湿法球磨联合酶法提取麦麸多肽和麦麸雌激素的方法
【专利摘要】本发明公开了一种湿法球磨联合酶法提取麦麸多肽和麦麸雌激素的方法，包括：(1)球磨粉碎：取麦麸，加入物料重量4-6倍的水，并加纤维素酶20U/g、淀粉酶10U/g，采用球磨机在转速为250-400rpm条件下对小麦麸皮进行湿法粉碎1-3h得到超细粉体悬浊液；(2)多肽的提取。(3)雌激素的提取。本发明的有益效果在于：本发明提供了湿法球磨联合酶法提取麦麸多肽和麦麸雌激素的方法，原料采用湿法球磨联合酶法进行预处理，可以打破小麦麸皮颗粒中致密的结晶结构，促进蛋白、淀粉、植物雌激素等有效成分的溶出，可有效提高麦麸多肽酶解中多肽的转化率和醇提取过程中雌激素的溶出量。
【专利说明】湿法球磨联合酶法提取麦麸多肽和麦麸雌激素的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于食品加工【技术领域】，涉及一种湿法球磨联合酶法提取麦麸多肽和麦麸雌激素的方法。
【背景技术】
[0002]近年研究发现，食物蛋白质的酶解产物中存在一些具有较高生物活性的短肽，如抗血栓肽、降血压肽、抗氧化肽、免疫促进肽等，这些生物活性肽的研究为新功能性食品的开发提供了新的途径，成为当前食品科学领域引人注目的研究方向之一。蛋白质酶解是一个复杂的过程，除酶本身的特性外，还受底物浓度、PH值、温度等多种因素的影响，任何一个条件的改变都可能产生不同的产物，影响蛋白质的转化率。目前，国内对于生物活性肽的研究集中在分离、纯化和功能性研究上，但多肽得率均较低，原料蛋白存在严重浪费问题。
[0003]植物雌激素指植物含有的类似于动物雌激素(雌二醇、孕酮等)生物活性物质，这类物质在高雌激素环境里表现抗雌激素作用，可降低乳腺癌、子宫肌瘤等与雌激素过高而引起的相关疾病，在低雌激素环境里起雌激素激动剂的作用，可防治如骨质疏松、更年期综合症等与雌激素水平下降有关的疾病。小麦麸皮中富含雌激素，具有抗癌、防癌等作用，小麦麸皮中的雌激素主要集中于小麦麸皮细胞内，生物利用率极低。
[0004]小麦麸皮中富含植物雌激素和蛋白，且目前主要作为饲料和肥料被利用，附加值极低。本发明选用麦麸作为原料提取麦麸蛋白和植物雌激素，通过湿法球磨联合酶解制各麦麸生物活性多肽和雌激素的混合溶液，方法条件温和、无污染、效率高。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种湿法球磨联合酶法提取麦麸多肽和麦麸雌激素的方法，其方法条件温和、无污染、效率高。
[0006]为了实现上述目的，本发明提出如下技术方案:
一种湿法球磨联合酶法提取麦麸多肽的方法，包括以下步骤:
(1)球磨粉碎:取一定量的麦麸，以麦麸重量计，加入物料重量4-6倍的水，并加纤维素酶20U/g、淀粉酶10U/g，采用球磨机在转速为250-400rpm条件下对小麦麸皮进行湿法粉碎l-3h得到超细粉体悬池液；
(2)多肽的提取:将悬浊液与球磨机分离，并加水至料液比为1:9，调整pH至9.5，以麦麸重量计,加入碱性蛋白酶50U/g,在55°C条件下酶解Ih,酶解液在4000rpm条件下离心20min得到多肽溶液。
[0007]优选地，所述步骤(I)中将一定量的麦麸置于玛瑙罐中。
[0008]优选地，所述步骤(I)中的球磨机为行星式球磨机。
[0009]优选地,所述步骤(2)中利用氢氧化钠溶液调整pH至9.5。
[0010]本发明还保护采用上述的方法提取的多肽溶液。
[0011]本发明另外提供一种湿法球磨联合酶法提取麦麸雌激素的方法，在上述步骤(I)和步骤(2)后，还包括以下步骤:
(3)雌激素的提取:取(2)过滤的滤渣，按照料液比为1:2的量加入体积分数为30%-60%的乙醇提取液，60-800C回流lh，在4000rpm条件下离心20min得雌激素提取液，残渣按照上述步骤重复提取一次，合并2次提取的上清液，得雌激素提取液。
[0012]本发明进一步保护采用上述方法提取的雌激素提取液。
[0013]本发明采用以下原料:纤维素酶(2000U/g)、淀粉酶(2000U/g)、碱性蛋白酶(20，000 U/g)三种酶购买于肇东市日成酶制剂有限公司。
[0014]本发明的有益效果在于:本发明提供了湿法球磨联合酶法提取麦麸多肽和麦麸雌激素的方法，原料采用湿法球磨联合酶法进行预处理，可以打破小麦麸皮颗粒中致密的结晶结构，促进蛋白、淀粉、植物雌激素等有效成分的溶出，可有效提高麦麸多肽酶解中多肽的转化率和醇提取过程中雌激素的溶出量。
[0015]本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
【具体实施方式】
[0016]下面通过实施例对本发明的技术方案作进一步说明，但不能理解为对本发明的限制。
[0017]实施例1
(1)球磨粉碎:取500克的麦麸至于玛瑙罐中，加入水2000mL，并加入纤维素酶5g、淀粉酶2.5g，采用行星式球磨机(XQM-20L，南京科析试验仪器研究所)在转速为400rpm条件下对小麦麸皮进行湿法粉碎3h得到超细粉体悬浊液；
(2)多肽的提取:将悬浊液与球罐分离，利用2500ml水冲洗球罐，合并2次悬浊液，利用氢氧化钠溶液调整PH至9.5，加入碱性蛋白酶1.25g，在55°C条件下酶解lh，酶解液在4000rpm条件下离心20min得到多肽溶液。采用双缩脲法检测溶液中多肽的含量，计算麦麸多肽的转化率为87%，采用试剂盒法检测溶液中孕酮含量为0.63ng/mL、雌二醇含量为
0.19pg/mL。麦麸多肽分离纯化的步骤是:粗制多肽溶液超滤分离，截留分子量为IOKDa以下的多肽，经真空冷冻干燥得即得将麦麸多肽。多肽溶液经过凝胶层析、离子交换层析和RT-HPLC后收集的活性组分进行醋酸纤维素薄膜电泳，电泳为一条单一条带，说明收集的活性多肽纯度较高，质谱测定其分子量为6523.2Da。
[0018](3)雌激素的提取:取(2)过滤的滤渣，加入体积分数为60%的乙醇提取液IOOOmL, 80°C回流lh，在4000rpm条件下离心20min得雌激素提取液，残渣按照上述步骤重复提取一次，合并2次提取的上清液，得雌激素提取液，采用试剂盒法检测溶液中孕酮含量为3.2ng/mL、雌二醇含量为2.5pg/mL。将步骤(2)中超滤脱除溶液与提取的雌激素上清液合并后，利用大孔树脂吸附柱分离，采用水混溶性溶剂进行梯度洗脱，得到含有结合态雌激素的浓缩液；将提取的结合态雌激素浓缩液，经反相C18柱富集纯化，进行上样、水混溶性溶剂梯度洗脱、收集组分浓缩，得到纯化的雌激素混合物。
[0019]检测方法:游离氨基酸采用甲醛滴定法；蛋白质采用凯氏定氮法。多肽采用双缩脲法检测。
[0020]多肽转化率计算公式:转化率=(Τ2-Τ1)/(Ρ1_Ρ2)。[0021]式中:T2为酶解后多肽含量；T1为酶解前多肽含量；P1为酶解前总蛋白含量；P2为酶解前酸溶性蛋白含量。
[0022]尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解:在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。
【权利要求】
1.一种湿法球磨联合酶法提取麦麸多肽的方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)球磨粉碎:取一定量的麦麸，以麦麸重量计，加入物料重量4-6倍的水，并加纤维素酶20U/g、淀粉酶10U/g，采用球磨机在转速为250-400rpm条件下对小麦麸皮进行湿法粉碎l-3h得到超细粉体悬池液； (2)多肽的提取:将悬浊液与球磨机分离，并加水至料液比为1:9，调整pH至9.5，以麦麸重量计,加入碱性蛋白酶50U/g,在55°C条件下酶解Ih,酶解液在4000rpm条件下离心20min得到多肽溶液。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(I)中将一定量的麦麸置于玛瑙罐中。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(I)中的球磨机为行星式球磨机。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中利用氢氧化钠溶液调整pH至 9.5。
5.权利要求1一 4所述的方法提取的多肽溶液。
6.一种湿法球磨联合酶法提取麦麸雌激素的方法，其特征在于，在权利要求1 一 4任一项所述步骤(I)和步骤(2 )后，还包括以下步骤: (3)雌激素的提取:取(2)过滤的滤渣，按照料液比为1:2的量加入体积分数为30%-60%的乙醇提取液，60-800C回流lh，在4000rpm条件下离心20min得雌激素提取液，残渣按照上述步骤重复提取一次，合并2次提取的上清液，得雌激素提取液。
7.权利要求6所述的方法提取的雌激素提取液。
【文档编号】A23L1/305GK103461643SQ201310401181
【公开日】2013年12月25日 申请日期:2013年9月6日 优先权日:2013年9月6日
【发明者】吴琴燕, 庄义庆, 杨敬辉 申请人:江苏丘陵地区镇江农业科学研究所