专利名称：一个棉纤维发育相关基因14-3-3f的表达与功能鉴定的制作方法
技术领域：
本发明涉及棉花基因。具体是一个棉纤维优势表达的非ε类型14-3-3蛋白基因Ghl4-3-3f的克隆及其表达活性、功能鉴定和14-3-3f蛋白与靶蛋白之间的相互作用，揭示 14-3-3f蛋白可能通过与靶蛋白之间的相互作用来发挥其在涉及棉纤维发育的相关信号通 路中的调控作用。
背景技术：
棉花是世界上最主要的天然纤维作物。在我国，棉纤维占纺织工业原料的70 %，棉 花种植面积占经济作物面积的1/3，与我国2亿农民的收入和1900万纺织工人的就业息息 相关。随着纺织工业快速发展和人民生活水平不断提高，纺织工业及其相关产业对棉纤维 品质的要求愈来愈高。与国际棉花生产相比较，我国皮棉总产世界第一，单产也居五大产棉 国首位，但我国棉花纤维的细长强结构不合理，质量欠佳，不能用作一些高附加值高质量纺 织产品的生产原料。因此，我国每年需进口优质皮棉100多万吨，造成国产原棉的积压。纤 维品质问题已成为制约我国棉花产业可持续发展的主要障碍之一。棉花遗传改良的最终目标是提高棉花纤维的产量和品质。棉纤维产量和品质不仅 受环境因素的影响，而且受相关基因特别是纤维特异表达基因的调控。目前，国内外除了利 用常规育种手段外，还逐步运用遗传工程对棉纤维品质进行遗传改良。对棉纤维发育的分 子生物学及相关基因表达调控的研究对于利用基因工程改良棉纤维品质具有重要意义，将 优良的农艺性状，特别是纤维品质相关的优良性状引入棉花主栽品种，不仅可提高棉花产 量和纤维品质，降低生产成本，而且可减轻对环境的不利影响。然而目前对棉花纤维发育分 子机制的研究还处在单个基因的研究模式阶段。通过基因工程的方法对棉纤维发育相关基 因进行大规模解析，研究基因间及蛋白间的相互关系，不仅可以解析棉花纤维发育的分子 机制，还可以为改良棉纤维品质提供有用的基因原件，推动棉纤维品质的分子改良。但是由 于棉花遗传转化相对较难，许多基因的功能都是通过在模式植物拟南芥、烟草或者酵母这 样一个简单的单细胞真核系统中间接证明其与纤维细胞发育的关系。迄今为止，只有蔗糖 合成酶基因(SuSy)和GhACTl基因在棉花中被证明与纤维细胞的发育相关。14-3-3蛋白是一类广泛存在于真核生物中高度保守的调控蛋白。该类蛋白为酸 性可溶性的蛋白，单体分子量为27-32kDa，自然条件下主要以同源或者异源二聚体的形式 存在，每个单体可以结合一个靶肽序列，14-3-3蛋白二聚体则可以同时与两个靶蛋白或者 与一个靶蛋白的两个结构域相互作用，通过与靶蛋白上的一小段共有序列的磷酸化丝氨酸 /苏氨酸残基结合从而改变靶蛋白的活性、定位、磷酸化状态或者与其他蛋白的相互作用能 力等来发挥其调控功能。14-3-3蛋白能够以多种机制与靶蛋白相互作用，对各种细胞功 能和生理过程进行调控，在植物中主要表现为对碳氮代谢的调控，对种子萌发调控，质膜 H+-ATPase活性调节，参与植物病害胁迫应答以及细胞信号传导等过程。
发明内容
本发明的目的在于提供一个新的棉花纤维优势表达的14-3-3基因(Ghl4-3_3f)，分析揭示该基因的表达活性与功能以及在棉纤维伸长过程中与其靶蛋白的相互作用，探索 其调控纤维发育的分子机制，进而应用该基因及其相关基因改良棉纤维品质，创造棉花优 良品种。为实现上述目的，申请人在最新的研究中，从棉纤维cDNA文库中分离得到了 10，000多个棉花cDNAs，通过生物信息学分析，获得10多个可能编码14_3_3蛋白的基因。 将其中的一个基因命名为Ghl4-3-3f。Ghl4-3-3fcDNA包含759bp的开放阅读框架，编码一 个含有252个氨基酸的蛋白，其中包含27个强碱性氨基酸，42个强酸性氨基酸，92个疏水 氨基酸和67个极性氨基酸，其分子量为28. 5KDa，等电点(pi)为4. 612。利用ClustalW做 氨基酸序列分析(见图1)，黑色阴影表示相同氨基酸，灰色阴影表示差异氨基酸，下划线所 在区域表示9个α螺旋，结果显示该蛋白具有14-3-3蛋白家族特有的保守结构特征，包含 9个保守的α螺旋以及不保守的N末端和C末端。利用MEGA3. 1软件对棉花和拟南芥14_3_3蛋白做Minimum进化树分析，重复 lOOObootstrap。Gh 14-3-3 和 12 个 AtGF14 在基因库中的编号依次为Ghl4-3_3a(EU189220)， Ghl4-3-3b(EU189221)，Ghl4_3_3c(EU189222)，Ghl4-3_3d(EU189223)，Ghl4_3_3e(EU189224)， Ghl4-3-3f (GU451708), Ghl4_3_3g (GU451709), Gh14_3_3h (GU451710)， Ghl4-3-3L(DQ402076)，AtGF 14 κ (MD51783)，AtGFl4 λ (AAD51781)，AtGF 14 χ (ΑΑΑ96254)， AtGF14 φ (MB62224)，AtGF14co (AM96253)，AtGF14 ν (MD51782)，AtGF14 υ (MB62225)， AtGF 14 Ψ (ΑΑΑ96252)，AtGF14y (AAD51784)，AtGF 14 ι (ΑΑΚ11271)，AtGF 14 ο (AAG47840)， AtGF14 ε (MD51785)，AtGF14 π (NP-565174)(见图 2)。进化分析表明，Ghl4-3_3f与8个非ε型拟南芥14_3_3蛋白处于同一进化枝，说 明Ghl4-3-3f属于非ε型的14_3_3蛋白。利用PCR扩增技术，申请人从棉花基因组DNA 中获得了 Ghl4-3-3f基因的全长序列。通过该基因的DNA序列与cDNA序列比较得到该基 因的结构示意图(见图3)，黑色方框表示外显子，线段表示5’ -和3’ -端非编码区及内含 子，线段下的数字表示内含子的大小，线段上的数字表示内含子在基因中插入的位点，ATG, 起始密码子；TAA、TGA和TAG，终止密码子。结果表明，Ghl4_3_3f由4个外显子和3个内 含子组成。3个内含子大小差异较大，其中第一个内含子长167bp，第二个内含子最大，长 1034bp，第三个内含子最小，长121bp。通过与棉花其他14-3-3基因的结构比较发现，棉花 ε型和非ε型14-3-3基因结构各自具有较高的保守，两个ε型的14_3_3基因都具有6 个外显子和5个内含子，而两个非ε型14-3-3基因则都具有4个外显子和3个内含子，且 内含子的插入位点也具有很高的保守性。利用定量RT-PCR技术对该基因在棉花不同组织 中的表达谱进行了分析(见图4)，结果表明Ghl4-3-3f基因在棉纤维细胞中优势表达，在 棉花其他组织中也都有表达。进一步研究Ghl4-3-3f在棉纤维发育不同阶段的表达情况发 现(见图5)，该基因在棉纤维发育的各个时期均有表达，从棉纤维起始到伸长时期表达量 逐步上升并在开花后10天的棉纤维细胞中达到最高值，而在纤维伸长后期(开花后15-20 天)表达水平则维持在一个稳定略低的水平。为了进一步研究14-3_3f蛋白在纤维细胞伸长过程中的作用，Ghl4-3_3f基 因的ORF序列被重组到酵母表达载体pREP-5N质粒中，随后用重组质粒转化裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)。在裂殖酵母中诱导表达Ghl4_3_3f基因，观察宿主细胞的表型研究该基因对单细胞生长的影响。从转基因酵母中选取10个细胞系进行培养，测量其 在非诱导和诱导条件下的细胞长度。统计分析结果显示Ghl4-3-3f转基因酵母在诱导和 非诱导条件下酵母细胞的长度有显著差异，而对照细胞在两种条件下的生长状况则没有明 显差异(见图6)，A和B分别代表在非诱导和诱导培养基上生长的转入pREP5N-Ghl4-3-3f 质粒的酵母细胞，说明Ghl4-3-3f基因的表达能显著增加宿主细胞的长度，促进真核单细 胞的纵向伸长应用酵母双杂交系统，研究了 Ghl4-3-3f蛋白与其他棉花蛋白间的相互作 用，筛选获得一些在纤维发育过程中与其相互作用的蛋白质。结果显示Ghl4-3-3f与本实 验室分离的其他几个14-3-3蛋白均不能相互作用。通过从开花后10天纤维酵母双杂交 cDNA文库中筛选互作蛋白，我们共筛选得到了 10个相互作用的靶蛋白，这些蛋白包括了参 与植物生长发育代谢关键酶类和其他蛋白亚硫酸盐氧化酶、葡萄糖磷酸变位酶、转移酶、 H+ATPaSe、40S核糖体蛋白、根向光性蛋白、ATP结合蛋白等，另外还包含了 BR信号通路中的 转录因子BZR。已有研究报道BR参与了棉花纤维的起始和发育，在模式植物拟南芥中也已 证实14-3-3蛋白能够与BZR相互作用并改变其定位，推测棉花Ghl4-3-3f可能在BR调控 棉花纤维发育过程中通过对转录因子BZR的调节而起到至关重要的作用。此外，Ghl4-3-3f 也可能通过与另外几种靶蛋白的结合而参与到它们所在的复杂调控网络中，进而参与对棉 花纤维发育的调控。本发明的优点1、提供了一个新的棉花纤维优势表达Ghl4-3-3f基因的全长序列及其cDNA序列， 该基因序列及其编码的蛋白与本实验室分离的其他棉花14-3-3基因及其编码蛋白具有较 高的同源性。2、在酵母细胞中过量表达Ghl4-3_3f基因能够导致宿主细胞出现显著的纵向伸 长，说明Ghl4-3-3f基因可能在单细胞伸长过程中起到重要作用。3、利用酵母双杂交系统从开花后10天的酵母双杂交cDNA文库中筛选与 Ghl4-3-3f相互作用的蛋白质，筛选得到的靶蛋白参与了植物生长发育的各个方面，也包括 了可能与棉花纤维发育相关的信号通路，说明14-3-3蛋白很可能通过与靶蛋白的相互作 用来发挥其在这些信号通路中的调控作用，从而调控棉花纤维的发育。本发明通过以下附图和实施进行进一步阐述，但并不限制本发明的范围。
图1、棉花14-3-3蛋白序列比较图中黑色阴影表示相同氨基酸，灰色阴影表示差异氨基酸，下划线所在区域表示 九个α螺旋。图2、棉花和拟南芥14-3-3蛋白的系统进化关系利用MEGA3. 1软件对棉花和拟南芥14_3_3蛋白做Minimum进化树分析，重复 lOOObootstrap。Ghl4_3_3和12个AtGF14在基因库中的编号依次为图中Ghl4-3-3a(EU189220)，Ghl4_3_3b(EU189221)，Ghl4_3_3c(EU189222)， Ghl4-3-3d(EU189223)，Gh14-3-3e(EU189224)，Gh14-3-3f(GU451708)， Ghl4-3-3g(GU451709) , Gh14_3_3h(GU451710) , Gh14-3-3L(DQ402076)，AtGF 14 κ (AAD51783)，AtGF 14 λ (AAD51781)，AtGF 14 χ (ΑΑΑ96254)，AtGF 14 φ (ΑΑΒ62224)， AtGF14co (AAA96253)，AtGF 14 ν (AAD51782)，AtGF 14 υ (ΑΑΒ62225)，AtGF 14 Ψ (ΑΑΑ96252)， AtGF14y (AAD51784)，AtGF 14 ι (ΑΑΚ11271)，AtGF 14 ο (AAG47840)，AtGF 14 ε (AAD51785)， AtGF14 π (ΝΡ-565174)。图3、棉花14-3-3基因的结构图中黑色方框表示外显子，线段表示5’ -和3’ -端非编码区及内含子。线段下的数字表示内含子的大小，线段上的数字表示内含子在基因中插入的位点。ATG，起始密码 子；TAA、TGA和TAG，终止密码子。图4、RT-PCR分析Ghl4_3_3f基因在棉花各组织中的差异表达图5、RT-PCR分析Ghl4_3_3f基因在棉纤维发育各时期的表达图中3天 20天依次代表开花后3 20天纤维。图6、Ghl4-3-3f蛋白在酵母细胞中过量表达导致宿主细胞显著增长图中A和B分别代表在非诱导和诱导培养基上生长的转入pREP5N-Ghl4-3-3f质 粒的酵母细胞。
具体实施例方式—个新的棉纤维发育相关基因14-3-3f的表达与功能鉴定1.棉花 Ghl4-3_3fcDNA 克隆鉴定从棉纤维cDNA文库中分离了 10，000多个棉花cDNAs，通过生物信息学分析，获得 10多个可能编码14-3-3蛋白的基因。对每个序列重新测序比对，发现一个新的编码14-3-3 蛋白的基因，命名为Ghl4-3-3f。2.实时荧光定量RT-PCR分析Ghl4-3_3f基因的表达(1)组织总 RNA 的提取(按 Li XB, Cai L, Cheng NH, Liu Jff, 2002. Molecularcharacterization of the cotton GhTUBl gene that preferentially expressed in fiber. Plant Physiol. 130 :666_674 进行)。(2)实时荧光定量RT-PCR研究基因的表达(按照Li XB, Fan XP, Wang XL, Cai L, YangffC,2005. The Cotton ACTINl gene is functionally expressed in fibers and participates in f iberelongation. Plant Cell 17 :859_875 进行)。首先，将棉花不同组 织(根、下胚轴、子叶、叶子、花瓣、花药、开花后3天纤维、5天纤维、6天纤维、9天纤维、10 天纤维和10天胚珠、12天纤维、15天纤维、18天纤维、20天纤维等)的总RNA (2 μ g/样) 用 SuperScript II RNaseH-Reverse Transcriptase(Invitrogen Life Technologies) 反转录成cDNA ；然后，以cDNA为模板，用基因特异的引物(Ghl4_3_3fPl和Ghl4_3_3fP2) 和 Real-time PCR Master Mix(T0Y0B0, Japan)进行定量 PCR 反应。棉花 polyubiquitin 基因(GhUBIl)作为RT-PCR反应的内标，目标基因每一个循环的扩增都被SYBR-Green荧 光检测。每个基因的表达水平相对值按公式Y= 10Δ 37Χ100%计算(其中ACt = CtGhUBIl-CtGhl4-3-3f, 3. 7是利用GhUBIl制备的标准曲线y = -0. 28x+9. 87中斜率的倒 数，表示基因表达相差10倍的PCR循环数)。重复3次，统计分析实验结果。结果见图4、 图5。3. Ghl4-3-3f基因全长序列的分离克隆
根据基因的cDNA序列，在其起始密码子及终止密码子处各设一个基因特异性引 物，用于PCR扩增，获得长度为2081bp的片段。引物序列如下Ghl4-3-3fPl :5，-ATGGCGACGATGGTGCCTGACAATCTAAGC-3，。Ghl4-3-3fPl :5，-CTATGGCTCGTCTAACTGGTCCTGAACATC-3，。4.在裂殖酵母中过量表达Ghl4-3_3f将Ghl4-3_3f0RF构建到载体pREP_5N上，电击法转化到裂殖酵母 (Schizosaccharomycespombe)中。在酵母细胞中诱导表达Ghl4_3_3f，方法按照Li L, WangXL, Hung GQ, Li XB. 2007. Molecular characterization of cotton GhTUA9 gene specifically expressed in fibre and involved incell elongation. Journal of Experimental Botany 58，3227-3238中介绍的方法进行。结果见图6。酵母双杂交系统筛选与Ghl4-3_3f相互作用的蛋白质将Ghl4-3-3f0RF构建到载体pGBKT7上，分别转化酵母菌株AH109和Y187，检 测Ghl4-3-3f 蛋白的自激活及对酵母细胞的毒性。结果显示该蛋白不具有自激活特性并 对酵母细胞无毒性，可以利用该酵母系统研究蛋白质的相互作用。按照BD Matchmaker LibraryConstruction and Screening Kits (BD Biosciences Clontech, Palo Alto, USA) 的方法构建开花后10天棉纤维酵母双杂交cDNA文库。利用酵母结合方法以Ghl4-3-3f为 诱饵蛋白从文库中筛选与其相互作用的蛋白质，用营养缺陷筛选及X-gal显色双重筛选阳 性克隆，提取质粒后转化大肠杆菌DH5 a并经氨苄抗性筛选，提取单克隆菌落质粒，PCR鉴 定正确者进行测序，然后进行生物信息学分析。结果如表1。表1.酵母双杂交系统筛选与Ghl4-3_3f相互作用的蛋白质
编号同源蛋白及其物种E-值同源性得分
权利要求
一个棉纤维特异表达基因Gh14-3-3f，该基因包括开放阅读框和3’端未翻译区的cDNA序列如下1 ATGGCGACGA TGGTGCCTGA CAATCTAAGC CGTGACCAGT ACGTTTACTT AGCCAAGTTA61 GCGGAACAAG CCGAACGCTA CGAGGAGATG GTTCAATTCA TGCAAAAGCT CGTCCTCGGC121 TCTACTCCTG CCTCCGAGCT CACCGTCGAG GAACGGAACC TTCTCTCGGT CGCTTACAAA181 AACGTGATCG GATCTCTACG CGCCGCGTGG AGGATCGTTT CTTCCATCGA GCAGAAAGAA241 GAAGGTCGGA AGAACGAGGA ACATGTGGTG CTCGTCAAGG AGTATAGATC GAAGGTTGAA301 TCTGAGTTGT CGGATGTTTG CGCTAGTATC TTGACTTTGT TGGACTCGAA TCTGATCCCA361 TCTGCTGCTG CGAGTGAATC GAAGGTTTTC TATTTGAAGA TGAAAGGGGA TTATCATCGG421 TATTTAGCAG AGTTTAAGGT TGGTGATGAG AGGAAAGCTG CTGCTGAGGA TACTATGCTG481 TCTTACAAGG CTGCTCAGGA TATCGCACTG ACGGATCTAG CACCAACGCA CCCGATCAGG541 CTGGGACTTG CGCTGAATTA CTCGGTGTTT TACTATGAGA TTCTGAATCA GTCCGATAAG601 GCTTGTAGCA TGGCTAAACA GGCATTTGAG GAAGCCATTG CTGAGCTTGA CACGCTGGGA661 GAAGAGTCTT ACAAGGACAG CACTCTCATT ATGCAACTCC TAAGGGATAA CCTTACTCTC721 TGGACTTCGG ATGTTCAGGA CCAGTTAGAC GAGCCATAGA AGGTGGTGTA ACCCGTGTTG781 GTCCTAGTCT TCTTCCGGAG GAGGTGGGCT TTGAATGTCA TTTGTTTATG TTGATTAAAG841 TGTGTAATTT AAAATGGGAA GTAATCCATG GCATGATGCT ATACTCTA基因的编码区从起始密码子ATG到终止密码子TAG是1-759bp。
2.如权利要求1所述的一个棉纤维特异表达基因Ghl4-3-3f，其特征是Ghl4-3-3f基 因编码区翻译的蛋白质序列如下1MATMVPDNLS61NVIGSLRAAW 121 SAAASESKVF 181 LGLALNYSVF 241 WTSDVQDQLDRDQYVYLAKL AEQAERYEEM VQFMQKLVLG STPASELTVEERNLLSVAYKRIVSSIEQKE EGRKNEEHVV LVKEYRSKVE SELSDVCASILTLLDSNLIP YLKMK⑶YHR YLAEFKV⑶E RKAAAEDTML SYKAAQDIAL TDLAPTHPIRYYEILNQSDK ACSMAKQAFE EAIAELDTLG EESYKDSTLIMQLLRDNLTL EP0
3.如权利要求1所述的一个棉纤维特异表达基因Ghl4-3-3f，其特征是Ghl4-3-3f基 因序列如下 1ATGGCGACGATGGTGCCTGACAACCTAAGCCGTGACCAGTACGTTTATTTAGCCAAGTTA 61GCGGAACAAGCCGAACGCTACGAGGAGATGGTTCAATTCATGCAAAAGCTCGTCCTCGGC 121TCTACTCCTGCTTCCGAGCTCACCGTCGAGGAACGGAACCTTCTCTCGGTCGCTTACAAA 181AACGTGATCGGATCTCTACGCGCCGCGTGGAGGATCGTTTCTTCTATCGAGCAGAAAGAA 241GAAGGTCGGAAGAACGGGGAACATGTGGTGCTCGTCAAGGAGTATAGATCGAAGGTTGAA 301TCCGAGTTGTCGGATGTTTGCGCTAGTATCTTGACTTTGTTGGACTCGAATCTGATCCCA 361TCTGCTGCTGCGAGTGAGTCGAAGGTTTTCTATTTGAAGATGAAAGGGGATTATCATCGG 421TATTTAGCAGAGTTTAAGGTTGGTGATGAGAGGAAAGCTGCTGCTGAGGATACTATGCTG 481TCTTACAAGGCTGCTCAG GT AACTTTTTTT AACTTAGAGC CAAGCTTTGA CTAAGTAATT .541 GMTATTAAG AGTAGAATTT TTTATGTTGA CTTGGAATTA TGATTTTAGG GTTAAGTTTT 601 TGGATTTGAG AATTCTGTAT AATTTGAAGT TGAAAATTTT GGATCCTGTG TTGAATTAAT 661 TGAA0GATAT CGCACTGACG GATCTAGCAC CAACGCACCC GATCAGGCTG GGACTTGCGC‘721 TAAATTACTC GGTGTTCTAC TATGAGATTC TGAATCAGTC CGATAAGGCT TGTAGCATGG’781 CTAAACAG GT GCTCTTCATT TTCTACTCAT GAACATGMT TGTTTAAAGC CTTTGCAAGT‘841 GMTCTGCTT TAAGCTCCAA ACTACTCTTC ACCTTGCTTG AGTTGATGCT TMACCAATC’901 AMAATGAAA CATAATGTGA CTTTTGGTCG ATGATCTTGG CTGTTTCTTT ATGGAGGAAT’961 AT ATT ATT AT TAGCTTAATT AATCTAATTA GTTTTGTAGT TTGACGTTGG MAGTTTGGT‘1021 CTTCTTTGTG AGGCTATTAA ACTCAGTTTT ATACCATGTC CAGTGCTCCT TATTTTATGA’1081 CTTTTATCCT TMTTTTGTC CCTTAMGTT TACTAGGGTC AAMAACGAG GTTGATTTGA‘1141 CTTCTTGTGT TGGTGACTTC ATCTAGATGA CTTTGTTAAG AGCCGATTAG ACAAGACTTT’1201 GAATCAGTTT TGGTTTTAAC CAGCATTAGC GCMTTAAAG TGACAAATGA TTTT.GTTTTA‘1261 TATTTTTGCA AATATATAGC TCTGTTTGTT ATGTGCTTGA TTCTAGTAAT TCTAGTACCC‘1321 TTAAMTTTA CTTCTTAGTT TTAAGTTGGT GAGGTCAGGA TTGTCTAGAA ATTMTATCA’1381 ATCCTCTTAT TAGCAAMTA GTTATATACT ATATGTGTAC ATGTAGATAT GCTMACCM‘1441 ATCCTTATTG AGCATAGCAC ACTAGAGTTT AAGTAGCMA TACATTATTT TCAAACATTA’1501 CATAGATGCA TGTTAGGAGA TGAATTTTTA TTTGGATGTT TTTCCTATTG TCTTCCTTGT‘1561 TTGTTTTCAT GGGGAGMAA TAAATGGAAC GCGGCCAACC TCTGAACTTA CTGCAACTTT’1621 CTGACCTGTT TGGGGGACTT TCTTAGTTGG ATGCTTTAAA TAAATGCTAT CTCTTTTTTG‘1681 GCATTTTGAC TTATTTTTCT GAAACATTCT TTGCCGTCTA TGTATAAAAT TATGTTGCTG’1741 AGTAGTTGAT GGTTTTAGTA AGAATAAAAG ATGAATTAAT GGTTGGATAT TCATT A A ATA‘1801 TTCCATGTTT TTTTATAAAA AO GCGTTTGA GGAAGCCATT GCTGAGCTTG ACACGCTGGG’1861 AGAAGAGTCT TACAAGGACA GCACTCTCAT TATGCAACTC CTAAGGGATA ACCTTACTCT‘1921 CTGGACTTCG GATGTTCAG G TCATTGCCCT ATCTCTCTCA CATAGACACA CGTACAGGCA’1981 CTTGAAGACC ATGTTTATAG GGACTTTGAT ATATTGATGT GACCAGTGCC TAACTGTATG‘2041 TGATGTTGGT TGTGATGCAG GACCAGTTAG ACGAGCCATA G其中斜体和下划线表示内含子序列。
全文摘要
从棉花中分离鉴定了一个新的14-3-3f基因(包括该基因全序列及其cDNA序列)，编码一个252个氨基酸、分子量为28.5KDa的14-3-3蛋白。棉花14-3-3f具有典型的14-3-3蛋白结构特证，包含9个保守的α螺旋，属于非ε类型。Gh14-3-3f基因的表达受到棉纤维发育时期的调节，且在10DPA棉花纤维中有较高表达。利用酵母(S.pobe)细胞过量表达Gh14-3-3f基因发现，该基因的过量表达明显增加了宿主细胞的长度，表明该基因对细胞的极性生长具有重要作用。利用酵母双杂交技术从10DPA棉花纤维cDNA文库中筛选获得一些与Gh14-3-3f相互作用的蛋白质，为揭示14-3-3蛋白在棉花纤维发育中的调控机制提供了新的实验资料。
文档编号C12N15/29GK101857868SQ20101014025
公开日2010年10月13日 申请日期2010年4月2日 优先权日2010年4月2日
发明者周颖, 张则婷, 李冰樱, 李学宝, 李扬 申请人:华中师范大学