专利名称：治疗眼部疾病的方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗需要的受试者的眼部障碍的无创伤性方法，包括向所需受试者眼睛表面局部施用药物组合物的步骤，所述药物组合物包含与受试者视网膜中视网膜神经节细胞缺失相关的目标基因的治疗型寡核苷酸。此外，本发明涉及一种提高患有眼部疾病、障碍或损伤的受试者视网膜神经节细胞存活的无创伤性方法。
背景技术：
向视网膜组织传输核酸化合物，特别是向视网膜神经节细胞是一个很大的给药挑战。迄今为止，滴眼剂被认为主要用于治疗眼前段疾病是有效的，就是因为其已经表明，核酸不通过角膜，且不充足的药物浓度达到眼后段组织(reviewed in del Amo andUrtti,2008. Drug Discov Today 13 (3/4):135-143;Fattal and Bochot, 2006. Adv DrugDel Rev 56:1203-1223)。视网膜神经节细胞(RGC)是一种靠近眼睛视网膜内表面位置的神经细胞。视网膜神经节细胞由感光细胞接收视觉信息，并统一传送视网膜视觉信息至大脑中的几个区域。此外，同时仍然需要有抑制受试者视网膜神经节细胞缺失的无创伤性方法。各种眼部疾病和障碍是以视网膜神经节细胞(RGC)死亡为特征。因此，仍然需要有一种抑制患有眼部疾病、眼部障碍或眼部损伤或以存在感染眼部疾病、眼部障碍或眼部损伤的风险为特征和/或以视网膜神经节细胞(RGC)变性或死亡介导的受试者视网膜神经节细胞(RGC)缺失的无创伤性方法。发明概述本发明涉及一种与视网膜神经节细胞(RGC)变性或死亡相关的眼部疾病、眼部障碍或眼部损伤的无创伤性治疗方法及其使用的组合物。本发明的方法包括向受试者眼睛表面局部施用可用于提高受试者视网膜神经节细胞存活的治疗型寡核苷酸组合物。迄今为止，寡核苷酸已通过系统传输或玻璃体内注射，与有害副作用和患者依从性差相关的方法分别传输到眼部视网膜组织。本发明提供了包含寡核苷酸的局部眼科药物组合物，及其用于下调与受试者视网膜的视网膜神经节细胞缺失相关的目标基因表达的无创伤性方法，以挽救视网膜神经节细胞的凋亡并治疗眼部障碍。因此，一方面，本发明提供一种向患有眼部疾病、眼部障碍或眼部损伤的受试者视网膜组织传输寡核苷酸的无创伤性方法，其中包括向受试者眼睛表面局部施用包含寡核苷酸的眼科组合物。另一方面，本发明提供一种向患有眼部障碍的受试者视网膜神经节细胞传输寡核苷酸的无创伤性方法，其中包括向受试者眼睛表面局部施用包含寡核苷酸的眼科组合物。另一方面，本发明提供了一种减弱与患有眼部疾病、眼部障碍或眼部损伤的受试者视网膜的视网膜神经节细胞缺失相关的目标基因表达的方法，其中包括向受试者眼睛表面局部(无创伤性)施用药物组合物，所述药物组合物包含目标基因的mRNA产物的至少一种寡核苷酸，以一定用量经过一段时间能有效减弱受试者视网膜基因的表达。
另一方面，本发明提供一种治疗受试者患有视网膜神经节细胞缺失或视网膜神经节细胞损伤的方法，并提供神经保护剂给患有或者存在感染眼部疾病、眼部障碍或眼部损伤风险的受试者。该方法包括向受试者眼睛表面局部施用眼科药物组合物，所述眼科药物组合物包括受试者视网膜目标基因靶向的至少一种寡核苷酸，以一定用量经过一段时间能有效抑制视网膜神经节细胞缺失或视网膜神经节细胞损伤。在不同实施例中，眼科药物组合物被配制为霜、泡沫、膏、软膏、乳剂、包括滴眼剂、凝胶、喷雾、悬浮液、微乳液、微球、微囊剂、纳米球、纳米粒子、脂质囊泡、脂质体、聚合物囊泡、眼罩或隐形眼镜的液体溶液。在一些实施例中，药物组合物被配制为滴眼剂。在优选实施例中，向眼睛施用眼科组合物，例如，是通过滴眼剂滴注或通过施用薄雾。在某些实施例中，至少一种目标眼部mRNA基因是选自任一 SEQ ID N0:l_58所述mRNA多核苷酸。在某些实施例中，至少一种目标基因是选自被转录为任一 SEQ ID NO: 1-58所示mRNA多核苷酸的基因。在一些实施例中，至少一种寡核苷酸是选自化学修饰的siRNA、未修饰的RNA、反义、核酶、miRNA和shRNA。在优选实施例中，至少一种寡核苷酸是化学修饰的siRNA。在一些实施例中，siRNA正义和反义寡核苷酸均是选自显示于表B1-B36中的正义和相应的反义寡核苷酸对，如SEQ ID NO:59-33，596所述。在一些实施例中，眼部障碍、疾病或损伤是选自青光眼、干眼症、糖尿病视网膜病变(DR)、糖尿病性黄斑水肿(DME)或老年性黄斑变性(AMD)。在其他实施例中，眼部障碍、疾病或损伤是视神经炎、视网膜中央静脉阻塞、视网膜分枝静脉阻塞(BRV0)。在进一步实施例中，眼部障碍、疾病或损伤是色素性视网膜炎(RP)、缺血性视神经病变或视神经损伤。在进一步的实施例中，眼部障碍、疾病或损伤是早产儿视网膜神经节的视网膜病变(R0P)、黄斑变性、遗传性视神经病变、代谢性视神经病变，以及由于毒剂或药物不良反应或维生素缺乏症引起的视神经病变。在另一个实施例中，该障碍是与肿瘤疾病相关的视力丧失。在不同实施例中，至少一种siRNA化合物被传输到受试者眼睛作为液体溶液，其中包括滴眼剂。在不同实施例中，本发明提供了一种减弱与患有眼部疾病、障碍或损伤的受试者的视网膜神经节细胞缺失相关的目标眼部基因表达的方法，其中包括向受试者眼睛表面局部施用以滴眼剂为配方的眼科药物组合物。在不同实施例中，目标眼部mRNA的表达在患有眼部疾病、障碍或损伤的受试者视网膜眼部细胞中减弱。在不同实施例中，眼部细胞包括但不仅限于泪腺腺泡细胞、泪腺导管细胞、视网膜神经节细胞(RGC)、视网膜色素上皮(RPE)细胞、脉络膜细胞、角膜细胞、睫状突细胞或小梁网细胞或其组合。本发明提供了一种抑制受试者视网膜神经节细胞缺失的方法，其中包括无创伤性地向受试者眼睛表面施用眼科组合物，所述眼科组合物包括至少一种siRNA的治疗有效量，所述siRNA下调与受试者视网膜的视网膜神经节细胞缺失相关的目标基因表达，从而抑制视网膜神经节细胞的丧失。在某些实施例中，两种或多种目标基因根据本发明方法被下调。至少一种与受试者视网膜的视网膜神经节细胞缺失相关的目标基因(眼部mRNA)的减弱表达赋予眼部神经保护特性。在不同实施例中，至少一种眼部目标基因是选自表Al至A4的列表，如SEQ ID NO: 1-58所述。在一个实施例中，所述眼部障碍是青光眼。因此，本发明提供了一种抑制患有青光眼受试者的视网膜神经节细胞缺失的方法，其中包括局部(无创伤性)向受试者眼睛表面施用眼科组合物，所述眼科组合物包括包括至少一种siRNA的治疗有效量，所述siRNA下调与 受试者视网膜的视网膜神经节细胞缺失相关的目标基因表达，从而抑制受试者眼睛视网膜神经节细胞的缺失。在优选实施例中，siRNA是化学修饰的。在一些实施例中，化学修饰的siRNA减弱基因在受试者眼睛视网膜(目标眼部mRNA)的表达。在其他实施例中，化学修饰的siRNA减弱目标mRNA在受试者眼睛视神经中的表达。在某些实施例中，减弱与受试者视网膜神经节细胞缺失相关的至少一种目标基因的表达是青光眼的有效治疗方法。在某些实施例中，至少一种目标基因是选自表Al JBSEQ ID NO: 1-35所述。在某些优选实施例中，该目标基因是选自 CASP2(SEQ ID NO: 1-2) ,ASPPl (SEQ ID NO: 4)、TP53BP2 (SEQ ID NO:6-7),BNIP3 (SEQ ID NO: 12)，RTP801L (SEQ ID NO: 14)、ACHE (SEQ ID NO: 19-20)、ADRBl (SEQ IDN0:21)和CAPNSl (SEQ ID NO: 28-29)。在不同实施例中，该基因如SEQ ID N0:l_2所述。在一些实施例中，siRNA正义和反义链均是选自SEQ ID NO:8515-9516所述的寡核苷酸序列对。在另一个实施例中，所述眼部障碍是干眼症。因此，本发明提供了一种抑制患有干眼症受试者的视网膜神经节细胞缺失的方法，所述方法包括局部(无创伤性)向受试者眼睛表面施用眼科组合物，所述眼科组合物包括至少一种siRNA的治疗有效量，所述siRNA下调与受试者视网膜的视网膜神经节细胞缺失相关的目标基因(目标眼部mRNA)表达，从而抑制受试者眼睛视网膜神经节细胞的缺失。在优选实施例中，siRNA是化学修饰的。在某些实施例中，减弱与受试者视网膜神经节细胞缺失相关的至少一种目标基因的表达是干眼症的有效治疗方法。在某些实施例中，减弱与受试者视网膜神经节细胞缺失相关的至少一种目标基因的表达对减轻干眼症症状有效。在某些实施例中，至少一种目标基因(目标眼部mRNA)在受试者眼睛视网膜神经节细胞中表达。在某些实施例中，至少一种目标基因(目标眼部mRNA)在受试者眼睛泪腺中表达。在某些实施例中，至少一种目标基因是选自表A2，如任一 SEQ ID N0:5(p53)、SEQ ID NO: 8-10 (LRDD)、SEQ ID NO: 26-27 (SHCl)和 SEQ IDNO:30-44 (FAS和FAS配位体)所述。在一些实施例中，该目标基因是选自FAS、FAS配位体(FASL)、p53、LRDD、PARPl、AIF (凋亡诱导因子)、N0S、N0S2A、XIAP 和 SHC1-SHC。在某些优选实施例中，目标基因如任一 SEQ ID N0:36-SEQ ID NO:43或SEQ ID NO:44所述。在一些实施例中，siRNA的正义和反义链均是选自SEQ ID NO: 13，225-15，224所述的寡核苷酸序列对。在另一个实施例中，所述眼部障碍是AMD、DR或DME。因此，本发明提供了一种抑制患有AMD、DR或DME的受试者的视网膜神经节细胞缺失的方法。所述方法包括局部(无创伤性)向受试者眼睛表面施用眼科组合物，所述眼科组合物包括至少一种siRNA的治疗有效量，所述siRNA下调与受试者视网膜的视网膜神经节细胞缺失相关的目标基因(目标眼部mRNA)表达，从而抑制受试者眼睛视网膜神经节细胞的缺失。在优选实施例中，siRNA是化学修饰的。在某些实施例中，减弱与受试者视网膜神经节细胞缺失相关的至少一种目标基因的表达是AMD、DR或DME的有效治疗方法。在某些实施例中，减弱与受试者视网膜神经节细胞缺失相关的至少一种目标基因的表达对减轻AMD、DR或DME症状有效。在某些实施例中，至少一种siRNA的施用减弱至少一种目标基因(靶mRNA)在受试者眼睛视网膜神经节细胞中表达。在某些实施例中，至少一种siRNA的施用减弱至少一种目标基因(目标眼部mRNA)在受试者眼睛脉络膜中的表达。在某些实施例中，至少一种目标基因列于表A3,如任一 SEQID N0:l-2、3、5、6-7、8-10、12、13、24-25、26-27、30-35、45-53所述。在某些实施例中，siRNA 革巴向CTSD、RTP801和BNIP3。在某些实施例中，该障碍是DR。siRNA靶向SEQ ID NO:48-53所述的mRNA。在一些实施例中，siRNA的正义和反义链均是选自SEQ ID NO: 24575-29594所述的任一序列。在某些优选实施例中，该障碍是AMD，siRNA靶向SEQ ID N0:3所述的基因，siRNA的正义和反义链均是选自SEQ ID NO: 11285-12224所述的任一序列。在一些实施例中，siRNA的正义和反义链均是选自SEQ ID NO:24575-29594所述的寡核苷酸序列对。在一个进一步的实施例中，所述眼部障碍是视网膜色素变性(RP)。因此，本发明提供了一种抑制患有RP的受试者的视网膜神经节细胞缺失的方法。所述方法包括局部(无创伤性)向受试者眼睛表面施用眼科组合物，所述眼科组合物包括至少一种siRNA的治疗有效量，所述siRNA下调与受试者视网膜的视网膜神经节细胞缺失相关的目标基因(目标眼部mRNA)表达，从而抑制受试者眼睛视网膜神经节细胞的缺失。在优选实施例中，siRNA是化学修饰的。在某些实施例中，减弱与受试者视网膜神经节细胞缺失相关的至少一种目标基因的表达是RP的有效治疗方法。在某些实施例中，减弱与受试者视网膜神经节细胞缺失相关的至少一种目标基因的表达对减轻RP症状有效。在某些实施例中，至少一种目标眼部mRNA是选自表A4所列基因的产物，其被转录为任一 SEQ ID NO: 3、14、26_35、54_57所述的mRNA。在一些实施例中，目标眼部 mRNA 是选自由 CASP1、CASP3、CASP12、RTP801、RTP801L、CAPNSU PARPU AIF, N0S1、N0S2、XIAP和SHCl-SHC组成的组的基因产物。在某些优选实施例中，siRNA靶向SEQ ID NO:56-57所述的基因。另一方面，本发明是以一种拯救受试者视网膜神经节细胞的细胞凋亡的方法为特征，其中包括无创伤性地向受试者眼睛表面施用眼科组合物，所述眼科组合物包括受试者视网膜的目标基因的治疗有效量的至少一种siRNA，从而拯救受试者视网膜神经节细胞的细胞凋亡。在优选实施例中，至少一种siRNA是化学修饰的。在一些实施例中，该目标基因如任一 SEQ ID N0:l-58所述。在不同实施例中，siRNA的正义和反义寡核苷酸均是选自显示于表B1-B36的正义及其相应的反义寡核苷酸，如SEQ ID NO: 59-33，596所述。另一方面，本发明提供一种提高呈现视神经病变体征或症状的受试者视网膜神经节细胞存活的方法，包括无创伤性地向受试者眼睛表面施用眼科组合物，所述眼科组合物包含至少一种siRNA的治疗有效量，所述siRNA下调与受试者视网膜的视网膜神经节细胞缺失相关的目标基因表达，从而提高受试者视网膜神经节细胞的存活。在优选实施例中，至少一种siRNA是化学修饰的。在某些实施例中，视神经病变的体征或症状是由细胞凋亡介导的。在一些实施例中，该目标基因如任一SEQ ID NO: 1-58所述。在不同实施例中，siRNA的正义和反义寡核苷酸均是选自正义及其相应的反义寡核苷酸，如SEQ ID NO:59-33, 596所述。另一方面，本发明涉及一种预防、治疗或减轻与受试者视网膜神经节细胞死亡相关的眼部疾病的方法，其中包括无创伤性地向受试者眼睛表面施用眼科组合物，所述眼科组合包括受试者视网膜目标基因的治疗有效量的至少一种siRNA，从而预防、治疗或减轻与受试者视网膜神经节细胞死亡相关的眼部疾病。在优选实施例中，至少一种siRNA是化学修饰的。在某些实施例中，该目标基因如任一 SEQ ID N0:l-58所述。在不同实施例中，siRNA的正义和反义寡核苷酸均是选自显示于表B1-B36的正义及其相应的反义寡核苷酸，如 SEQ ID NO:59-33，596 所述。另一方面，本发明提供了一种治疗或预防受试者视网膜神经节细胞死亡的方法，其中包括无创伤性地向受试者眼睛表面施用眼科组合物，所述眼科组合物包括(a)受试 者视网膜目标基因的治疗有效量的至少一种siRNA，和(b)药学上可接受的赋形剂或载体或其混合物，从而治疗或预防受试者视网膜神经节细胞死亡。在优选实施例中，至少一种siRNA是化学修饰的。在一些实施例中，该目标基因如任一 SEQ ID N0:l_58所述。在不同实施例中，siRNA的正义和反义寡核苷酸均是选自正义及其相应的反义寡核苷酸，如SEQ IDNO :59-33, 596 所述。另一方面，本发明涉及一种预防由受试者眼睛中高眼压介导的视网膜神经节细胞死亡的方法，其中包括无创伤性地向受试者眼睛表面施用眼科组合物，所述眼科组合包括受试者视网膜目标基因的治疗有效量的至少一种siRNA，从而预防受试者视网膜神经节细胞死亡。在优选实施例中，至少一种siRNA是化学修饰的。在一个特定实施例中，根据这一方法该受试者是患有青光眼。在一些实施例中，该目标基因如任一 SEQ ID NO: 1-58所述。在不同实施例中，siRNA的正义和反义寡核苷酸均是选自正义及其相应的反义寡核苷酸，如SEQ ID NO :59-33, 596 所述。本发明还提供了一种延迟、预防或拯救患有高IOP受试者的视网膜细胞死亡的方法，其中包括无创伤性地向受试者眼睛表面施用眼科组合物，所述眼科组合物包括与受试者视网膜的RGC死亡相关的目标基因的治疗有效量的至少一种siRNA，从而延迟、预防或拯救视网膜细胞的损伤或死亡，其中眼内压(IOP)仍然大幅度提升。在优选实施例中，至少一种siRNA是化学修饰的。在一个特定实施例中，根据这一方法该受试者是患有青光眼。在一些实施例中，该目标基因如任一 SEQ ID N0:l-58所述。在不同实施例中，siRNA的正义和反义寡核苷酸均是选自SEQ ID NO:59-33，596所述的正义及其相应的反义寡核苷酸。本发明还提供一种治疗患有视网膜神经节细胞缺失或视网膜神经节细胞损伤受试者的方法，其中包括无创伤性地向受试者眼睛表面施用眼科组合物，所述眼科组合物包括至受试者视网膜的目标基因的治疗有效量的至少一种siRNA，从而治疗受试者或降低受试者视网膜细胞的死亡。在优选实施例中，至少一种siRNA是化学修饰的。在一些实施例中，该目标基因如任一 SEQ ID N0:l-58所述。在不同实施例中，siRNA的正义和反义寡核苷酸均是选自SEQ ID NO:59-33，596所述的正义及其相应的反义寡核苷酸。
本发明还提供了一种降低视网膜神经节细胞缺失的方法，并提供神经保护剂给所需要的受试者，其中包括无创伤性地向受试者眼睛表面施用眼科组合物，所述眼科组合物包括至受试者视网膜的目标基因的治疗有效量的至少一种siRNA，从而降低网膜神经节细胞缺失，并提供神经保护剂给受试者。在优选实施例中，至少一种siRNA是化学修饰的。在某些实施例中，该目标基因如任一 SEQ ID N0:l-58所述。在不同实施例中，siRNA的正义和反义寡核苷酸均是选自显示于表B1-B36的正义及其相应的反义寡核苷酸对，如SEQ IDNO :59-33, 596 所述。本发明还提供一种预防与受试者视网膜神经节细胞缺失相关的视野丧失的方法，其中包括无创伤性地向受试者眼睛表面施用眼科组合物，所述眼科组合物包括至受试者视网膜的目标基因的治疗有效量的至少一种siRNA，从而预防受试者的视野丧失。在优选实施例中，至少一种siRNA是化学修饰的。在某些实施例中，该目标基因如任一 SEQ ID NO: 1-58所述。在不同实施例中，siRNA的正义和反义寡核苷酸均是选自显示于表B1-B36的正义及其相应的反义寡核苷酸对，如SEQ ID NO:59-33，596所述。另一方面，本发明提供了一种无创伤治疗与受试者视网膜神经节细胞缺失相关的 眼部疾病的眼科组合物，其中包括(a)受试者视网膜目标基因的治疗有效量的至少一种siRNA，和(b)药学上可接受的赋形剂或载体或其混合物。在优选实施例中，至少一种siRNA是化学修饰的。在某些实施例中，该目标基因如任一 SEQ ID N0:l-58所述。在不同实施例中，siRNA的正义和反义寡核苷酸均是选自显示于表B1-B36的正义及其相应的反义寡核苷酸对，如 SEQ ID NO:59-33，596 所述。另一方面，本发明提供了一种无创伤治疗与视觉系统组织的病理性异常/变化有关的眼部疾病的局部眼科药物组合物，其中包括(a)受试者视网膜目标基因的治疗有效量的至少一种siRNA，其中所述目标基因如任一 SEQ ID NO: 1_58所述，和(b)药学上可接受的赋形剂或载体或其混合物。在优选实施例中，至少一种siRNA是化学修饰的。在不同实施例中，siRNA的正义和反义寡核苷酸均是选自显示于表B1-B36的正义及其相应的反义寡核苷酸对，如SEQ ID NO:59-33，596所述。根据另一方面，本发明涉及一种用于治疗与视网膜神经节细胞死亡相关的眼部疾病的眼科药物组合物，其中包括(a)受试者视网膜目标基因的治疗有效量的至少一种siRNA，其中所述目标基因如任一 SEQ ID NO: 1_58所述，和(b)药学上可接受的赋形剂或载体或其混合物。在优选实施例中，至少一种siRNA是化学修饰的。在不同实施例中，siRNA的正义和反义寡核苷酸均是选自显示于表B1-B36的正义及其相应的反义寡核苷酸对，如SEQ ID NO :59-33, 596 所述。在不同实施例中，所述眼部疾病是选自包括青光眼、干眼症、糖尿病视网膜病变(DR),糖尿病性黄斑水肿(DME)、老年性黄斑变性(AMD)、视神经炎、视网膜中央静脉阻塞、视网膜分枝静脉阻塞、缺血性视神经病变、视神经损伤、早产儿视网膜病变(R0P)、色素性视网膜炎(RP)、视网膜神经节细胞变性，黄斑变性、遗传性视神经病变、代谢性视神经病变，以及由于毒剂或药物不良反应或维生素缺乏症引起的视神经病变；所述组合物被配制为霜、泡沫、膏、软膏、乳剂、液体溶液、滴眼剂、凝胶、喷雾、悬浮液、微乳液、微球、微囊剂、纳米球、纳米粒子、脂质囊泡、脂质体、聚合物囊泡、眼罩或生物插入物。在优选实施例中，所述组合物被配制为滴眼剂。
另一方面，本发明涉及一种包装的药物制剂，其中包括(a)容器内根据本发明的药物组合物(b)所述组合物用于治疗眼部疾病的说明书。在不同实施例中，根据本发明的药物组合物包括患有眼部疾病的受试者视网膜目标基因的治疗有效量的至少一种siRNA。在优选实施中，至少一种siRNA是化学修饰的。在一些实施例中，目标基因如任一 SEQ IDNO: 1-58所述。在不同实施例中，siRNA的正义和反义寡核苷酸均是选自显示于表B1-B36的正义及其相应的反义寡核苷酸对，如SEQ ID NO:59-33，596所述。在一特定实施例中，根据本发明的一方面，所述药物组合物是用于无创伤性治疗与受试者视网膜神经节细胞缺失相关的眼部疾病。在另一特定实施例中，根据本发明的一方面，所述药物组合物是用于无创伤性治疗与视觉系统组织病理异常/变化相关的眼部疾病。在另一特定实施例中，根据本发明的一方面，所述药物组合物是用于无创伤性治疗患有与视网膜神经节细胞死亡相关的眼部疾病的受试者。根据另一方面，本发明涉及根据本发明在 药剂加工中提高受试者视网膜神经节细胞存活的药物组合物的用途。在不同实施例中，根据本发明的药物组合物包括患有眼部疾病的受试者视网膜目标基因的治疗有效量的至少一种siRNA。在优选实施中，至少一种siRNA是化学修饰的。在一些实施例中，目标基因如任一 SEQ ID N0:l_58所述。在不同实施例中，siRNA正义和反义寡核苷酸均是选自显示于表B1-B36的正义和相应的反义寡核苷酸对，如SEQ ID NO:59-33，596所述。在一特定实施例中，根据本发明的一方面，所述药物组合物是用于无创伤性治疗与受试者视网膜神经节细胞缺失相关的眼部疾病。在另一特定实施例中，根据本发明的一方面，所述药物组合物是用于无创伤性治疗与视觉系统组织病理异常/变化相关的眼部疾病。在另一特定实施例中，根据本发明的一方面，所述药物组合物是用于无创伤性治疗受试者患有与视网膜神经节细胞死亡相关的眼部疾病。在一些实施例中，所述组合物包括增粘剂。增粘剂是选自(例如)亲水聚合物，其中包括纤维素和纤维素衍生物，如甲基纤维素和甲基纤维素衍生物。这些药剂包括甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙甲基纤维素和羧甲基纤维素及其衍生物、组合和盐类。在一些实施例中，增粘剂是甲基纤维素。在某些实施例中，所提供的增粘剂浓度为约O. 01 %至约4 %，在其他实施例中，所提供的增粘剂浓度为约O.1 %至约3 %，或约O. 5 %至约2%。在一些实施例中，所述组合物包括提供渗透压平衡或者表面活性剂的药剂。这些药剂包括丙三醇、乙二醇、聚乙二醇(PEG)、丙二醇、山梨醇、甘露醇、单糖、双糖和低聚糖。本发明还提供一种治疗所需受试者青光眼的方法，其中包括局部(无创伤性)地向受试者眼睛表面施用受试者眼睛目标基因的治疗有效量的至少一种siRNA，以一定量有效治疗青光眼。在某些优选实施例中，siRNA是化学修饰的。在某些实施例中，至少一种siRNA抑制至少一种基因在受试者眼睛视网膜中的表达。在某些实施例中，至少一种基因抑制赋予眼部神经保护特性。在某些实施例中，至少一种基因是选自表Al的列表，其被转录为SEQID NO: 1-35所述的mRNA。在某些优选实施例中，该基因是选自CASP2 (SEQ ID NO: 1-2),ASPPl (SEQ ID NO:4)、TP53BP2(SEQ ID NO:6-7)、BNIP3(SEQ ID NO:12),RTP801L(SEQ IDNO:14)、ACHE(SEQ ID NO:19-20),ADRBl(SEQ ID N0:21)和 CAPNSl(SEQ ID NO:28-29) 在不同实施例中，该基因如SEQ ID N0:l-2所述。在一些实施例中，siRNA的正义和反义链是选自SEQ ID N0:8515-9516所述的任一序列。
本发明还提供了一种治疗所需受试者干眼症的方法，其中包括局部(无创伤性)地向受试者眼睛表面施用至少一种siRNA的治疗有效量，所述siRNA抑制至少一种基因在受试者眼睛中的表达，其以一定量有效降低干眼症症状。在某些优选实施例中，siRNA是化学修饰的。在某些实施例中，至少一种基因在受试者泪腺中表达。在某些实施例中，至少一种基因是选自表 A2，如任一 SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8-10、SEQ ID N0:26_27 和 SEQID N0:30-44所述。在一些实施例中，所述基因是选自FAS、FAS配位体(FASL)、p53、LRDD、PARP1、AIF(凋亡诱导因子)、N0S1、N0S2A、XIAP和SHC1-SHC。在某些优选实施例中，所述基因被转录成任一 SEQ ID N0:36-SEQID NO:44所述的mRNA。在一些实施例中，siRNA的正义和反义链均是选自表6-17中SEQ ID N0:13、225-15、224所述的任一序列。本发明还提供了一种治疗所需受试者AMD、DR或DME的方法，其中包括局部(无创伤性)地向受试者眼睛表面施用至少一种siRNA的治疗有效量，所述siRNA抑制至少一种基因在受试者眼睛中的表达，其以一定量有效降低AMD、DR或DME症状。在某 些优选实施例中，siRNA是化学修饰的。在某些实施例中，至少一种siRNA抑制至少一种基因在受试者眼睛脉络膜中的表达。在某些实施例中，至少一种目标眼部mRNA列于表A3，如任一 SEQID N0:l-2、3、5、6-7、8-10、12、13、24-25、26-27、30-35、45-53 所述。在某些优选实施例中，siRNA靶向CTSD、RTP801和BNIP3。在某些优选实施例中，所述眼部障碍是DR，siRNA靶向SEQ ID NO:48-53 所述的 mRNA。在一个进一步的实施例中，所述眼部障碍是视网膜色素变性(RP)。因此，本发明提供了一种减弱目标眼部mRNA在患有RP的受试者眼睛中表达的方法。所述方法包括局部(无创伤性)地向受试者眼睛表面施用受试者眼睛目标基因的治疗有效量的至少一种siRNA。在某些优选实施例中，siRNA是化学修饰的。在某些实施例中，至少一种目标基因(目标眼部mRNA)的减弱表达是有效治疗RP的方法。在某些实施例中，至少一种目标眼部mRNA的减弱表达对减轻RP症状有效。在某些实施例中，至少一种目标眼部mRNA是选自表A4所列基因的基因产物，其被转录为任一 SEQ ID N0:3、14、26-35、54-57所述的mRNA。在一些实施例中，目标眼部 mRNA 是选自由 CASPl、CASP3、CASP12、RTP801、RTP801L、CAPNSl、PARPl、AIF、N0S1、N0S2、XIAP和SHCl-SHC组成的组的基因产物。在某些优选实施例中，siRNA靶向 SEQ ID NO: 56-57 所述的 mRNA。在不同实施例中，至少一种siRNA是化学修饰的。在不同实施例中，至少一种siRNA包括足够数量的具有与目标mRNA中的核苷酸序列具有充分同源性的连续核苷酸序列，以与mRNA杂交，并减弱mRNA在受试者眼睛中的表达。在不同实施例中，至少一种siRNA包括包括足够数量的具有与基因中的核苷酸序列具有充分同源性的连续核苷酸序列，以与该基因杂交，并降低或抑制基因在受试者眼睛中的表达。附图简要说明
图1A-1B :表示施用滴眼剂后注入小鼠视网膜的Cy3标记DDIT4siRNA的典型图像。图1C:在E.D.给药后4小时的视网膜的共聚焦显微镜图像，给药(上X40，下X60)。在左(Cy3)和右(合并)小图中RGC的Cy3染色是显著的。 图2A-2C :表示施用滴眼剂后注入小鼠泪腺导管及腺泡细胞的Cy3标记DDIT4siRNA的典型图像。图2D :代表的Cy3标记的siRNADDIT4纳入小鼠泪腺导管及腺泡细胞的图像。E.D.后4小时，泪腺的共聚焦显微镜图像(X60)。图3A-3C :表示施用滴眼剂1-4小时后小鼠脉络膜的Cy3_siRNA累积随时间的变化。图4 :表示向眼睛施用滴眼剂I小时后传输到小梁网和睫状体的Cy3_siRNA。图5A-5B :表示施用p53基因靶向QM5 - siRNA的滴眼剂I小时后的视网膜共聚焦显微镜图像(倍数X60)。视网膜的siRNA (视网膜色素上皮细胞，视网膜神经节细胞)通过Cy3荧光显示。图6A-6B:表示注入小鼠视网膜的Cy3标记DDIT4 siRNA的典型图像。图6B表示施用滴眼剂I小时后DDIT4_1 Cy3-siRNA的累积。感光细胞的脉络膜、外核层、RPE和外节层显不了 Cy3染色。图7显示了施用滴眼剂I小时后RGC细胞通过使用Dy_649/C6染色的DDIT4_1 Dy-649/C6-siRNA 累积。图8A-8C 表示对照 siRNA FITC_CNL_1RD/CNL_1FD 和不规则的 3’ cy3_CNL_lRGC 通过不同染色方法传输到视网膜组织。图9A-9B表示Casp2的不同结构传输到小鼠视网膜组织。图 10A-10B 表示 TGASEI1-FAM 和 HN0EL-FAM 的传输。图11表示PBS中作为阳性对照组的p53靶向siRNA的视网膜传输。图12A-12B表示正常动物或施用不含有siRNA的ED后视网膜中无荧光信号。图13A-13D提供了显示视网膜中p53抑制的实验结果。图13A-13B显示了测量P53蛋白水平的标准曲线。图13C-13D显示了通过滴眼剂实现的视网膜p53抑制。发明详述本发明提供了局部寡核苷酸组合物及其用于治疗各种眼部疾病及障碍的无创伤性方法。特别地，本发明提供了与患有该疾病或障碍的受试者眼睛基因表达相关的不同眼部疾病及障碍的治疗方法。本发明部分是基于siRNA组合物靶向某些眼部组织和细胞类型的局部无创伤性给药的意外发现，并当局部传输至眼睛表面时在那些组织和细胞中很活跃。考虑到已知siRNA的传输障碍以及提供无创伤性方法作为玻璃体或全身传输的现实选择，这一发现是令人惊讶的。对于有效沉默目标基因的mRNA的siRNA分子，所述siRNA需要三个层次的目标目标组织、目标细胞的类型和目标亚细胞室。现在本发明公开了治疗眼部疾病和障碍的无创伤性方法。本发明通常涉及下调基因在眼部细胞中表达的化合物，特别涉及新的小干扰RNA(siRNA),以及这些新的siRNAs在治疗受试者患有与眼部组织和细胞中基因表达相关的疾病的用途。对减弱眼部目标mRNA表达的方法及治疗眼部障碍的方法在此进行了详细谈论，任何所述分子和/或组合物可有益地用于治疗患有所述疾病的受试者。本发明的siRNA具有可能增加活性、增加稳定性或减少毒性的结构和修饰；对本发明siRNAs的新修饰可以有益地应用到用于防止或减弱目标基因表达的双链RNA序列中，特别是此处讨论的目标基因。
每一个指示目标基因的非限制性实例，已详列于表A1-A4，见下文。表Al :治疗青光眼的目标基因
权利要求
1.具有如下结构的双链RNA化合物5’ iB-GCCAGAAUGUGGAACUCCU 3’(正义链；SEQ ID NO :503)3’CGGUCUUACACCUUGAGGA 5’(反义链；SEQ ID NO: 1004)其中每一个A、C、U和G是核糖核苷酸，并且每一个连续核糖核苷酸通过磷酸二酯键与下一个核糖核苷酸连接；其中正义链包括，从 5，末端数，在位点 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和19的非修饰核糖核苷酸，位点18的L-脱氧胞苷，和在5’末端共价连接的反向脱氧脱碱基(iB);并且其中反义链包括，从5’末端数，在位点2、4、6、8、11、13、15、17和19的2’-O-Me糖基修饰核糖核苷酸，以及在位点1、3、5、7、9、10、12、14、16和18的非修饰核糖核苷酸。
2.根据权利要求1的化合物在制备用于治疗的药物中的用途。
3.根据权利要求1的化合物在制备用于治疗患有眼部疾病、眼部障碍、眼部损伤、视野丧失的患者；或提供眼部神经保护的药物中的用途。
4.根据权利要求3的用途，其中所述眼部疾病、眼部障碍或眼部损伤与视觉系统组织的病理性异常/变化有关
5.根据权利要求4的用途，其中所述眼部疾病、眼部障碍或眼部损伤是神经变性。
6.根据权利要求4的用途，其中所述眼部疾病、眼部障碍或眼部损伤与视网膜神经节细胞缺失或视网膜神经节细胞损伤有关。
7.根据权利要求6的用途，其中所述视网膜神经节细胞缺失或视网膜神经节细胞损伤由眼内压(IOP)升高介导。
8.根据权利要求3的用途，其中所述视野丧失与视网膜神经节细胞死亡相关。
9.根据权利要求3的用途，其中所述眼部疾病、眼部障碍或眼部损伤选自眼部神经病变、眼内压升高(Ι0Ρ)、青光眼、干眼症、糖尿病视网膜病变(DR)、糖尿病性黄斑水肿(DME)、老年性黄斑变性(AMD)、视神经炎、视网膜中央静脉阻塞、视网膜分枝静脉阻塞、缺血性视神经病变、视神经损伤、早产儿视网膜病变(R0P)、色素性视网膜炎(RP)、视网膜神经节细胞变性，黄斑变性、遗传性视神经病变、代谢性视神经病变，以及由于毒剂或药物不良反应或维生素缺乏症引起的视神经病变。
10.根据权利要求9的用途，其中所述眼部疾病、眼部障碍或眼部损伤是青光眼。
11.根据权利要求9的用途，其中所述眼部疾病、眼部障碍或眼部损伤是缺血性视神经病变。
12.根据权利要求11的用途，其中所述缺血性视神经病变是前部缺血性视神经病。
13.根据权利要求11的用途，其中所述缺血性视神经病变是后部缺血性视神经病变。
14.根据权利要求9的用途，其中所述眼部疾病、眼部障碍或眼部损伤是遗传性视神经病变。
15.根据权利要求9的用途，其中所述眼部疾病、眼部障碍或眼部损伤是干眼症。
16.包括根据权利要求1的化合物和药学可接受赋形剂或载体或其混合物的组合物。
17.根据权利要求16的组合物在制备用于在眼部细胞中下调CASP2基因表达的药物中的用途，其中所述眼部细胞选自泪腺腺泡细胞、泪腺导管细胞、视网膜神经节细胞(RGC)、视网膜色素上皮(RPE)细胞、脉络膜细胞、角膜细胞、睫状突细胞和小梁网细胞或其组合。
18.根据权利要求16的组合物，其中所述化合物最终存在浓度按组合物体积计为约5 μ g/ μ I 至约 60 μ g/ μ I。
19.根据权利要求16的组合物，其中所述组合物被配制为霜、泡沫、膏、软膏、乳剂、液体溶液、滴眼剂、凝胶、喷雾、悬浮液、微乳液、微球、微囊剂、纳米球、纳米粒子、脂质囊泡、脂质体、聚合物囊泡、眼罩或隐形眼镜。
20.根据权利要求19的组合物，其中所述组合物被配制成液体溶液。
21.根据权利要求19的组合物，其中所述组合物被配制成用于玻璃体内注射。
22.根据权利要求1的化合物在制备用于延迟、抑制或预防视网膜细胞的死亡或对视网膜细胞的损伤或者用于提高视网膜细胞的存活的药物中的用途。
23.根据权利要求22的用途，其中所述视网膜细胞是视网膜神经节细胞。
全文摘要
本发明涉及一种抑制受试者视网膜神经节细胞缺失的组合物和方法，包括向受试者眼睛表面局部无创伤性地向受试者眼睛表面施用眼科组合物，所述眼科组合包含治疗有效量的至少一种siRNA；所述siRNA下调与视网膜神经节细胞缺失相关的目标基因表达，从而抑制受试者视网膜神经节细胞的缺失。本发明的方法还涉及一种具有结构基序的化学修饰siRNA化合物的用途，所述结构基序下调在哺乳动物眼睛视网膜组织表达的人类基因的表达。
文档编号C12N15/113GK102994500SQ201210278029
公开日2013年3月27日 申请日期2009年10月22日 优先权日2008年10月22日
发明者E·法因施泰因, E·艾伯特, I·梅特, A·巴-伊兰, I·斯皮瓦克, H·卡林斯基, N·斯拉格尔 申请人:夸克医药公司