专利名称：判定肺癌的淋巴结转移的装置和方法、以及控制系统的制作方法
技术领域：
本发明涉及判定肺癌的淋巴结转移的装置、判定肺癌的淋巴结转移的方法以及控制系统。
背景技术：
在肺癌的诊断中，淋巴结转移的有无成为用于功能保存手术的切除范围决定、用于决定手术后的化学疗法的有益信息。在大多数的医疗机构等中，上述淋巴结转移的有无的检查是通过用显微镜观察根据淋巴结组织制作的切片的组织诊断来进行的。但是，在组织诊断中，即使在淋巴结组织中实际上存在癌细胞时，在使用通过不包含癌细胞的切断面制作的切片的情况、淋巴结转移是微小转移的情况下，有时也无法得到正确的诊断结果。另外，在组织诊断中，根据所诊断的病理医生的熟练程度，有时在其诊断结果中产
生偏差。 因此，提出了根据分子标记的表达来检查肺癌的方法。例如，在Liqiang Xi ,et. al"A Combination of Molecular Markers Accurately Detects LymphNode Metastasis in Non Small Cell Lung Cancer Patients"Clin Cancer Res 2006 ； 12 (8) April 15,2006 p. 24844491中，作为肺癌的淋巴结转移的分子标记，记载有TACSTD1、CK19、CEA等。此处，公开了在淋巴结组织中，利用这些分子标记的表达水平越高，肺癌转移到淋巴结的可能性越高这样的现象，来检查肺癌有无转移到淋巴结的方法。但是，为了更高精度地检查肺癌有无转移到淋巴结，期望开发更进一步的分子标记、方法。另一方面，有分层蛋白(stratifin) (14-3-3 σ )这样的遗传基因的表达参与癌的抑制这样的报告。例如，在 Anne T. Ferguson ,et. al"High frequency of hypermethylation at the 14-3-3 σ locus leads to gene silencing in breast cancer'T1NAS May 23,2000vol. 97 no. 11 6049-6054中，公开了在乳癌的癌细胞中，与正常细胞相比，上述分层蛋白的mRNA的表达被抑制。另外，在Dan -juan Li,et. al “Identificating 14-3-3 sigma as a lymph node metastasis-related protein in human lung squamous carcinoma，，Cancer Letters， 2009vol. 27965-73中，报告了如果对肺癌的原发巢中的分层蛋白的蛋白质水平下的表达、 和转移淋巴结组织中的分层蛋白的蛋白质水平下的表达进行比较，则分层蛋白在肺癌的转移淋巴结组织中下降。
发明内容
本发明提供(1) 一种判定肺癌的淋巴结转移的装置，包括测定部，取得测定试剂中包含的分层蛋白的mRNA的表达量，所述测定试剂使用被
4怀疑为肺癌转移的淋巴结组织来调制出；判定部，在由所述测定部得到的分层蛋白的mRNA的表达量过剩的情况下，判定为肺癌转移到所述淋巴结组织；以及输出部，输出判定结果。(2)根据(1)所述的装置，其特征在于分层蛋白的mRNA的表达量是通过核酸放大法取得的。(3)根据⑵所述的装置，其特征在于核酸放大法是聚合酶连锁反应法、链置换反应法、连接酶连锁反应法、转录放大法中的某一个。(4)根据( 所述的装置，其特征在于分层蛋白的mRNA的表达量是基于通过核酸放大法得到的核酸放大反应的循环数的值。(5)根据(4)所述的装置，其特征在于判定部对核酸放大反应的循环数和规定的阈值进行比较，在循环数小于规定的阈值的情况下，判定为肺癌转移到所述淋巴结组织。(6)根据( 所述的装置，其特征在于判定部在核酸放大反应的循环数大于规定的阈值的情况下，进而判定为肺癌没有转移到所述淋巴结组织。(7)根据(2)所述的装置，其特征在于分层蛋白的mRNA的表达量是通过核酸放大法计算出的分层蛋白的mRNA的定量值。(8)根据(7)所述的装置，其特征在于判定部对所计算出的分层蛋白的mRNA的定量值和规定的阈值进行比较，在定量值大于规定的阈值的情况下，判定为肺癌转移到所述淋巴结组织。(9)根据(8)所述的装置，其特征在于判定部在定量值小于规定的阈值的情况下，进而判定为肺癌没有转移到所述淋巴结组织。(10)根据(1)所述的装置，其特征在于淋巴结组织是包括所属于肺的淋巴结的组织。(11)根据(10)所述的装置，其特征在于所属于肺的淋巴结是纵隔淋巴结、肺门淋巴结以及肺内淋巴结中的某一个。(12)根据(11)所述的装置，其特征在于纵隔淋巴结是上纵隔淋巴结、气管旁淋巴结、气管前淋巴结、前纵隔淋巴结、气管后淋巴结、气管支气管淋巴结、大动脉下淋巴结、 大动脉旁淋巴结、气管分支部淋巴结、食道旁淋巴结、肺韧带淋巴结中的某一个。(13)根据(11)所述的装置，其特征在于肺门淋巴结是主支气管周围淋巴结、叶支气管间淋巴结、叶支气管周围淋巴结中的某一个。(14)根据(11)所述的装置，其特征在于肺门淋巴结是区域支气管周围淋巴结、 亚区域支气管周围淋巴结中的某一个。(15)根据(1)所述的装置，其特征在于使用淋巴结组织而调制出的测定试剂是将被怀疑为肺癌转移的组织在预处理液中搅勻而得到的试剂。(16)根据(15)所述的装置，其特征在于预处理液的pH是2. 5 5. 0。(17)根据(1 所述的装置，其特征在于预处理液包含缓冲液和界面活性剂。(18) 一种判定肺癌的淋巴结转移的方法，其特征在于取得测定试剂中包含的分层蛋白的mRNA的表达量，所述测定试剂使用被怀疑为淋巴结转移的肺癌患者的淋巴结组织来调制出；
在所取得的分层蛋白的mRNA的表达量过剩的情况下，判定为肺癌转移到所述淋巴结组织。(19)根据(18)所述的方法，其特征在于分层蛋白的mRNA的表达量是基于通过核酸放大法得到的核酸放大反应的循环数的值。(20)根据(19)所述的方法，其特征在于对核酸放大反应的循环数和规定的阈值进行比较，在循环数小于规定的阈值的情况下，判定为肺癌转移到所述淋巴结组织。(21)根据00)所述的方法，其特征在于在核酸放大反应的循环数大于规定的阈值的情况下，进而判定为肺癌没有转移到所述淋巴结组织。(22)根据(18)所述的方法，其特征在于分层蛋白的mRNA的表达量是通过核酸放大法计算出的分层蛋白的mRNA的定量值。(23)根据02)所述的方法，其特征在于对所计算出的分层蛋白的mRNA的定量值和规定的阈值进行比较，在定量值大于规定的阈值的情况下，判定为肺癌转移到所述淋巴结组织。(24)根据所述的方法，其特征在于在定量值小于规定的阈值的情况下，进而判定为肺癌没有转移到所述淋巴结组织。05) —种控制系统，包括测定单元，取得测定试剂中包含的分层蛋白的mRNA的表达量，所述测定试剂使用被怀疑为肺癌转移的淋巴结组织来调制出；判定单元，在由所述测定单元得到的分层蛋白的mRNA的表达量过剩的情况下，判定为肺癌转移到所述淋巴结组织；以及输出单元，输出判定结果。(26)根据05)所述的控制系统，其特征在于分层蛋白的mRNA的表达量是基于通过核酸放大法得到的核酸放大反应的循环数的值。(27)根据06)所述的控制系统，其特征在于判定单元对核酸放大反应的循环数和规定的阈值进行比较，在循环数小于规定的阈值的情况下，判定为肺癌转移到所述淋巴
结组织。(28)根据(XT)所述的控制系统，其特征在于判定单元在核酸放大反应的循环数大于规定的阈值的情况下，进而判定为肺癌没有转移到所述淋巴结组织。(29)根据0 所述的控制系统，其特征在于分层蛋白的mRNA的表达量是通过核酸放大法计算出的分层蛋白的mRNA的定量值。(30)根据09)所述的控制系统，其特征在于判定单元对所计算出的分层蛋白的 mRNA的定量值和规定的阈值进行比较，在定量值大于规定的阈值的情况下，判定为肺癌转移到所述淋巴结组织。(31)根据(30)所述的控制系统，其特征在于判定单元在定量值小于规定的阈值的情况下，进而判定为肺癌没有转移到所述淋巴结组织。根据上述(1)的装置，可以更高精度地检查肺癌有无转移到淋巴结。根据上述 (18)的方法，可以更高精度地检查肺癌有无转移到淋巴结。根据上述0 的控制系统，可以更高精度地检查肺癌有无转移到淋巴结。
图1是执行肺癌的淋巴结转移的判定的判定装置的一个实施方式。图2是示出肺癌的淋巴结转移判定的一个例子的流程图。图3是示出在试验例1中淋巴结转移的有无以及标记的种类与PCR循环数的关系的曲线。
具体实施例方式以往，认为在癌的转移淋巴结组织中，分层蛋白的表达量降低。但是，本发明者通过调查在组织学上肺癌的转移被认可的淋巴结(以下，还称为“转移阳性淋巴结”)以及在组织学上肺癌的转移没有被认可的淋巴结(以下，还称为“转移阴性淋巴结”)各自中的 mRNA的表达分布，发现转移阳性淋巴结中的分层蛋白的mRNA量比转移阴性淋巴结中的分层蛋白的mRNA量多，从而完成了本发明。[1.肺癌的淋巴结转移的判定方法]本发明的肺癌的淋巴结转移的判定方法(以下，还简称为“判定方法”)的特征在于取得从肺癌患者提取出的、使用被怀疑为肺癌的转移的淋巴结组织而调制出的测定试剂中包含的、分层蛋白的mRNA的表达量，在所取得的分层蛋白的mRNA的表达量过剩的情况下，判定为肺癌转移到上述淋巴结组织。分层蛋白是具有使细胞周期以G2/M期停止的功能的蛋白质。分层蛋白还被称为 14-3-3 σ。对于分层蛋白的mRNA的碱基排列，作为GenBank登记编号NM_006142，可以从由美国生物工学信息中心(National Centerfor Biotechnology Information)提供的数据库GenBank得到。另外，上述GenBank登记编号是2010年3月14日时的最新版本下的编号。[1-1.表达量的取得]在本发明的判定方法中，首先，取得从肺癌患者提取出的、使用被怀疑为肺癌的转移的淋巴结组织而调制出的测定试剂中包含的、分层蛋白的mRNA的表达量。上述测定试剂是适合于分层蛋白的mRNA的表达量的测定的试剂即可。例如，可以通过将淋巴结组织中包含的细胞与适合的预处理液混合，对所得到的混合物中的细胞，实施化学处理和/或物理处理，或者使用市面销售的RNA抽出配套元件从淋巴结组织中包含的细胞抽出RNA等，来得到上述测定试剂。上述测定试剂的调制优选通过使用预处理液的方法来进行。其理由在于可以简便并且短时间地调制测定试剂。作为上述淋巴结组织，只要是包含属于肺的淋巴结的组织即可。作为上述淋巴结， 例如，可以举出上纵隔淋巴结、气管旁淋巴结、气管前淋巴结、前纵隔淋巴结、气管后淋巴结、气管支气管淋巴结、大动脉下淋巴结、大动脉旁淋巴结、气管分支部淋巴结、食道旁淋巴结、肺韧带淋巴结等纵隔淋巴结；主支气管周围淋巴结、叶支气管间淋巴结、叶支气管周围淋巴结等肺门淋巴结；区域支气管周围淋巴结、亚区域支气管周围淋巴结等肺内淋巴结等。 这些淋巴结可以根据成为本实施方式的判定方法的应用对象的患者的状态等而适宜选择。预处理液是使淋巴结组织中包含的细胞中的mRNA可溶化的溶液即可。上述预处理液根据抑制RNA的分解的观点，优选具有酸性pH，优选具有pH2. 5 pH5. 0，更优选为具有PH3.0 pH4.0。作为上述预处理液，例如，可以举出包含缓冲液等的溶液等。作为上述缓冲液，例如，可以举出甘氨酸盐酸缓冲液等。另外，预处理液中的缓冲液的浓度只要是可以将预处理液的PH保持为酸性pH的范围即可，可以适宜地设定。另外，预处理液根据提高从淋巴结组织中包含的细胞抽出mRNA的抽出效率的观点，优选还具有界面活性剂。上述界面活性剂只要是可以使淋巴结组织中包含的细胞的细胞膜、核膜损伤，而易于抽出细胞中的核酸的界面活性剂，则没有特别限定。作为上述界面活性剂，例如，可以举出非离子性界面活性剂等。在上述非离子性界面活性剂中，根据提高从淋巴结组织中包含的细胞抽出mRNA的抽出效率的观点，优选聚氧乙烯类非离子性界面活性剂，更优选为用式(I)R1-R2- (CH2CH2O) -H (I)(在式中、R1表示碳数10 22的烃基、碳数10 22的烯基、碳数10 22的炔基或者碳数10 22的异辛基，R2表示氧原子或者亚苯基氧基，η表示8 120的整数)表示的聚氧乙烯类非离子性界面活性剂。作为上述聚氧乙烯类非离子性界面活性剂，没有特别限定，但例如，可以举出聚氧乙烯十二烷基醚、聚氧乙烯十六烷基醚、聚氧乙烯油醇醚、聚氧乙烯十四酸醚、聚氧乙烯十八烷基醚、聚氧乙烯壬基酚醚、聚氧乙烯苯基异辛醚等。作为上述聚氧乙烯类非离子性界面活性剂，可以使用聚氧乙烯十二烷基醚(氧乙烯基的附加模数 23) (Sigma-Aldrich公司制、商品名Brij35)等。预处理液中的界面活性剂的浓度根据从淋巴结组织中包含的细胞充分地抽出mRNA的观点，优选为0. 1 6体积％，更优选为1 5体积％。另外，在通过后述核酸放大法取得上述分层蛋白的mRNA的表达量的情况下，预处理液优选含有二甲基亚砜(以下，称为“DMS0”)。由此，可以抑制核酸放大法中使用的核酸合成酶的活性降低。而且，即使在阻碍上述核酸合成酶的反应的物质(阻碍物质)包含于淋巴结组织中的情况下，也可以有效地降低该阻碍物质的影响。预处理液中的DMSO的浓度根据充分地发挥上述效果的观点，优选为1 50体积％，更优选为5 30体积％，进一步优选为10 25体积％。在调制测定试剂时使用的预处理液的量根据预处理液的种类等而不同，所以可以根据预处理液的种类等适宜设定。通常，在调制测定试剂时使用的预处理液的量在Img淋巴结组织时是0. 0001 0. 0005mL。淋巴结组织中包含的细胞和预处理液的混合可以通过例如在室温下使淋巴结组织中包含的细胞和预处理液搅拌来执行。作为上述化学处理，例如，可以举出利用界面活性剂等的细胞的可溶化处理、利用氯仿等有机溶媒的RNA的分离处理等。另外，作为上述物理处理，可以举出使用了均化器等的破碎处理、冻结融解处理等。通过上述化学处理和/或物理处理得到的产品也可以根据需要，通过离心分离、过滤器过滤、柱层析等精炼方法精炼。分层蛋白的mRNA的表达量的取得例如可以通过核酸放大法、使用了配置了与分层蛋白的mRNA对应的核酸的DNA微阵列的DNA微阵列杂化法等公知的方法来进行。另外，在本说明书中，通过上述核酸放大法进行的情况下的“分层蛋白的mRNA的表达量”只要是与分层蛋白的mRNA的表达量相关的数据，则没有特别限定。分层蛋白的 mRNA的表达量是指，例如，基于放大后的mRNA的光学的测定值(例如，荧光强度、浊度、吸光度等)、上述光学的测定值达到了规定的基准值时的循环数或者时间、由于核酸放大反应引起的光学的测定值的变化量达到了规定的基准值时的循环数或者时间、根据上述光学的测定值、循环数等和检量线计算出的mRNA的定量值(表达量)等。另外，在本说明书中，通过使用上述DNA片的方法进行的情况下的“与分层蛋白的mRNA的表达量相关的数据”是指， 例如，基于与DNA片上的上述核酸杂交的分层蛋白的mRNA的荧光强度、根据上述荧光强度和检量线计算出的mRNA的定量值(表达量)等。由于核酸放大反应引起的光学的测定值的变化量是指，核酸放大反应的1个循环的反应前后的光学的测定值的变化量。此处，上述规定的基准值可以根据上述数据的种类适宜设定。例如，在上述数据是循环数的情况下，可以将核酸放大反应呈现指数增殖时的荧光强度的变化量设定为基准值。由于与分层蛋白的mRNA的表达量相关的数据等的取得容易，所以也可以通过核酸放大法取得上述分层蛋白的mRNA的表达量。上述核酸放大法可以例如通过将包含测定试剂、用于对分层蛋白的mRNA、该mRNA 的一部分、与上述mRNA对应的核酸(例如，cDNA等)进行放大的引子(primary)对(或者引子组)、以及核酸合成酶的反应液维持为适合的反应条件下来进行。作为上述核酸放大法，例如，可以举出聚合酶连锁反应法、链置换反应法、连接酶连锁反应法、转录放大法等。作为上述聚合酶连锁反应法，例如，可以举出定量的 RT-PCR(Reverse Transcription PCR，逆转录-聚合酶链反应)法等。作为上述链置换反应法，例如，可以举出定量的RT-LAMP(Reverse Transcription LAMP，逆转录等温扩增)法 (例如，参照美国专利6410278号说明书等)等。作为转录放大法，例如，可以举出TAS法等。在它们中，由于上述数据的取得容易，所以优选为定量的RT-PCR法以及定量的RT-LAMP 法。作为上述定量的RT-PCR 法，可以举出 iTaciMan 法(“iTaciMan"是 Roche Molecular System公司的注册商标)、使用嵌入剂〔例如，商品名STORGreen(Molecular Probelnc. 制)〕的嵌入剂法等。在上述定量的RT-PCR法中，伴随核酸的放大而反应液的光学的状态变化，所以通过实时地测定上述反应液的光学的测定值，可以迅速、并且简便地取得上述表达量。在定量的RT-LAMP法中，伴随与分层蛋白的mRNA对应的cDNA的放大，生成针对反应液中包含的液体成分是不溶性的焦磷酸镁。因此，在定量的RT-LAMP法中，可以根据直至反应液的浊度或者吸光度达到规定的基准值为止的时间，计算上述与分层蛋白的mRNA的表达量相关的数据。上述引子对(或者引子组)中包含的引子根据分层蛋白的mRNA的碱基排列， 与核酸放大法的种类对应地设计。在核酸放大法是定量的RT-PCR法的情况下，作为上述引子对(或者引子组)没有特别限定，例如，可以举出由排列编号1所示的碱基排列 (5 ‘ -GCAGGCCGAACGCTATGA-3 ‘)所构成的正向引子、和排列编号2所示的碱基排列 (5' -GCAGGTTTCGCTCTTCGCA-3')所构成的反向引子构成的引子对等。由于上述反应液的光学的测定值的测定容易，所以优选通过标识物质来标识上述引子对(或者引子组)中包含的引子。作为上述标识物质，没有特别限定，但可以举出放射性同位体、荧光物质、配体、 色素等。核酸合成酶只要是与核酸放大法的种类对应的酶即可。另外，在本说明书中，上述核酸合成酶是指例如，RNA依赖性DNA聚合酶(以下，称为“逆转录酶” )、DNA依赖性DNA 聚合酶(以下，称为“DNA聚合酶”)、链置换型DNA聚合酶、连接酶等。在核酸放大法是定量的RT-PCR法的情况下，作为上述核酸合成酶使用逆转录酶以及DNA聚合酶。作为上述逆转录酶，例如，可以举出AMV逆转录酶、M-MLV逆转录酶等。另外，作为上述DNA聚合酶，可以举出I1aq DNA聚合酶、T4 DNA聚合酶、Bst DNA聚合酶等。另外，在定量的RT-PCR法中，作为上述核酸放大酶，也可以使用具有逆转录酶活性以及DNA合成活性这双方的酶。核酸放大法中的反应条件根据核酸放大法的种类、所使用的引子对的种类等而不同，所以无法一概决定。上述反应条件可以参照Molecular Cloning =A Laboratory Manual, 2nd ed.第2版〔Sambrook等、1989年发行〕等记载的方法，根据核酸放大法的种类、所使用的引子对的种类等适宜设定。[1-2.肺癌的转移判定]接下来，在所取得的分层蛋白的mRNA的表达量过剩的情况下，判定为肺癌转移到上述淋巴结组织。分层蛋白的mRNA的表达量过剩与否可以对与上述表达量相关的数据、和与上述数据的种类对应的阈值进行比较来表示。此处，“分层蛋白的mRNA的表达量过剩”是指例如，与表达量相关的数据大于与阈值对应的表达量。例如，意味着在上述数据是由于核酸放大反应引起的荧光强度的变化量达到了规定的基准值时的循环数的情况下，在“循环数 <阈值”时，分层蛋白的mRNA的表达量过剩。此时，可以判定为肺癌转移到上述淋巴结组织。另外，意味着在“循环数>阈值”时，分层蛋白的mRNA的表达量并未过剩。此时，可以判定为肺癌没有转移到上述淋巴结组织。另外，意味着在上述数据是上述mRNA的定量值(表达量)的情况下，在“mRNA的定量值(表达量)>阈值”时，分层蛋白的mRNA的表达量过剩。此时，可以判定为肺癌转移到上述淋巴结组织。另外，意味着在“mRNA的定量值(表达量)<阈值”时，分层蛋白的 mRNA的表达量并未过剩。此时，可以判定为肺癌没有转移到上述淋巴结组织。阈值可以根据上述与表达量相关的数据的种类，通过各种方法来设定。即，可以将阈值在经验上设定为表示可以分类成肺癌的转移被认可的淋巴结群和转移没有被认可的淋巴结群的规定的表达量的值。更具体而言，在与表达量相关的数据是循环数的情况下，可以针对在组织学上肺癌的转移被认可的多个淋巴结以及在组织学上肺癌的转移没有被认可的多个淋巴结分别取得循环数，将淋巴结转移被认可的淋巴结群和淋巴结转移没有被认可的淋巴结群分类为2个群那样的循环数设定为阈值。[2.肺癌的淋巴结转移判定装置]接下来，参照附图，作为适用于实施本发明的一个实施方式的判定方法的装置的一个例子，详细说明本发明的一个实施方式的肺癌的淋巴结转移判定装置(以下，还称为 “判定装置”)。另外，作为上述与mRNA的表达量相关的数据，本实施方式的判定装置使用荧光强度的变化量达到了规定的基准值时的循环数，比较该循环数和循环数的阈值来进行判定的
直ο[2-1.判定装置的结构]图1是示出本发明的一个实施方式的判定装置1的整体结构的框图。
本实施方式的判定装置1由核酸放大测定装置100、和与该核酸放大测定装置100 连接的信息处理装置200构成。核酸放大测定装置(测定部)100由可以进行定量的RT-PCR法等的PCR装置构成。 该核酸放大测定装置100是对分层蛋白的mRNA进行放大，并且对基于放大后的mRNA的荧光强度、和定量的RT-PCR法中的循环数进行测定的装置。在该核酸放大测定装置100上连接有信息处理装置(计算机)200。该信息处理装置200控制核酸放大测定装置100的动作，并且使用由该核酸放大测定装置100测定出的上述荧光强度的数据以及上述循环数的数据，判定淋巴结转移是否为阳性。信息处理装置200具备信息处理装置本体(判定部)210、将所需的数据输入到信息处理装置本体210的输入设备230、以及显示输入输出数据等的显示部(输出部)220。 在该信息处理装置200中，根据需要，包括外部记录介质M0。信息处理装置本体210具备CPU210a、R0M210b、RAM210c、硬盘210d、读出装置 210e、输入输出接口 210f、图像输出接口 210h、以及总线210i。在信息处理装置本体210内，CPU210a、R0M210b、RAM210c、硬盘210d、读出装置 210e、输入输出接口 210f以及图像输出接口 210h分别通过总线210i连接成可以发送接收数据。CPU210a可以执行R0M210b中存储的计算机程序以及RAM210c中载入的计算机程序。在R0M210b中，记录有由CPU2IOa执行的计算机程序以及用于CPU2IOa执行计算机程序的数据等。RAM210C用于读出R0M210b以及硬盘210d中记录的计算机程序。另夕卜，RAM210c 在执行这些计算机程序时，用作CPU210A的作业区域。在硬盘210d中，安装了操作系统(OS)、应用程序等用于使CPU210a执行的各种计算机程序以及该计算机程序的执行中使用的数据。在硬盘210d中安装的程序中，包括用于实现肺癌的淋巴结转移的判定方法的应用程序MOa以及控制核酸放大测定装置100的程序。另外，在硬盘210d中，作为用于实现肺癌的淋巴结转移的判定方法的程序的执行中使用的数据，存储有阈值等。读出装置210e由软盘驱动器、⑶-ROM驱动器、DVD-ROM驱动器等构成，可以读出外部记录介质240中记录的计算机程序或者数据。另外，应用程序MOa既可以记录在外部记录介质240中，也可以保存于设置在信息处理装置本体210内的R0M210b或者RAM210c中。另外，还可以采用CPU210a从外部记录介质240读出该应用程序MOa，将应用程序 MOa安装到硬盘210d中的结构。另外，在硬盘2IOd中，例如，安装有美国微软公司制造销售的Windows (注册商标) 等提供图形用户接口环境的操作系统。在以下的说明中，与上述判定相关的应用程序MOa 在该操作系统上动作。输入输出接口210f 例如由 USB、IEEE1394、RS-232C 等串行接口、SCSI、IDE、 IEEE1284等并行接口、以及包括D/A变换器、A/D变换器等的模拟接口等构成。对输入输出接口 210f，连接有键盘、鼠标等输入设备230。另外，在输入输出接口 210f上连接有核酸放大测定装置100。由此，信息处理装置本体210可以经由输入输出接口 210f与核酸放大测定装置100进行数据的发送接收。
图像输出接口 210h与由LCD、CRT等构成的显示部220连接，将与从CPU210a提供的图像数据对应的影像信号输出到显示部220。显示部220按照所输入的影像信号显示图像(画面)。另外，显示部220显示从后述CPU210a提供的判定结果。此处，使用图2，说明通过上述判定装置1实施的应用程序MOa的动作流程的一个例子。首先，CPU210a从核酸放大装置100经由输入输出接口 210f，接收核酸放大反应时的荧光强度的变化量的数据以及循环数的数据(步骤Si)。接下来，在步骤S2中，CPU210a根据核酸放大反应时的荧光强度的变化量的数据以及循环数的数据，计算核酸放大反应时的荧光强度的变化量达到基准值0. 08时的循环数(循环数A)。接下来，在步骤S3中，CPU210a对预先作为应用程序MOa的数据而存储于硬盘 210d中的循环数的阈值(31. 4循环)的数据、和上述循环数A的数据进行比较。在本步骤 S3中，针对上述循环数A是否小于循环数的阈值(31. 4循环)，进行比较判断。在上述循环数A小于31.4循环的情况下(“是”)，CPU210a使处理进入到步骤 S4-1。另一方面，在循环数A不是小于31. 4循环的循环数的情况下(“否”)，CPU210a使处理进入到步骤S4-2。在步骤S4-1中，CPU210a判定为肺癌转移到淋巴结组织(淋巴结转移阳性)。另外，在步骤S4-2中，CPU210a判定为肺癌没有转移到淋巴结组织(淋巴结转移阴性)。之后，在步骤S5中，CPUl IOa将上述判定结果储存到RAM2IOc中，并且经由图像输出接口 210h，输出到显示部220。另外，在本实施方式中，对于核酸放大反应时的荧光强度的变化量的数据以及循环数的数据，从核酸放大测定装置100经由输入输出接口 210f而取得，但不限于此，也可以通过输入设备230输入核酸放大反应时的荧光强度的变化量的数据以及循环数的数据， CPU210a根据这些输入的值计算并取得核酸放大反应时的荧光强度的变化量达到了基准值时的循环数(循环数A)。另外，核酸放大反应时的荧光强度的变化量是指，例如核酸放大反应的1个循环的反应前后的荧光强度的变化量。另外，在本实施方式中，对于核酸放大反应时的荧光强度的变化量达到了基准值时的循环数(循环数A)，CPU210a根据核酸放大反应时的荧光强度的变化量的数据以及循环数的数据而计算并取得，但不限于此，也可以通过输入设备230输入并取得核酸放大反应时的荧光强度的变化量达到了基准值时的循环数(循环数A)。另外，在本实施方式中，CPU210a根据核酸放大反应时的荧光强度的变化量的数据以及循环数的数据，计算出核酸放大反应时的荧光强度的变化量达到了基准值时的循环数，但不限于此，也可以根据荧光强度、循环数等和检量线而计算分层蛋白的mRNA的定量值。在该情况下，在步骤S3中，可以设成在上述定量值大于规定的阈值的情况下使处理进入到步骤S4-1，在定量值小于规定的阈值的情况下使处理进入到步骤S4-2。实施例以下，根据实施例详细说明本发明，但本发明不限于这些。(调制例1)使用在组织学上肺癌的转移被认可的15个淋巴结〔阳性检测体(转移阳性淋巴结)1 15〕以及在组织学上肺癌的转移没有被认可的20个淋巴结〔阴性检测体(转移阴性淋巴结)1 20〕，如下所述调制了测定试剂。表1示出阳性检测体1 15各自的淋巴结的部位以及名称，表2示出阴性检测体1 20各自的淋巴结的部位以及名称。
表1
权利要求
1.一种判定肺癌的淋巴结转移的装置，包括测定部，取得测定试剂中包含的分层蛋白的mRNA的表达量，所述测定试剂使用被怀疑为肺癌转移的淋巴结组织来调制出；判定部，在由所述测定部得到的分层蛋白的mRNA的表达量过剩的情况下，判定为肺癌转移到所述淋巴结组织；以及输出部，输出判定结果。
2.根据权利要求1所述的装置，其特征在于分层蛋白的mRNA的表达量是通过核酸放大法取得的。
3.根据权利要求2所述的装置，其特征在于核酸放大法是聚合酶连锁反应法、链置换反应法、连接酶连锁反应法、转录放大法中的某一个。
4.根据权利要求2所述的装置，其特征在于分层蛋白的mRNA的表达量是基于通过核酸放大法得到的核酸放大反应的循环数的值。
5.根据权利要求4所述的装置，其特征在于判定部对核酸放大反应的循环数和规定的阈值进行比较，在循环数小于规定的阈值的情况下，判定为肺癌转移到所述淋巴结组织。
6.根据权利要求5所述的装置，其特征在于判定部在核酸放大反应的循环数大于规定的阈值的情况下，进而判定为肺癌没有转移到所述淋巴结组织。
7.根据权利要求2所述的装置，其特征在于分层蛋白的mRNA的表达量是通过核酸放大法计算出的分层蛋白的mRNA的定量值。
8.根据权利要求7所述的装置，其特征在于判定部对所计算出的分层蛋白的mRNA的定量值和规定的阈值进行比较，在定量值大于规定的阈值的情况下，判定为肺癌转移到所述淋巴结组织。
9.根据权利要求8所述的装置，其特征在于判定部在定量值小于规定的阈值的情况下，进而判定为肺癌没有转移到所述淋巴结组织。
10.根据权利要求1所述的装置，其特征在于淋巴结组织是包括所属于肺的淋巴结的组织。
11.根据权利要求10所述的装置，其特征在于所属于肺的淋巴结是纵隔淋巴结、肺门淋巴结以及肺内淋巴结中的某一个。
12.根据权利要求11所述的装置，其特征在于纵隔淋巴结是上纵隔淋巴结、气管旁淋巴结、气管前淋巴结、前纵隔淋巴结、气管后淋巴结、气管支气管淋巴结、大动脉下淋巴结、 大动脉旁淋巴结、气管分支部淋巴结、食道旁淋巴结、肺韧带淋巴结中的某一个。
13.根据权利要求11所述的装置，其特征在于肺门淋巴结是主支气管周围淋巴结、叶支气管间淋巴结、叶支气管周围淋巴结中的某一个。
14.根据权利要求11所述的装置，其特征在于肺门淋巴结是区域支气管周围淋巴结、 亚区域支气管周围淋巴结中的某一个。
15.根据权利要求1所述的装置，其特征在于使用淋巴结组织而调制出的测定试剂是将被怀疑为肺癌转移的组织在预处理液中搅勻而得到的试剂。
16.根据权利要求15所述的装置，其特征在于预处理液的pH是2.5 5. 0。
17.根据权利要求15所述的装置，其特征在于预处理液包含缓冲液和界面活性剂。
18.一种判定肺癌的淋巴结转移的方法，包括取得测定试剂中包含的分层蛋白的mRNA的表达量，所述测定试剂使用被怀疑为淋巴结转移的肺癌患者的淋巴结组织来调制出；在所取得的分层蛋白的mRNA的表达量过剩的情况下，判定为肺癌转移到所述淋巴结组织。
19.根据权利要求18所述的方法，其特征在于分层蛋白的mRNA的表达量是基于通过核酸放大法得到的核酸放大反应的循环数的值。
20.根据权利要求19所述的方法，其特征在于对核酸放大反应的循环数和规定的阈值进行比较，在循环数小于规定的阈值的情况下，判定为肺癌转移到所述淋巴结组织。
21.根据权利要求20所述的方法，其特征在于在核酸放大反应的循环数大于规定的阈值的情况下，进而判定为肺癌没有转移到所述淋巴结组织。
22.根据权利要求18所述的方法，其特征在于分层蛋白的mRNA的表达量是通过核酸放大法计算出的分层蛋白的mRNA的定量值。
23.根据权利要求22所述的方法，其特征在于对所计算出的分层蛋白的mRNA的定量值和规定的阈值进行比较，在定量值大于规定的阈值的情况下，判定为肺癌转移到所述淋巴结组织。
24.根据权利要求23所述的方法，其特征在于在定量值小于规定的阈值的情况下，进而判定为肺癌没有转移到所述淋巴结组织。
25.一种控制系统，包括测定单元，取得测定试剂中包含的分层蛋白的mRNA的表达量，所述测定试剂使用被怀疑为肺癌转移的淋巴结组织来调制出；判定单元，在由所述测定单元得到的分层蛋白的mRNA的表达量过剩的情况下，判定为肺癌转移到所述淋巴结组织；以及输出单元，输出判定结果。
26.根据权利要求25所述的控制系统，其特征在于分层蛋白的mRNA的表达量是基于通过核酸放大法得到的核酸放大反应的循环数的值。
27.根据权利要求沈所述的控制系统，其特征在于判定单元对核酸放大反应的循环数和规定的阈值进行比较，在循环数小于规定的阈值的情况下，判定为肺癌转移到所述淋巴结组织。
28.根据权利要求27所述的控制系统，其特征在于判定单元在核酸放大反应的循环数大于规定的阈值的情况下，进而判定为肺癌没有转移到所述淋巴结组织。
29.根据权利要求25所述的控制系统，其特征在于分层蛋白的mRNA的表达量是通过核酸放大法计算出的分层蛋白的mRNA的定量值。
30.根据权利要求四所述的控制系统，其特征在于判定单元对所计算出的分层蛋白的mRNA的定量值和规定的阈值进行比较，在定量值大于规定的阈值的情况下，判定为肺癌转移到所述淋巴结组织。
31.根据权利要求30所述的控制系统，其特征在于判定单元在定量值小于规定的阈值的情况下，进而判定为肺癌没有转移到所述淋巴结组织。
全文摘要
本发明提供一种判定肺癌的淋巴结转移的装置，其特征在于，包括测定部，取得测定试剂中包含的分层蛋白的mRNA的表达量，所述测定试剂使用被怀疑为肺癌转移的淋巴结组织来调制出；判定部，在由所述测定部得到的分层蛋白的mRNA的表达量过剩的情况下，判定为肺癌转移到所述淋巴结组织；以及输出部，输出判定结果。
文档编号C12M1/36GK102286370SQ20111016021
公开日2011年12月21日 申请日期2011年6月15日 优先权日2010年6月15日
发明者中林一树, 吉田雄一郎, 小林雅树, 檜山佳代 申请人:希森美康株式会社