专利名称：生产盾壳霉菌分生孢子的方法
技术领域：
本发明涉及一种生产盾壳霉菌分生孢子的方法。
背景技术：
盾壳霉是防治油菜菌核病的生防菌，可作为高效生物农药。盾壳霉应用于生产实 践的首要前提是得到大量的有活性的分生孢子。研究发现，盾壳霉在液体发酵条件下不产 生分生孢子，半固体条件下产孢量极少或不产孢；利用PDA平板固体培养盾壳霉可产生大 量的分生孢子，但此生产方式不便用于工业扩大培养生产。还有另外一种方法，就是使用小 麦、燕麦、大麦等作为基质培养盾壳霉，由于这些基质含有大量的碳、氮源，可使盾壳霉产生 大量分生孢子，且可直接用于工业发酵罐扩大培养生产，也相对简化了分生孢子制剂制作 的后续工序。但由于基质价格昂贵，培养成本高，不利于推广应用。
发明内容
为了克服现有技术中存在的上述问题，本发明提供了一种以农业废弃物为原料， 生产盾壳霉菌分生孢子的方法，本发明是这样实现的一种生产盾壳霉菌分生孢子的方法，包括如下步骤(1)基质准备将农业废弃物粉碎，使粉碎后废弃物颗粒长度不超过8mm，50°C烘 干机烘干至恒重；(2)按照基质与发酵液重量比为1 3至1 5的范围称取基质与发酵液，混合均 勻，放置3 6小时后，湿热灭菌1小时，冷却，制得基质混合物；(3)孢子悬浮液制备取活化培养后的盾壳霉，水洗分生孢子，稀释成孢子数量为 1 X 106个/ml的孢子悬浮液；(4)接种吸取1ml孢子悬浮液放入到步骤(2)制得的基质混合物中，震荡混勻， 放置在生化培养箱中培养；(5)培养控制培养条件为20°C、黑暗条件，每天振荡容器一次，震荡一周，一周以 后静止培养，总计培养20天 26天，即制得盾壳霉菌分生孢子。更进一步的方案是所述的农业废弃物为谷壳、玉米杆、油菜杆、稻草、玉米芯、小 麦杆、麸皮中的一种或几种。更进一步的方案是所述的发酵液为含有10g/L的蔗糖和10g/L的蛋白胨，以及 少量 KH2P04、MgS04、ZnS04、MnCl2、CuS04 的水溶液，pH 值为 6. 5，其中 KH2P04、MgS04、ZnS04、 MnCl2、CuS04 的总浓度为 lg/L。本发明采用农业废弃物制备盾壳霉菌分生孢子，经过测定，最终产孢量达到 1. 58X 109 6. OX 109个/克基质，与单一小麦发酵产孢量无显著差异。但本发明克服了 现有技术中成本高的缺陷，成本非常低，可以利用农业废弃物，且生产效果非常好。
具体实施例方式实施例一一种生产盾壳霉菌分生孢子的方法，包括如下步骤(1)基质准备将玉米杆粉碎，使粉碎后废弃物颗粒长度不超过8mm，50°C烘干机 烘干至恒重；(2)按照基质与发酵液重量比为1 4的标准称取基质与发酵液，混合均勻，放置 4小时后，湿热灭菌1小时，冷却，制得基质混合物；(3)孢子悬浮液制备取活化培养后的盾壳霉，水洗分生孢子，稀释成孢子数量为 1 X 106个/ml的孢子悬浮液；(4)接种吸取1ml孢子悬浮液放入到步骤(2)制得的基质混合物中，震荡混勻， 放置在生化培养箱中培养；(5)培养控制培养条件为20°C、黑暗条件，每天振荡容器一次，震荡一周，一周以 后静止培养，总计培养23天，即制得盾壳霉菌分生孢子。其中的发酵液为含有10g/L的蔗糖和10g/L的蛋白胨，以及少量KH2P04、MgS04、 ZnS04、MnCl2、CuS04 的水溶液，pH 值为 6. 5，其中 KH2P04、MgS04、ZnS04、MnCl2、CuS04 的总浓度 为 lg/Lo产孢量测定将附满盾壳霉孢子的培养基质倒入干净的容器中，加入少量水，用 小型粉碎搅拌机粉碎搅拌，洗脱附着在基质上的孢子，至基质成勻浆，用孔径63um的尼龙 布过滤，用清水反复清洗基质，至洗出的水中无或极少孢子为止，稀释孢子悬浮液至固定体 积，显微镜下血球计数板镜检计数，换算成每克基质产孢量。制得的孢子量为2. 3 X 109个/
克基质。实施例二所用的农业废弃物为麸皮，基质与发酵液重量比为1 5，放置时间为3小时，培养 时间为20天，其余与实施例一相同，制得的孢子量为5. 8X 109个/克基质。实施例三所用的农业废弃物为谷壳、稻草按1 1的比例混合，基质与发酵液重量比 为1 3，放置时间为6小时，培养时间为26天，其余与实施例一相同，制得的孢子量为 6.0父109个/克基质。
权利要求
一种生产盾壳霉菌分生孢子的方法，包括如下步骤(1)基质准备将农业废弃物粉碎，使粉碎后废弃物颗粒长度不超过8mm，50℃烘干机烘干至恒重；(2)按照基质与发酵液重量比为1∶3至1∶5的范围称取基质与发酵液，混合均匀，放置3～6小时后，湿热灭菌1小时，冷却，制得基质混合物；(3)孢子悬浮液制备取活化培养后的盾壳霉，水洗分生孢子，稀释成孢子数量为1×106个/ml的孢子悬浮液；(4)接种吸取1ml孢子悬浮液放入到步骤(2)制得的基质混合物中，震荡混匀，放置在生化培养箱中培养；(5)培养控制培养条件为20℃、黑暗条件，每天振荡容器一次，震荡一周，一周以后静止培养，总计培养20天～26天，即制得盾壳霉菌分生孢子。
2.根据权利要求1所述的生产盾壳霉菌分生孢子的方法，其特征在于所述的农业废 弃物为谷壳、玉米杆、油菜杆、稻草、玉米芯、小麦杆、麸皮中的一种或几种。
3.根据权利要求1或2所述的生产盾壳霉菌分生孢子的方法，其特征在于所述的发 酵液为含有10g/L的蔗糖和10g/L的蛋白胨，以及少量KH2P04、MgS04、ZnS04、MnCl2、CuS04的 水溶液，PH 值为 6. 5，其中 KH2P04、MgS04、ZnS04、MnCl2、CuS04 的总浓度为 lg/L。
全文摘要
本发明提供了一种以农业废弃物为原料，生产盾壳霉菌分生孢子的方法，包括如下步骤(1)将农业废弃物粉碎，烘干；(2)制备基质混合物；(3)制备孢子悬浮液；(4)接种；(5)培养。本发明采用农业废弃物制备盾壳霉菌分生孢子，经过测定，最终产孢量达到1.58×109～6.0×109个/克基质，与单一小麦发酵产孢量无显著差异。但本发明克服了现有技术中成本高的缺陷，成本非常低，可以利用农业废弃物，且生产效果非常好。
文档编号C12R1/645GK101851600SQ201010120300
公开日2010年10月6日 申请日期2010年3月9日 优先权日2010年3月9日
发明者姚永秀 申请人:成都趋元科技有限责任公司