专利名称：一种降低脂肪含量的骨钙提取方法及骨钙素的制作方法
技术领域：
本发明涉及骨钙提取工艺，属于食品加工领域。
背景技术：
随着社会的老龄化，在西方国家，骨质疏松症的患病率居代谢性骨病的第一位。骨质疏松病症带给患者及家庭的痛苦是不言而喻的。据统计，我国目前约有超过I亿的骨质疏松症患者，预计到2050年将增加到2亿I千万人。造成越来越多的人们钙缺乏的因素生活和工作节奏加快，工作压力大以及生活无规律，不注意饮食结构的合理搭配，每日钙摄入少于600毫克者可认为是钙摄入不足，易造成体内钙的缺乏；一些中年人工作紧张，缺乏自我保健意识，不重视室外活动，使得体内合成的维生素D减少，影响钙的吸收和利用；营养摄入不均衡或缺乏人体所必需的营养元素。
目前市场的钙剂多为工业合成的钙。工业合成的钙剂营养成分单一，很难满足骨骼生长代谢过程中多方面的营养需求，补钙效果不理想。动物骨富含钙、磷、铁、镁等多种矿物元素，而且与人骨相似，人体骨骼细胞对相同组织细胞有较强的亲和力，因而利用率更闻。中国专利CN1087793A和美国专利US6342252B1公开了一种利用酶解方法从牛骨中提取钙素的工艺。酶解骨钙具有钙磷比例适宜、营养丰富、钙质吸收利用率高等特点。从市场销售情况看，酶解骨钙深受广大消费者的喜爱，服用后改善骨质疏松的效果明显，取得了显著的经济效益。但是，上述工艺制得的骨钙中，脱脂方法主要是以蒸煮方式实施，难以去除骨质中高含量的脂肪，导致最终的产品脂肪含量较高。对于具有心血管疾病的消费者，过高的脂肪摄入量显然会升高发病的危险因素。因此，从动物骨骼中提取钙素的过程中，去除过多的脂肪，减少心血管疾病的发病风险，成为技术人员急需解决的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新的酶解骨钙的提取工艺，所述的工艺能够较现有技术更好的去除骨质中的脂肪。本发明的另一目的是提供一种更健康的补钙产品生产工艺，所述的工艺制得的补钙产品具有较低的脂肪含量。本发明的另一目的是提供一种具有市场竞争力的补钙产品，所述的产品不因脱脂工艺的设计而增加生产成本，为达到上述目的，本发明采用下列技术方案实现。本发明采用三次脱脂方式去除骨油，第一次是60 80°C，45 75min ;第二次80 90°C，30min ;第三次是脂肪酶酶解。三次脱脂除具有除去骨质中的脂肪效果外，同时还具有杀菌的功效。为增强脱脂效果，本发明优选的将骨粉碎至5 40_颗粒，颗粒过小则增加生产成本，颗粒过大去脂效果较差。发明人经过多次试验及经验，最终确定5 40_颗粒范围达到去骨脂和成本的最佳性价比。在乙醇浸提脱脂后，本发明还采用热水浸泡漂洗方式去除骨料中存在的脂肪；漂洗后再次以4000 8000r/min,离心30min,这样可以去除骨料中大部分的脂肪。为进一步去除残存的脂肪，本发明的工艺选择在离心后再次加入碱性脂肪酶进行酶解骨料中残存的脂肪。碱性脂肪酶A、B按I. 5 3 I混合的复合脂肪酶，占骨料重量比O. I O. 4%，20 30°C，水解40 60min。在酶解后，二次离心，进一步将残存的微量脂肪去除。经过上述脱脂步骤后，采用两步酶解法提取骨料中的钙素。第一步是在骨料冷却至45 55°C时，加入胰蛋白酶，水解I 2h。第二部是在骨料中加入中性蛋白酶，水解I 2h。二次酶解后，分离液体，高温灭活，干燥，即可获得所述的酶解骨钙。优选的，本发明第一次酶解骨钙中，胰蛋白酶水解温度优选为50°C。水解骨料所用的胰蛋白酶占骨料重量比为O. 04 O. 08%为佳。碱性脂肪酶A由福建师范大学生物工程学院研制的扩展青霉PF868产生的碱性脂肪酶，由深圳绿微康生物工程有限公司提供；碱性脂肪酶B采用生物技术由真菌发酵精制而产生的碱性脂肪酶，由海宁金潮实业有限公司提供。本发明的组合物与任何一种或一种以上药剂学上辅料如淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维素、羟丙甲基纤维素、聚乙二醇、硬脂酸镁、微粉硅胶、木糖醇、乳糖醇、葡萄糖、甘氨酸、甘露醇、甘氨酸等混合制成的各种剂型，例如，可制成片剂、缓释片、滴丸、颗粒剂、粉剂、胶囊齐 、微粒剂。优选剂型为片剂或颗粒剂。采用本发明的脱脂工艺制得的骨粉中，脂肪基本被完全去除，使得酶解获得的钙剂中脂肪含量低于O. I %。产品对有心血管疾病的消费者来说更加安全和健康，但是又未因此而增加经济负担。
具体实施例方式实施例I取动物骨骼粉碎至40mm颗粒，加入乙醇，80°C，浸提75min，弃上清液；90°C热水浸泡漂洗30min，将骨料8000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比I : 5，调PH值10，加入碱性脂肪酶A、B按I. 5 I混合的复合脂肪酶，占骨料重量比O. 4%，30°C，水解60min，离心，弃上清液；加水，骨料与水重量体积比I : 5，100°C，lOmin，冷却至55°C，加入胰蛋白酶，占骨料重量比为O. 08%，搅拌2h ;加入中性蛋白酶，占骨料重量比为O. 1%，搅拌2h，分离液体，高温灭活，干燥，即得。采用“GB/T5009. 6食品中脂肪的测定”规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定，测得产品脂肪含量为O. 09%。实施例2取动物骨骼粉碎至5mm颗粒，加入乙醇，60°C，浸提45min，弃上清液；80°C热水浸泡漂洗30min，将骨料4000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比I : 3，调PH值8，加入碱性脂肪酶A、B按3 I混合的复合脂肪酶，占骨料重量比O. 1%，20°C，水解40min，离心，弃上清液；加水，骨料与水重量体积比I : 3，90°C，lOmin，冷却至45°C，加入胰蛋白酶，占骨料重量比为O. 04%，搅拌Ih ;加入中性蛋白酶，占骨料重量比为O. 05%，搅拌lh，分离液体，高温灭活，干燥，即得。采用“GB/T5009. 6食品中脂肪的测定”规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定，测得产品脂肪含量为O. 08%。实施例3取动物骨骼粉碎至20mm颗粒，加入乙醇，70°C，浸提60min，弃上清液；85°C热水浸泡漂洗30min，将骨料8000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比I : 4，调PH值9，加入碱性脂肪酶A、B按2 I混合的复合脂肪酶，占骨料重量比O. 3%, 25 V，水解50min,离心，弃上清液；加水，骨料与水重量体积比I 4，95 V，IOmin,冷却至50°C，加入胰蛋白酶，占骨料重量比为O. 06%，搅拌I. 5h 加入中性蛋白酶，占骨料重量比为O. 08%，搅拌I. 5h，分离液体，高温灭活，干燥，即得。采用“GB/T5009. 6食品中脂肪的测定”规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定，测得产品脂肪含量为O. 08%。实施例4取动物骨骼粉碎至IOmm颗粒，加入乙醇，80°C，浸提75min，弃上清液；90°C热水浸泡漂洗30min，将骨料6000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比I : 3. 5，调PH值8. 5，加入碱性脂肪酶A、B按2 I混合的复合脂肪酶，占骨料重量比O. 2%，30°C，水解60min，离心，弃上清液；加水，骨料与水重量体积比I : 3. 5，95°C，lOmin，冷却至55°C，加入胰蛋白酶，占骨料重量比为O. 05%，搅拌211 ;加入中性蛋白酶，占骨料重量比为O. 09%，搅拌2h，分离液体，高温灭活，干燥，即得。采用“GB/T5009. 6食品中脂肪的测定”规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定，测得产品脂肪含量为O. 07%。实施例5取动物骨骼粉碎至25mm颗粒，加入乙醇，75°C，浸提65min，弃上清液；86°C热水浸泡漂洗30min，将骨料8000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比I : 4，调PH值9. 5，加入碱性脂肪酶A、B按2. 8 I混合的复合脂肪酶，占骨料重量比O. 3%，30°C，水解50min，离心，弃上清液；加水，骨料与水重量体积比I : 4. 5，100°C，lOmin，冷却至55°C，加入胰蛋白酶，占骨料重量比为O. 07%，搅拌211 ;加入中性蛋白酶，占骨料重量比为O. 06%，搅拌lh，分离液体，高温灭活，干燥，即得。采用“GB/T5009. 6食品中脂肪的测定”规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定，测得产品脂肪含量为O. 09%。实施例6取动物骨骼粉碎至35mm颗粒，加入乙醇，78°C，浸提70min，弃上清液；87°C热水浸泡漂洗30min，将骨料7000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比I : 5，调PH值8，加入碱性脂肪酶A、B按I. 8 I混合的复合脂肪酶，占骨料重量比O. 25%，20°C，水解50min，离心，弃上清液；加水，骨料与水重量体积比I 3，100。。，lOmin，冷却至45°C，加入胰蛋白酶，占骨料重量比为O. 07%，搅拌2h ;加入中性蛋白酶，占骨料重量比为O. 1%，搅拌2h，分离液体，高温灭活，干燥，即得。采用“GB/T5009. 6食品中脂肪的测定”规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定，测得产品脂肪含量为O. 08%。实施例7取动物骨骼粉碎至IOmm颗粒，加入乙醇，60°C，浸提75min，弃上清液；88°C热水浸泡漂洗30min，将骨料5000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比I : 4，调PH值10，加入碱性脂肪酶A、B按3 I混合的复合脂肪酶，占骨料重量比O. 35%，24°C，水解45min，离心，弃上清液；加水，骨料与水重量体积比I : 4，95°C，lOmin，冷却至50°C，加入胰蛋白酶，占骨料重量比为O. 08%，搅拌Ih ;加入中性蛋白酶，占骨料重量比为O. 05%，搅拌Ih，分离液体，高温灭活，干燥，即得。采用“GB/T5009. 6食品中脂肪的测定”规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定，测得产品脂肪含量为O. 07%。实施例8取动物骨骼粉碎至15mm颗粒，加入乙醇，80°C，浸提75min，弃上清液；89°C热水浸泡漂洗30min，将骨料8000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比I : 5，调PH值8. 5，加入碱性脂肪酶A、B按2. 6 I混合的复合脂肪酶，占骨料重量比O. 14%，30°C，水解60min，离心，弃上清液；加水，骨料与水重量体积比I : 4. 5，IOO0C，IOmin,冷却至55°C，加入胰蛋白酶，占骨料重量比为O. 06%，搅拌2h ;加入中性蛋白酶，占骨料重量比为O. 1%，搅拌2 h，分离液体，高温灭活，干燥，即得。采用“GB/T5009.6食品中脂肪的测定”规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定，测得产品脂肪含量为O. 08%。实施例9取动物骨骼粉碎至30mm颗粒，加入乙醇，75°C，浸提55min，弃上清液；85°C热水浸泡漂洗30min，将骨料8000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比I : 5，调PH值8，加入碱性脂肪酶A、B按3 I混合的复合脂肪酶，占骨料重量比O. 35%，28°C，水解60min，离心，弃上清液；加水，骨料与水重量体积比I 4，94°C，lOmin，冷却至55°C，加入胰蛋白酶，占骨料重量比为O. 05%，搅拌Ih ;加入中性蛋白酶，占骨料重量比为O. 1%，搅拌2h，分离液体，高温灭活，干燥，即得。采用“GB/T5009. 6食品中脂肪的测定”规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定，测得产品脂肪含量为O. 09%。实施例10取动物骨骼粉碎至20mm颗粒，加入乙醇，80°C，浸提60min，弃上清液；84°C热水浸泡漂洗30min，将骨料6000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比I : 5，调PH值10，加入碱性脂肪酶A、B按3 I混合的复合脂肪酶，占骨料重量比O. 3%，30°C，水解60min，离心，弃上清液；加水，骨料与水重量体积比I : 5，90°C，lOmin，冷却至50°C，加入胰蛋白酶，占骨料重量比为O. 07%，搅拌2h ;加入中性蛋白酶，占骨料重量比为O. 05%，搅拌1，分离液体，高温灭活，干燥，即得。采用“GB/T5009. 6食品中脂肪的测定”规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定，测得产品脂肪含量为O. 09%。实施例11将骨骼粉碎至40mm颗粒，加入乙醇，80°C，浸提75min，弃上清液；83°C热水浸泡漂洗30min，将骨料8000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比I : 5，调PH值10，加入碱性脂肪酶A、B按I. 7 I混合的复合脂肪酶，占骨料重量比O. 1%，30°C，水解60min，离心，弃上清液；加水，骨料与水重量体积比I : 3，100°C，lOmin，冷却至55°C，加入胰蛋白酶，占骨料重量比为O. 04%，搅拌2h ;加入中性蛋白酶，占骨料重量比为O. 1%，搅拌2h，分离液体，高温灭活，干燥，即得。采用“GB/T5009. 6食品中脂肪的测定”规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定，测得产品脂肪含量为O. 07%。实施例12将骨骼粉碎至5mm颗粒，加入乙醇，60°C，浸提45min，弃上清液；82°C热水浸泡漂洗30min，将骨料4000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比I : 3，调PH值8，加入碱性脂肪酶A、B按I. 9 I混合的复合脂肪酶，占骨料重量比O. 1%，20°C，水解60min，离心，弃上清液；加水，骨料与水重量体积比I 3，90°C，lOmin，冷却至55°C，加入胰蛋白酶，占骨料重量比为O. 08%，搅拌2h ;加入中性蛋白酶，占骨料重量比为O. 1%，搅拌2h，分离液体，高温灭活，干燥，即得。采用“GB/T5009. 6食品中脂肪的测定”规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定，测得产品脂肪含量为O. 07%。实施例13将骨骼粉碎至30mm颗粒，加入乙醇，75°C，浸提60min，弃上清液；81°C热水浸泡漂洗30min，将骨料8000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比I : 4，调PH值9，加入碱性脂肪酶A、B按2. I I混合的复合脂肪酶，占骨料比O. 4%，30°C，水解60min，离心，弃上清液；加水，骨料与水重量体积比I : 3. 5，95°C，lOmin，冷却至50°C，加入胰蛋白酶，占骨料重量比为O. 08%，搅拌2h ;加入中性蛋白酶，占骨料重量比为O. 1%，搅拌2h，分离液体，高温灭活，干燥，即得。采用“GB/T5009.6食品中脂肪的测定”规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定，测得产品脂肪含量为O. 09%。实施例14 将骨骼粉碎至IOmm颗粒，加入乙醇，80°C，浸提75min，弃上清液；84°C热水浸泡漂洗30min，将骨料8000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比I : 5，调PH值10，加入碱性脂肪酶A、B按2. 2 I混合的复合脂肪酶，占骨料重量比O. 4%，30°C，水解60min，离心，弃上清液；加水，骨料与水重量体积比I : 5，100°C，lOmin，冷却至50°C，加入胰蛋白酶，占骨料重量比为O. 08%，搅拌2h ;加入中性蛋白酶，占骨料重量比为O. 08%，搅拌lh，分离液体，高温灭活，干燥，即得。采用“GB/T5009. 6食品中脂肪的测定”规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定，测得产品脂肪含量为O. 08%。实施例15将骨骼粉碎至25mm颗粒，加入乙醇，80°C，浸提65min，弃上清液；84°C热水浸泡漂洗30min，将骨料6000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比I : 4，调PH值8. 5，加入碱性脂肪酶A、B按2. 3 I混合的复合脂肪酶，占骨料重量比O. 3%, 30 V，水解60min，离心，弃上清液；加水，骨料与水重量体积比I : 5，95°C，I Omin,冷却至50°C，加入胰蛋白酶，占骨料重量比为O. 07%，搅拌Ih ;加入中性蛋白酶，占骨料重量比为O. 08%，搅拌lh，分离液体，高温灭活，干燥，即得。采用“GB/T5009. 6食品中脂肪的测定”规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定，测得产品脂肪含量为O. 08%。
权利要求
1.一种降低脂肪含量的骨钙提取方法，包括如下步骤 (1)将骨粉碎，浸提去骨油，弃上清液； (2)将浸提后的骨料浸泡漂洗、离心，弃上清液； (3)将离心后的骨料加水，调PH值，加碱性脂肪酶水解，离心，弃上清液； (4)将步骤(3)中离心后的骨料加水蒸煮，冷却后加入胰蛋白酶水解； (5)步骤(4)中的水解液再加入中性蛋白酶二次水解，高温灭活，干燥即得。
2.根据权利要求I所述的骨钙提取方法，其特征在于，所述的步骤(I)骨料颗粒5 40mm 加入乙醇，60 80°C，45 75min。
3.根据权利要求I所述的骨钙提取方法，其特征在于，所述的步骤(2)中将骨料颗粒热水漂洗，然后4000 8000r/min,离心30min。
4.根据权利要求I所述的骨钙提取方法，其特征在于，所述的步骤(3)中骨料与水重量体积比I : 3 5，调PH值8 10，加入碱性脂肪酶A、B混合的复合脂肪酶。
5.根据权利要求4所述的骨钙提取方法，其特征在于，所述的复合脂肪酶中碱性脂肪酶A、B重量比为I. 5 3 I。
6.根据权利要求4或5所述的骨钙提取方法，其特征在于，所述的复合脂肪酶占骨料重量比O. I O. 4%。
7.根据权利要求I所述的骨钙提取方法，其特征在于，所述的步骤(4)中骨料与水重量体积比I : 3 5，90 100°C，10min，冷却至45 55°C，加入胰蛋白酶，占骨料重量比为.O.04 O. 08%，搅拌 I 2h。
8.根据权利要求7所述的骨钙提取方法，其特征在于，所述的酶解温度优选为50°C。
9.根据权利要求I所述的动物骨钙提取方法，其特征在于，所述的步骤(5)中加入中性蛋白酶，占骨料重量比为O. 05-0. 1%，搅拌I 2h。
10.一种由骨骼提取制备的骨钙素，其特征在于，采用以下方法制备将骨骼粉碎至5 40mm颗粒，加入乙醇，60 80°C，浸提45 75min，弃上清液；骨料热水浸泡漂洗，水温80-90°C，浸泡30分钟，将骨料4000 8000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比I : 3 5，调PH值8 10，加入碱性脂肪酶A、B按I. 5 .3 I混合的复合脂肪酶，占骨料重量比O. I 0.4%，20 30°C，水解40 60min，离心，弃上清液；加水，骨料与水重量体积比I : 3 5，90 100°C，lOmin，冷却至45 55°C，力口入胰蛋白酶，占骨料重量比为O. 04 O. 08%，搅拌I 2h ;加入中性蛋白酶，占骨料重量比为O. 05-0. 1%，搅拌I 2h，分离液体，高温灭活，干燥，即得。
全文摘要
本发明公开了一种降低脂肪含量的骨钙提取方法及由该方法制得的骨钙素。包括如下步骤三次脱脂、两次离心、两步蛋白酶水解。采用本发明的脱脂工艺制得的骨粉中，脂肪基本被完全去除，使得酶解获得的钙剂中脂肪含量低于0.1％。产品对有心血管疾病的消费者来说更加安全和健康，但是又未因此而增加经济负担。
文档编号A23L1/29GK102871125SQ20121038243
公开日2013年1月16日 申请日期2012年10月10日 优先权日2012年10月10日
发明者赵健, 黄永亮, 郁正刚, 崔卜东, 吴益群 申请人:天狮集团有限公司