专利名称：一种检测空气中白僵菌分生孢子的培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及微生物培养技术领域，具体涉及一种能够定性或定量检测空气中白僵 菌分生孢子的培养基。
背景技术：
白僵菌是重要的昆虫病原真菌，目前世界上发现死于真菌病的昆虫中，白僵病占 20%以上。资料显示白僵菌可寄生15个目700多种昆虫及螨类，寄主范围非常广泛，所以 在环境中白僵菌的分生孢子自然繁殖量大；另外，白僵菌也是一种重要的微生物农药，通过 人工繁殖释放后也会造成环境中白僵菌分生孢子的局部骤增和扩散。白僵菌的分生孢子形 成于昆虫体表，容易脱落，且数量多，重量轻，容易随风传播，由于空气中大量散布的白僵菌 分生孢子可污染桑园或直接扩散到蚕室内感染家蚕，导致近年来蚕桑主产区频繁出现蚕白 僵病大范围的爆发，给养蚕农户带来巨大的经济损失，严重制约着蚕桑产业的发展，因此监 测蚕区空气中白僵菌分生孢子污染和扩散情况，及时采取相应对策，对于预防蚕白僵病的 发生具有重要意义。在实验室条件下白僵菌通过接种的方法可以在许多培养基上培养，但室外环境复 杂，微生物种类多，需要一种能采集和培养白僵菌的选择性培养基，以检测空气中白僵菌分 生孢子的污染和扩散情况。目前用于监测空气中白僵菌分生孢子的方法尚未见报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种可采集和检测空气中白僵菌分生孢子的培养基，该培 养基能够定性或定量检测空气中白僵菌分生孢子，能有效抑制杂菌生长，易于观察菌落特 征，具有成本低，制作简单等特点。能应用于养蚕区域对白僵菌分生孢子污染和扩散的检 测。本发明提供的一种检测空气中白僵菌分生孢子的培养基，制备配方如下黄豆芽 100-250g,蔗糖 10-25g,链霉素 0. 1-0. 5g，孟加拉红 0. 1-0. 5g，琼脂 15_20g，加水至 1000mL, 调节pH值为8. 0-11.0。本发明提供的一种检测空气中白僵菌分生孢子的培养基，通过以下方法制备1)取新鲜的黄豆芽，洗净后晾干表面水分，称取配方所述质量，加水至990mL，煮 沸40分钟，双层纱布过滤；2)滤液中加入配方所述质量的蔗糖、孟加拉红、琼脂，煮沸后补足水量至990mL ；3)放入高压灭菌锅中，压强1. 035X10sPa，温度121°C 士 1°C，保持20_30分钟后， 自然冷却；4)灭菌后的培养基冷却至55°C 士5°C时，990mL培养基加入刚配制的相应质量百 分比浓度的链霉素溶液10mL，调节pH值为8. 0-11. 0。本发明提供的一种检测空气中白僵菌分生孢子的培养基的使用方法为，使用时将 培养基装入培养皿中，暴露在空气中10-60分钟后，25°C -30°c培养3天即可根据菌落情况检测出空气中白僵菌分生孢子污染和扩散情况。本发明提供的一种检测空气中白僵菌分生孢子的培养基主要优点如下1、本发明的培养基具有适合白僵菌生长的必需营养成份，在培养基中添加抗生素 和孟加拉红不仅能够抑制细菌和放线菌的生长，而且能够抑制真菌菌落扩散，从而避免了 某些气生性强的霉菌菌落的蔓延。同时提供的碱性条件可有效抑制非目的菌的生长。2、本发明的培养基加入孟加拉红后，整个培养基颜色呈淡粉红色，白僵菌菌落背 面呈鲜红色，易于鉴别。3、本发明的培养基配方无特殊原料，容易取得，制备简单，使用方便，无需专门的 技术培训，易于推广应用。
具体实施例方式
具体实施例方式实施例1:配方黄豆芽100g，蔗糖25g，链霉素0. 5g，孟加拉红0. 5g，琼脂20g，加水至 1000mL。制备方法1)取新鲜的黄豆芽，洗净后晾干表面水分，称取100g，加水至990mL，煮沸40分钟， 双层纱布过滤；2)滤液中加蔗糖25g，孟加拉红0. 5g，琼脂20g，煮沸后补足水量至990mL ；3)放入高压灭菌锅中，压强1. 035X10sPa，温度121 °C 士 1°C，保持20-30分钟，自 然冷却；4)灭菌后的培养基冷却至55°C 士5°C时，990mL培养基加入刚配制的质量百分比 浓度为5%的链霉素溶液10mL，调节最终pH值为8. 0。实施例2 配方黄豆芽150g，蔗糖15g，链霉素0. 3g，孟加拉红0. 3g，琼脂18g，加水至 1000mL。制备方法1)取新鲜的黄豆芽，洗净后晾干表面水分，称取150g，加水至990mL，煮沸40分钟， 双层纱布过滤；2)滤液中加蔗糖15g，孟加拉红0. 3g，琼脂18g，煮沸后补足水量至990mL ；3)放入高压灭菌锅中，压强1. 035X10sPa，温度121 °C 士 1°C，保持20-30分钟，自 然冷却；4)灭菌后的培养基冷却至55°C 士5°C时，990mL培养基加入刚配制的质量百分比 浓度为3%的链霉素溶液10mL，调节最终pH值为9. 0。实施例3:配方黄豆芽250g，蔗糖10g，链霉素0. lg，孟加拉红0. lg，琼脂15g，加水至 1000mL。制备方法1)取新鲜的黄豆芽，洗净后晾干表面水分，称取250g，加水至990mL，煮沸40分钟，双层纱布过滤；2)滤液中加蔗糖10g，孟加拉红0. lg，琼脂15g，煮沸后补足水量至990mL ；3)放入高压灭菌锅中，压强1. 035X10sPa，温度121 °C 士 1°C，保持20-30分钟，自 然冷却；4)灭菌后的培养基冷却至55°C 士5°C时，990mL培养基加入刚配制的质量百分比 浓度为的链霉素溶液10mL，调节最终pH值为11.0。
权利要求
一种检测空气中白僵菌分生孢子的培养基，其特征在于，制备配方如下黄豆芽100-250g，蔗糖10-25g，链霉素0.1-0.5g，孟加拉红0.1-0.5g，琼脂15-20g，加水至1000mL，调节pH值为8.0-11.0，通过以下方法制备1)取新鲜的黄豆芽，洗净后晾干表面水分，称取配方所述质量，加水至990mL，煮沸40分钟，双层纱布过滤；2)滤液中加入配方所述质量的蔗糖、孟加拉红、琼脂，煮沸后补足水量至990mL；3)放入高压灭菌锅中，压强1.035×105Pa，温度121℃±1℃，保持20-30分钟后，自然冷却；4)灭菌后的培养基冷却至55℃±5℃时，990mL培养基加入刚配制的相应质量百分比浓度的链霉素溶液10mL，调节pH值为8.0-11.0。
2.一种检测空气中白僵菌分生孢子的培养基的应用，将培养基装入培养皿中，暴露在 空气中10-60分钟后，25°C-30°C培养3天即可根据菌落情况检测出空气中白僵菌分生孢子 污染和扩散情况。
全文摘要
一种检测空气中白僵菌分生孢子的培养基，该培养基由黄豆芽、蔗糖、链霉素、孟加拉红、琼脂和水制成，pH值为8.0-11.0。该培养基能够定性或定量检测空气中白僵菌分生孢子，能有效抑制杂菌生长，易于观察菌落特征，具有成本低，制作简单等特点。能应用于养蚕区域对白僵菌分生孢子污染和扩散的检测。
文档编号C12Q1/06GK101851662SQ20101020638
公开日2010年10月6日 申请日期2010年6月23日 优先权日2010年6月23日
发明者万永继, 刘光英, 周围, 张冉, 金志雄, 高红 申请人:西南大学