专利名称：一种利用放线菌发酵生产卡拉霉素的培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及微生物聚酮类化合物转化培养基，具体涉及一种用于生物合成卡拉霉素的放线菌发酵培养基。
背景技术：
卡拉霉素属广谱抗菌素，对革兰阳性，阴性细菌都有抑菌作用，用于大肠杆菌，产气杆菌，肠炎杆菌，痢疾杆菌，肠炎球菌，耐药性葡萄球菌等引起的感染。还广泛用于对青霉素G耐药的金黄色葡萄球菌所引起的各种感染，如败血症、心内膜炎、尿路感染、肺部感染等，以及对链霉素耐药的结核杆菌所致的各种感染。尤其近年来研究发现卡拉霉素是肿瘤·靶点AKT抑制剂，具有抗肿瘤的作用，因此成了药物研发热点。目前工业生产上均采用传统的培养基及菌种生产卡拉霉素，其转化率低，生产率低，难以满足市场的需求，因此现急需一种高效的转化工艺，提高底物的转化率，降低生产成本。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种以放线菌M097为菌种，生物合成卡拉霉素的发酵培养基，包含氮源、碳源、无机盐和金属离子。所述的氮源包括有机氮源和无机氮源；有机氮源为酵母提取物，含量为8g/L ;无机氮源为硝酸钾，其含量为2g/L。所述的碳源为可溶性淀粉和葡萄糖，其含量为60 g/L。培养基中还加入钾盐、磷酸盐、铵盐和硝酸盐等无机盐和镁等金属离子。不同有机氮源对转化的影响显著，实验考察了花生粉饼、豆柏、豆饼粉、牛肉膏和蛋白胨五中常用有机氮源，添加浓度均为8g/L，底物投料浓度相同，转化结束后通过HPLC检测各有机氮源发酵液中产物的浓度，其中牛肉膏、蛋白胨和酵母提取液中的产物含量较闻，而酵母提取液的最闻。不同碳源对转化也具有的显著影响，实验考察了可溶性淀粉、葡萄糖、糊精、玉米粉和蔗糖等碳源，添加浓度均为60g/L，底物投料浓度相同，转化结束后通过HPLC检测各有碳源发酵液中产物的浓度，其中可溶性淀粉和葡萄糖中的产物含量较高。采用本发明发酵培养基和菌种合成卡拉霉素时，转化率可达85%，而采用现有技术的发酵培养基和菌种时，转化率< 70%。因此采用本发明经过组分优化的发酵培养基来进行卡拉霉素的合成时可以很好的解决转化率不高的缺点，从而降低生产成本。
具体实施例方式实施例1
发酵用液体种子培养基配方(g/L):玉米淀粉9，磷酸氢二钾O. 9，硫酸镁O. 6，氯化钙O. 5，蛋白胨6，酵母提取物I。pH7.0，121°C灭菌30分钟。
液体发酵培养基配方(g/L):酵母提取物8，磷酸氢二钾O. 8，硫酸镁O. 6，氯化钙O. 5，豆饼浸出物5，ρΗ7· 0,121°C灭菌30分钟。发酵培养将10%活化放线菌M097液体菌种接入种子罐，搅拌均匀，调整pH7. 0，与26°C温度下培养20h备用；将种子罐内培养好的液体种子按10%的接种量接入发酵培养基中搅拌发酵48h备用，pH7. O,发酵温度26°C，发酵过程鼓入无菌空气，空气量为O. 2-1. OL/分钟。发酵液采用超临界CO2萃取分离，离心取上清用HPLC进行分析，采用外标法对样品进行定量，计算转化率为85%。HPLC条件为=LC-1OAD型高效液相色谱仪；色谱柱XDB-C18(250_X4. 6mm, 5 μ m);流动相为甲醇:水=70 30 ;流速1. Oml/ 分钟；进样量10 μ I ;检测波长240nm。 上述实施例不作为对本发明的限定，凡在本发明的范围内所作的任何修改、等同替换、改进等，均属于本发明的保护范围。
权利要求
1.一种以放线菌M097为菌种，生物合成卡拉霉素的发酵培养基，包含氮源、碳源、无机盐和金属离子，其特征在于，所述的氮源包括有机氮源和无机氮源，有机氮源为酵母提取物。
2.如权利要求1所述的发酵培养基，其特征在于，所述的有机氮源的含量为8g/L。
3.如权利要求1所述的发酵培养基，其特征在于，所述的无机氮源为硝酸钾，其含量为2g/L。
4.如权利要求1所述的发酵培养基，其特征在于，所述的碳源为可溶性淀粉和葡萄糖，其含量为60 g/L。
全文摘要
本发明公开了一种以放线菌MO97为菌种，生物合成卡拉霉素的发酵培养基，包含氮源、碳源、无机盐和金属离子，所述的氮源包括有机氮源和无机氮源，采用本发明发酵培养基合成卡拉霉素时，其转化率可达85%，可以很好的解决目前卡拉霉素产率低的问题。
文档编号C12P17/18GK103014091SQ20121051354
公开日2013年4月3日 申请日期2012年12月5日 优先权日2012年12月5日
发明者荆晓丽 申请人:青岛艾华隆生物科技有限公司