一种土霉素的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种土霉素的制备方法，具体为将龟裂链霉菌菌种制备后先进行种子罐培养，然后转为发酵培养。待pH值达5.2～6.5，总效价≥8000U/mL，总糖含量≤3.0％，滤速≥5mL/5min时，发酵结束并放罐。最后进行板框过滤，离子交换树脂脱色，结晶，气流干燥，制得土霉素。本发明所述方法发酵工艺简单，能有效提高发酵单位，提高收率，降低生产成本，同时避免了化学有机溶剂的使用。
【专利说明】一种土霉素的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于制药领域，涉及一种抗生素的制备方法，具体涉及一种土霉素的制备 方法。
【背景技术】
[0002] 土霉素为广谱抗生素，对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌都有抑制作用，对衣原体、 立克次氏体、霉形体、螺旋体等也有一定的抑制作用。土霉素主要用于防治畜禽大肠杆菌、 沙门氏菌感染（如犊牛白痢、羔羊痢疾、仔猪黄白痢、幼畜副伤寒等）、巴氏杆菌、布氏杆菌 感染及猪喘气病、鸡慢性呼吸道病；也常用于治疗狗的立克次氏体病、猫的传染性贫血，预 防狗的衣原体病和钧端螺旋体病；局部用于坏死杆菌所引起的子宫内膜炎及组织坏死等。 而土霉素作为饲料添加剂使用，具有促进生长和提高饲料转化率的作用。
[0003] 随着畜牧业的进一步发展，近年来土霉素的市场需求量不断扩大，国内外客户对 土霉素的质量要求越来越高，而现有关于土霉素的制备方法主要存在收率低，成本高，质量 不高的缺点，因此有必要对土霉素的制备方法进行改进。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种土霉素的制备方法，该方法能有效提高发酵单位，降 低生产成本。
[0005] 本发明采用的具体技术方案如下：
[0006] 一种土霉素的制备方法，包括以下步骤：
[0007] a.种子培养
[0008] 1)菌种制备
[0009] 将龟裂链霉菌孢子接种到含有孢子培养基的母斜面上并在34±0.5°C下培养 3. 5?4天；然后再接种到含有孢子培养基的子斜面上，在35. 5± 1°C下培养3?5天，至孢 子成熟；
[0010] 所述孢子培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：麸皮5. 5±1 %， MgSO4O. 005±0· 001 %，KH2PO4O. 01 ±0. 002 %，（NH4)2HPO4O. 015±0· 005 %，琼脂粉 2. 0 ? 2. 2%，余量为水；
[0011] 2)种子罐培养
[0012] 将制备的孢子转至种子罐培养，首先进行一级种子罐培养，培养条件为：培养温度 30 ?33°C，通气量 1:1. 5 ?2. Ov/v/min，罐压 0· 01 ?0· 04MPa，搅拌速度 150 ?230rpm/ min,培养时间15?40小时；然后按一级种子罐培养液与二级种子罐培养基体积比为1:2 的比例，将一级种子罐培养液转入二级种子罐继续培养，培养条件为：培养温度30?33°C， 通气量1:1. 5?2. Ov/v/min，罐压0. 01?0. 04MPa，搅拌速度150?230rpm/min，培养时间 10?40小时；
[0013] 所述一级种子罐培养的培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：玉米淀粉0? 3%，花生饼粉O?I. 5%，黄豆饼粉O?I. 5%，酵母粉O?1%，玉米浆O?I. 5%，碳酸钙 O?0· 6 %，硫酸铵O?1 %，氯化钠 O?0· 6 %，磷酸二氢钾O?0· 03 %，植物油O?0· 6 %， 小麦粉〇?1. 〇 %，麦芽糊精〇?2. 0 %，氯化钴0?0. 005 %，消泡剂0?0. 1 %，余量为 水；
[0014] 所述二级种子罐培养的培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：玉米淀粉0? 6%，花生饼粉0?2. 0%，黄豆饼粉0?2. 0%，酵母粉0?1 %，玉米浆0?1. 5%，碳酸钙 0?0· 9 %，硫酸铵0?1 %，氯化钠0?0· 5 %，磷酸二氢钾0?0· 03 %，植物油0?0· 5 %， 小麦粉〇?1.0%，麦芽糊精〇?1.5%，消泡剂0?0. 1%，余量为水；
[0015] b.发酵培养
[0016] 种子罐培养完毕后转为发酵培养,发酵培养条件为：罐内温度28?33°C，通气速 率为 I :0.8 ?l:1.0v/v/min，罐压 0.02 ?0.05MPa，搅拌速度 150 ?230rpm/min，pH 值 5. 2?6. 6,发酵时间130?250小时；发酵过程中通过添加补料培养基控制发酵液总糖质 量百分浓度在3?5%之间；发酵结束前，依据发酵液总糖浓度来确定添加补料量，确保发 酵结束时发酵液总糖质量百分浓度不高于3% ;
[0017] 发酵培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：玉米淀粉0?9. 0 %，花生饼粉 0?2. 0%，黄豆饼粉0?2. 0%，酵母粉0. 4?1. 0%，玉米浆0?2. 5%，碳酸钙0?0. 9%， 硫酸铵0?1. 2 %，氯化钠0?0. 3 %，磷酸二氢钾0?0. 03 %，淀粉酶0?0. 07 %，植物油 0?0.4%，消泡剂0?0. 1%，余量为水；
[0018] 补料培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：玉米淀粉0?50%，花生饼粉 0?0. 5%，黄豆饼粉0?0. 5%，酵母粉0?0. 5%，玉米浆0?3%，碳酸钙0?0. 9%，硫 酸铵0?0. 9%，氯化钠0?0. 5%，淀粉酶0?0. 2%，消泡剂0?0. 3%，余量为水；
[0019] c.发酵液的分离纯化
[0020] 发酵培养结束后，对发酵液进行预处理，然后板框过滤；过滤后的滤液用122离 子交换树脂进行脱色，直至滤液透光度> 90%后进入结晶罐结晶；在结晶罐内温度为8? KTC条件下,用氨水将脱色后滤液pH值调至4. 4?4. 8,然后保温50?60min,再进行离心 分离，直至分离后湿晶体含水量按质量百分浓度计达19?20% ;将离心得到的湿晶体采用 气流干燥方式进行干燥，保持进风温度为100?160°C，最后得到含水量按质量百分浓度计 彡10%的干粉。
[0021] 优选的，所述孢子培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：麸皮5. 5%， MgSO4O. 004%，KH2PO4O. 01%，（NH4)2HPO4O. 015%，琼脂粉 2. 0%，余量为水。
[0022] 优选的，所述一级种子罐培养的培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：玉 米淀粉2 %，花生饼粉1 %，黄豆饼粉1 %，酵母粉1 %，玉米浆1 %，碳酸钙0.4%，硫酸铵 0. 4 %，氯化钠0. 6 %，磷酸二氢钾0. 01 %，植物油0. 5 %，小麦粉0. 8 %，麦芽糊精2. 0 %，氯 化钴0.005%，消泡剂0. 1%，余量为水。
[0023] 优选的，所述二级种子罐培养的培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：玉米 淀粉5. 5 %，花生饼粉1 %，黄豆饼粉1 %，酵母粉0. 5 %，玉米浆1 %，碳酸钙0. 6 %，硫酸铵 0. 4%，氯化钠0. 5%，磷酸二氢钾0. 01 %，植物油0. 5%，小麦粉I. 0%，麦芽糊精1 %，消泡 剂0. 1%，余量为水。
[0024] 优选的，所述发酵培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：玉米淀粉8%，花生 饼粉I %，黄豆饼粉I %，酵母粉0. 5 %，玉米浆I. 5 %，碳酸钙0. 6 %，硫酸铵0. 8 %，氯化钠 0. 3 %，磷酸二氢钾0. 03 %，淀粉酶0. 06 %，植物油0. 4 %，消泡剂0. 1 %，余量为水。
[0025] 优选的，所述补料培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：玉米淀粉40%，花 生饼粉0. 4 %，黄豆饼粉0. 4 %，酵母粉0. 3 %，玉米浆2. 5 %，碳酸钙0. 5 %，硫酸铵0. 6 %， 氯化钠0. 4%，淀粉酶0. 1 %，消泡剂0. 1 %，余量为水。
[0026] 优选的，包括如下步骤：
[0027] a.种子培养
[0028] 1)菌种制备
[0029] 将龟裂链霉菌孢子接种到含有孢子培养基的母斜面上并在34°C下培养4天；然后 再接种到含有孢子培养基的子斜面上，在35°C下培养3天，至孢子成熟；
[0030] 所述孢子培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：麸皮5. 5%，MgSO4O. 004%， KH2PO4O. 01%，（NH4)2HPO4O. 015%，琼脂粉 2. 0%，余量为水；
[0031] 2)种子罐培养
[0032] 将制备的孢子转至种子罐培养，首先进行一级种子罐培养，培养条件为：培养温度 32°C，通气量1:1. 8v/v/min，罐压0. 03MPa，搅拌速度180rpm/min，培养时间30小时；然后 按一级种子罐培养液与二级种子罐培养基体积比为1:2的比例，将一级种子罐培养液转入 二级种子罐继续培养，培养条件为：培养温度32°C，通气量I: I. 5v/v/min，罐压0. 03MPa，搅 拌速度180rpm/min，培养时间30小时；
[0033] 所述一级种子罐培养的培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：玉米淀粉 2%，花生饼粉1%，黄豆饼粉1%，酵母粉1%，玉米浆1%，碳酸钙0.4%，硫酸铵0.4%， 氯化钠0. 6 %，磷酸二氢钾0. 01 %，植物油0. 5 %，小麦粉0. 8 %，麦芽糊精2. 0 %，氯化钴 0.005%，消泡剂0. 1%，余量为水；
[0034] 所述二级种子罐培养的培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：玉米淀粉 5. 5 %，花生饼粉1 %，黄豆饼粉1 %，酵母粉0.5 %，玉米浆1 %，碳酸钙0.6%，硫酸铵 0. 4%，氯化钠0. 5%，磷酸二氢钾0. 01 %，植物油0. 5%，小麦粉I. 0%，麦芽糊精1 %，消泡 剂0. 1%，余量为水；
[0035] b.发酵培养
[0036] 种子罐培养完毕后转为发酵培养，发酵培养条件为：罐内温度32°C，通气速率为 I :0. 8v/v/min，罐压0. 05MPa，搅拌速度180rpm/min，pH值6. 0,发酵时间199小时；发酵过 程中通过添加补料培养基控制发酵液总糖质量百分浓度在3?5%之间；发酵结束前，依据 发酵液总糖浓度来确定添加补料量，确保发酵结束时发酵液总糖质量百分浓度不高于3 % ;
[0037] 所述发酵培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：玉米淀粉8%，花生饼粉 1 %，黄豆饼粉1 %，酵母粉0. 5 %，玉米浆1. 5 %，碳酸钙0. 6 %，硫酸铵0. 8 %，氯化钠 0. 3 %，磷酸二氢钾0. 03 %，淀粉酶0. 06 %，植物油0. 4 %，消泡剂0. 1 %，余量为水；
[0038] 所述补料培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：玉米淀粉40%，花生饼粉 0. 4 %，黄豆饼粉0. 4 %，酵母粉0. 3 %，玉米浆2. 5 %，碳酸钙0. 5 %，硫酸铵0. 6 %，氯化钠 〇. 4%，淀粉酶0. 1 %，消泡剂0. 1 %，余量为水；
[0039] c.发酵液的分离纯化
[0040] 发酵培养结束后，对发酵液进行预处理，然后板框过滤；过滤后的滤液用122离子 交换树脂进行脱色，直至滤液透光度达98%后进入结晶罐结晶；在结晶罐内温度为8°C条 件下，用氨水将脱色后滤液PH值调至4. 7,然后保温60min，再进行离心分离，直至分离后 湿晶体含水量按质量百分浓度计达19. 5% ;将离心得到的湿晶体采用气流干燥方式进行干 燥，保持进风温度为148°C，最后得到含水量按质量百分浓度计为8. 5%的干粉。
[0041] 优选的，所述步骤c中所述发酵液预处理包括：首先对发酵液进行稀释，然后用草 酸进行酸化，酸化后PH值为1. 90?2. 00,然后按重量体积比向发酵液中加入发酵液体积 3. 0±0. 3%。的黄血盐钠，20分钟后按重量体积比加入发酵液体积2. 0%。的硫酸锌。
[0042] 本发明的有益效果在于：本发明发酵工艺简单，能有效提高发酵单位，提高收率， 降低生产成本，同时避免了化学有机溶剂的使用，防止有机溶剂对土霉素造成污染，避免了 对动物的危害；并且采用本发明所述培养基利于土霉素特殊结构的合成，从而提高土霉素 收率，还能有利于后续对土霉素的分离纯化；另外，由于气流干燥以蒸汽为热源，采用气流 干燥方式对土霉素进行干燥，大大提高了生产效率，降低了工作量。
【具体实施方式】
[0043] 下面对本发明的优选实施例进行详细的描述。实施例中未注明具体条件的实验方 法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
[0044] 实施例1
[0045] 土霉素的制备方法具体如下：
[0046] a.种子培养
[0047] 1)菌种制备
[0048] 将龟裂链霉菌孢子接种到含有孢子培养基的母斜面上并在34°C下培养4天；然后 再接种到含有孢子培养基的子斜面上，在35°C下培养5天，至孢子成熟；
[0049] 所述孢子培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：麸皮5%，MgSO4O. 005%， KH2PO4O. 01 %，（NH4) 2ΗΡ040· 01 %，琼脂粉 2 %，余量为水；
[0050] 2)种子罐培养
[0051] 将制备的孢子转至种子罐培养，首先进行一级种子罐培养，培养条件为：温度 32°C，通气量1:2. Ov/v/min，罐压0. 04MPa，搅拌速度200rpm/min，培养时间35小时；然后 按一级种子罐培养液与二级种子罐培养基体积比为1:2的比例，将一级种子罐培养液转入 二级种子罐继续培养，培养条件为：培养温度32°C，通气量1:2. Ov/v/min，罐压0. 03MPa，搅 拌速度200rpm/min，培养时间30小时；取样检测，测得种子液为浅黄色、稠，菌丝浓度20%， pH值为5. 8,总糖2. 5%，氨基氮78mg/100mL，效价150U/mL，镜检结果显示菌丝呈密网状分 节菌丝粗壮，无杂菌；
[0052] 所述一级种子罐培养与二级种子罐培养的培养基相同，培养基按质量百分浓度 计由以下成分组成：玉米淀粉3 %，花生饼粉1. 5 %，黄豆饼粉1. 5 %，酵母粉1 %，玉米浆 1. 5 %，碳酸钙0. 5 %，硫酸铵1 %，氯化钠0. 6 %，磷酸二氢钾0. 03 %，植物油0. 6 %，小麦粉 1.0%，麦芽糊精2.0%，氯化钴0.005%，消泡剂0. 1%，余量为水；
[0053] b.发酵培养
[0054] 种子罐培养完毕后转为发酵培养，发酵培养条件为：罐内温度33°C，通气速率为 I :1. Ov/v/min，罐压0. 02MPa，搅拌速度180rpm/min，pH值6. 4,发酵时间110小时；发酵过 程中通过添加补料培养基控制发酵液总糖质量百分浓度在3?5%之间；发酵结束前，依据 发酵液总糖浓度来确定添加补料量，确保发酵结束时发酵液总糖质量百分浓度不高于3 % ; 发酵结束测得总糖1. 5%，氨基氮78mg/100mL，效价18000U/mL，滤速12mL/min ;
[0055] 所述发酵培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：玉米淀粉8%，花生饼粉 2 %，黄豆饼粉1 %，酵母粉0. 5 %，玉米浆1. 5 %，碳酸钙0. 6 %，硫酸铵0. 8 %，氯化钠 0. 3 %，磷酸二氢钾0. 03 %，淀粉酶0. 06 %，植物油0. 4 %，消泡剂0. 1 %，余量为水；
[0056] 所述补料培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：玉米淀粉40%，花生饼粉 0. 4 %，黄豆饼粉0. 4 %，酵母粉0. 3 %，玉米浆2. 5 %，碳酸钙0. 5 %，硫酸铵0. 6 %，氯化钠 〇. 4%，淀粉酶0. 1 %，消泡剂0. 1 %，余量为水；
[0057] c.发酵液的分离纯化
[0058] 1)发酵液的酸化、净化、过滤
[0059] 发酵液稀释后加入草酸进行酸化，调节发酵液的pH值为1. 90,取酸化样测效价为 17000U/mL，滤速为14mL/min。然后按重量体积比向发酵液中加入发酵液体积3. 0±0. 3%。 的黄血盐钠，20分钟后按重量体积比加入发酵液体积2. 0%。的硫酸锌，稀释后进行板框过 滤；
[0060] 2)脱色
[0061] 过滤后的滤液用122离子交换树脂进行脱色，直至透光度为96%后进入连续结晶 罐进行结晶；
[0062] 3)结晶
[0063] 在结晶罐内温度为9°C条件下，向脱色后的滤液中加入质量分数为15%的氨水调 节pH值至4. 6,保温60min后进入离心机分离；
[0064] 4)离心分离
[0065] 往离心机中加入结晶步骤获得的结晶液进行分离，并用纯水洗两次，共4分钟，最 后获得的湿晶体含水量按质量百分浓度计为20% ;
[0066] 5)干燥与混粉
[0067] 湿晶体的干燥采用气流干燥，进风温度为158°C，湿粉经粉碎机粉碎进入管道，物 料随热空气经扩大罐至旋风干燥器，过筛后进入混粉器，得到含水量按质量百分浓度计在 7 %的干粉。
[0068] 本实施例的收率为85%。
[0069] 其中，种子罐转移至发酵罐中的移种指标如表1 :
[0070] 表1种子罐转移至发酵罐中的移种指标
[0071]
【权利要求】
1. 一种土霉素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： a. 种子培养 1) 囷种制备 将龟裂链霉菌孢子接种到含有孢子培养基的母斜面上并在34±0. 5°C下培养3. 5?4 天；然后再接种到含有孢子培养基的子斜面上，在35. 5±1°C下培养3?5天，至孢子成熟； 所述孢子培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：麸皮5. 5±1 %， MgS040. 005 ±0. 001 %，KH2P040. 01±0. 002 %，（NH4)2HP040. 015 ±0. 005 %，琼脂粉 2. 0 ? 2. 2%，余量为水； 2) 种子罐培养 将制备的孢子转至种子罐培养，首先进行一级种子罐培养，培养条件为：培养温度 30 ?33°C，通气量 1:1. 5 ?2. Ov/v/min，罐压 0? 01 ?0? 04MPa，搅拌速度 150 ?230rpm/ min,培养时间15?40小时；然后按一级种子罐培养液与二级种子罐培养基体积比为1:2 的比例，将一级种子罐培养液转入二级种子罐继续培养，培养条件为：培养温度30?33°C， 通气量1:1. 5?2. Ov/v/min，罐压0. 01?0. 04MPa，搅拌速度150?230rpm/min，培养时间 10?40小时； 所述一级种子罐培养的培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：玉米淀粉〇?3%， 花生饼粉0?1.5%，黄豆饼粉0?1.5%，酵母粉0?1%，玉米浆0?1.5%，碳酸钙0? 〇? 6%，硫酸铵0?1%，氯化钠0?0? 6%，磷酸二氢钾0?0? 03%，植物油0?0? 6%，小 麦粉0?1. 0 %，麦芽糊精0?2. 0 %，氯化钴0?0. 005 %，消泡剂0?0. 1 %，余量为水； 所述二级种子罐培养的培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：玉米淀粉〇?6 %， 花生饼粉0?2. 0%，黄豆饼粉0?2. 0%，酵母粉0?1 %，玉米浆0?1. 5%，碳酸钙0? 〇? 9 %，硫酸铵0?1 %，氯化钠0?0? 5 %，磷酸二氢钾0?0? 03 %，植物油0?0? 5 %，小 麦粉0?1. 0 %，麦芽糊精0?1. 5 %，消泡剂0?0. 1 %，余量为水； b. 发酵培养 种子罐培养完毕后转为发酵培养，发酵培养条件为：罐内温度28?33°C，通气速率为 1 :0? 8 ?1:1. Ov/v/min，罐压 0? 02 ?0? 05MPa，搅拌速度 150 ?230rpm/min，pH 值 5. 2 ? 6. 6,发酵时间130?250小时；发酵过程中通过添加补料培养基控制发酵液总糖质量百分 浓度在3?5%之间；发酵结束前，依据发酵液总糖浓度来确定添加补料量，确保发酵结束 时发酵液总糖质量百分浓度不高于3% ; 发酵培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：玉米淀粉〇?9. 0 %，花生饼粉0? 2. 0%，黄豆饼粉0?2. 0%，酵母粉0. 4?1. 0%，玉米浆0?2. 5%，碳酸钙0?0. 9%，硫 酸铵0?1. 2 %，氯化钠0?0. 3 %，磷酸二氢钾0?0. 03 %，淀粉酶0?0. 07 %，植物油 0?0.4%，消泡剂0?0. 1%，余量为水； 补料培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：玉米淀粉〇?50%，花生饼粉0? 0. 5%，黄豆饼粉0?0. 5%，酵母粉0?0. 5%，玉米浆0?3%，碳酸钙0?0. 9%，硫酸铵 0?0. 9%，氯化钠0?0. 5%，淀粉酶0?0. 2%，消泡剂0?0. 3%，余量为水； c?发酵液的分尚纯化 发酵培养结束后，首先对发酵液进行预处理，然后板框过滤；过滤后的滤液用122离 子交换树脂进行脱色，直至滤液透光度> 90%后进入结晶罐结晶；在结晶罐内温度为8? l〇°C条件下,用氨水将脱色后滤液pH值调至4. 4?4. 8,然后保温50?60min,再进行离心 分离，直至分离后湿晶体含水量按质量百分浓度计达19?20% ;将离心得到的湿晶体采用 气流干燥方式进行干燥，保持进风温度为100?160°C，最后得到含水量按质量百分浓度计 彡10%的干粉。
2. 根据权利要求1所述的一种土霉素的制备方法，其特征在于，所述孢子培养 基按质量百分浓度计由以下成分组成：麸皮5. 5%，MgS040.004 %，KH2P040 . 01 %， (NH4)2HP040. 015%，琼脂粉 2. 0%，余量为水。
3. 根据权利要求1所述的一种土霉素的制备方法，其特征在于，所述一级种子罐培养 的培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：玉米淀粉2%，花生饼粉1 %，黄豆饼粉1 %， 酵母粉1 %，玉米浆1 %，碳酸钙0. 4 %，硫酸铵0. 4 %，氯化钠0. 6 %，磷酸二氢钾0. 01 %，植 物油0. 5 %，小麦粉0. 8 %，麦芽糊精2. 0 %，氯化钴0. 005 %，消泡剂0. 1 %，余量为水。
4. 根据权利要求1所述的一种土霉素的制备方法，其特征在于，所述二级种子罐培 养的培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：玉米淀粉5. 5 %，花生饼粉1 %，黄豆饼粉 1 %，酵母粉〇. 5 %，玉米浆1 %，碳酸钙0. 6 %，硫酸铵0. 4 %，氯化钠0. 5 %，磷酸二氢钾 0. 01 %，植物油0. 5 %，小麦粉1. 0 %，麦芽糊精1 %，消泡剂0. 1 %，余量为水。
5. 根据权利要求1所述的一种土霉素的制备方法，其特征在于，所述发酵培养基按质 量百分浓度计由以下成分组成：玉米淀粉8 %，花生饼粉1 %，黄豆饼粉1 %，酵母粉0. 5 %， 玉米浆1. 5 %，碳酸钙0. 6 %，硫酸铵0. 8 %，氯化钠0. 3 %，磷酸二氢钾0. 03 %，淀粉酶 0.06%，植物油0.4%，消泡剂0. 1%，余量为水。
6. 根据权利要求1所述的一种土霉素的制备方法，其特征在于，所述补料培养基按 质量百分浓度计由以下成分组成：玉米淀粉40 %，花生饼粉0. 4 %，黄豆饼粉0. 4 %，酵母 粉0. 3 %，玉米浆2. 5 %，碳酸钙0. 5 %，硫酸铵0. 6 %，氯化钠0. 4 %，淀粉酶0. 1 %，消泡剂 0. 1%，余量为水。
7. 根据权利要求1所述的一种土霉素的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： a.种子培养 1) 囷种制备 将龟裂链霉菌孢子接种到含有孢子培养基的母斜面上并在34°C下培养4天；然后再接 种到含有孢子培养基的子斜面上，在35°C下培养3天，至孢子成熟； 所述孢子培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：麸皮5.5%，MgS040. 004%， KH2P040. 01%，（NH4)2HP040. 015%，琼脂粉 2. 0%，余量为水； 2) 种子罐培养 将制备的孢子转至种子罐培养，首先进行一级种子罐培养，培养条件为：培养温度 32°C，通气量1:1. 8v/v/min，罐压0. 03MPa，搅拌速度180rpm/min，培养时间30小时；然后 按一级种子罐培养液与二级种子罐培养基体积比为1:2的比例，将一级种子罐培养液转入 二级种子罐继续培养，培养条件为：培养温度32°C，通气量1:1. 5v/v/min，罐压0. 03MPa，搅 拌速度180rpm/min，培养时间30小时； 所述一级种子罐培养的培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：玉米淀粉2%，花 生饼粉1 %，黄豆饼粉1 %，酵母粉1 %，玉米浆1 %，碳酸钙0.4%，硫酸铵0.4%，氯化钠 0. 6 %，磷酸二氢钾0. 01 %，植物油0. 5 %，小麦粉0. 8 %，麦芽糊精2. 0 %，氯化钴0. 005 %， 消泡剂0. 1%，余量为水； 所述二级种子罐培养的培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：玉米淀粉5. 5%， 花生饼粉1 %，黄豆饼粉1 %，酵母粉0. 5 %，玉米浆1 %，碳酸钙0. 6 %，硫酸铵0. 4 %，氯化 钠0. 5 %，磷酸二氢钾0. 01 %，植物油0. 5 %，小麦粉1. 0 %，麦芽糊精1 %，消泡剂0. 1 %，余 量为水； b.发酵培养 种子罐培养完毕后转为发酵培养，发酵培养条件为：罐内温度32°C，通气速率为1 : 0. 8v/v/min，罐压0. 05MPa，搅拌速度180rpm/min，pH值6. 0,发酵时间199小时；发酵过程 中通过添加补料培养基控制发酵液总糖质量百分浓度在3?5%之间；发酵结束前，依据发 酵液总糖浓度来确定添加补料量，确保发酵结束时发酵液总糖质量百分浓度不高于3% ; 所述发酵培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：玉米淀粉8 %，花生饼粉1 %，黄 豆饼粉1 %，酵母粉〇. 5 %，玉米浆1. 5 %，碳酸钙0. 6 %，硫酸铵0. 8 %，氯化钠0. 3 %，磷酸 二氢钾0. 03 %，淀粉酶0. 06 %，植物油0. 4 %，消泡剂0. 1 %，余量为水； 所述补料培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：玉米淀粉40%，花生饼粉0. 4%， 黄豆饼粉〇. 4 %，酵母粉0. 3 %，玉米浆2. 5 %，碳酸钙0. 5 %，硫酸铵0. 6 %，氯化钠0. 4 %， 淀粉酶〇. 1 %，消泡剂〇. 1 %，余量为水； c?发酵液的分尚纯化 发酵培养结束后，对发酵液进行预处理，然后板框过滤；过滤后的滤液用122离子交换 树脂进行脱色，直至滤液透光度达98%后进入结晶罐结晶；在结晶罐内温度为8°C条件下， 用氨水将脱色后滤液pH值调至4. 7,然后保温60min，再进行离心分离，直至分离后湿晶体 含水量按质量百分浓度计达19. 5% ;将离心得到的湿晶体采用气流干燥方式进行干燥，保 持进风温度为148°C，最后得到含水量按质量百分浓度计为8. 5%的干粉。
8.根据权利要求1?7任一项所述的一种土霉素的制备方法，其特征在于，所述步骤 c中所述发酵液预处理包括：首先对发酵液进行稀释，然后用草酸进行酸化，酸化后pH值为 1. 90?2. 00,然后按重量体积比向发酵液中加入发酵液体积3. 0±0. 3%。的黄血盐钠，20分 钟后按重量体积比加入发酵液体积2. 0%。的硫酸锌。
【文档编号】C12R1/59GK104372058SQ201410608403
【公开日】2015年2月25日 申请日期:2014年11月3日 优先权日:2014年11月3日
【发明者】谢昌贤, 邓维康, 刘运添, 王鹏飞 申请人:金河生物科技股份有限公司