专利名称：一种微生物发酵法生产全维生素矿物质口服液的方法
技术领域：
本发明涉及一种保健口服液的制备，尤其涉及一种微生物发酵法生产全维生素矿物质口服液的方法。
背景技术：
“善存”是美国一种保健品”Centrum”的中文音译。这种保健品的主要成分是人体必需的矿物质(按量的大小可分为常量元素、半微量元素和微量元素)和维生素。它的第一个特点是成分很全，一般含有30-40种成分，差不多涵盖了人体所需要的全部矿物质和维生素。第二个特点是品种很全，从幼儿到老年各种年龄段使用的产品都有，而且还分性别，不同产品在成分和用量上都有些差别。以50岁以上老年人使用的为例，分为“50以上男性用”和“50以上女性用”两种，女性用品的补钙量是男性的两倍，这是考虑到老年妇女骨质 疏松较为普遍的特点而设计的。儿童用品和老人用品在成分和含量上差别更明显。美国、澳大利亚等国此类产品很多，其中以“Centrum”最为著名，年销量也最大。我国台湾地区人们保健意识比较强，几乎人人吃“Centrum”。大陆经济连续腾飞，购买美国“Centrum”的也越来越多。我国类似产品也早已问世，比较著名的有“黄金搭档”、“21金维它”等。至于像“蓝瓶的”葡萄糖酸锌等产品只是补充个别成分，针对的人群数量太少，不能和Centrum这样的全营养素相提并论。但是Centrum也有其缺点。众所周知，上述所有产品，不管它是以胶囊形式出现，还是以片剂形式上市，其实都是无机盐和维生素的直接混合物。稍懂一点化学知识的人都知道，几十种无机盐和维生素混合在一起，肯定会起多种复杂的化学反应，这些反应的产物有些是有害的，有些则降低了某些成分的水溶性即降低它的被吸收率。另一个问题是可能会产生拮抗作用。所谓拮抗，在这里可简单理解为抵消，如含量多的元素(常量元素)可能挤掉含量低的元素(微量元素)在肠内壁的吸收位点，使含量本来就很低的元素反而不被吸收，这是一种拮抗。被挤掉的这些微量元素往往对人体特别重要。另一种拮抗现象，譬如某些金属元素可能影响某些维生素作用的发挥，使维生素减效或失效。这在生物化学上也是常见的现象。归根到底，因为直接混合物成分太多太复杂，有害副作用的产生是不可避免的，而且很难预料和很难彻底搞清楚。有的生物化学家反对补充像“Centrum”这样的直接混合物保健品，也都是出于以上考虑。他们提倡用食品补充，因为食品中的矿物质和维生素都是有机态的，即都是和蛋白质、脂肪和碳水化合物等有机大分子结合在一起的，不是游离状态的，相互之间不会拮抗和竞争。综上，利用微生物发酵法生产全维生素矿物质口服液的方法迄今未见报道。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明要解决的问题是提供一种微生物发酵法生产全维生素矿物质口服液的方法。本发明所述微生物发酵法生产全维生素矿物质口服液的方法，步骤是(I)选择药用和食用蕈类、国标中允许使用的益生菌菌种；(2)利用微生物富集转化矿物质，进行多级发酵，发酵中参照国食药监注[2005] 202号《维生素、矿物质种类和用量》的规定分级添加矿物质；(3)根据菌体生长密度、形态和pH指标确定转罐及发酵终点；(4)参照国食药监注[2005]202号《维生素、矿物质种类和用量》的规定向三级发酵后的发酵罐中添加维生素；(5)灭菌和灌装；
其特征在于步骤(I)所述微生物菌种是金针菇、灵芝、虫草、香菇、双孢菇、杏鲍菇、草菇、紫芝、两岐双岐杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌或保加利亚乳杆菌；步骤(2)所述多级发酵为三级发酵；所述分级添加矿物质是指在培养基基本配方基础上，分别添加不同种类和不同量的矿物质元素构成一、二和三级发酵培养基；其中矿物质的分级添加为一级发酵时添加矿物质元素是Se4+或Se6+30. O 200. 0mg/L、Cr3+30. O 300. Omg/L、Cu2+400. O 1000. Omg/L、Mn2+600. O 2000. Omg/L、Μο6+20· O 60. Omg/L ;二级发酵时添加矿物质元素是Mg2+600 1800mg/L、Fe2+或Fe3+200 800mg/L、Zn2+400 1600mg/L ;三级发酵时添加矿物质元素是Ca2+800 3000mg/L、K2+2000 4000mg/L ；上述矿物质元素优选使用的化合物是Na2SeO3, CrCl3, CuSO4, MnSO4, (NH4) 2Mo04，MgCl2, FeCl3, Zn (CH3COO)2, CaCl2, K2HPO4 ；上述培养基基本配方具体是蕈类发酵培养基基本配方土豆泥40. Og/L,麸皮汁40. 0g/L,葡萄糖20. 0g/L ；乳酸菌发酵培养基基本配方蛋白胨10. 0g/L，牛肉浸膏10. 0g/L，酵母粉5. 0g/L,葡萄糖20. 0g/L,吐温801. 0mL/L，柠檬酸氢二铵2. 0g/L ；步骤(3)所述转罐指标是蕈类镜检菌体形态粗壮，菌密度120 150菌丝球/mL，pH3. 5 4. 5，或乳酸菌镜检菌体形态粗壮，菌密度2x10卜7菌落/mL，pH4. 5 5. O ;发酵终点指标是蕈类pH3. 5 4. 0，或乳酸菌pH3. 8 4. 2 ;步骤(4)所述添加的维生素种类及含量是维生素A 2. 5 6. 0mg/L、维生素D
0.01 I. 0mg/L、维生素 E 40 1000mg/L、维生素 K 0. 14 0. 6mg/L、维生素 B14 130mg/L、维生素B24 130mg/L、维生素PP 40 400mg/L、维生素B64 60mg/L、叶酸0. 6
2.5mg/L、维生素 B120. 01 0. lmg/L、泛酸 12 120mg/L、胆碱 1000 10000mg/L、生物素
0.06 0. 6mg/L、维生素 C 200 3000mg/L ；步骤(5)所述灭菌采用蕈类60 80°C，20 30分钟，乳酸菌不需灭菌；所述灌装为无菌操作间无菌操作灌装。上述微生物发酵法生产全维生素矿物质口服液的方法中步骤(I)所述微生物菌优选是金针菇、灵芝、虫草或保加利亚乳杆菌。上述微生物发酵法生产全维生素矿物质口服液的方法中步骤(2)所述一级发酵时添加矿物质兀素是Se4+ 或 Se6+30mg/L、Cr3+30mg/L> Cu2+400mg/L> Mn2+600mg/L> Mo6+20mg/L ;二级发酵时添加矿物质元素是Mg2+600mg/L、Fe2+或Fe3+200mg/L、Zn2+600mg/L ;三级发酵时添加矿物质元素是Ca2+1000mg/L、K+2000mg/L ;此量适用于未成年人。上述微生物发酵法生产全维生素矿物质口服液的方法中步骤(2)所述一级发酵时添加矿物质兀素是Se4+ 或 Se6+55mg/L、Cr3+50mg/L> Cu2+500mg/L> Mn2+800mg/L> Mo0+4Omg/L ;二级发酵时添加矿物质元素是Mg2+800mg/L、Fe2+或Fe3+400mg/L、Zn2+800mg/L ;三级发酵时添加矿物质元素是Ca2+2000mg/L、K+3000mg/L ;此量适用于成年人。上述微生物发酵法生产全维生素矿物质口服液的方法中步骤(3)所述转罐指优选是蕈类菌密度130 140菌丝球/mL，pH4.0，或乳酸菌菌密度2xl07菌落/mL，pH4.6 ;发酵终点指标优选是蕈类PH3. 5 3. 6，或乳酸菌pH4. O。上述微生物发酵法生产全维生素矿物质口服液的方法中步骤(4)所述三级罐发酵终点添加的维生素种类及含量是维生素A 2. 5mg/L、维生素D O. 02mg/L、维生素E60mg/L、维生素K O. 2mg/L、维生素B16mg/L、维生素B25mg/L、维生素PP 60mg/L、维生素·B610mg/L、叶酸 O. 6mg/L、维生素 B120. 02mg/L、泛酸 12mg/L、胆碱 1000mg/L、生物素 O. 15mg/L、维生素C 300mg/L ;此量适用于未成年人。上述微生物发酵法生产全维生素矿物质口服液的方法中步骤(4)所述三级罐发酵终点添加的维生素种类及含量是维生素A 3mg/L、维生素D 0.05mg/L、维生素E80mg/L、维生素K O. 3mg/L、维生素B120mg/L、维生素B210mg/L、维生素PP 80mg/L、维生素B620mg/L、叶酸 I. Omg/L、维生素 B120. 03mg/L、泛酸 50mg/L、胆碱 2000mg/L、生物素 O. 20mg/L、维生素C 1000mg/L ;此量适用于成年人。上述微生物发酵法生产全维生素矿物质口服液的方法中步骤(5)所述蕈类灭菌优选采用70°C，20分钟。本发明方法所产生的有益效果是利用微生物液体发酵富集转化作用，将各种人体必需的矿物质和维生素按一定规律添加到培养基中，让微生物在生长过程中吸收和转化无机矿质元素，成为有机形态。因为微生物液体发酵生产是多级进行的，所以矿物质可以分级加入，这样可避免矿物质之间的拮抗和竞争。具有保健功能的微生物很多，本发明根据需要进行灵活选择。如各种药用食用蕈类，各种益生菌(乳酸菌)分别具有多种保健功能，可根据食用人群的需要选用。本发明三级发酵后添加人体必需的维生素，避免了维生素高温破坏作用。申请人:迄今没有检索到国内外有类似工艺生产本发明所述保健口服液的方法。本发明的产品可以做到将美国“Centrum”中所有成分都包括进去，还增加了微生物的保健功能，具有更大的开发应用价值，能取得较好的经济和社会效益。
具体实施例方式实施例I :利用金针菇发酵生产适用于未成年人的全维生素矿物质口服液的方法I.金针菇菌种保存用PDA斜面(单位g/L) 200g 土豆块煮沸30分钟，过滤取汁，40g麸皮煮沸30分钟过滤取汁，葡萄糖20. 0，KH2PO4L 5，MgSO4 ·7Η20 O. 75，琼脂15. 0,121。。灭菌30分钟，制成试管斜面，接种金针菇菌，25°C培养4 5天制成斜面种子；2.液体摇瓶金针菇种子液制备培养基(单位g/L) 200g 土豆块煮沸30分钟，过滤取汁，40g麸皮煮沸30分钟过滤取汁，葡萄糖20. O, KH2PO4L 5，MgSO4 · 7H20 O. 75，121。。灭菌30分钟；冷却后，试管斜面种子接种；25°C，摇床200rpm，培养4天，得到培养好的金针燕摇瓶种子；3. 一级发酵罐发酵将制备好的摇瓶金针菇种子按10% (v/v)的量接种到121°C灭菌30分钟，然后冷却至25°C的一级发酵罐中通气搅拌发酵，培养温度25 ± I °C，搅拌桨转速200rpm培养，定时取样分析，镜检，菌丝粗壮、待菌丝球密度达到140菌丝球/mL，pH4. O时，作为种子待转到二级发酵罐；上述一级发酵罐培养基配方是土豆泥40. Og/L,麸皮40. Og/L,煮沸30分钟过滤取汁，葡萄糖 20. Og/L, Na2Se0365. 6mg/L, CrCl391. 5mg/L, CuS04100 5mg/L, MnS041648mg/L,(NH4) Mo0440. 8mg/L ；
4. 二级发酵罐发酵将一级发酵好的菌种按10% (v/v)的量转到121°C灭菌30分钟，然后冷却至25°C的二级发酵罐中通气搅拌发酵，培养温度25 土 TC，搅拌桨转速180rpm培养，定时取样分析，镜检，菌丝粗壮、待菌丝球密度达到150菌丝球/mL，和pH4. O时，作为种子待转到三级发
酵罐；上述二级发酵罐培养基配方是土豆泥40. Og/L,麸皮40. Og/L,煮沸30分钟过滤取汁，葡萄糖 20. 0g/L, MgCl22352. 9mg/L, FeCl3581. 4mg/L, C4H6O4Zn 1680. 7mg/L ；5.三级发酵罐发酵将二级发酵好的菌种按10% (v/v)的量转到121°C灭菌30分钟，然后冷却至25°C的三级发酵罐中通气搅拌发酵，培养温度25 土 TC，搅拌桨转速160rpm培养，定时取样分析，当PH降至3. 5，此时镜检，菌丝出现裂解，即为发酵终点；上述三级发酵罐培养基配方是土豆泥40. 0g/L,麸皮40. 0g/L,煮沸30分钟过滤取汁，葡萄糖 20. 0g/L, CaCl22777. 8mg/L, K2HP044454. 3mg/L ；6.维生素添加三级发酵完毕后添加维生素，各种维生素加量为(单位mg/L):维生素A 2. 5、维生素D 0.02、维生素E 60、维生素K 0. 2、维生素B16、维生素B25、维生素PP 60、维生素B610、叶酸0. 6、维生素B120. 02、泛酸12、胆碱1000、生物素0. 15、维生素C 300 ；7.灭菌与灌装将添加维生素后的三级发酵罐中的产品采用70°C灭菌20分钟，然后无菌操作间灌装制成商品化口服液。实施例2 :利用灵芝发酵生产成年人全维生素矿物质口服液的方法I.灵芝菌种保存用PDA斜面(g/L):200g 土豆块煮沸30分钟，过滤取汁，40g麸皮煮沸30分钟过滤取汁，葡萄糖20. O7KH2PO4L 5，MgS04 ·7Η20 O. 75，琼脂15. 0,121°C灭菌30分钟，制成试管斜面，接种灵芝菌，28°C培养4 5天制成斜面种子；2.液体摇瓶灵芝种子液制备培养基(g/L):200g 土豆块煮沸30分钟，过滤取汁，40g麸皮煮沸30分钟过滤取汁，葡萄糖20. O, KH2PO4L 5，MgSO4 · 7H20 O. 75，121°C灭菌30分钟；冷却后，试管斜面种子接种；30°C，摇床ISOrpm，培养4天，得到培养好的灵芝摇瓶种子；
3. 一级发酵罐发酵将制备好的摇瓶灵芝种子按10% (v/v)的量接种到121°C灭菌30分钟，然后冷却至30°C的一级发酵罐中通气搅拌发酵，培养温度29± 1°C，搅拌桨转速200rpm培养，定时取样分析，镜检，菌丝粗壮、待菌丝球密度达到150菌丝球/mL，和pH4. O时，作为种子待转到二级发酵罐；上述一级发酵罐培养基配方是土豆泥40. Og/L,麸皮40. Og/L,煮沸30分钟过滤取汁，葡萄糖 20. Og/L, Na2Se03120 . 4mg/L, CrCl3152. 4mg/L, CuS0412 56 . 3mg/L,MnS042 1 97 . 8mg/L, (NH4) Mo0481. 6mg/L ； 4. 二级发酵罐发酵将一级发酵好的菌种按10% (v/v)的量转到121°C灭菌30分钟，然后冷却至30°C的二级发酵罐中通气搅拌发酵，培养温度29土 TC，搅拌桨转速180rpm培养，定时取样分析，镜检，菌丝粗壮、待菌丝球密度达到150菌丝球/mL，和pH4. O时，作为种子待转到三级发
酵罐；上述二级发酵罐培养基配方是土豆泥40. Og/L，麸皮40. Og/L，煮沸30分钟过滤取汁，葡萄糖 20. 0g/L, MgCl23137. 3mg/L, FeCl31162. 8mg/L, C4H6O4Zn 2240. 9mg/L ；5.三级发酵罐发酵将二级发酵好的菌种按10% (v/v)的量转到121°C灭菌30分钟，然后冷却至30°C的三级发酵罐中通气搅拌发酵，培养温度29土 TC，搅拌桨转速160rpm培养，定时取样分析，当PH降至3. 6，此时镜检，菌丝出现裂解，即为发酵终点；上述三级发酵罐培养基配方是土豆泥40. 0g/L,麸皮40. 0g/L,煮沸30分钟过滤取汁，葡萄糖 20. 0g/L, CaCl25555. 6mg/L, K2HP046681. 5mg/L ；6.维生素添加三级发酵完毕后添加维生素，各种维生素加量为(单位mg/L):维生素A 3、维生素D 0.05、维生素E 80、维生素K 0. 3、维生素B120、维生素B210、维生素PP 80、维生素B620、叶酸I. O、维生素B120. 03、泛酸50、胆碱2000、生物素0. 20、维生素C 1000 ；7.灭菌与灌装将添加维生素后的三级发酵罐中的产品采用70°C灭菌20分钟，然后无菌操作间灌装制成商品化口服液。实施例3 :利用泰山虫草发酵生产成年人全维生素矿物质口服液的方法I.泰山虫草菌种保存用PDA斜面(g/L) :200g 土豆块煮沸30分钟，过滤取汁，40g麸皮煮沸30分钟过滤取汁，葡萄糖20. O, KH2PO4L 5，MgSO4 · 7H20 O. 75，琼脂15. 0,121。。灭菌30分钟，制成试管斜面，接种灵芝菌，25°C培养4 5天制成斜面种子；2.液体摇瓶灵芝种子液制备培养基(g/L):200g 土豆块煮沸30分钟，过滤取汁，40g麸皮煮沸30分钟过滤取汁，葡萄糖20. O7KH2PO4L 5,MgSO4 ·7Η20 O. 75，121°C灭菌30分钟；冷却后，试管斜面种子接种；25°C，摇床ISOrpm，培养3 4天，得到培养好的泰山虫草摇瓶种子；3. 一级发酵罐发酵将制备好的摇瓶泰山虫草种子按10% (v/v)的量接种到121°C灭菌30分钟，然后冷却至25 °C的一级发酵罐中通气搅拌发酵，培养温度25± 1°C，搅拌桨转速200rpm培养，定时取样分析，镜检，菌丝粗壮、待菌丝球密度达到120菌丝球/mL，和pH4. O时，作为种子待转到二级发酵罐；上述一级发酵罐培养基配方是土豆泥40. Og/L,麸皮40. Og/L,煮沸30分钟过滤取汁，葡萄糖 20. Og/L, Na2Se03120 . 4mg/L, CrCl3152. 4mg/L, CuS0412 56 . 3mg/L,MnS042 1 97 . 8mg/L, (NH4) Mo0481. 6mg/L ；4. 二级发酵罐发酵将一级发酵好的菌种按10% (v/v)的量转到121°C灭菌30分钟，然后冷却至25°C的二级发酵罐中通气搅拌发酵，培养温度25 土 TC，搅拌桨转速180rpm培养，定时取样分析，镜检，菌丝粗壮、待菌丝球密度达到120菌丝球/mL，和pH4. O时，作为种子待转到三级发
酵罐； 上述二级发酵罐培养基配方是土豆泥40. Og/L,麸皮40. Og/L,煮沸30分钟过滤取汁，葡萄糖 20. 0g/L, MgCl23137. 3mg/L, FeCl31162. 8mg/L, C4H6O4Zn 2240. 9mg/L ；5.三级发酵罐发酵将二级发酵好的菌种按10% (v/v)的量转到121°C灭菌30分钟，然后冷却至25°C的三级发酵罐中通气搅拌发酵，培养温度25 土 TC，搅拌桨转速160rpm培养，定时取样分析，当PH降至3. 9，此时镜检，菌丝出现裂解，即为发酵终点；上述三级发酵罐培养基配方是土豆泥40. 0g/L,麸皮40. 0g/L,煮沸30分钟过滤取汁，葡萄糖 20. 0g/L, CaCl25555. 6mg/L, K2HP046681. 5mg/L ；6.维生素添加三级发酵完毕后添加维生素，各种维生素加量为(单位mg/L):维生素A 3、维生素D 0.05、维生素E 80、维生素K 0. 3、维生素B120、维生素B210、维生素PP 80、维生素B620、叶酸I. O、维生素B120. 03、泛酸50、胆碱2000、生物素0. 20、维生素C 1000 ；7.灭菌与灌装将添加维生素后的三级发酵罐中的产品采用60°C灭菌30分钟，然后无菌操作间灌装制成商品化口服液。实施例4 :利用保加利亚乳杆菌发酵生产全维生素矿物质口服液的方法I.保加利亚乳杆菌菌种保存用MRS斜面(g/L):蛋白胨10. 0，牛肉浸膏10. 0，酵母提取物 5. O，葡萄糖 20. O，吐温 801. O，柠檬酸氢二铵 2. O,MnSO4 .H2O 0. 25,MgSO4 ·7Η200· 58，Κ2ΗΡ042. 0，琼脂15. 0，121 °C灭菌30分钟，制成试管斜面，接种保加利亚乳杆菌，37°C培养，制成斜面种子；2.液体摇瓶保加利亚乳杆菌种子液制备培养基(g/L):蛋白胨10.0，牛肉浸* 10.0,酵母提取物5. O,葡萄糖20. O,吐温801. O,柠檬酸氢二铵2. O, MnSO4 · H2O 0. 25，MgSO4 · 7H200. 58，K2HP042. 0,121°C灭菌30分钟，冷却后，试管斜面种子接种，瓶口保鲜膜密封，42°C，摇床120rpm，培养24 30小时，得到培养好的保加利亚乳杆菌摇瓶种子；3. 一级发酵罐发酵将制备好的摇瓶保加利亚乳杆菌种子按7% (v/v)的量接种到121°C灭菌30分钟，然后冷却至42°C的一级发酵罐中搅拌均匀，培养温度42土 TC，静止培养，定时取样分析，镜检，菌体粗壮、待菌密度达到2xl07菌落/mL，和pH4. 5时，作为种子待转到二级发酵罐；上述一级发酵罐培养基配方是蛋白胨10. 0g/L，牛肉浸膏10.g/L，酵母提取物 5. Og/L,葡萄糖 20. Og/L,吐温 801. 0ml/L,柠檬酸氢二铵 2. Og/L, Na2Se03120 . 4mg/L,CrCl3152. 4mg/L, CuS0412 56 . 3mg/L, MnS042 1 97 . 8mg/L, (NH4) Mo0481. 6mg/L ；4. 二级发酵罐发酵将一级发酵好的菌种按10% (v/v)的量转到121°C灭菌30分钟，然后冷却至42°C的二级发酵罐中搅拌均匀，培养温度42± 1°C，静止培养，定时取样分析，镜检，菌体粗壮、待菌密度达到2xl07菌落/mL，pH4. 5时，作为种子待转到三级发酵罐；上述二级发酵罐培养基配方是蛋白胨10. Og/L,牛肉浸膏10. g/L,酵母提取物 5. 0g/L，葡萄糖 20. 0g/L,吐温 801. 0ml/L,梓檬酸氢二铵 2. 0g/L, MgCl23137. 3mg/L,FeCl31162. 8mg/L, C4H6O4Zn 2240. 9mg/L ；5.三级发酵罐发酵
将二级发酵好的菌种按10% (v/v)的量转到121°C灭菌30分钟，然后冷却至42°C的二级发酵罐中搅拌均匀，培养温度42 土 1°C，静止培养，定时取样分析，当pH下降至4. O时，确定为发酵终点；上述三级发酵罐培养基配方是蛋白胨10. 0g/L,牛肉浸膏10. g/L,酵母提取物
5.0g/L，葡萄糖 20. 0g/L,吐温 801. 0ml/L，柠檬酸氢二铵 2. 0g/L, CaCl25555. 6mg/L, K2HPO46681. 5mg/L ；6.维生素添加三级发酵完毕后添加维生素，各种维生素加量为(单位mg/L):维生素A 3、维生素D 0.05、维生素E 80、维生素K 0. 3、维生素B120、维生素B210、维生素PP 80、维生素B620、叶酸I. O、维生素B120. 03、泛酸50、胆碱2000、生物素0. 20、维生素C 1000 ；7.灌装将添加维生素后的三级发酵罐搅拌均匀，然后不经灭菌直接无菌操作灌装制成商品化口服液。上述实施例中涉及的分析方法汇总如下I.菌丝形态和菌丝球密度用镜检分析，染色用革兰氏染色法，用常规光学显微镜油镜观察，最大倍数1500倍。2. pH 用 pH 计测定。3.多糖分析用两次DNS法，第一次DNS法分析发酵液中残留还原糖，然后发酵液用3N盐酸，100°C水解30分钟，中和后，第二次DNS法分析水解后的发酵液中还原糖，两次分析差值为多糖含量。4.矿物质分析用火焰原子吸收仪测定。本发明中涉及的菌种均购自天津生物芯片技术有限责任公司。
权利要求
1.一种微生物发酵法生产全维生素矿物质口服液的方法，步骤是 (1)选择药用和食用蕈类、国标中允许使用的益生菌菌种； (2)利用微生物富集转化矿物质，进行多级发酵，发酵中参照国食药监注[2005]202号《维生素、矿物质种类和用量》的规定分级添加矿物质； (3)根据菌体生长密度、形态和pH指标确定转罐及发酵终点； (4)参照国食药监注[2005]202号《维生素、矿物质种类和用量》的规定向三级发酵后的发酵罐中添加维生素； (5)灭菌和灌装； 其特征在于 步骤(I)所述微生物菌种是金针菇、灵芝、虫草、香菇、双孢菇、杏鲍菇、草菇、紫芝、两岐双岐杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌或保加利亚乳杆菌； 步骤(2)所述多级发酵为三级发酵；所述分级添加矿物质是指在培养基基本配方基础上，分别添加不同种类和不同量的矿物质元素构成一、二和三级发酵培养基；其中矿物质的分级添加为一级发酵时添加矿物质元素是=Se4+或Se6+30. O 200. Omg/L、Cr3+30. O 300. Omg/L、Cu2+400. O 1000. Omg/L、Mn2+600. 0 2000. Omg/L、Μο6+20· 0 60. Omg/L ;二级发酵时添加矿物质元素是Mg2+600 1800mg/L、Fe2+或Fe3+200 800mg/L、Zn2+400 1600mg/L ;三级发酵时添加矿物质元素是Ca2+800 3000mg/L、K2+2000 4000mg/L ； 上述培养基基本配方具体是 蕈类发酵培养基基本配方土豆泥40. 0g/L,麸皮汁40. 0g/L,葡萄糖20. 0g/L ； 乳酸菌发酵培养基基本配方蛋白胨10. 0g/L,牛肉浸膏10. 0g/L,酵母粉5. 0g/L,葡萄糖 20. 0g/L,吐温 801. 0mL/L,柠檬酸氢二铵 2. 0g/L ； 步骤(3)所述转罐指标是蕈类镜检菌体形态粗壮，菌密度120 150菌丝球/mL，pH3. 5 4. 5，或乳酸菌镜检菌体形态粗壮，菌密度2x10卜7菌落/mL，pH4. 5 5. O ;发酵终点指标是蕈类pH3. 5 4. 0，或乳酸菌pH3. 8 4. 2 ; 步骤(4)所述添加的维生素种类及含量是维生素A 2. 5 6. 0mg/L、维生素D 0. 01 I.0mg/L、维生素 E 40 1000mg/L、维生素 K 0. 14 0. 6mg/L、维生素 B14 130mg/L、维生素 B24 130mg/L、维生素 PP 40 400mg/L、维生素 B64 60mg/L、叶酸 0. 6 2. 5mg/L、维生素 B120. 01 0. lmg/L、泛酸 12 120mg/L、胆碱 1000 10000mg/L、生物素 0. 06 0. 6mg/L、维生素 C 200 3000mg/L ； 步骤(5)所述灭菌采用蕈类60 80°C，20 30分钟，乳酸菌不需灭菌；所述灌装为无菌操作间无菌操作灌装。
2.如权利要求I所述微生物发酵法生产全维生素矿物质口服液的方法，其特征在于步骤(I)所述微生物菌是金针菇、灵芝、虫草或保加利亚乳杆菌。
3.如权利要求I所述微生物发酵法生产全维生素矿物质口服液的方法，其特征在于步骤(2)所述一级发酵时添加矿物质元素是Se4+或Se6+30mg/L、Cr3+30mg/L> Cu2+400mg/L>Mn2+600mg/L,Mo6+20mg/L ;二级发酵时添加矿物质元素是Mg2+600mg/L、Fe2+ 或 Fe3+200mg/L、Zn2+600mg/L ;三级发酵时添加矿物质元素是Ca2+1000mg/L、K+2000mg/L ;此量适用于未成年人。
4.如权利要求I所述微生物发酵法生产全维生素矿物质口服液的方法，其特征在于步骤(2)所述一级发酵时添加矿物质元素是Se4+或Se6+55mg/L、Cr3+50mg/L> Cu2+500mg/L>Mn2+800mg/L>Mo6+40mg/L ;二级发酵时添加矿物质元素是Mg2+800mg/L、Fe2+ 或 Fe3+400mg/L、Zn2+800mg/L ;三级发酵时添加矿物质元素是Ca2+2000mg/L、K+3000mg/L ;此量适用于成年人。
5.如权利要求I所述微生物发酵法生产全维生素矿物质口服液的方法，其特征在于步骤(3)所述转罐指是蕈类菌密度130 140菌丝球/mL，pH4. 0，或乳酸菌菌密度2xl07菌落/mL, ρΗ4· 6 ;发酵终点指标是蕈类ρΗ3· 5 3. 6，或乳酸菌ρΗ4· O。
6.如权利要求I所述微生物发酵法生产全维生素矿物质口服液的方法，其特征在于步骤(4)所述三级罐发酵终点添加的维生素种类及含量是维生素A 2. 5mg/L、维生素DO. 02mg/L、维生素E 60mg/L、维生素K O. 2mg/L、维生素B16mg/L、维生素B25mg/L、维生素PP60mg/L、维生素 B610mg/L、叶酸 O. 6mg/L、维生素 B120. 02mg/L、泛酸 12mg/L、胆碱 1000mg/L、生物素O. 15mg/L、维生素C 300mg/L ;此量适用于未成年人。
7.如权利要求I所述微生物发酵法生产全维生素矿物质口服液的方法，其特征在于步骤(4)所述三级罐发酵终点添加的维生素种类及含量是维生素A 3mg/L、维生素DO. 05mg/L、维生素 E 80mg/L、维生素 K O. 3mg/L、维生素 B120mg/L、维生素 B210mg/L、维生素 PP 80mg/L、维生素 B620mg/L、叶酸 I. Omg/L、维生素 B120. 03mg/L、泛酸 50mg/L、胆碱2000mg/L、生物素O. 20mg/L、维生素C 1000mg/L ;此量适用于成年人。
8.如权利要求I所述微生物发酵法生产全维生素矿物质口服液的方法，其特征在于步骤(5)所述蕈类灭菌采用70°C，20分钟。
全文摘要
本发明公开了一种微生物发酵法生产全维生素矿物质口服液的方法，是经过菌种选择、利用多级发酵分级添加矿物质、根据菌体生长密度、形态和pH指标确定转罐及发酵终点、向三级发酵后的发酵罐中添加维生素、灭菌和灌装等步骤完成。本发明利用微生物液体发酵富集转化作用，将各种人体必需的矿物质和维生素按一定规律分级添加到培养基中，让微生物在生长过程中吸收和转化无机矿质元素，成为有机形态，同时利用多级添加发酵避免了矿物质之间的拮抗和竞争。本发明产品还增加了微生物的保健功能，具有更大的开发应用价值及较好的经济和社会效益。
文档编号A23L1/302GK102940260SQ20121048858
公开日2013年2月27日 申请日期2012年11月26日 优先权日2012年11月26日
发明者张厚程, 王玉萍, 李翔太 申请人:山东大学