本发明公开了一种肠溶型益生菌发酵酸化剂颗粒的制备方法，属于饲料添加剂制备技术领域。
背景技术：
仔畜早期断奶后，由于自身消化道机能发育不全，特别是胃酸分泌不足，且仔畜饲料的pH值多在5.8～6.5之间，常使仔畜胃内的pH值较高。过高的pH值使胃蛋白酶活性降低，饲料利用率低，而且易引起肠道受损，产生腹泻等症状，严重影响仔畜的生长和养殖户的经济效益。在仔畜早期断奶后，配合使用酸化剂，可以弥补胃酸分泌的不足，能提高饲料消化率，保证仔畜的健康生长。
酸化剂分为单一酸化剂和复合酸化剂两大类，单一酸化剂包括无机酸和有机酸。饲料中常用的无机酸有盐酸、磷酸等，有机酸有乳酸、柠檬酸、丙酸、苹果酸等，无机酸具有较强的酸性及相对较低的添加成本，但是在使用过程中会破坏胃粘膜功能甚至灼伤胃粘膜，抑制胃酸分泌和仔猪胃功能的正常发育；有机酸具有良好的风味，并且有些可直接进入三羧酸循环，在生产实际中使用较多，复合酸化剂是由不同种酸化剂按一定比例复合而成的产品。当前比较一致认为效果较好的排列顺序是：复合酸＞有机酸＞无机酸。
然而，现有的这些饲料酸化剂往往存在以下问题：（1）不能达到抑制有害微生物生长、促进有益菌生长的目的，对动物的防病治病、提高免疫力的效果欠佳；（2）目前酸化剂的制备方法主要是简单物理混合、颗粒化，这种制备方法易使酸化剂暴露，这种暴露的酸化剂不仅破坏饲料中的其他营养成分，影响饲料的适口性，甚至在加工过程中腐蚀饲料加工机械。随着人们对动物食品安全的认识水平越来越高，现有的饲料酸化剂已无法满足使用需求。
技术实现要素：
本发明主要解决的技术问题：针对现有酸化剂不能达到抑制有害微生物生长、促进有益菌生长的目的，无法提高仔畜的抗病能力，且易破坏饲料中营养成分，还会腐蚀饲料加工机械的缺陷，提供一种肠溶型益生菌发酵酸化剂颗粒的制备方法，本发明首先配置液体培养基，随后将枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌等接种到液体培养基中培养，将所得菌液混合制得复合益生菌液，再以红薯粉、麦麸、豆粕等为营养底物，经复合益生菌液发酵酸化，再将所得发酵酸化料与羧甲基纤维素混合造粒并干燥制成芯材，最后将邻苯二甲酸醋酸纤维素与乙醇丙酮溶液、去离子水等肠溶型材料配置成壳材乳液，并包裹芯材，得肠溶型益生菌发酵酸化剂颗粒，本发明制得的酸化剂颗粒实现定位释放药液效果，从而提高了调控动物肠道酸碱平衡和胃肠道生长发育的效果，同时避免了酸化剂对饲料中其它营养成分的破坏及对加工机械的腐蚀，还可有效提高动物免疫力、改善饲料适口性，具有广泛的应用前景。
为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：
（1）称取10～12g葡萄糖，10～12g蛋白胨，10～12g酵母膏，5～6g柠檬酸三铵，5～6g牛肉粉，5～6g乙酸钠，0.5～0.6g氯化镁，0.20～0.24g氯化锰，0.5～0.6g磷酸氢二钾，加入1.0～1.2L去离子水中，以300～400r/min搅拌20～30min，得混合液，用质量分数为10%碳酸氢钠溶液调节混合液pH为6.2～6.5，随后装入高压灭菌锅中，在120～121℃下灭菌处理20～30min，得液体培养基；
（2）按接种量均为3～5%，将枯草芽孢杆菌，植物乳杆菌，乳酸菌LB1，双歧杆菌，分别接种至4份80～100mL上述液体培养基中进行单菌种培养，在35～37℃下厌氧培养15～20h，过滤得菌液，量取10～20mL枯草芽孢杆菌菌液，80～100mL植物乳杆菌菌液，30～50mL乳酸菌LB1菌液，30～50mL双歧杆菌菌液混合均匀后，得复合益生菌液；
（3）称取400～500g红薯粉，200～300g麦麸，200～300g豆粕，加入粉碎机中粉碎，过60目筛，将过筛后的复合粉末装入高压蒸汽灭菌锅中，在120～121℃下灭菌处理15～20min，得灭菌发酵料，将灭菌发酵料与上述复合益生菌液混合后加入500～600mL去离子水，并装入发酵罐中，在22～30℃下密封发酵3～5天，得发酵酸化料；
（4）向700～800g上述发酵酸化料中添加100～200mL质量分数为2%羧甲基纤维素，并转入造粒机中挤出制成1～3mm粒径的颗粒，随后置于干燥箱中，在50～60℃下干燥2～3h，得芯材；
（5）称取3～4g邻苯二甲酸醋酸纤维素，加入30～40mL质量分数为10%乙醇丙酮溶液中，以300～400r/min搅拌20～30min，再加入1.0～1.5g柠檬酸三乙酯，55～60mL去离子水，继续搅拌30～40min，得壳材乳液，随后将上述芯材浸泡在壳材乳液中3～5min，过滤得滤饼，将滤饼置于干燥箱中，在45~55℃下干燥5~6h，得肠溶型益生菌发酵酸化剂颗粒。
本发明的应用方法是：首先按质量比1:350～1:1000，将本发明制得的酸化剂颗粒与猪饲料搅拌混合8～12min，随后将所得混合猪饲料对断奶15～20天、生长健康的仔猪进行喂养，让仔猪自由采食，将混合饲料每天分2～4次进行投喂，控制仔猪日采食量在1～3kg，并且要保证每天都有1h的空槽时间即可。经检测，仔猪连续食用含有本发明酸化剂的饲料30天后，平均增重15～18kg，平均日增重达500～600g，与使用传统饲料酸化剂相比，动物日增重提高了8～10%，日采食量提高了3～5%，料肉比降低了4～6%，同时本发明饲料酸化剂颗粒具有较好的肠溶、缓释作用，在动物胃中释放率为8～10%，在小肠中释放率为50～70%，在大肠中释放率为25～40%。
本发明的有益效果是：
（1）本发明制得的酸化剂颗粒具有较好的肠道保健及改善饲料适口性的效果，同时有效降低饲料酸度，降低饲料的pH和酸结合力，延长饲料的保存时间；
（2）本发明制得的酸化剂颗粒可以有效弥补牲畜胃酸分泌的不足，提高动物的消化吸收能力，显著增加食欲，从而保证动物的健康生长，食用后动物皮红毛亮，提高生产性能和抵抗疾病能力；
（3）本发明饲料酸化剂为肠溶性颗粒制品，在口腔、食道包衣膜完整，有效酸成分未释放出来，到达后段肠道才会缓慢释放，发挥抑菌和改善动物消化道微生态的作用，还可避免对饲料中其他营养成分造成破坏，亦不会对加工机械造成腐蚀。
具体实施方式
首先称取10～12g葡萄糖，10～12g蛋白胨，10～12g酵母膏，5～6g柠檬酸三铵，5～6g牛肉粉，5～6g乙酸钠，0.5～0.6g氯化镁，0.20～0.24g氯化锰，0.5～0.6g磷酸氢二钾，加入1.0～1.2L去离子水中，以300～400r/min搅拌20～30min，得混合液，用质量分数为10%碳酸氢钠溶液调节混合液pH为6.2～6.5，随后装入高压灭菌锅中，在120～121℃下灭菌处理20～30min，得液体培养基；随后按接种量均为3～5%将枯草芽孢杆菌，植物乳杆菌，乳酸菌LB1，双歧杆菌，分别接种至4份80～100mL上述液体培养基中进行单菌种培养，在35～37℃下厌氧培养15～20h，过滤得菌液，量取10～20mL枯草芽孢杆菌菌液，80～100mL植物乳杆菌菌液，30～50mL乳酸菌LB1菌液，30～50mL双歧杆菌菌液混合均匀后，得复合益生菌液；再称取400～500g红薯粉，200～300g麦麸，200～300g豆粕，加入粉碎机中粉碎，过60目筛，将过筛后的复合粉末装入高压蒸汽灭菌锅中，在120～121℃下灭菌处理15～20min，得灭菌发酵料，将灭菌发酵料与上述复合益生菌液混合后加入500～600mL去离子水，并装入发酵罐中，在22～30℃下密封发酵3～5天，得发酵酸化料；再向700～800g上述发酵酸化料中添加100～200mL质量分数为2%羧甲基纤维素，并转入造粒机中挤出制成1～3mm粒径的颗粒，随后置于干燥箱中，在50～60℃下干燥2～3h，得芯材；最后称取3～4g邻苯二甲酸醋酸纤维素，加入30～40mL质量分数为10%乙醇丙酮溶液中，以300～400r/min搅拌20～30min，再加入1.0～1.5g柠檬酸三乙酯，55～60mL去离子水，继续搅拌30～40min，得壳材乳液，随后将上述芯材浸泡在壳材乳液中3～5min，过滤得滤饼，将滤饼置于干燥箱中，在45~55℃下干燥5~6h，得肠溶型益生菌发酵酸化剂颗粒。
实例1
首先称取10g葡萄糖，10g蛋白胨，10g酵母膏，5g柠檬酸三铵，5g牛肉粉，5g乙酸钠，0.5g氯化镁，0.20g氯化锰，0.5g磷酸氢二钾，加入1.0L去离子水中，以300r/min搅拌20min，得混合液，用质量分数为10%碳酸氢钠溶液调节混合液pH为6.2，随后装入高压灭菌锅中，在120℃下灭菌处理20min，得液体培养基；随后按接种量均为3%，将枯草芽孢杆菌，植物乳杆菌，乳酸菌LB1，双歧杆菌，分别接种至4份80mL上述液体培养基中进行单菌种培养，在35℃下厌氧培养15h，过滤得菌液，量取10mL枯草芽孢杆菌菌液，80mL植物乳杆菌菌液，30mL乳酸菌LB1菌液，30mL双歧杆菌菌液混合均匀后，得复合益生菌液；再称取400g红薯粉，200g麦麸，200g豆粕，加入粉碎机中粉碎，过60目筛，将过筛后的复合粉末装入高压蒸汽灭菌锅中，在120℃下灭菌处理15min，得灭菌发酵料，将灭菌发酵料与上述复合益生菌液混合后加入500mL去离子水，并装入发酵罐中，在22℃下密封发酵3天，得发酵酸化料；再向700g上述发酵酸化料中添加100mL质量分数为2%羧甲基纤维素，并转入造粒机中挤出制成1mm粒径的颗粒，随后置于干燥箱中，在50℃下干燥2h，得芯材；最后称取3g邻苯二甲酸醋酸纤维素，加入30mL质量分数为10%乙醇丙酮溶液中，以300r/min搅拌20min，再加入1.0g柠檬酸三乙酯，55mL去离子水，继续搅拌30min，得壳材乳液，随后将上述芯材浸泡在壳材乳液中3min，过滤得滤饼，将滤饼置于干燥箱中，在45~55℃下干燥5~6h，得肠溶型益生菌发酵酸化剂颗粒。
本实例操作简便，使用时，首先按质量比1:350，将本发明制得的酸化剂颗粒与猪饲料搅拌混合8min，随后将所得混合猪饲料对断奶15天、生长健康的仔猪进行喂养，让仔猪自由采食，将混合饲料每天分2次进行投喂，控制仔猪日采食量在1kg，并且要保证每天都有1h的空槽时间即可。经检测，仔猪连续食用含有本发明酸化剂的饲料30天后，平均增重15kg，平均日增重达500g，与使用传统饲料酸化剂相比，动物日增重提高了8%，日采食量提高了3%，料肉比降低了4%，同时本发明饲料酸化剂颗粒具有较好的肠溶、缓释作用，在动物胃中释放率为8%，在小肠中释放率为50%，在大肠中释放率为25%。
实例2
首先称取11g葡萄糖，11g蛋白胨，11g酵母膏，5g柠檬酸三铵，5g牛肉粉，5g乙酸钠，0.5g氯化镁，0.22g氯化锰，0.5g磷酸氢二钾，加入1.1L去离子水中，以350r/min搅拌25min，得混合液，用质量分数为10%碳酸氢钠溶液调节混合液pH为6.3，随后装入高压灭菌锅中，在120℃下灭菌处理25min，得液体培养基；随后按接种量均为4%，将枯草芽孢杆菌，植物乳杆菌，乳酸菌LB1，双歧杆菌，分别接种至4份90mL上述液体培养基中进行单菌种培养，在36℃下厌氧培养18h，过滤得菌液，量取15mL枯草芽孢杆菌菌液，90mL植物乳杆菌菌液，40mL乳酸菌LB1菌液，40mL双歧杆菌菌液混合均匀后，得复合益生菌液；再称取450g红薯粉，250g麦麸，250g豆粕，加入粉碎机中粉碎，过60目筛，将过筛后的复合粉末装入高压蒸汽灭菌锅中，在120℃下灭菌处理18min，得灭菌发酵料，将灭菌发酵料与上述复合益生菌液混合后加入550mL去离子水，并装入发酵罐中，在26℃下密封发酵4天，得发酵酸化料；再向750g上述发酵酸化料中添加150mL质量分数为2%羧甲基纤维素，并转入造粒机中挤出制成2mm粒径的颗粒，随后置于干燥箱中，在55℃下干燥2h，得芯材；最后称取3g邻苯二甲酸醋酸纤维素，加入35mL质量分数为10%乙醇丙酮溶液中，以350r/min搅拌25min，再加入1.3g柠檬酸三乙酯，58mL去离子水，继续搅拌35min，得壳材乳液，随后将上述芯材浸泡在壳材乳液中4min，过滤得滤饼，将滤饼置于干燥箱中，在45~55℃下干燥5~6h，得肠溶型益生菌发酵酸化剂颗粒。
本实例操作简便，使用时，首先按质量比1:650，将本发明制得的酸化剂颗粒与猪饲料搅拌混合10min，随后将所得混合猪饲料对断奶18天、生长健康的仔猪进行喂养，让仔猪自由采食，将混合饲料每天分3次进行投喂，控制仔猪日采食量在2kg，并且要保证每天都有1h的空槽时间即可。经检测，仔猪连续食用含有本发明酸化剂的饲料30天后，平均增重16kg，平均日增重达550g，与使用传统饲料酸化剂相比，动物日增重提高了9%，日采食量提高了4%，料肉比降低了5%，同时本发明饲料酸化剂颗粒具有较好的肠溶、缓释作用，在动物胃中释放率为9%，在小肠中释放率为60%，在大肠中释放率为33%。
实例3
首先称取12g葡萄糖，12g蛋白胨，12g酵母膏，6g柠檬酸三铵，6g牛肉粉，6g乙酸钠，0.6g氯化镁，0.24g氯化锰，0.6g磷酸氢二钾，加入1.2L去离子水中，以400r/min搅拌30min，得混合液，用质量分数为10%碳酸氢钠溶液调节混合液pH为6.5，随后装入高压灭菌锅中，在121℃下灭菌处理30min，得液体培养基；随后按接种量均为5%，将枯草芽孢杆菌，植物乳杆菌，乳酸菌LB1，双歧杆菌，分别接种至4份100mL上述液体培养基中进行单菌种培养，在37℃下厌氧培养20h，过滤得菌液，量取20mL枯草芽孢杆菌菌液，100mL植物乳杆菌菌液，50mL乳酸菌LB1菌液，50mL双歧杆菌菌液混合均匀后，得复合益生菌液；再称取500g红薯粉，300g麦麸，300g豆粕，加入粉碎机中粉碎，过60目筛，将过筛后的复合粉末装入高压蒸汽灭菌锅中，在121℃下灭菌处理20min，得灭菌发酵料，将灭菌发酵料与上述复合益生菌液混合后加入600mL去离子水，并装入发酵罐中，在30℃下密封发酵5天，得发酵酸化料；再向800g上述发酵酸化料中添加200mL质量分数为2%羧甲基纤维素，并转入造粒机中挤出制成3mm粒径的颗粒，随后置于干燥箱中，在60℃下干燥3h，得芯材；最后称取4g邻苯二甲酸醋酸纤维素，加入40mL质量分数为10%乙醇丙酮溶液中，以400r/min搅拌30min，再加入1.5g柠檬酸三乙酯，60mL去离子水，继续搅拌40min，得壳材乳液，随后将上述芯材浸泡在壳材乳液中5min，过滤得滤饼，将滤饼置于干燥箱中，在45~55℃下干燥5~6h，得肠溶型益生菌发酵酸化剂颗粒。
本实例操作简便，使用时，首先按质量比1:1000，将本发明制得的酸化剂颗粒与猪饲料搅拌混合12min，随后将所得混合猪饲料对断奶20天、生长健康的仔猪进行喂养，让仔猪自由采食，将混合饲料每天分4次进行投喂，控制仔猪日采食量在3kg，并且要保证每天都有1h的空槽时间即可。经检测，仔猪连续食用含有本发明酸化剂的饲料30天后，平均增重18kg，平均日增重达600g，与使用传统饲料酸化剂相比，动物日增重提高了10%，日采食量提高了5%，料肉比降低了6%，同时本发明饲料酸化剂颗粒具有较好的肠溶、缓释作用，在动物胃中释放率为10%，在小肠中释放率为70%，在大肠中释放率为40%。