一株球孢白僵菌及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种球孢白僵菌的制备方法及应用，尤其对防治蝗虫类害虫有效。本发明提供的球孢白僵菌Beauveria?bassiana(Bals.-Criv.)Vuill?TRCC16001，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC?No.7997。该菌株产孢能力强，对菱蝗3龄跳蝻杀虫活性强，致死中时LT50为3.04天。利用该菌株能有效控制菱蝗的种群数量。另外，蝗虫绿僵菌对其他害虫松毛虫、玉米螟、蛴螬等也具有很好的防效，值得推广应用。
【专利说明】一株球孢白僵菌及其应用
【技术领域】
[0001] 一株球孢白僵菌的制备方法及应用
【背景技术】
[0002] 蝗虫是蝗科，直翅目昆虫。全世界有超过10, 000种。分布于全世界的热带、温带 的草地和沙漠地区。口器坚硬，前翅狭窄而坚韧，后翅宽大而柔软，善于飞行，后肢很发达， 善于跳跃。蝗虫是农、林、牧业生态系统的重要组成部分，不少有害蝗种对农、林、牧业可造 成不同程度危害。全世界的蝗虫已有1万种以上，其中对农、林、牧业可造成危害的蝗虫约 300种左右，全球除南极洲、欧亚大陆北纬550以北地区外均可发生蝗虫。
[0003] 多年来草原蝗虫一直采用化学农药防治，对迅速控制蝗害的发生、扩散起到了积 极作用。但化学农药治蝗存在成本高、用量大、安全性差等弊端且大量使用易造成人畜中 毒、污染草原同时杀灭蝗虫天敌危害草原生态环境破坏生态平衡。因此生物防治技术是目 前草原灾害综合治理的积极有效的措施。白僵菌是一种半知菌类的虫生真菌，具有营养器 官一菌丝和繁殖器官一分生孢子，菌丝有横隔有分枝。白僵菌的分布范围很广，从海拔几 米至2000多米的高山均发现过白僵菌的存在，白僵菌可以侵入6个目15科200多种昆虫、 螨类的虫体内大量繁殖，同时不断产生白僵素（大环脂类毒素）和草酸钙结晶，这些物质可 引起昆虫中毒，使体液发现机能发生变化，打乱新陈代谢以致死亡。所谓白僵虫就是白僵菌 的分生孢子落在昆虫体上，在合适温湿条件下，即可发芽直接侵入昆虫体内，以昆虫体内的 血细胞及其他组织细胞作为营养，大量增殖，以后菌丝穿出体表，产生白粉状分生孢子，从 而使害虫呈白色僵死状，称为白僵虫。白僵菌制剂对人、畜无毒，对作物安全，无残留、无污 染，但能感染家蚕幼虫，形成僵蚕病。
【发明内容】
[0004] 本发明要解决的技术问题是提供了一株球包白僵菌。
[0005] 本发明所提供的球抱白僵菌 Beauveria bassiana(Bals.-Criv. ) Vuill TRCC16001，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为 CGMCC No. 7997。该菌株已于2013年08月13日把藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普 通微生物中心（简称CGMCC)。
[0006] 本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种杀虫菌剂。
[0007] 本发明提供的杀虫菌剂，它的活性成分是上述球孢白僵菌Beauveria bassiana(Bals. -Criv.)Vuill TRCC16001。
[0008] 所述杀虫菌剂用于防治以下害虫的几种或一种：松毛虫、玉米螟、蛴螬、蝗虫、马铃 薯甲虫、松褐天牛、白蚁、茶小绿叶蝉、桃小食心虫等。
[0010] 本发明的球抱白僵菌 Beauveria bassiana (Bals.-Criv. ) Vuill TRCC16001 对 3 龄蝗蝻具有高致病力。
[0011] 菌种名称：球孢白僵菌
[0012] 拉丁名：Beauveria bassiana
[0013] 菌种编号：TRCC16001
[0014] 保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
[0015] 保藏机构简称：CGMCC
[0016] 地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
[0017] 保藏日期：2013年08月13日
[0018] 保藏中心登记入册编号：CGMCC No. 7997
[0019] 以下结合具体实施实例详细描述本发明，这些实例仅仅是用于理解本发明而非限 制。 实施实例1
[0020] 球孢白僵菌的菌株鉴定
[0021] 分子系统学鉴定 DNA提取方法：采用石英砂研磨CTAB提取法（Scott et al.，2000)。 遗传标记：选用翻译延伸因子（tef 1-alpha)基因（tef)，扩增引物：EF1T， EF2T(Bischoff et al. ,2006)〇 PCR扩增反应条件：先94摄氏度加热3分钟使模板DNA变性，然后进入下列温度循环： 94摄氏度变性30秒，50摄氏度退火30秒，72摄氏度延伸45秒，共进行35个循环，最后在 72摄氏度延伸5分钟（Wang，2012)。 PCR 产物检测和测序：PCR 产物与 100bp DNA ladder(MBI Fermentas)用 2.0 %的琼脂糖凝胶（agarose gel)在0.5 XTBE电泳缓冲液中于80V电压下 电泳20分钟，然后置于0. 5μ g/ml的溴乙锭（EB，ehidium bromide)溶液中染 色15分钟，在波长365和254nm的紫外光下检测为明显单一条带的产物由擎科 生物技术有限公司纯化后用ABI3700 (Applied Biosystems)进行双向直通测 序。 数据处理和统计学分析：原始序列用生物软件Bioedit7. 0. 9 (Hal 1，1999)编辑后 得到准确无误的序列，与GenBank下载的模式和权威菌株序列组成序列数据矩阵。对 于序列矩阵，在Bioedit 7. 0.9下做必要的人工编辑和调整得到的新矩阵。将该矩阵 用 MEGA5.0(Tamura et al·，2011)进行邻居连接法（neighbor-joining，NJ)分析，推断 出系统发育树，并用自展法（bootstrap)进行1000次重复评估各分支的可靠性。菌株 TRCC16001tef 序列如下： TRCC 16001 5' -TCACATCAACGTCGTCGTTATCGGGTGCGTTTAACGCTGAACGCCTTCGACCTCGACGAGCAATAAATA CTGACCACCAGACAGCCACGTCGATTCCGGCAAGTCTACCACCGTAAGTTTTTTTCAATTCGAGTGGCTTTTGAGCT CTCGAACCAGCAATCTTCGGCCTCGCCGGTACCTGAGAGCAAAGAGCTAACTATGTATACAGACTGGTCACTTGATC TACCAGTGCGGTGGTATTGACAAGCGTACCTGAGAAGTTCGAGAAGGTAAGCATAGTATCCAACTCTTTTCTACTGT CAAATGGACCTTGATCGCTTGCTGCGCAAATTTTTTTTCGTCGTATCGCGCTGGCCACCAGCACTCACTACCCCTCC TCCTCGGCAAAAATTTTCAGTGCCTTATCAATTCAGTGGGGCCAGTGAGAGTACCCCGCCACCTTGTCGCAAGCTTT CCCCTCATCTATTAGGTCGAAGCAGCAGAAGAAGAGACATCGCGTGCACTCGCCACAGATCGCTAACCTACCGTCTA CAGGAAGCCGCTGAACTCGGCAAGGGTTCCTTCAAGTATGCCTGGGTTCTTGACAAGCTCAAGGCCGAGCGTGAGCG TGGTATCACCATTGATATCGCTCCTGGAGTTCGAGACTCCCAAGTACCACGTCACCGTTATTGATGCTCCCGGTCAC CGTGACTTCATCAAGAACAT-3， 其系统发育树如下：
【权利要求】
1. 一种球包白僵菌，其拉丁名称为Beauveria bassiana (Bals.-Criv. ) Vuill，其特征 在于：所述的球抱白僵菌 Beauveria bassiana(Bals.-Criv.) Vuill，菌株号为 TRCC16001， 其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No. 7997。
2. 权利要求1所述的球包白僵菌在产生分生孢子或菌丝体中的应用。
3. -种杀虫菌剂，它的活性成分是权利要求1所述的球包白僵菌，其拉丁名称为 Beauveria bassiana(Bals. -Criv. )Vuill〇
4. 根据权利要求3所述的菌剂，其特征在于：所述的球包白僵菌为生孢子或菌丝体。
5. 根据权利要求3或4所述的菌剂，其特征在于：所述杀虫菌剂用于防治以下害虫的 几种或一种：松毛虫、玉米螟、蛴螬、蝗虫、马铃薯甲虫、松褐天牛、白蚁、茶小绿叶蝉、桃小食 心虫等。
6. 权利要求1所述的球包白僵菌，其拉丁名称为Beauveria bassiana (Bals.-Criv.) Vuill，在制备植物杀虫剂中的应用。
7. 权利要求3或4所述的菌剂在制备植物杀虫剂中的应用。
【文档编号】C12N1/14GK104087510SQ201310646165
【公开日】2014年10月8日 申请日期:2013年12月6日 优先权日:2013年12月6日
【发明者】王根豪, 梁小文, 陈晓燕, 周立峰, 李源, 刘丽君, 李肖宇, 马忠岩, 朱湘盛 申请人:江西天人生态股份有限公司