ZmHINT基因在花发育中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种ZmHINT基因在花发育中的应用。本发明公开了如下任一物质在促进植物提早开花中的应用：（1）SEQ?ID?No.2所示的蛋白；（2）SEQ?ID?No.2所示蛋白的编码基因；（3）含有（2）所述编码基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。本发明提供的ZmHINT基因在拟南芥中过表达能够诱导拟南芥提前开花，说明ZmHINT基因在花发育中具有重要作用。
【专利说明】ZmH I NT基因在花发育中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种ZmHINT基因在花发育中的应用。
【背景技术】 [0002]组氨酸三聚体蛋白超家族是一个具有核苷酸转移酶和水解酶活性的家族，其中，组氨酸三聚体核苷结合蛋白(Histidine triad nucleotide binding protein,HINT)是组氨酸三聚体蛋白超家族成员中分布最为广泛的一种蛋白，该蛋白在低等植物和高等动物中均具有很高的结构和功能相似性。晶体结构研究结果表明，HINT是其他四种组氨酸三聚体蛋白超家族成员的祖先，结构和功能的保守性，预示了 HINT发挥着重要的生物学功能。目前，有研究报道了关于哺乳动物HINT在细胞凋亡、肿瘤发生、发展中发挥了重要作用。相对动物HINT的研究，植物HINT的功能研究较少，尤其是对玉米HINT的研究尚未见报道。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是提供一种ZmHINT基因在花发育中的应用。
[0004]本发明提供了如下任一物质在促进植物提早开花中的应用:
[0005](I) SEQ ID N0.2 所示的蛋白；
[0006](2) SEQ ID N0.2所示蛋白的编码基因；
[0007](3)含有(2)所述编码基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。
[0008]上述应用中，所述编码基因如SEQ ID N0.1所示。
[0009]上述任一所述的应用中，所述植物为拟南芥。
[0010]一种制备转基因植物的方法也属于本发明的保护范围，包括如下步骤:将SEQ IDN0.2所示蛋白的编码基因导入出发植物中，得到转基因植物；与出发植物相比，转基因植物的开花时间提前。
[0011]上述方法中，所述编码基因是通过重组表达载体导入的，所述重组表达载体是将所述编码基因插入出发载体PCAMBIA-1304的多克隆位点得到的。
[0012]上述任一所述的方法中，所述编码基因如SEQ ID N0.1所示；
[0013]所述植物具体为拟南芥。
[0014]一种蛋白也属于本发明的保护范围，为如下(I)或(2)所示:
[0015](I)SEQ ID N0.2 所示的蛋白；
[0016](2)将SEQ ID N0.2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且功能相同的蛋白质。
[0017]上述蛋白的编码基因也属于本发明的保护范围。
[0018]上述编码基因中，所述编码基因为如下中至少一种:
[0019]I) SEQ ID N0.1 所示的 DNA 分子；
[0020]2)在严格条件下与I)限定的DNA分子杂交且编码所述蛋白质的DNA分子；
[0021]3)与I)或2)限定的DNA分子具有90%以上的同一性且编码所述蛋白质的DNA分子。
[0022]含有上述任一所述编码基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌也属于本发明的保护范围。
[0023]本发明提供的ZmHINT基因在拟南芥中过表达能够诱导拟南芥提前开花，说明ZmHINT基因在花发育中具有重要作用。
【专利附图】
【附图说明】
[0024]图1为重组农杆菌和对照农杆菌的PCR鉴定。
[0025]图2为不同浓度的潮霉素对转ZmHINT基因Tl代拟南芥的筛选。
[0026]图3为转ZmHINT基因的T2代拟南芥以及转空载体pCAMBIA_1304的T2代拟南芥的潮霉素抗性筛选。
[0027]图4为转ZmHINT基因的T2代拟南芥、转空载体pCAMBIA_1304的T2代拟南芥以及野生型拟南芥的PCR鉴定。
[0028]图5为拟南芥表型分析。
【具体实施方式】
[0029]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0030]下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0031]GC Buffer购自宝生物工程(大连)有限公司，产品目录号为9154。
[0032]B73 玉米自交系(Zea m`ays ssp.mays L.)在文献 “PatrickS.Schnable,et al.The B73Maize Genome: Complexity, Diversity,and Dynamics.Science326, 1112-1115(2009) ”中公开过，公众可从河南农业大学获得。
[0033]拟南芥(Arabidopsisthaliana)哥伦比亚型(Columbia-0)在文献“Xiao Luoj XiBai，Xiaoli Sun, Dan Zhu，Baohui Liu, Wei Jij Hua Caij Lei Cao，Jing Wuj Mengran Hu，XinLiu,Lili Tang and Yanming Zhu.Expression of wild soybean WRKY20in Arabidopsisenhances drought tolerance and regulates ABA signaling.Journal of ExperimentalBotany.2013.”中公开过，公众可从河南农业大学获得。
[0034]MS盐购自美国Sigma公司，货号为M5524-50L。
[0035]MS盐溶液按照如下方法配制:该溶液由溶剂和溶质组成；溶质为MS盐，蔗糖和Silwet L-77，溶剂为蒸馏水。MS盐在MS盐溶液中的浓度为2.15g/L，Silwet L-77在MS盐溶液中的浓度为200iil/L，蔗糖在MS盐溶液中的浓度为5g/100ml，调pH=5.8。
[0036]YEP液体培养基按照如下方法制备:
[0037]牛肉膏5.0g/L,蛋白胨5.0g/L,酵母提取物1.0g/L,蔗糖5.0g/L,MgSO4 ? 7H200.5g/L，余量为水，调pH=7.0后灭菌保存。
[0038]根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)GV3101 在文献“Wei Tang, RonSederoff, Ross Whetten.Regeneration of transgenic loblolly pine (Pinustaeda L.) from zygotic embryos transformed with Agrobacterium tumefaciens.Planta (2001) 213:981-989.”中公开过，公众可从河南农业大学获得。
[0039]pMD18-T Simple载体购自宝生物工程(大连)有限公司，产品目录号为6011。[0040]载体pCAMBIA-1304 在文献 “Ruchi Pandey, Avinash Mishra, G.K.Garg.Plantpromoter driven heterologous expression of HMff glutenin gene(s)subunit inE.col1.Mol Biol Rep (2008) 35:153 - 162.”中公开过，公众可从河南农业大学获得。
[0041]实施例1、ZmHINT基因过表达载体及重组农杆菌的构建
[0042]一、引物设计
[0043](一)根据ZmHINT基因编码区全长cDNA序列，设计并合成如下引物:
[0044]
【权利要求】
1.如下任一物质在促进植物提早开花中的应用: (1)SEQ ID N0.2所示的蛋白； (2)SEQ ID N0.2所示蛋白的编码基因； (3)含有(2)所述编码基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于:所述编码基因如SEQID N0.1所示。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于:所述植物为拟南芥。
4.一种制备转基因植物的方法，包括如下步骤:将SEQ ID N0.2所示蛋白的编码基因导入出发植物中，得到转基因植物；与出发植物相比，转基因植物的开花时间提前。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于:所述编码基因是通过重组表达载体导入的，所述重组表达载体是将所述编码基因插入出发载体PCAMBIA-1304的多克隆位点得到的。
6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于:所述编码基因如SEQID N0.1所示； 所述植物具体为拟南芥。
7.一种蛋白，为如下(I)或(2)所示:
(1)SEQ ID N0.2所示的蛋白； (2)将SEQID N0.2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且功能相同的蛋白质。
8.权利要求7所述蛋白的编码基因。
9.根据权利要求8所述的编码基因，其特征在于:所述编码基因为如下中至少一种: 1)SEQ ID N0.1所示的DNA分子； 2)在严格条件下与I)限定的DNA分子杂交且编码权利要求7所述蛋白质的DNA分子； 3)与I)或2)限定的DNA分子具有90%以上的同一性且编码权利要求7所述蛋白质的DNA分子。
10.含有权利要求8或9所述编码基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。
【文档编号】C12N5/10GK103695436SQ201310651445
【公开日】2014年4月2日 申请日期:2013年12月5日 优先权日:2013年12月5日
【发明者】吴刘记, 陈彦惠, 祖小峰, 唐海涛, 王顺喜 申请人:河南农业大学