专利名称：一种高效反硝化聚磷菌的筛选方法
技术领域：
本发明涉及一种适用于反硝化聚磷菌的筛选方法。
背景技术：
进入21世纪以来，我国地表水污染问题依然较重，湖泊(水库)富营养化问题依然突出，导致水体富营养化的主要营养物质为氮和磷，而目前城市污水处理中对氮、磷的去除率并不高，所以防治水体富营养化首要目的就是研究如何进行脱氮除磷。反硝化聚磷菌(denitrifying phosphate accumuLating organisms, DNPAOs)是应用于反硝化除憐技术的有效菌群，它能在缺氧条件下以硝酸盐作为电子受体进行同步反硝化(脱氮)和过量吸磷(除磷)过程。因此，反硝化除磷技术具有反硝化脱氮时无需碳源、吸磷时无需曝气并且排泥量少等优点已成为当前废水处理技术领域的研究热点之一。目前国内外对反硝化聚磷菌的种属都有了一定的研究，而且反硝化聚磷菌的筛选技术也有了一定的发展，但是现有筛选方法，需要的工作量比较大。反硝化聚磷菌的常规筛选方法是先通过富集，牛肉膏蛋白胨培养基的分离纯化，得到单菌落以后再进行除磷效果试验、反硝化产气试验，最后筛选到反硝化聚磷菌，其中牛肉膏蛋白胨培养基的分离纯化需要大量时间。因此我们需要寻求一种新的技术来解决这一问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种高效反硝化聚磷菌的筛选方法。本发明采用的技术方案是
一种高效反硝化聚磷菌的筛选方法，此筛选方法通过聚磷菌分离培养基进行筛选，所述聚磷菌分离培养基包括以下组分
3-5g/LCH3COONa · 3H20 ；150-250mg/L MgSO4 · 7H20 ；
70-90mg/L NH4CL ；30-50mg/LNa2HPO4 · 2H20 ；
50-70mg/L K2SO4；20_40mg/LCaCL2 · 2H20 ；
l-3mL 微量元素溶液； 15-20g/L琼脂，
Ph 值为 6. 5-7. 5，0· 5 X IO5-1. 5 X IO5Pa 灭菌 25-35 min。所述微量元素溶液包括以下组成
4-6g/LEDTA ；4-6g/L MnCL2· 4H20 ；1.5-1. 7g/L CuSO4 · 5H20 ； 4_6g/L FeSO4 · 7H20 ；
40-60mg/L CoCL2 · 6H20 ； 40_60mg/L H3BO3 ；
5-15mg/LKI;40_60mg/L(NH4) 6Mo7024 · 4H20。Ph值通过0.5-1. 5moL/L的氢氧化钠溶液和0.5-1. 5 moL/L的盐酸溶液调至6. 5~7. 5。本发明的优点是通过聚磷菌分离培 养基的选择性筛选，大大缩短了筛选周期，提高了工作效率。
具体实施例方式实施例1
本发明的一种高效反硝化聚磷菌的筛选方法，此筛选方法通过聚磷菌分离培养基进行筛选，所述聚磷菌分离培养基包括以下组分3g/L CH3COONa · 3H20 ；150mg/L MgSO4 · 7H20 ；70mg/L NH4CL ；30mg/L Na2HPO4 · 2H20 ；50mg/L K2SO4 ；20mg/L CaCL2 · 2H20 ；lmL 微量元素溶液；15g/L 琼脂，Ph 值为 6. 5，0.5 X IO5Pa 灭菌 25 min。微量元素溶液包括以下组成4g/LEDTA ；4g/L MnCL2 · 4H20 ;1. 5g/LCuSO4 · 5H20 ； 4g/L FeSO4 · 7H20 ；40mg/L CoCL2 · 6H20 ；40mg/L H3BO3 ；5mg/L KI ； 40mg/L (NH4) 6Mo7024 · 4H20。Ph值通过0. 5moL/L的氢氧化钠溶液和0. 5moL/L的盐酸溶液调至6. 5。
实施例2
本发明的一种高效反硝化聚磷菌的筛选方法，此筛选方法通过聚磷菌分离培养基进行筛选，所述聚磷菌分离培养基包括以下组分4g/L CH3COONa · 3H20 ；200mg/L MgSO4 · 7H20 ；80mg/L NH4CL ；40mg/L Na2HPO4 · 2H20 ；60mg/L K2SO4 ；30mg/L CaCL2 · 2H20 ；2mL 微量元素溶液；20g/L琼脂，Ph值为7，I X IO5Pa灭菌30 min。微量元素溶液包括以下组成5g/LEDTA ；5g/L MnCL2 · 4H20 ;1. 6g/LCuSO4 ·5Η20; 5g/L FeSO4 ·7Η20 ;50mg/L CoCL2 ·6Η20 ；50mg/L H3BO3 ；10mg/L KI ； 50mg/L (NH4) 6Mo7024 · 4H20。Ph值通过ImoL/L的氢氧化钠溶液和ImoL/L的盐酸溶液调至7。实施例3
本发明的一种高效反硝化聚磷菌的筛选方法，此筛选方法通过聚磷菌分离培养基进行筛选，所述聚磷菌分离培养基包括以下组分5g/L CH3COONa · 3H20 ；250mg/L MgSO4 · 7H20 ；90mg/L NH4CL ；50mg/L Na2HPO4 · 2H20 ；70mg/L K2SO4 ；40mg/L CaCL2 · 2H20 ；3mL 微量元素溶液；25g/L 琼脂，Ph 值为 7. 5，1. 5 X IO5Pa 灭菌 35 min。微量元素溶液包括以下组成6g/LEDTA ；6g/L MnCL2 · 4H20 ;1. 7g/LCuSO4 ·5Η20; 6g/L FeSO4 ·7Η20 ;60mg/L CoCL2 ·6Η20 ；60mg/L H3BO3 ；15mg/L KI ； 60mg/L (NH4) 6Mo7024 · 4H20。Ph值通过1. 5moL/L的氢氧化钠溶液和1. 5moL/L的盐酸溶液调至7. 5。通过此聚磷菌分离培养基得到的菌株P革兰氏染色反应呈阴性，光学显微镜和扫描电镜显示该菌为典型的短杆状,大小O. 3 μ m-o. 4 μ ΧΙ.2 μ m-2. O μ m，菌株P主要生理生化特性为革兰氏阴性，氧化酶阳性，接触酶阳性，其基本生理生化特性与假单胞菌(Pseudomonas)很相似。经过24小时缺氧培养后测定Ν03__Ν和Ρ0/—-Ρ的含量变化，发现菌株P除磷率达到75. 1%，脱氮率达90. 1%，筛选到的反硝化聚磷菌具有不错的反硝化除磷效果，同时筛选周期大大缩短了。
权利要求
1.一种高效反硝化聚磷菌的筛选方法，其特征在于此筛选方法通过聚磷菌分离培养基进行筛选，所述聚磷菌分离培养基包括以下组分 3-5g/LCH3COONa · 3H20 ； 150_250mg/L MgSO4 · 7H20 ； 70-90mg/LNH4CL ； 30-50mg/LNa2HPO4 · 2H20 ； 50-70mg/LK2SO4； 20_40mg/LCaCL2 · 2H20 ； l-3mL 微量元素溶液； 15-20g/L琼脂，Ph 值为 6. 5-7. 5，0· 5 X IO5-1. 5 X IO5Pa 灭菌 25-35 min。
2.根据权利要求1所述的一种高效反硝化聚磷菌的筛选方法，其特征在于所述微量元素溶液包括以下组成 4-6g/LEDTA ；4-6g/L MnCL2· 4H20 ；1.5-1. 7g/L CuSO4 · 5H20 ； 4_6g/L FeSO4 · 7H20 ； 40-60mg/L CoCL2 · 6H20 ； 40_60mg/L H3BO3 ； 5-15mg/LKI;40_60mg/L(NH4) 6Mo7024 · 4H20。
3.根据权利要求1所述的一种高效反硝化聚磷菌的筛选方法，其特征在于Ph值通过O.5-1. 5moL/L的氢氧化钠溶液和O. 5-1. 5 moL/L的盐酸溶液调至6. 5-7. 5。
全文摘要
本发明公开了一种高效反硝化聚磷菌的筛选方法，其特征在于此筛选方法通过聚磷菌分离培养基进行筛选，所述聚磷菌分离培养基包括以下组分3-5g/LCH3COONa·3H2O；150-250mg/L MgSO4·7H2O；70-90mg/L NH4CL；30-50mg/L Na2HPO4·2H2O；50-70mg/L K2SO4；20-40mg/L CaCL2·2H2O；1-3mL微量元素溶液；15-20g/L琼脂，Ph值为6.5-7.5，0.5×105-1.5×105Pa灭菌25-35min。本发明的优点是通过聚磷菌分离培养基的选择性筛选，大大缩短了筛选周期，提高了工作效率。
文档编号C12N1/20GK103045508SQ20121053920
公开日2013年4月17日 申请日期2012年12月14日 优先权日2012年12月14日
发明者洪武林, 刘希邈, 徐莉群, 范志伟 申请人:南通立源水业科技发展有限公司