物。
28.一种包含权利要求27所述的发酵人参浓缩物的食品组合物。
29.一种包含治疗有效量的权利要求27所述的发酵人参浓缩物的功能食品组合物。
30.一种通过权利要求25所述的方法制备的发酵人参粉末。
31.一种包含权利要求30所述的发酵人参粉末的食品组合物。
32.一种包含治疗有效量的权利要求30所述的发酵人参粉末的功能食品组合物。
全文摘要
本发明涉及一种制备发酵人参浓缩物的方法。所述方法首先涉及用溶剂对人参进行提取从而获得人参提取物。接下来，在能够有效发酵所述人参提取物的条件下将果胶酶和β-半乳糖苷酶添加至所述人参提取物中。然后将发酵的提取物浓缩以制得发酵人参浓缩物。所述方法还可以包括将所述发酵人参浓缩物干燥以获得发酵人参粉末。
文档编号A23L1/212GK102459623SQ200980160042
公开日2012年5月16日 申请日期2009年5月19日 优先权日2009年5月19日
发明者成钟焕, 李承劝, 沈大根, 赵旻九 申请人:株式会社一和