一种用于核酸快速提取的工具盒、试剂盒及核酸提取方法

一种用于核酸快速提取的工具盒、试剂盒及核酸提取方法
【专利摘要】本发明一种用于核酸快速提取的工具盒、试剂盒及一种核酸快速提取方法，主要用于从各种临床样本中快速提取核酸(包括RNA和DNA)，本发明将核酸提取装置和试剂组合为一体，主要包括注射器、中空的转接器、核酸吸附膜管、加样针、盛放不同试剂的各种管、管架等部分，在经过临床样本裂解处理、注射器抽吸、核酸吸附膜吸附核酸、漂洗液漂洗核酸吸附膜、洗脱液洗脱核酸等步骤后，可以获得纯的核酸溶液用于下游实验。
【专利说明】—种用于核酸快速提取的工具盒、试剂盒及核酸提取方法

【技术领域】
[0001]本发明涉及生物【技术领域】，具体涉及一种可以从各种临床样本中快速提取核酸的工具盒、试剂盒及从临床样本中快速提取核酸的方法。

【背景技术】
[0002](一 )核酸提取
[0003]核酸提取已经成为了分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作，但是目前核酸的提取方案非常之多，而且繁简不一。分子诊断、核酸测序、功能基因组等相关实验的完成全部依赖核酸的成功提取，传统的操作流程己经可以实现全部的自动化，但这些昂贵的仪器并不能得到大规模的推广使用，我国目前仍是发展中国家，广大的基层医疗单位并不能配备复杂的仪器，因此，提供一种经济性好的核酸提取装置很有必要。
[0004]核酸包括DNA、RNA两种分子，在细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在，核酸提取的主要步骤为:一、裂解细胞，去除与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂类等生物大分子，去除其他不需要的核酸分子，如提取DNA分子时，应去除RNA，反之亦然，如果是提取RNA和DNA共提取的话，则不需去除任何一种；二、沉淀核酸或者吸附核酸；三、纯化核酸，去除盐类，有机剂等杂质；四、洗脱或溶解核酸，利用洗脱液或者溶解液将核酸洗脱或者溶解。
[0005]( 二)临床样本前处理
[0006]由于样本的处理及保存对DNA和RNA (尤其是RNA)的影响较大，因此在核酸测定时标本的处理及适当保存对测定结果的准确有效非常重要。临床常见的标本有血清(浆)、全血、分泌物、棉拭子、脓液、体液、新鲜组织、石蜡切片等，这些临床标本的处理方法各有不同。
[0007]1.血清(浆)标本
[0008]加适量的红细胞裂解液(破膜液)，裂解全血中的红细胞；再加适量的细胞核裂液(破核液)，裂解白细胞中的细胞核，使核内DNA释放出来；然后再加SDS(十二烷基硫酸钠)等去污剂，溶解脂蛋白，解聚核蛋白；SDS可与蛋白质结成复合物，使蛋白质变性沉淀，但SDS在以后的核酸提取过程中必须除去。
[0009]2.痰标本
[0010]痰属于分泌物，临床上常用作结核杆菌DNA测定样本，由于痰标本中含大量粘蛋白和杂质，故在核酸提取时，一定要对标本进行前处理，即用4% NaOH液化，去除粘蛋白，然后用煮沸或蛋白酶、酚/氯仿等经典法提取DNA。
[0011]3.棉拭子
[0012]用PCR方法检测性病病原体时(衣原体、支原体、淋球菌、梅毒螺旋体、人乳头状瘤病毒等)，临床标本一般为棉拭子。标本取材是关键，衣原体等病原体感染上皮细胞，因此取材一定要取到细胞。具体方法:
[0013]加Iml无菌生理盐水，充分震荡混匀，12000rpm,离心5分钟
[0014]用棉拭子取尿道分泌物或宫颈分泌物(由医护人员采集)，置无菌试管或EP管内弃上清，沉淀加无菌生理盐水Iml,打匀，12000rpm,离心5分钟
[0015]4.体液
[0016]体液标本，包括胸水、腹水、脑脊液、尿液等，可直接离心，取沉淀物提取核酸。血性胸腹水，可使用红细胞裂解液处理:
[0017]5.脓液
[0018]粘稠脓液:同痰标本处理，先用4% NaOH液化，再离心取沉淀提取DNA。
[0019]水样脓液:直接离心，沉淀用生理盐水洗2-3次后用于DNA提取。
[0020]6.组织
[0021]组织有新鲜组织和石蜡切片。新鲜组织的处理步骤:先用生理盐水洗二次，然后将其捣碎或剪碎(用眼科剪)，加蛋白酶K消化后提取核酸；石蜡切片用于核酸提取，需先用二甲苯脱蜡，再用蛋白酶K消化后进行DNA提取。
[0022](三)核酸提取工具及试剂盒
[0023]核酸提取已经成为了分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作，但是目前核酸的提取方案非常之多，而且繁简不一。分子诊断、核酸测序、功能基因组等相关实验的完成全部依赖核酸的成功提取，传统的操作流程已经可以实现全部的自动化，但这些昂贵的仪器并不能得到大规模的推广使用，我国目前仍是发展中国家，广大的基层医疗单位并不能配备复杂的仪器， 因此，提供一种经济性好的核酸提取装置很有必要。
[0024]CN101684463A提出一种微量临床样本核酸快速提取装置，由尖口吸管、带膜的过滤器和抽吸装置(注射器或塑料泡)三部分组成，其通过三次抽吸完成核酸吸附、清洗及洗脱过程，能快速简便从样本中提取核酸，然美中不足的是，尖口吸管、带膜的过滤器和抽吸装置三部分组合方式单一且为固定安装，用塑料泡做抽吸装置时(CN101684463A的图2、图3)第三次抽吸进行核酸洗脱实际不能完成(前两次抽吸的废液无法排出，带核酸的洗脱液混在废液中)，而使用注射器做抽吸装置时，带核酸的洗脱液进入注射器不仅会沾染注射器形成生物垃圾，还会导致微量样本中核酸备注射器沾染而损失致使检测不准确。
[0025]另一方面，由于临床检测和诊断中往往有时限要求，需要快速提取和检测核酸，常规实验室的试剂及检测器具分类庞杂而不能针对性地进行检测，难以实现高效检测；而基层单位又往往条件有限，很难再短时间凑齐检测用试剂和器具，因此快速核酸提取技术并不易于普及推广。
[0026]还有，临床上已有多种核酸提取试剂盒产品，但其中只配备试剂，检测操作中还需另外找寻适用工具来配合完成，有时会因器具不全或不适用而影响检测。可见，有必要研发一种快速、简便、易于操作、能够推广使用的核酸提取工具盒及试剂盒产品。


【发明内容】

[0027]本发明目的在于提供一种组合有核酸快速提取装置及相关器具、每人份独立包装、便于使用的用于核酸快速提取的工具盒、试剂盒及提取方法。
[0028]本发明第一方面，提供用于核酸快速提取的工具盒，其包括一管架、置于管架上的若干试管、核酸提取装置以及一外包装，所述管架设架腿和上、下两层隔板，上、下隔板上对应分布设有盛置孔，管架的上隔板分为两个功能区域，用于放置试管的第一区和用于放置核酸提取装置的第二区。
[0029]第一区设有多个分区，每个分区设一个盛置孔用于放置对应编号的试管；对应管架第一区的盛置孔，配备同样数量的试管，试管上均标注与隔板分区一致的标号，并将相同标号的试管固定安置在管架的盛置孔内。
[0030]放置于第二区的核酸提取装置包括两个注射器以及吸附膜管、转接器和加样针各一个，管架上隔板的第二区内与注射器外形对应设有两个容置孔，与上述其它三个部分外形对应设有另外三个容置孔，将匹配的部件放入相对的容置孔内。
[0031]所述核酸提取装置的转接器为中空圆台状，转接器连接在注射器和吸附膜管中间且注射器、转接器和吸附膜管液路连通；吸附膜管内的底端安装有吸附膜。
[0032]吸附膜管为两端开口的管体，一端为该管体的敞口端，另一端固定一小口连接管，吸附膜安装在该小口连接管一端；吸附膜管敞口端尺寸与转接器的外尺寸匹配。
[0033]注射器包括筒体、置于筒体前端的管状连接座以及置于筒体内可推拉的推杆，所述小口连接管的外径与注射器的连接座外径尺寸相等，所述转接器设中间通孔，中间通孔尺寸与注射器的连接座外径尺寸匹配。
[0034]所述加样针包括针座和针头,所述小口连接管的外径与所述加样针的针座内径匹配。
[0035]转接器一端连通注射器，另一端连通吸附膜管的小口连接管，组成该装置的抽液方式。
[0036]或，转接器一端连通注射器，另一端套接在吸附膜管的敞口端内，吸附膜管的小口连接管连通加样针，组成该装置的推液方式。
[0037]推液方式中，所述转接器外形为圆台状，圆台状转接器的小头端外径尺寸与吸附膜管的敞口端匹配，该敞口端从圆台状转接器的小头端套接。
[0038]具体的，本发明提供一种用于DNA提取的工具盒，管架的第一区为正方形，设有五个分区A-E，五个分区以其中一个为中心另外四个分区对称分散布置，每个分区设一个盛置孔用于放置对应编号的试管；吸附膜管中的吸附膜是能吸附DNA的硅胶膜。
[0039]具体的，本发明还提供一种用于RNA提取的工具盒，管架的第一区为长方形，其上分布设有九个分区A-1，以其中一个分区为中心另外八个分区对称分布设置，每个分区设一个盛置孔，其中A、B各分区各设一主孔(A和B)和一副孔(A+和B+)，每一盛置孔放置对应编号的试管；吸附膜管中的吸附膜是能吸附RNA的硅胶膜。
[0040]具体的，本发明又提供一种用于RNA与DNA共同提取的工具盒，管架的第一区为长方形，其上分布设有九个分区A-1，以其中一个分区为中心另外八个分区对称分布设置，每个分区设一个盛置孔，其中A、B各分区各设一主孔(A和B)和一副孔(A+和B+)，每一盛置孔放置对应编号的试管；吸附膜管中的吸附膜是能吸附RNA和DNA的硅胶膜。
[0041]第二方面，本发明提出用于核酸快速提取的试剂盒，使用前述工具盒，将相关试剂装入对应试管中包装得到。
[0042]所述试剂盒中试剂包括裂解液、漂洗液和洗脱液。
[0043]具体的，本发明提供一种用于DNA提取试剂盒，各试管带盖，试管中装入以下针对一个样本用量的试剂=A管，裂解液，异硫氰酸肌溶液或者Chelex裂解液；B管，洗液I，75%酒精；(:管，洗液2，95%酒精山管，洗脱液，1mM的Tris-HCL或者双蒸水；另外E管为空管。
[0044]具体的，本发明提供一种用于RNA提取或RNA和DNA共同提取试剂盒，各试管带盖，其中装入以下针对一个样本用量的试剂:A管，RNA酶抑制剂(粉末)；A+管，AVE溶液；B管，RNA结合剂(粉末)；B+管，AVE溶液；C管:裂解液，异硫氰酸肌溶液或者Chelex裂解液；D管，99%酒精出管，洗液1，70%酒精^管，洗液2，95%酒精；G管，洗液3，99%酒精；H管:洗脱液，1mM的Tris-HCL或者双蒸水；另外I管为空管。
[0045]第三方面，本发明提供核酸快速提取的方法，使用前述试剂盒，经过样本用裂解液进行裂解处理、用吸附膜吸附样本中核酸、用漂洗液漂洗吸附膜除杂、以及用洗脱液洗脱核酸等步骤，获得纯的核酸溶液。
[0046]该方法体现为“两抽一推一抽”使裂解液中的核酸吸附于滤膜上；“二抽”使漂洗液通过滤膜以清洗杂质；“一推”将吸附在滤膜上的核酸成分洗脱，从而完成了生物样本中核酸成分的提取；
[0047]该方法具体包括以下步骤:
[0048]a)试剂标示分装:
[0049]将核酸提取中涉及的裂解液、漂洗液、洗脱液等按每一人份分装至各试管，并对每一管进行标示；
[0050]b)将样本加入裂解液管中得到样本裂解混合液；
[0051]c) 一吸:使用核酸提取装置的抽液形式，用吸附膜管的敞口端从样本裂解混合液中抽吸，利用注射器抽吸产生的吸力，样本中的核酸成分流经吸附膜时因膜的特异性吸附而吸附在吸附膜上，滤液为有细胞碎屑和蛋白质等杂质的废液，废液进入注射器腔；
[0052]d) 二吸:使用核酸提取装置的抽液形式，用吸附膜管的敞口端从漂洗液管中抽吸，利用注射器抽吸产生的吸力，用漂洗液清洗吸附膜，清洗残留在吸附膜上的蛋白质或其它成分，滤液进入注射器腔且该滤液；
[0053]e) 一推:更换另一只洁净的注射器，先吸入洗脱液，然后使用核酸提取装置的推液形式，将注射器腔内的洗脱液加入到吸附膜管里，利用注射器推压产生的压力将洗脱液流经吸附膜，并将吸附在膜上的核酸成分洗脱推挤至空管中，完成样本中核酸的提取。
[0054]具体的，本发明提供一种从样本中快速提取DNA的方法，使用所述DNA提取试剂盒，其中步骤a)将所涉及的裂解液、75%酒精、95%酒精、洗脱液等每一人份(一个样本用量)分装至工具盒中各试管中，并对每一管标示为A-D不同字母和颜色；各试管放置在管架第一区的盛置孔A-D内，将空管E管放在管架第一区的盛置孔E内；
[0055]步骤b) -e)按前述操作，最终将提取的DNA溶液收集到E管中，完成样本中DNA的提取。
[0056]具体的，本发明提供从样本中快速提取RNA或DNA和RNA共提取的方法，使用所述RNA提取试剂盒或DNA和RNA共同提取试剂盒，包括以下步骤:
[0057]a)试剂标示分装:将所涉及的各试剂按每一人份(一个样本用量)分装至工具盒中各试管中，并对每一管标示为A-H不同字母和颜色；各试管放置在管架第一区的盛置孔A-H内，将空管I管放在管架第一区的盛置孔I内；
[0058]b)将A+管中的AVE溶液加入到A管粉末当中溶解RNA酶抑制剂；将B+管中的AVE溶液加入到B管粉末当中溶解RNA结合剂(粉末)；将样本加入装有裂解液的C管中，再加入溶解的RNA酶抑制剂和溶解的RNA结合剂，并混匀；最后将D管中的溶液加入到C管中，再次混匀，得到样本裂解混合液；
[0059]c) 一吸:使用核酸提取装置的抽液形式，用吸附膜管的敞口端从C管样本裂解混合液中抽吸，利用注射器抽吸产生的吸力，样本中的核酸成分流经吸附膜时因膜的特异性吸附而吸附在吸附膜上，滤液为有细胞碎屑和蛋白质等杂质的废液，废液进入注射器腔；
[0060]d) 二吸:继续使用抽液形式，用吸附膜管的敞口端从E管中抽吸洗液1，利用注射器抽吸产生的吸力，用洗液I清洗吸附膜，清洗残留在吸附膜上的蛋白质或其它成分，滤液进入注射器腔；再次用吸附膜管的敞口端从F管中抽吸洗液2，利用注射器抽吸产生的吸力，用洗液2清洗吸附膜，清洗残留在吸附膜上的蛋白质或其它成分，滤液进入注射器腔；再次用吸附膜管的敞口端从G管中抽吸洗液3，利用注射器抽吸产生的吸力，用洗液3清洗吸附膜，清洗残留在吸附膜上的蛋白质或其它成分，滤液进入注射器腔；拆卸吸附膜管2和转接器3，用过的注射器I放置一边；
[0061]e) 一推:使用核酸提取装置的推液形式，加样针对着I管，将注射器腔内的洗脱液加入到吸附膜管里，利用注射器推压产生的压力将洗脱液流经吸附膜，并将吸附在膜上的核酸成分洗脱推挤至I管中收集，完成样本中RNA的提取或DNA和RNA的共同提取。
[0062]采用以上技术方案，本发明的特点:核酸提取装置中多用途的转接器可以同时连接不同部件，同时利用注射器取代了高转速离心机，利用提取装置就可以在液相非均匀体系中达到分离的效果。本发明将核酸提取所需各种部件组合包装，试剂又巧妙组合在各部件中，方便取用，更便于携带，适于对生物样本的现场操作。
[0063]本发明可以作为核酸扩增前对生物样本进行核酸提取的一种简捷手段，提取出的样本纯度足够符合下一步核酸扩增的要求，同时不需要任何仪器、操作安全和简单、一次性使用，因而可以被广泛地应用于病原体或宿主核酸提取，用于临床检测和诊断。本发明提取装置成本低廉，操作简单同时又不需要任何特殊仪器，操作时间短，大约只需要10-15分钟，因而本发明可以被广泛地应用于一些实验条件相对较差的基层医院和经济不发达地区或国家；同时，也可以很好地满足高层次医院的需求，特别是急诊室和床边的核酸快速诊断。

【专利附图】

【附图说明】
[0064]图1为本发明实施例1核酸快速提取工具盒管架的分区及构成示意图；
[0065]图2为本发明实施例2核酸快速提取工具盒管架的分区及构成示意图；
[0066]图3为本发明中核酸提取装置的构成及结构图；
[0067]图4为本发明中核酸提取装置行使抽吸功能时的分解和组合图；
[0068]图5为本发明中核酸提取装置行使推压功能时的分解和组合图；
[0069]图6为本发明检测实例I得到的旋毛虫DNA扩增核酸检测结果；
[0070]图7为本发明检测实例2得到的沙门氏菌DNA PCR扩增检测结果；
[0071]图8为本发明检测实例3得到的H1N1RNA RT-LAMP扩增检测结果。

【具体实施方式】
[0072]本发明提供用于核酸快速提取的工具盒、试剂盒及配套的核酸提取的方法，用于方便快捷地从各种临床样本中提取核酸(包括RNA和DNA)。
[0073]本发明用于核酸快速提取的工具盒，主要用于从各种临床样本中快速提取核酸(包括RNA和DNA)。主要包括注射器、中空的转接器、核酸吸附膜管、加样针、盛放不同试剂的各种管、管架等部分，在经过临床样本裂解处理、注射器抽吸、核酸吸附膜吸附核酸、漂洗液漂洗核酸吸附膜、洗脱液洗脱核酸等步骤后，可以获得纯的核酸溶液用于下游实验。
[0074]参见图1-图2所示，本发明工具盒首先配备一管架9，与传统试管架类似，管架9设架腿和上、下两层隔板，上、下隔板上对应分布设有盛置孔，一般下层隔板孔洞略小于上层隔板孔洞；本发明中，管架9的上隔板分为两个功能区域，第一区和第二区，其中:
[0075]第一区设有多个分区，每个分区设一个盛置孔用于放置对应编号的试管；对应管架9第一区的盛置孔，配备同样数量的试管，试管上均标注与隔板分区一致的标号，并将相同标号的试管固定安置在管架9的盛置孔内。
[0076]第二区主要用于放置核酸提取装置，核酸提取装置主要包括注射器1、吸附膜管
2、转接器3和加样针4四个部分(参见图3)，在管架9上隔板的第二区内，与注射器I外形对应设有两个容置孔91，与上述其它三个部分外形对应设有容置孔92-94，另外将匹配标号的部件放入相对的容置孔内以固定，其中包含两个注射器I和吸附膜管2、转接器3和加样针4各一个。
[0077]如此，将各试管按标号固定安置在管架9第一区的盛置孔内，将核酸提取装置的各部件按匹配标号固定安置在管架9第二区的盛置孔内，再配以一外包装(袋或盒)，即得到本发明用于核酸快速提取的工具盒。
[0078]本发明的试剂盒是基于以上设计的工具盒产品，将相关试剂装入对应试管中包装得到。本发明中所用试剂和材料均可商购获得，例如可用的裂解液是临床上常用的异硫氰酸肌溶液或者Chelex裂解液等可以裂解细胞的溶液；漂洗液是PH〈7的清洗液，如70%的酒精；洗脱液是1mM的Tris-HCL或者双蒸水；吸附膜是各种能吸附核酸的膜，如硅胶膜Silica membrane。
[0079]以下结合具体实施例进一步描述本发明。
[0080]实施例1:DNA提取工具盒、试剂盒及样本中DNA的快速提取
[0081]本实施例中，工具盒产品中，管架9的结构与前述相同，特点是:第一区为正方形，如图1所示其上分布设有五个分区A-E，为使操作稳定性好，五个分区以其中一个(E区)为中心另外四个分区对称分散布置，每个分区设一个盛置孔用于放置对应编号的试管。
[0082]第二区同样用于放置核酸提取装置中注射器1、吸附膜管2、转接器3和加样针4四个部分，其中:
[0083]注射器I为普通筒状一次性注射器或者能行使注射器功能的类似装置，其具有筒体11、置于筒体11前端用于连接注射器针头的管状连接座12、以及置于筒体11内可推拉的推杆13 ;加样针4即为普通的注射针头，包括针座41和针头42。
[0084]转接器3为中空的圆柱或圆台，其中间通孔31尺寸与注射器I管状连接座12外径尺寸匹配，使该管状连接座12能插入到转接器3中间通孔31中；另，转接器3外表为圆柱状或圆台状，其外径尺寸与吸附膜管2匹配，以下详述；转接器3可以具有弹性的材料如橡胶、塑料制成。
[0085]吸附膜管2为两端开口的管体，可用塑料材料制成，其一端为该管体的敞口端21，另一端固定一小口连接管22，吸附膜管2内底部(连接管22 —端称为底)设吸附膜23 (市售商品，本例中装有吸附DNA的硅胶膜Silica membrane);吸附膜管2的两端开口均可与转接器3相连，其中敞口端21尺寸与圆柱状转接器3的外径尺寸匹配，或与圆台状转接器的小头端外径尺寸匹配以使转接器3能与敞口端21套接；吸附膜管2的小口连接管22外径与注射器I连接座12相同，既与加样针4的针座41内径匹配，又与转接器3中间通孔31尺寸匹配，使该小口连接管22既能插入到针座41内连接加样针4，又能插入到中间通孔31中连接转接器3。
[0086]如此，将各试管A-E按标号固定安置在管架9第一区的盛置孔A-E内，将核酸提取装置的各部件按标号固定安置在管架9第二区的盛置孔内，再配以一外包装(袋或盒)，即得到本发明用于DNA快速提取的工具盒。
[0087]进一步，上述工具盒中的各试管可用聚丙烯材料制成，并配有盖，在其中装上用于DNA提取的试剂(一个样本用量)，则形成DNA提取试剂盒产品。具体的，本例各试管中可装入的试剂为:A管:裂解液；主要用于裂解样本中的细胞。B管:洗液I ;多为75%酒精，用于洗净吸附膜上的杂质。C管:洗液2;多为95%酒精，用于洗净吸附膜上的杂质。D管:洗脱液 '多为1mM的Tris-HCL或者双蒸水，用于将核酸从吸附膜上洗脱。E管:空管，作为收集管用于盛放洗脱得到的含有样本核酸的溶液。管架的盛置孔和各管在颜色和标号上一一对应，方便放置和操作。附加有试剂后，DNA快速提取工具盒变成了 DNA快速提取试剂盒，对样本的DNA提取更加便捷。
[0088]利用以上工具盒或试剂盒从样本中快速提取DNA包括以下步骤:
[0089]a)试剂标示分装:将所涉及的裂解液、75%酒精、95%酒精、洗脱液等每一人份(一个样本用量)分装至工具盒中各试管中，并对每一管标示为A-D不同字母和颜色；各试管放置在管架9第一区的盛置孔A-D内，将空管E管放在管架9第一区的盛置孔E内；
[0090]b)将临床样本加入装有裂解液的A管中，并混匀；
[0091]c)组装核酸提取装置:将一只注射器1、吸附膜管2和转接器3从管架9第二区中取出，用转接器3 —端连接注射器I的连接座12，另一端连接吸附膜管2的小口连接管22，使吸附膜23在后(本发明中以注射器使用方向定义前后，即装针头一端定义为“前”，推杆抽取时运动方向定义为“后”)，即组配成核酸快速提取装置的抽液形式(如图4所示)。
[0092]d) 一吸:使用上述组装的核酸提取装置的抽液形式，用吸附膜管的敞口端从A管样本裂解混合液中抽吸，利用注射器抽吸产生的吸力，样本中的核酸成分流经吸附膜时因膜的特异性吸附而吸附在吸附膜上，滤液为有细胞碎屑和蛋白质等杂质的废液，废液进入注射器腔且废液仅经过该吸附膜一次；
[0093]e) 二吸:继续使用抽液形式，用吸附膜管的敞口端从B管中抽吸洗液1，利用注射器抽吸产生的吸力，用洗液I清洗吸附膜，清洗残留在吸附膜上的蛋白质或其它成分，滤液进入注射器腔；再次用吸附膜管的敞口端从C管中抽吸洗液2，利用注射器抽吸产生的吸力，用洗液I清洗吸附膜，清洗残留在吸附膜上的蛋白质或其它成分，滤液进入注射器腔；拆卸吸附膜管2和转接器3，用过的注射器I放置一边；
[0094]f)反向组装核酸提取装置:取出另一只洁净的注射器I和加样针4，用该注射器先吸入D管中的洗脱液，用转接器3 —端连接注射器I的连接座12，另一端伸入吸附膜管2的敞口端21，而吸附膜管2的小口连接管22再连接加样针4的针座41，组配成核酸快速提取装置的推液形式(如图5所示)。
[0095]g) 一推:使用核酸提取装置的推液形式，加样针4对着E管(此处E管作为了收集管)，将注射器腔内的洗脱液加入到吸附膜管里，利用注射器推压产生的压力将洗脱液流经吸附膜，并将吸附在膜上的核酸成分洗脱推挤至E管中收集，完成样本中DNA中核酸的提取过程。
[0096]如此E管收集的即为不含有其他杂质的DNA溶液，可用于后续核酸扩增及检测。实施例2:RNA提取工具盒、试剂盒及样本中RNA的快速提取
[0097]本实施例中，工具盒产品中，管架9的结构与前述相同，特点是:管架9的第一区为长方形(如图2)，其上分布设有九个分区A-1，同样以其中一个分区(I区)为中心另外八个分区对称分布设置，每个分区设一个盛置孔，其中A、B各分区各设一主孔(A和B)和一副孔(A+ 和 B.)。
[0098]第二区放置的核酸提取装置与实施例1基本相同，略有差别的是吸附膜管2中装设的吸附膜23为可以吸附RNA的硅胶膜Silica membrane。相同部分不再赘述。
[0099]如此，将各试管A-1按标号固定安置在管架9第一区的盛置孔A-1内，将核酸提取装置的各部件按标号固定安置在管架9第二区的盛置孔内，再配以一外包装(袋或盒)，即得到本发明用于RNA快速提取的工具盒。
[0100]进一步，进一步，上述工具盒中的各试管可用聚丙烯材料制成，并配有盖，在其中装上用于RNA提取的试剂(一个样本用量)，则形成RNA提取试剂盒产品。本例中，各试管中可装入的试剂为:A管:RNA酶抑制剂(粉末)；主要用于抑制样本中的RNA酶，最大程度保存RNA的提取量。A+管:AVE溶液；主要用于溶解RNA酶抑制剂(粉末)。B管:RNA结合剂(粉末)；主要用来针对微量样本提取核酸时，帮助高效回收核酸的作用。B+管:AVE溶液；主要用于溶解RNA结合剂(粉末)。C管:裂解液；主要用于裂解样本中的细胞。D管:99%酒精；主要用于沉淀核酸，使核酸析出更好的吸附于吸附膜上。E管:洗液I ;多为70%酒精，用于洗净吸附膜上的杂质。F管:洗液2 ;多为95%酒精，用于洗净吸附膜上的杂质。G管:洗液3 ;多为99%酒精，用于洗净吸附膜上的杂质并有助于干燥吸附膜。H管:洗脱液；多为1mM的Tris-HCL或者双蒸水，用于将核酸从吸附膜上洗脱。I管:空管，作为收集管用于盛放洗脱得到的含有核酸的溶液。管架上的盛置孔和各试管标识在颜色和标号上一一对应，方便放置和操作。
[0101]附加有试剂后，RNA快速提取工具盒变成了 RNA快速提取试剂盒，对样本的RNA提取更加便捷。
[0102]利用以上工具盒或试剂盒从样本中快速提取RNA。包括以下步骤:
[0103]a)试剂标示分装:将所涉及的上述各试剂按每一人份(一个样本用量)分装至工具盒中各试管中，并对每一管标示为A-H不同字母和颜色；各试管放置在管架9第一区的盛置孔A-H内，将空管I管放在管架9第一区的盛置孔I内；
[0104]b)将A+管中的AVE溶液加入到A管粉末当中溶解RNA酶抑制剂；将B+管中的AVE溶液加入到B管粉末当中溶解RNA结合剂(粉末)；将临床样本加入装有裂解液的C管中，再加入溶解的RNA酶抑制剂和溶解的RNA结合剂，并混匀；最后将D管中的溶液加入到C管中，再次混匀，至此完成裂解混合液，可以进行下一步操作。
[0105]c)组装核酸提取装置:将一只注射器1、吸附膜管2和转接器3从管架9第二区中取出，用转接器3 —端连接注射器I的连接座12，另一端连接吸附膜管2的小口连接管22，使吸附膜23在后(本发明中以注射器使用方向定义前后，即装针头一端定义为“前”，推杆抽取时运动方向定义为“后”)，即组配成核酸快速提取装置的抽液形式(如图4所示)。
[0106]d) 一吸:使用上述组装的核酸提取装置的抽液形式，用吸附膜管的敞口端从C管样本裂解混合液中抽吸，利用注射器抽吸产生的吸力，样本中的核酸成分流经吸附膜时因膜的特异性吸附而吸附在吸附膜上，滤液为有细胞碎屑和蛋白质等杂质的废液，废液进入注射器腔且废液仅经过该吸附膜一次；
[0107]e) 二吸:继续使用抽液形式，用吸附膜管的敞口端从E管中抽吸洗液1，利用注射器抽吸产生的吸力，用洗液I清洗吸附膜，清洗残留在吸附膜上的蛋白质或其它成分，滤液进入注射器腔；再次用吸附膜管的敞口端从F管中抽吸洗液2，利用注射器抽吸产生的吸力，用洗液2清洗吸附膜，清洗残留在吸附膜上的蛋白质或其它成分，滤液进入注射器腔；再次用吸附膜管的敞口端从G管中抽吸洗液3，利用注射器抽吸产生的吸力，用洗液3清洗吸附膜，清洗残留在吸附膜上的蛋白质或其它成分，滤液进入注射器腔；拆卸吸附膜管2和转接器3，用过的注射器I放置一边；
[0108]f)反向组装核酸提取装置:取出另一只洁净的注射器I和加样针4，用该注射器先吸入H管中的洗脱液，用转接器3 —端连接注射器I的连接座12，另一端伸入吸附膜管2的敞口端2 1，而吸附膜管2的小口连接管22再连接加样针4的针座41，组配成核酸快速提取装置的推液形式(如图5所示)。
[0109]g) 一推:使用核酸提取装置的推液形式，加样针4对着I管，将注射器腔内的洗脱液加入到吸附膜管里，利用注射器推压产生的压力将洗脱液流经吸附膜，并将吸附在膜上的核酸成分洗脱推挤至I管中收集，完成样本中RNA的提取过程。
[0110]如此I管收集的即为不含有其他杂质的RNA的溶液，可用于后续核酸扩增及检测。应用于微生物检测、基因突变检测、单核苷酸多态性检测等涉及核酸的下游实验。
[0111]说明:本发明工具盒中试管因为常用的试管壁都是聚丙烯的材料，管壁上有静电，会吸附核酸，因此在提取纯化过程中采用RNA结合剂(例如实施例2装在B管中的试剂，B+管中的AVE溶液用于溶解该RNA结合剂)可帮助核酸去除静电效应，通常在步骤b中加入，使核酸RNA能很好被吸附到纯化柱上，可提高洗脱效率，从而达到尽可能大的回收样本中核酸。如果试管采用其他不会吸附核酸的材质制成，B管中的RNA结合剂以及B+管中的AVE溶液不是必需的。
[0112]实施例3 =RNA和DNA共同提取工具盒、试剂盒及样本中RNA和DNA的快速提取
[0113]本实施例用于从样本中实施RNA和DNA共同提取与检测，该工具盒产品与实施例2基本相同，略有差别的是吸附膜管2中装设的吸附膜23为可以同时吸附RNA和DNA的硅胶膜 Silica membrane。
[0114]本实施例中所用试剂与实施例2完全相同，RNA和DNA快速提取工具盒变成了 RNA和DNA快速提取试剂盒，对样本的RNA和DNA的同时提取更加便捷。
[0115]利用以上工具盒和试剂盒从样本中快速共提取RNA和DNA的过程与实施例2操作也完全相同，最终完成样本中RNA和DNA的共同提取。本实施例与实施例2相同部分不再赘述。
[0116]本实施例应用在样品中可能存在RNA和DNA的情况，收集得到的为不含有其他杂质的RNA和DNA的溶液，可用于后续核酸扩增及检测、分型。应用于微生物检测、基因突变检测、单核苷酸多态性检测等涉及核酸的下游实验。
[0117]以下给出利用本发明工具盒、试剂盒及方法提取及检测核酸的实例说明本发明的应用。实例中未提及内容与前述实施例相同。
[0118]实例1:沙门氏菌DNA的提取
[0119]本例以沙门氏菌DNA的提取为例，验证本发明核酸提取工具盒、试剂盒及方法。工具盒配备参见实施例1。本实例提取样本共4份(I为阴性对照，2-4为沙门氏菌)，分别进行如下操作:
[0120]1.裂解
[0121]取500微升的沙门氏菌过夜培养的菌液，加入等量的裂解液(A管，组成:NaOH，25mmol ;Tris_Hcl，1mmol ；Triton X-100，I % ;NP_40，I % ;EDTA，0.1mMol ;Chelex_100，2%.);混匀后室温静置5分钟，使用核酸提取装置的抽液形式，将混合液抽吸至吸附膜管，使混合液经过吸附膜，不含核酸的废液进入注射器腔。
[0122]2.清洗
[0123]使用核酸提取装置的抽液形式，将漂洗液(B管和C管)分次抽吸到吸附膜管里，同上步操作使漂洗液清洗吸附膜上的杂质，废液进入到注射器腔。
[0124]3.DNA 洗脱
[0125]更换一只洁净注射器，将120微升洗脱液(D管)吸入至注射器腔，使用核酸提取装置的推液形式，用注射器推压产生的力将洗脱液推至吸附膜管，洗脱液流经吸附膜，并将吸附在膜上的核酸成分连同洗脱液通过加样针推挤至一新的离心管(E管)中，备用。
[0126]4.核酸扩增
[0127]应用沙门氏菌PCR扩增试剂(2XTap MIX试剂盒，天根生化科技(北京)有限公司)，分别扩增提取出的DNA，具体反应如下:沙门氏菌扩增反应液20微升，离心管中提取的核酸(DNA)溶液5微升，总体积为25微升，反应程序:95°C，5分钟一个循环；94°C，30秒，58 0C，30秒，72 0C，30秒共35个循环；72°C，7分钟一个循环；4°C保存。
[0128]5.结果检测
[0129]扩增产物通过电泳进行检测，结果如附图6 (其中M为NDA marker, I为阴性对照，2-4为沙门氏菌)。从图6的结果可以看出，沙门氏菌样本的检测结果均为阳性，表明本发明沙门氏菌DNA提取非常有效。
[0130]实例2:环介导恒温扩增法检测血液中的旋毛虫
[0131]本例以环介导恒温扩增法检测血液中的旋毛虫为例说明本发明在核酸提取及检测中的应用。本例基于实施例1的内容，检测样本共8份(1-6样本为阳性感染血样，7-8样本为阴性对照)，分别进行如下检测操作:
[0132]1.裂解
[0133]取500微升的血液样本，加入等量的裂解液(组成:Na0H，25mmol ;Tris-Hcl，1mmol ;Triton X-100,1 % ；ΝΡ-40,1 % ；EDTA, 0.1mMol ；Chelex-100, 2% ? );混匀后室温静置5分钟，使用核酸提取装置的抽液形式，将混合液抽吸至吸附膜管，使混合液经吸附膜，不含核酸的废液进入注射器腔。
[0134]2.清洗
[0135]使用核酸提取装置的抽液形式，将漂洗液(B管和C管)分次抽吸到吸附膜管里，同上步操作使漂洗液清洗吸附膜上的杂质，废液进入到注射器腔。
[0136]3.DNA 洗脱
[0137]更换一只洁净注射器，将120微升洗脱液(D管)吸入至注射器腔，使用核酸提取装置的推液形式，用注射器推压产生的力将洗脱液推至吸附膜管，洗脱液流经吸附膜，并将吸附在膜上的核酸成分连同洗脱液通过加样针推挤至一新的离心管(E管)中，备用。
[0138]4.核酸扩增
[0139]应用旋毛虫环介导恒温扩增试剂(LAMP法DNA扩增试剂盒(DNA Amplificat1nKit)，日本荣研化学株式会社(EIKEN CHEMICAL C0.，LTD, Tochigi, Japan))，扩增提取出的旋毛虫DNA。具体反应如下:旋毛虫扩增反应液20微升,离心管中提取的核酸(DNA)溶液5微升，总体积为25微升,反应温度及时间:65° ,反应60分钟。
[0140]5.结果检测
[0141]用实时浊度仪对扩增产物进行检测。结果如图7。图7的结果显示，阳性感染的血样(样本1-6)经扩增后核酸检测结果均为阳性。表明本例提取血样中旋毛虫DNA可用于检测中。
[0142]实例3:咽拭子中甲型流感病毒H1N1RNA的提取及检测
[0143]本例基于实施例2的内容，以咽拭子中甲型流感病毒H1N1RNA的提取及检测为例说明本发明在提取RNA中的应用。检测样本共8份(I为阴性对照，2-8均为阳性样本)，分别进行如下提取与检测操作:
[0144]1.裂解
[0145]取咽拭子样本200ul，加入适量裂解液(C管，组成:Na0H，25mmol ;Tris-Hcl，1mmol ;Triton X-100,1 % ；ΝΡ-40,1 % ；EDTA, 0.1mMol ；Chelex-100, 2% ? )、RNA 结合液(B和B+管混合)和RNA酶抑制剂溶液(Α和A+管混合)，充分混匀，再加入99%酒精(D管)，室温静置5分钟；使用核酸提取装置的抽液形式，将混合液抽吸至吸附膜管，使混合液经吸附膜，不含核酸的废液进入注射器腔。
[0146]2.清洗
[0147]使用核酸提取装置的抽液形式，将漂洗液(Ε管，F管，G管)分次抽吸到吸附膜管里，同上步操作使漂洗液清洗吸附膜上的杂质，废液进入到注射器腔。
[0148]3.RNA 洗脱
[0149]更换一只洁净注射器，将120微升洗脱液(H管)吸入至注射器腔，使用核酸提取装置的推液形式，用注射器推压产生的力将洗脱液推至吸附膜管，洗脱液流经吸附膜，并将吸附在膜上的核酸成分连同洗脱液通过加样针推挤至一新的离心管(I管)中，备用。
[0150]4.核酸扩增
[0151]应用RT-LAMP 恒温扩增试剂(LAMP 法 RNA 扩增试剂盒(RNA Amplificat1n Kit)，日本荣研化学株式会社(EIKEN CHEMICAL C0.，LTD, Tochigi, Japan))，扩增提取出的H1N1RNA。具体反应如下:RT-LAMP扩增反应液20微升，离心管中提取的核酸(RNA)溶液5微升，总体积为25微升,反应温度及时间:60° ,60分钟。
[0152]5.结果检测
[0153]扩增结果用实时浊度仪进行检测，结果如图8 (I为阴性对照，2-8均为阳性样本)。图6的结果可以看出，所有阳性样本的检测结果均为阳性。表明本例可以提取H1N1RNA并用于检测中。
[0154]本发明整合了从样本中提取核酸的全部工具与试剂，可以作为核酸扩增前对生物样本进行核酸提取的一种简捷手段，提取出的核酸纯度足够符合下一步扩增的要求，同时不需要任何仪器、操作安全和简单、一次性使用，因而可以被广泛地应用于病原体或宿主核酸提取，用于临床检测和诊断。本发明提取装置成本低廉，操作简单同时又不需要任何特殊仪器，操作时间短，大约只需要10-15分钟，因而本发明可以被广泛地应用于一些实验条件相对较差的基层医院和经济不发达地区或国家；同时，也可以很好地满足高层次医院的需求，特别是急诊室和床边的核酸快速诊断。
【权利要求】
1.用于核酸快速提取的工具盒，其特征在于，包括一管架、置于管架上的若干试管、核酸提取装置以及一外包装，所述管架设架腿和上、下两层隔板，上、下隔板上对应分布设有盛置孔，管架的上隔板分为两个功能区域，用于放置试管的第一区和用于放置核酸提取装置的第二区。
2.根据权利要求1所述的工具盒，其特征在于，第一区设有多个分区，每个分区设一个盛置孔用于放置对应编号的试管；对应管架第一区的盛置孔，配备同样数量的试管，试管上均标注与隔板分区一致的标号，并将相同标号的试管固定安置在管架的盛置孔内。
3.根据权利要求1或2所述的工具盒，其特征在于，放置于第二区的核酸提取装置包括两个注射器以及吸附膜管、转接器和加样针各一个，管架上隔板的第二区内与注射器外形对应设有两个容置孔，与上述其它三个部分外形对应设有另外三个容置孔，将匹配的部件放入相对的容置孔内。
4.根据权利要求3所述的工具盒，其特征在于，所述核酸提取装置的转接器为中空圆台状，转接器连接在注射器和吸附膜管中间且注射器、转接器和吸附膜管液路连通；吸附膜管内的底端安装有吸附膜。
5.根据权利要求4所述的工具盒，其特征在于，吸附膜管为两端开口的管体，一端为该管体的敞口端，另一端固定一小口连接管，吸附膜安装在该小口连接管一端；吸附膜管敞口端尺寸与转接器的外尺寸匹配。
6.根据权利要求5所述的工具盒，其特征在于，注射器包括筒体、置于筒体前端的管状连接座以及置于筒体内可推拉的推杆，所述小口连接管的外径与注射器的连接座外径尺寸相等，所述转接器设中间通孔，中间通孔尺寸与注射器的连接座外径尺寸匹配。
7.根据权利要求5或6所述的工具盒，其特征在于，所述加样针包括针座和针头，所述小口连接管的外径与所述加样针的针座内径匹配。
8.根据权利要求5或6所述的工具盒，其特征在于，转接器一端连通注射器，另一端连通吸附膜管的小口连接管，组成该装置的抽液方式。
9.根据权利要求5或6或7所述的工具盒，其特征在于，转接器一端连通注射器，另一端套接在吸附膜管的敞口端内，吸附膜管的小口连接管连通加样针，组成该装置的推液方式。
10.根据权利要求9所述的工具盒，其特征在于，所述转接器外形为圆台状，圆台状转接器的小头端外径尺寸与吸附膜管的敞口端匹配，该敞口端从圆台状转接器的小头端套接。
11.根据权利要求1至10任一所述的工具盒，其特征在于，为用于DNA提取的工具盒，管架的第一区为正方形，设有五个分区A-E，五个分区以其中一个为中心另外四个分区对称分散布置，每个分区设一个盛置孔用于放置对应编号的试管；吸附膜管中的吸附膜是能吸附DNA的硅胶膜。
12.根据权利要求1至10任一所述的工具盒，其特征在于，为用于RNA提取的工具盒，管架的第一区为长方形，其上分布设有九个分区A-1，以其中一个分区为中心另外八个分区对称分布设置，每个分区设一个盛置孔，其中A、B各分区各设一主孔(A和B)和一副孔(A+和B+)，每一盛置孔放置对应编号的试管；吸附膜管中的吸附膜是能吸附RNA的硅胶膜。
13.根据权利要求1至10任一所述的工具盒，其特征在于，为用于RNA与DNA共同提取的工具盒，管架的第一区为长方形，其上分布设有九个分区A-1，以其中一个分区为中心另外八个分区对称分布设置，每个分区设一个盛置孔，其中A、B各分区各设一主孔(A和B)和一副孔(A+和B+)，每一盛置孔放置对应编号的试管；吸附膜管中的吸附膜是能吸附RNA和DNA的硅胶膜。
14.用于核酸快速提取的试剂盒，使用权利要求1至13任一所述的工具盒，将相关试剂装入对应试管中包装得到。
15.根据权利要求14所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂包括裂解液、漂洗液和洗脱液。
16.根据权利要求14或15所述的试剂盒，其特征在于，用于DNA提取，基于权利要求11所述工具盒，其中各试管带盖，其中装入以下针对一个样本用量的试剂:A管，裂解液，异硫氰酸肌溶液或者Chelex裂解液；B管，洗液1，75%酒精；C管，洗液2，95%酒精山管，洗脱液，1mM的Tris-HCL或者双蒸水；另外E管为空管。
17.根据权利要求14或15所述的试剂盒，其特征在于，用于RNA提取，基于权利要求12所述工具盒，其中各试管带盖，其中装入以下针对一个样本用量的试剂:A管，RNA酶抑制剂(粉末)；A+管，AVE溶液；B管，RNA结合剂(粉末)；B+管，AVE溶液；C管:裂解液，异硫氰酸肌溶液或者Chelex裂解液；D管，99%酒精出管，洗液I，70%酒精；F管，洗液2，95%酒精；6管，洗液3，99%酒精出管:洗脱液，1mM的Tris-HCL或者双蒸水；另外I管为空管。
18.根据权利要求14或15所述的试剂盒，其特征在于，用于RNA和DNA共同提取，基于权利要求13所述工具盒 ，其中各试管带盖，其中装入以下针对一个样本用量的试剂:A管，RNA酶抑制剂(粉末)-X管，AVE溶液；B管，RNA结合剂(粉末)；B+管，AVE溶液；C管:裂解液，异硫氰酸肌溶液或者Chelex裂解液；D管，99%酒精；E管，洗液1，70%酒精疋管，洗液2，95%酒精而管，洗液3，99%酒精出管:洗脱液，1mM的Tris-HCL或者双蒸水；另外I管为空管。
19.核酸快速提取的方法，使用权利要求14-18任一所述试剂盒，经过样本用裂解液进行裂解处理、用吸附膜吸附样本中核酸、用漂洗液漂洗吸附膜除杂、以及用洗脱液洗脱核酸等步骤，获得纯的核酸溶液。
20.根据权利要求19所述的方法，其特征在于，为“两抽一推”法:“一抽”使裂解液中的核酸吸附于滤膜上；“二抽”使漂洗液通过滤膜以清洗杂质；“一推”将吸附在滤膜上的核酸成分洗脱，从而完成了生物样本中核酸成分的提取；具体包括以下步骤:a)试剂标示分装:将核酸提取中涉及的裂解液、漂洗液、洗脱液等按每一人份分装至各试管，并对每一管进行标示；b)将样本加入裂解液管中得到样本裂解混合液；c)一吸:使用权利要求8所述核酸提取装置的抽液形式，用吸附膜管的敞口端从样本裂解混合液中抽吸，利用注射器抽吸产生的吸力，样本中的核酸成分流经吸附膜时因膜的特异性吸附而吸附在吸附膜上，滤液为有细胞碎屑和蛋白质等杂质的废液，废液进入注射器腔；d)二吸:使用权利要求8所述核酸提取装置的抽液形式，用吸附膜管的敞口端从漂洗液管中抽吸，利用注射器抽吸产生的吸力，用漂洗液清洗吸附膜，清洗残留在吸附膜上的蛋白质或其它成分，滤液进入注射器腔且该滤液；e) 一推:更换另一只洁净的注射器，先吸入洗脱液，然后使用权利要求9或10所述核酸提取装置的推液形式，将注射器腔内的洗脱液加入到吸附膜管里，利用注射器推压产生的压力将洗脱液流经吸附膜，并将吸附在膜上的核酸成分洗脱推挤至空管中，完成样本中核酸的提取。
21.根据权利要求20所述的方法，其特征在于，为从样本中快速提取DNA的方法，使用权利要求16所述试剂盒，其中步骤a)将所涉及的裂解液、75%酒精、95%酒精、洗脱液等每一人份(一个样本用量)分装至工具盒中各试管中，并对每一管标示为A-D不同字母和颜色；各试管放置在管架第一区的盛置孔A-D内，将空管E管放在管架第一区的盛置孔E内；步骤b)-e)按权利要求20的操作，将提取的DNA溶液收集到E管中，完成样本中DNA的提取。
22.根据权利要求20所述的方法，其特征在于，为从样本中快速提取RNA的方法，使用权利要求17所述试剂盒，包括以下步骤:a)试剂标示分装:将所涉及的各试剂按每一人份(一个样本用量)分装至工具盒中各试管中，并对每一管标示为A-H不同字母和颜色；各试管放置在管架第一区的盛置孔A-H内，将空管I管放在管架第一区的盛置孔I内；b)将A+管中的AVE溶液加入到A管粉末当中溶解RNA酶抑制剂；将B+管中的AVE溶液加入到B管粉末当 中溶解RNA结合剂(粉末)；将样本加入装有裂解液的C管中，再加入溶解的RNA酶抑制剂和溶解的RNA结合剂，并混匀；最后将D管中的溶液加入到C管中，再次混匀，得到样本裂解混合液；c)一吸:使用核酸提取装置的抽液形式，用吸附膜管的敞口端从C管样本裂解混合液中抽吸，利用注射器抽吸产生的吸力，样本中的核酸成分流经吸附膜时因膜的特异性吸附而吸附在吸附膜上，滤液为有细胞碎屑和蛋白质等杂质的废液，废液进入注射器腔；d)二吸:继续使用抽液形式，用吸附膜管的敞口端从E管中抽吸洗液1，利用注射器抽吸产生的吸力，用洗液I清洗吸附膜，清洗残留在吸附膜上的蛋白质或其它成分，滤液进入注射器腔；再次用吸附膜管的敞口端从F管中抽吸洗液2，利用注射器抽吸产生的吸力，用洗液2清洗吸附膜，清洗残留在吸附膜上的蛋白质或其它成分，滤液进入注射器腔；再次用吸附膜管的敞口端从G管中抽吸洗液3，利用注射器抽吸产生的吸力，用洗液3清洗吸附膜，清洗残留在吸附膜上的蛋白质或其它成分，滤液进入注射器腔；拆卸吸附膜管和转接器，用过的注射器I放置一边；e)一推:使用核酸提取装置的推液形式，加样针对着I管，将注射器腔内的洗脱液加入到吸附膜管里，利用注射器推压产生的压力将洗脱液流经吸附膜，并将吸附在膜上的核酸成分洗脱推挤至I管中收集，完成样本中RNA的提取过程。
23.根据权利要求20所述的方法，其特征在于，为从样本中共同提取RNA和DNA的方法，使用权利要求18所述试剂盒，包括以下步骤:a)试剂标示分装:将所涉及的各试剂按每一人份(一个样本用量)分装至工具盒中各试管中，并对每一管标示为A-H不同字母和颜色；各试管放置在管架第一区的盛置孔A-H内，将空管I管放在管架第一区的盛置孔I内；b)将A+管中的AVE溶液加入到A管粉末当中溶解RNA酶抑制剂；将B+管中的AVE溶液加入到B管粉末当中溶解RNA结合剂(粉末)；将样本加入装有裂解液的C管中，再加入溶解的RNA酶抑制剂和溶解的RNA结合剂，并混匀；最后将D管中的溶液加入到C管中，再次混匀，得到样本裂解混合液；c)一吸:使用核酸提取装置的抽液形式，用吸附膜管的敞口端从C管样本裂解混合液中抽吸，利用注射器抽吸产生的吸力，样本中的核酸成分流经吸附膜时因膜的特异性吸附而吸附在吸附膜上，滤液为有细胞碎屑和蛋白质等杂质的废液，废液进入注射器腔；d)二吸:继续使用抽液形式，用吸附膜管的敞口端从E管中抽吸洗液1，利用注射器抽吸产生的吸力，用洗液I清洗吸附膜，清洗残留在吸附膜上的蛋白质或其它成分，滤液进入注射器腔；再次用吸附膜管的敞口端从F管中抽吸洗液2，利用注射器抽吸产生的吸力，用洗液2清洗吸附膜，清洗残留在吸附膜上的蛋白质或其它成分，滤液进入注射器腔；再次用吸附膜管的敞口端从G管中抽吸洗液3，利用注射器抽吸产生的吸力，用洗液3清洗吸附膜，清洗残留在吸附膜上的蛋白质或其它成分，滤液进入注射器腔；拆卸吸附膜管和转接器，用过的注射器I放置一边；e)一推:使用核酸提取装置的推液形式，加样针对着I管，将注射器腔内的洗脱液加入到吸附膜管里，利用注射器推压产生的压力将洗脱液流经吸附膜，并将吸附在膜上的核酸成分洗脱推挤至I管中收集 ，完成样本中DNA和RNA的共同提取过程。
【文档编号】C12M1/00GK104073429SQ201410333527
【公开日】2014年10月1日 申请日期:2014年7月14日 优先权日:2013年7月12日
【发明者】黄留玉, 刘威, 袁静 申请人:中国人民解放军疾病预防控制所