成人的髓母细胞瘤细胞系及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种成人的髓母细胞瘤细胞系XQ625，保藏号为CCTCC?No：C2013171；该细胞系是从发生于成人小脑蚓部的经典型髓母细胞瘤手术切除标本中分离培养获得，在体外能够长期传代培养，在裸鼠体内1×104个细胞即能起始肿瘤的发生；该细胞系既有助于满足对髓母细胞瘤的深入研究需要，又是研制抗髓母细胞瘤药物的有力工具，具有潜在良好的应用前景。
【专利说明】成人的髓母细胞瘤细胞系及其应用
【技术领域】
[0001]本发明属于细胞生物学领域，涉及一种肿瘤细胞系。
【背景技术】
[0002]髓母细胞瘤是儿童最常见的恶性脑肿瘤，发病高峰年龄为8岁；仅30%的髓母细胞瘤发生于成人。由于发病率较低，目前全世界已有的髓母细胞瘤细胞系非常有限，仅有Daoy, D283、D341Med、BO-U MED-FU, 0NS-76 和 0NS-81 几种，且均来源于儿童。近年来，随着对髓母细胞瘤研究的深入，大量证据表明，儿童和成人的髓母细胞瘤在遗传背景及临床预后等方面均有不同。例如，成人的髓母细胞瘤通常发生于小脑半球，而儿童的髓母细胞瘤多发生于小脑蚓部；成人的髓母细胞瘤组织学类型上多以促结缔组织增生型为主，且比儿童的髓母细胞瘤预后更差。因此，有必要分离并建立一系列具有不同生物学特性的髓母细胞瘤细胞系，以满足对髓母细胞瘤及其治疗药物的深入研究需要。
【发明内容】
[0003]有鉴于此，本发明的目的在于分离并建立具有不同生物学特性的髓母细胞瘤细胞系，以满足对髓母细胞瘤及其治疗药物的深入研究需要。
[0004]经研究，本发明提供如下技术方案:
[0005]成人的髓母细胞瘤细胞系XQ625，保藏号为CCTCC No:C2013171。
[0006]发明人收集了 2011-2013年间中国人民解放军第三军医大学第二附属医院术前诊断疑是髓母细胞瘤的13例标本，手术中取材进行原代细胞的培养。术后病理诊断为髓母细胞瘤的5例标本(MB1-MB5)均在体外成功分离培养原代髓母细胞瘤细胞，并规律传代。在传代培养过程中发现，随着传代次数的增加，细胞的增殖能力逐渐减弱，4例原代髓母细胞瘤细胞在培养十几代后细胞的分化现象非常明显，细胞生长停滞，仅I例原代髓母细胞瘤细胞(MB4)可以连续传代，由此建立了稳定的髓母细胞瘤细胞系XQ625。
[0007]髓母细胞瘤细胞系XQ625来源于成人，发生于小脑蚓部，其病理诊断依据2007年WHO中枢神经系统肿瘤分类属于经典型髓母细胞瘤。
[0008]对XQ625细胞的生物学特性研究发现:细胞的倍增时间为42小时；细胞周期为G1期占53.93%，G2期占16.07%, S期占30.00% ;在裸鼠体内，I X IO4个XQ625细胞即能起始肿瘤的发生；移植瘤细胞呈弥散分布，细胞小而圆，核浆比大，核分裂相易见，胞浆少，胞浆内细胞器少，可见核糖体及线粒体，呈较原始的未分化状态；免疫组化标记Vimentin呈阳性，Κ?67 约 95% 细胞呈阳性，其余免疫组化标记 CD99、CgA、GFAP、Pan-CK、Syn、LCA、EMA、Desmin和S-100均为阴性。
[0009]本发明的成人髓母细胞瘤细胞系XQ625可以用于制备或筛选抗髓母细胞瘤的药物。例如，通过体外实验筛选出具有抑制或杀伤XQ625细胞的抗体，可将此抗体作为治疗髓母细胞瘤药物的主要成分，或筛选出特异识别XQ625细胞的抗体作为靶向工具，制备抗髓母细胞瘤的靶向药物。[0010]本发明的有益效果在于:本发明在对5例髓母细胞瘤原代进行细胞培养的过程中，成功建立了一株发生于成人的髓母细胞瘤细胞系，并对其细胞生物学特性进行了研究，该细胞系在体外能够长期传代培养，在裸鼠体内IXlO4即能起始肿瘤的发生，既有助于满足对髓母细胞瘤的深入研究需要，又是研制抗髓母细胞瘤药物的有力工具，具有潜在良好的应用前景。
[0011]生物材料保藏
[0012]成人的髓母细胞瘤细胞系XQ625，于2013年11月5日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址:中国.武汉.武汉大学)，保藏号为CCTCC No:C2013171o
【专利附图】
【附图说明】
[0013]为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图进行说明:
[0014]图1为髓母细胞瘤原代标本的HE染色，其中A-E分别为MB1-MB5肿瘤组织HE染色，放大倍数X 200 ；F-J分别为MB1-MB5肿瘤组织HE染色，放大倍数X 400。
[0015]图2为髓母细胞瘤原代细胞的倒置相差显微镜观察，其中A-E分别为MB1-MB5髓母细胞瘤原代细胞培养的形态特征，放大倍数X 100。
[0016]图3为不同代数P1、P21和P41的髓母细胞瘤细胞XQ625的倒置相差显微镜观察，其中A-C分别为XQ625细胞P1、P21和P41的形态特征，放大倍数X 100 ;D_F分别为XQ625细胞P1、P21和P41的形态特征，放大倍数X 200。
[0017]图4为髓母细胞瘤细胞XQ625的生长曲线和细胞周期检测，其中A为CCK8检测XQ625细胞的生长曲线，B为细 胞周期试剂盒流式检测XQ625细胞的细胞周期。
[0018]图5为髓母细胞瘤细胞XQ625的核型分析结果。
[0019]图6为髓母细胞瘤细胞XQ625的裸鼠皮下成瘤，其中A为不同数量级XQ625细胞所成瘤的大小，B为不同数量级XQ625细胞所成瘤的重量。
[0020]图7为XQ625移植瘤HE染色及免疫组化染色，其中A为HE染色，B-J分别为vimentin、Ki67、CD99、CgA、GFAP, Pan-CK, Syn, LCA, EMA, Desmin、S-100 免疫组化染色，放大倍数均为X 400。
[0021]图8为XQ625移植瘤电镜观察，其中A显示瘤细胞较小，大小形态比较一致，核浆比大，可见一核分裂相出显示瘤细胞核膜较光滑，可见核仁，胞浆少，胞浆内细胞器少，可见核糖体及线粒体。
【具体实施方式】
[0022]下面将结合附图，对本发明的优选实施例进行详细的描述。优选实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照试剂制造厂商所建议的条件进行。
[0023]实施例中使用的主要设备如下:
[0024]
设备名称I生产商(产地)
光学显微镜，BX-40型Olympus公司(日本)
【权利要求】
1.成人的髓母细胞瘤细胞系XQ625，保藏号为CCTCCNo:C2013171。
2.权利要求1所述成人的髓母细胞瘤细胞系XQ625在制备或筛选抗髓母细胞瘤的药物中的应用。
【文档编号】C12N5/09GK103695371SQ201310722702
【公开日】2014年4月2日 申请日期:2013年12月24日 优先权日:2013年12月24日
【发明者】任勇, 卞修武, 崔有宏 申请人:中国人民解放军第三军医大学第一附属医院