专利名称：一种野生嗜杀酿酒酵母的筛选方法
技术领域：
本发明属于食品发酵工业领域，特别是涉及一种野生嗜杀酿酒酵母的筛选方法。
背景技术：
在此处键入背景技术描述段落。嗜杀酵母是指某些酵母在其生长繁殖过程中，能向菌体外分泌一种毒素蛋白的菌株，这种毒素蛋白能够杀死同一属的敏感菌株，较少情况下，也能杀死不同属的敏感菌株。嗜杀酵母分泌的毒素蛋白称为嗜杀毒素，嗜杀酵母对自身分泌的嗜杀毒素具有免疫力。在酿造过程中，防止野生酵母和细菌的侵染是至关重要的。在国外，人们已在清酒、葡萄酒、酒精发酵、啤酒生产中使用了嗜杀菌株。国内近年来也开展了嗜杀酿酒酵母方面的研究工作，并经过发酵试验证明可有效防止野生酵母的污染，对于保证果酒、酒精、啤酒纯种酿造及提高成品果酒、啤酒的生物稳定性具有明显效果，具有开发利用的潜在价值。嗜杀酿酒酵母获得方法之一可以从野生菌株进行筛选，以获得高性能的嗜杀菌株。目前已存在的滴定法和交叉划线法可以进行嗜杀菌株的初步筛选。但由于操作方法的不确定性，无法体现待测菌液的量与嗜杀能力大小的关系。
发明内容
在此处键入发明内容描述段落。本发明的目的是针对传统筛选方法存在的诸多缺点，获得一种高效的可以相对比较酿酒酵母嗜杀能力大小的筛选方法。本发明采取如下技术方案
在麦芽汁平板培养基(含O. 003%美兰)中添加敏感酿酒酵母菌株、最终浓度为IO5CUf/ml，涂布均匀，将培养好的待测菌株稀释10倍，摇匀，用镊子夹取直径大约为5mm灭菌滤纸片，蘸取稀释菌液，以滤纸片全部被淹没为准，轻轻置于麦芽汁鉴定培养基上，25°C培养2cT3d后，若待测菌为嗜杀菌株，则在其周围会形成圆形蓝色的死菌带。可根据死菌带直径大小比较野生酿酒酵母嗜杀性能的高低。
具体实施方案野生酿酒酵母菌增殖培养采集400g市售葡萄样品，捣碎，置于无菌锥形瓶中，盖八层纱布于25°C 30°C下自然发酵2 3d。野生酿酒酵母菌的分离无菌条件下，将采集到的用于分离酵母菌的增殖培养液样品摇勻，用无菌移液管吸取适量发酵液于10°灭菌麦芽汁培养液中，25°C下培养5d。取培养液Iml梯度稀释至浓度为10_，10_5，吸取O. I O. 2ml稀释液均匀涂布于麦芽汁平板培养基上，25°C下倒置48h，待长出菌落后，选择具有典型单菌落(酵母菌菌落)进一步划线纯化2-3次，单菌落分别转入麦芽汁固体斜面培养基上，4°C下低温保存。野生酿酒酵母菌的筛选在9cm麦芽汁平板培养基(含O. 003%美兰)中添加敏感酿酒酵母菌株O. I O. 2ml，最终浓度为105cuf/ml，涂布均匀；同时活化并培养待测菌株，菌液稀释10倍，摇匀，用镊子夹取直径大约为5_灭菌滤纸片，蘸取稀释菌液，以滤纸片全部被淹没为准，轻轻置于麦芽汁鉴定培养基上，25°C培养2cT3d后，若待测菌为嗜杀菌株，则在其周围会形成圆形蓝色的死菌带。可根据死菌带直径大小比较野生酿酒酵母嗜杀性能的闻低。
权利要求
1.一种野生嗜杀酿酒酵母的筛选方法，其特征在于利用嗜杀酿酒酵母对敏感酿酒酵母的嗜杀特性，采用滤纸片法筛选野生嗜杀酿酒酵母。
2.根据权利要求I所述的一种野生嗜杀酿酒酵母的筛选方法，其特征在于所述滤纸片法之滤纸片在每次筛选操作时所采用尺寸必须相同。
3.根据权利要求I所述的一种野生嗜杀酿酒酵母的筛选方法，其特征在于所述野生酿酒酵母嗜杀特性的强弱，可根据蓝色死菌带直径大小进行横向比较。
4.根据权利要求I所述的一种野生嗜杀酿酒酵母的筛选方法，其特征在于所述野生嗜杀酿酒酵母是经过多次平板分离，使筛选菌种纯化而得到的。
全文摘要
本发明属于食品发酵工业领域，其技术方案为在含一定浓度美兰的麦芽汁平板培养基中添加一定浓度的敏感酿酒酵母菌株，涂布均匀。将培养好的待测菌株稀释10倍，摇匀，用镊子夹取直径大约为5mm灭菌滤纸片，蘸取稀释菌液，轻轻置于麦芽汁鉴定培养基上，25℃培养2-3天后，若待测菌为嗜杀菌株，则在其周围会形成圆形蓝色的死菌带。其特征是利用嗜杀酿酒酵母对敏感酿酒酵母的嗜杀特性，采用滤纸片法筛选野生嗜杀酿酒酵母；所述滤纸片在每次筛选时尺寸必须相同；所述野生酿酒酵母嗜杀特性的强弱，可根据蓝色死菌带直径大小比较；该嗜杀酿酒酵母是经过多次平板分离、纯化而得。
文档编号C12Q1/04GK102936616SQ20121048164
公开日2013年2月20日 申请日期2012年11月23日 优先权日2012年11月23日
发明者杨东升 申请人:杨东升