一种黑枸杞压片及其制备方法与流程

文档序号:12660601阅读:519来源:国知局

背景技术
::野生黑枸杞味甘、性平,富含蛋白质、枸杞多糖、氨基酸、维生素、矿物质、微量元素等多种营养成分,还含有丰富的花青素(这是市面上的红枸杞不具备的),其OPC含量超过蓝莓8-10倍,是迄今为止,发现OPC含量最高的天然野生植物,花青素OPC是最有效的天然水溶性自由基清除剂,其功效是VC的20倍、VE的50倍,花青素有穿过血脑屏障的能力,可直接保护大脑中枢神经系统,花青素还能够增强血管弹性,改善循环系统和增进皮肤的光滑度,抑制炎症和过敏,改善关节的柔韧性。因此,野生黑枸杞也被誉为“软黄金”,野生的“蓝色妖姬”。黑枸杞的功效及作用:(1)美容养颜,延缓衰老:野生黑枸杞含有的花青素是最有效的天然自由基清除剂,对皮肤粗糙、老化,肤色不佳、晦暗、黄褐斑的女性具有延缓人体细胞组织衰老,保持年轻状态,延年益寿等作用。(2)明目作用:野生黑枸杞具有明显保护视力的作用,特别对用电脑后发生眼疲劳、眼疼等有明显作用,对青少年假性近视,中老年眼花、眼底出血糖尿病,视网膜病变,白内障,视疲劳,干眼症都有良好的保健作用。(3)预防癌症、补肾益精:野生黑枸杞中的花青素有清除自由基的功效,亦可让癌细胞无法顺利扩散,借此保护更多健康的细胞免于被癌细胞侵蚀;(4)抗辐射、抗氧化:科学验证服用黑枸杞泡的水,3分钟后就能在血液中发现花青素有效的抵抗紫外线辐射、电脑辐射、手机辐射等。花青素具有抗氧化性,能够清除体内的自由基,所以女性常喝黑枸杞能够保持年轻。花青素还是天然的阳光遮盖物,能够阻止紫外线侵害皮肤,如果用花青素加以保护,则大约有85%的皮肤细胞可以幸免于难。(5)生津止渴、改善循环:花青素能够改善血液循环,恢复失去的微血管功效,加强脆弱的血管,因而使血管更具弹性,原花青素被称为“动脉粥样硬化的解毒药”,所以欧洲的医生通常会建议静脉曲张的病人食用富含花青素的食品。目前已经公开的黑枸杞及其相关的片剂较多:申请号为201410706802.4的中国专利公开了一种黑果枸杞片剂,其特征在于:该片剂是将黑果枸杞冻干粉与越桔提取物、糊精、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠和硬脂酸镁以重量份数比为4~7:1~3:0.3~0.6:0.1~0.3:0.1~0.4:0.1~0.4混合后制粒,最后干燥后压片即可;原料制作方法独特、提高了黑果枸杞功效成分花色苷的含量,利于黑果枸杞花色苷的长期保存、并能有效保持黑果枸杞功效成分的活性,具有抗疲劳、降血压、降血脂、美容养颜等作用,适用于高血脂患者及妇女血瘀腹痛、面色枯槁、营养不良者。申请号为201410114102.6的中国专利公开了一种红黑枸杞双层片及其制备方法,该发明涉及红黑枸杞双层片生产方法,包括如下步骤:(1)清洗:将采摘后的柴达木黑果枸杞和红枸杞的鲜果进行拣选;(2)破碎、研磨、过滤;(3)低温澄清:由于榨汁后的枸杞果汁中残存大量的果肉碎屑及纤维,故需在8~10℃澄清;(4)杀菌:在枸杞果汁中加入均质辅料(麦芽糊精等)采用115℃下3s超高温瞬时灭菌法进行杀菌处理;(5)均质、干燥:将灭菌后的枸杞果汁加入高压均质机中进行均质,压力控制在25MPa左右,然后干燥;(6)制粒:根据既定的配方,取黑果枸杞和红枸杞的两种粉末,分别制粒;(7)压片:将上述2种颗粒分别加入双层压片机2个不同的料斗,进行压片,即得。申请号为200910082329.6的中国专利公开了一种枸杞营养咀嚼片及其制备方法。该枸杞营养咀嚼片,它的活性成分包括枸杞、低聚异麦芽糖和下述四种营养物质中的至少一种;所述营养物质为胡萝卜、红枣、菠萝和脱脂奶粉。该发明的枸杞营养咀嚼片富含维生素A、β-胡萝卜素,具有益肝明目和改善肠道平衡等多重保健功效,且风味独特,食用方便,易于携带。该发明采用粉末直接压片法制备枸杞营养咀嚼片,解决了以往同类营养咀嚼片生产过程中,需先湿法造粒再压片的问题,从而简化了加工工序,提高了加工效率。申请号为201310740299.X的中国专利公开了一种枸杞含服制剂的制备方法,该方法包括:(1)将新鲜枸杞与水混合并打浆,得到枸杞浆液;(2)去除枸杞浆液中的固形物,得到清液;(3)将所述清液浓缩,与糊精混合并干燥,得到枸杞干粉;(4)将所述枸杞干粉与乙基纤维素、卡波姆、蔗糖和柠檬酸混合,得到压片干粉,并将压片干粉与乙醇水溶液混合后得到软料,并进行制粒和压片。该发明的枸杞含服制剂能够在口腔含服环境中,以均匀且恰当的释放速度来释放枸杞有效成分,从而提高了枸杞含服制剂经口腔吸收的效率。申请号为201410309763.4的中国专利公开了一种黑果枸杞花青素咀嚼片,该咀嚼片由下述重量份的组分按常规方法依次经制粒、40~50℃烘干、整粒、在压力为80~100千牛的条件下压片制成:黑果枸杞花青素50~500、桃花山奈酚30~300、手掌参10~100、枸杞多糖50~500。该发明原料易得,易于工业化实施,可使人体最大程度利用和吸收植物提取物。上述公开的专利黑枸杞压片的抗氧化性、生物活性、适口性及稳定性差、功能性不全面且有效成分利用率低,尚未见以黑枸杞为原料,经功能性酿酒酵母发酵制备黑枸杞片以克服上述缺陷的相关报道。技术实现要素::本发明的目的是克服现有黑枸杞压片的缺陷,提供一种抗氧化性、生物活性、适口性及稳定性好,多功能黑枸杞压片及其制备方法。为了达到上述目的,本发明采用以下技术方案:一种黑枸杞压片,主要由以下重量份数的原料制备:黑枸杞20-40份,食用粉6-10份,粘结剂2-4份,酿酒酵母种子液2-4份,糊精1-3份,微晶纤维素1-3份,硬脂酸镁0.2-1份;进一步地,所述酿酒酵母具体为酿酒酵母tlj2016,该菌株已于2016年7月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCCNo.12789,保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,邮编100101;所述酿酒酵母tlj2016具有以下特性:1)对葡萄糖的耐受能力达到300g/L,利于其在高浓度葡萄糖条件下生产GSH;2)在5L发酵罐中发酵生产GSH终浓度达到3308mg/L;3)耐受L-半胱氨酸的能力特强,在5mmol/LL-半胱氨酸作用下仍能缓慢生长,在40mmol/LL-半胱氨酸作用下仍能保持GSH大量合成;4)耐盐能力达到18%,有利于扩展其应用领域;所述酿酒酵母种子液培养方法为:取酿酒酵母斜面菌种一环,接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中150rpm,30℃培养30h得酿酒酵母种子液;所述摇瓶培养基质量组成为:(NH4)2SO46g/L,葡萄糖35g/L,K2HPO4·3H2O3g/L,KH2PO40.5g/L,酵母粉11g/L,MnSO40.1g/L,KCL0.1g/L,FeSO40.1g/L,MgSO4·7H2O0.1g/L,余量为水,pH6.0。进一步地,所述食用粉是科学复配羊肚菌子实体、桔子皮和牛肉,经高压脉冲电场、复合酶分段酶解、分级超滤、分段反应、冷冻干燥等低温加工技术而制备的兼有牛肉和桔子风味的复合风味呈味肽,不仅可大大提黑枸杞压片的适口性,提高消化率,而且具有较强抗氧化效果,可大大消除自由基;优选地,所述食用粉的制备方法,包括以下步骤:按质量比1-2:1-3:3-5称取羊肚菌子实体、桔子皮和牛肉,混匀、粉碎得混合料,加入其质量6倍的离子溶液,混匀,调节pH值为6-8,于室温下在电场强度25-35kV/cm,脉冲时间300-500μs,脉冲频率200-300Hz条件下进行高压脉冲电场处理20-30min;然后加入混合料质量0.01-0.05%的复合酶,于50-60℃酶解30-50min,然后降温至35-45℃酶解40-60min,95℃灭酶10min,降至室温,除菌过滤得酶解液,酶解液通过5500Da和7000Da的超滤膜过滤,取两膜之间的透过液,浓缩至固形物含量为20-25%得酶解浓缩液;加入酶解浓缩液质量3-4%的还原糖,依次于122-128℃反应10-30min和142-148℃反应20-25min后;将反应液通过2000Da和4000Da的超滤膜过滤,取两膜之间的透过液,减压浓缩至固形物含量为32-36%得反应浓缩液;向反应浓缩液中加入其质量0.2-0.4%的大豆多肽,混匀,冷冻干燥即得食用粉;优选地,所述离子溶液为含有铁离子17-22mg/L、锌离子15-20mg/L的水溶液;优选地,所述复合酶为蚯蚓丝氨酸蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、脂肪酶按质量比4-6:2-4:0.2-0.4:0.1-0.3均匀混合;优选地,所述还原糖为木糖、核糖、葡萄糖、果糖、半乳糖中的一种或几种;更优选地,所述还原糖的质量组成为:木糖:核糖:葡萄糖:果糖:半乳糖=2-4:1-3:1-3:1-2:1-2。进一步地,所述粘结剂是以蒿草籽为原料,经高压静电、高压脉冲电场辅助水杨酸浸泡、冷藏冷冻处理后粉碎、冻干而制得;优选地,所述粘结剂的制备方法,包括如下步骤:将蒿草籽装盘,首先于电场强度1-3kV/cm高压静电处理5-7min;接着在浓度为3-5mg/L的水杨酸溶液中室温浸泡2-5h,同时在电场强度2-6kV/cm,脉冲时间50-100μs,脉冲频率100-150Hz条件下进行高压脉冲电场处理;漂洗、沥干,于3-5℃静置18-24h,然后依次在1-3℃冷藏2-4d,-3--5℃冷冻1-3d、-15--18℃冷冻10-15h,立即放在室外自然光照2-4h后立即进行粉碎,冻干,加入冻干粉质量3-8%的小苏打,均匀混合,过80-100目筛即得粘结剂。本发明另一目的是提供上述黑枸杞压片的制备方法,包括如下步骤:将黑枸杞清洗后置烤箱中于70-85℃烘烤30-50min,加入其质量5-6倍的水,破碎得到混合物;向混合物中加入葡萄糖,使葡萄糖的含量为200-300g/L,灭菌、降温至28-30℃得发酵基质,保温,加入酿酒酵母种子液进行发酵,通气量4-6L/min,罐压0.01-0.03MPa,400-600rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养,发酵至20-30h时,一次性添加终浓度为24-26mmol/L的L-半胱氨酸,继续发酵,当发酵液残糖降至4-8g/L时终止发酵得发酵液,40-60目筛网过滤,滤液采取真空低温浓缩获得浸膏;冷冻干燥,粉碎,与食用粉、粘结剂、糊精、微晶纤维素、硬脂酸镁混匀,制粒、压片即得黑枸杞压片;所述发酵液中GSH终浓度达到3298-3308mg/L;经上述方法制备的黑枸杞压片酿酒酵母活菌含量为7x1012-9x1012cfu/g。有益效果:本发明以黑枸杞为原料,经清洗、烘烤,不仅可达到灭菌作用,而且还可产生部分美拉德反应,提高了黑枸杞压片的香味和鲜味,增强了压片中黑枸杞的主体香气,原料破碎、调配、灭菌后,接种功能性酿酒酵母tlj2016种子液,经补料、恒温、恒pH值、微压发酵后,得到含有高浓度活性酿酒酵母(益生菌)和大量谷胱甘肽的发酵液,得到了功能性和益生性较强的黑枸杞发酵液,经冻干、粉碎后与具有不同功能特性的食用粉、粘结剂、糊精、微晶纤维素、硬脂酸镁混匀,制粒、压片即得一种抗氧化性、生物活性、适口性及稳定性好,功能性强的黑枸杞压片。具体试验例见实施例7-12,具体技术原理如下:1.本发明将黑枸杞预处理后,添加功能性酿酒酵母tlj2016低温发酵,发酵液中GSH终浓度达到3298-3308mg/L,制备的黑枸杞压片酿酒酵母活菌含量为7x1012-9x1012cfu/g,不仅提高了黑枸杞压片的生物活性肽水平,而且提高了黑枸杞压片的生物活性和抗氧化性,极大地增强了黑枸杞压片的功能特性,酿酒酵母tlj2016除具备普通酵母的益生性外还具有以下功能特性:1)对葡萄糖的耐受能力达到300g/L,利于其在高浓度葡萄糖条件下生产GSH;2)在5L发酵罐中发酵生产GSH终浓度达到3308mg/L;3)耐受L-半胱氨酸的能力特强,在5mmol/LL-半胱氨酸作用下仍能缓慢生长,在40mmol/LL-半胱氨酸作用下仍能保持GSH大量合成;4)耐盐能力达到18%。2.本发明制备的粘结剂是以天然盐生植物蒿草的种子蒿草籽为原料而制备的,无污染、无公害、食品安全性强,蒿草籽(蒿草种子)富含抗冻蛋白,经高压静电处理、高压脉冲电场辅助水杨酸诱导、低温分段胁迫处理和自然光照有机结合,使得本身含有抗冻基质的活性种子在外界环境的胁迫和诱导下,抗冻基质成分得到了最全面、最丰富的合成和积累,提高了抗冻蛋白的含量,提高了黑枸杞压片中营养和生物活性物质的抗冻效果和稳定性,延长了产品的保质期,同时抗冻蛋白与一定质量比的小苏打混合,可显著提高黑枸杞压片在制粒、整粒、压片过程中的粘结性,提高了原料利用率,降低了生产成本。3.本发明制备的食用粉是科学复配羊肚菌子实体、桔子皮和牛肉,经高压脉冲电场、复合酶分段酶解、分级超滤、分段反应、冷冻干燥等低温加工技术而制备的兼有牛肉和桔子风味的复合风味呈味肽和大量的功能性小肽,呈味和功能性物质丰富,不仅可以改善黑枸杞压片的适口性,而且还可以全面促进营养成分的消化和吸收,提高消化吸收率,进一步提高机体免疫力。同时含有全程采用低温加工技术,避免了因高温而造成的蛋白变性和其它生物活性物质及香味物质损失,采用高压脉冲电场技术,不仅可防止提取过程杂菌污染,而且大大疏松了羊肚菌、牛肉和桔子蛋白、纤维及组织间的结构,增加了组织的通透性,有利于后续复合酶的渗入和接触,提高了酶解效率和风味肽及功能性小肽的收得率,同时也可直接增加可溶性肽的溶出,相对于现有高温预处理更高效、更环保;采用分段酶解、分级超滤和分段美拉德反应,进一步提高了复合风味肽及功能性小肽的收率;离子溶液和复合酶的科学复配进一步提高了复合酶的活性,提高了酶解效率,降低了酶制剂的使用量,最大限度地提高了复合风味肽及功能性小肽的获取;采用冷冻干燥,特别向反应液科学复配了具有优良呈味和抗冻效果的大豆多肽,大大减少了食用粉的氧化损失和冷冻损失,提高了食用粉的抗氧化性,最终制得一种不仅可大大提高黑枸杞压片的适口性,提高消化吸收率功能特性,而且具有较强抗氧化效果,消除自由基的食用粉。需要说明的是本发明的技术效果是各组分技术特征和方法特征相互协同、相互作用的结果,并非简单的技术特征(组分功能)的叠加,各组分技术特征的有机结合和协同产生的效果远远超过各单一技术特征功能和效果的叠加,具有较好的先进性和实用性。具体实施方式下面通过具体的实施方案叙述本发明。除非特别说明,本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外,实施方案应理解为说明性的,而非限制本发明的范围,本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言,在不背离本发明实质和范围的前提下,对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。实施例1原料制备1.酿酒酵母种子液的制备:取酿酒酵母斜面菌种一环,接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中150rpm,30℃培养30h得酿酒酵母种子液;所述摇瓶培养基质量组成为:(NH4)2SO46g/L,葡萄糖35g/L,K2HPO4·3H2O3g/L,KH2PO40.5g/L,酵母粉11g/L,MnSO40.1g/L,KCL0.1g/L,FeSO40.1g/L,MgSO4·7H2O0.1g/L,余量为水,pH6.0;所述酿酒酵母具体为酿酒酵母tlj2016,该菌株已于2016年7月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCCNo.12789。2.食用粉的制备:所述食用粉的制备方法,包括以下步骤:按质量比1.5:2:4称取羊肚菌子实体、桔子皮和牛肉,混匀、粉碎得混合料,加入其质量6倍的离子溶液,混匀,调节pH值为7,于室温下在电场强度30kV/cm,脉冲时间400μs,脉冲频率250Hz条件下进行高压脉冲电场处理25min;然后加入混合料质量0.03%的复合酶,于55℃酶解40min,然后降温至40℃酶解50min,95℃灭酶10min,降至室温,除菌过滤得酶解液,酶解液通过5500Da和7000Da的超滤膜过滤,取两膜之间的透过液,浓缩至固形物含量为23%得酶解浓缩液;加入酶解浓缩液质量3.5%的还原糖,依次于125℃反应20min和145℃反应22min后;将反应液通过2000Da和4000Da的超滤膜过滤,取两膜之间的透过液,减压浓缩至固形物含量为34%得反应浓缩液;向反应浓缩液中加入其质量0.3%的大豆多肽,混匀,冷冻干燥即得食用粉;所述离子溶液为含有铁离子20mg/L、锌离子18mg/L的水溶液;所述复合酶为蚯蚓丝氨酸蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、脂肪酶按质量比5:3:0.3:0.2均匀混合;所述还原糖的质量组成为:木糖:核糖:葡萄糖:果糖:半乳糖=3:2:2:1.5:1.5。3.粘结剂的制备:所述粘结剂的制备方法,包括如下步骤:将蒿草籽装盘,首先于电场强度2kV/cm高压静电处理6min;接着在浓度为4mg/L的水杨酸溶液中室温浸泡4h,同时在电场强度4kV/cm,脉冲时间80μs,脉冲频率120Hz条件下进行高压脉冲电场处理;漂洗、沥干,于4℃静置21h,然后依次在2℃冷藏3d,-4℃冷冻2d、-16℃冷冻12h,立即放在室外自然光照3h后立即进行粉碎,冻干,加入冻干粉质量5%的小苏打,均匀混合,过100目筛即得粘结剂。以下实施例2-6所使用的食用粉、粘结剂、酿酒酵母种子液为实施例1制备,其它原料均为市购。实施例2一种黑枸杞压片,主要由以下重量份数的原料制备:黑枸杞30份,食用粉8份,粘结剂3份,酿酒酵母种子液3份,糊精2份,微晶纤维素2份,硬脂酸镁0.6份;制备方法,包括如下步骤:将黑枸杞清洗后置烤箱中于80℃烘烤40min,加入其质量5.5倍的水,破碎得到混合物;向混合物中加入葡萄糖,使葡萄糖的含量为250g/L,灭菌、降温至29℃得发酵基质,保温,加入酿酒酵母种子液进行发酵,通气量5L/min,罐压0.02MPa,500rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养,发酵至25h时,一次性添加终浓度为25mmol/L的L-半胱氨酸,继续发酵,当发酵液残糖降至6g/L时终止发酵得发酵液,50目筛网过滤,滤液采取真空低温浓缩获得浸膏;冷冻干燥,粉碎,与食用粉、粘结剂、糊精、微晶纤维素、硬脂酸镁混匀,制粒、压片即得黑枸杞压片;所述发酵液中GSH终浓度达到3308mg/L;经上述方法制备的黑枸杞压片酿酒酵母活菌含量为9x1012cfu/g。实施例3一种黑枸杞压片,主要由以下重量份数的原料制备:黑枸杞20份,食用粉6份,粘结剂2份,酿酒酵母种子液2份,糊精1份,微晶纤维素1份,硬脂酸镁0.2份;制备方法,包括如下步骤:将黑枸杞清洗后置烤箱中于70℃烘烤30min,加入其质量5倍的水,破碎得到混合物;向混合物中加入葡萄糖,使葡萄糖的含量为200g/L,灭菌、降温至28℃得发酵基质,保温,加入酿酒酵母种子液进行发酵,通气量4L/min,罐压0.01MPa,400rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养,发酵至20h时,一次性添加终浓度为24mmol/L的L-半胱氨酸,继续发酵,当发酵液残糖降至4g/L时终止发酵得发酵液,40目筛网过滤,滤液采取真空低温浓缩获得浸膏;冷冻干燥,粉碎,与食用粉、粘结剂、糊精、微晶纤维素、硬脂酸镁混匀,制粒、压片即得黑枸杞压片;所述发酵液中GSH终浓度达到3300mg/L;经上述方法制备的黑枸杞压片酿酒酵母活菌含量为8x1012cfu/g。实施例4一种黑枸杞压片,主要由以下重量份数的原料制备:黑枸杞40份,食用粉10份,粘结剂4份,酿酒酵母种子液4份,糊精3份,微晶纤维素3份,硬脂酸镁1份;制备方法,包括如下步骤:将黑枸杞清洗后置烤箱中于85℃烘烤50min,加入其质量6倍的水,破碎得到混合物;向混合物中加入葡萄糖,使葡萄糖的含量为300g/L,灭菌、降温至30℃得发酵基质,保温,加入酿酒酵母种子液进行发酵,通气量6L/min,罐压0.03MPa,600rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养,发酵至30h时,一次性添加终浓度为26mmol/L的L-半胱氨酸,继续发酵,当发酵液残糖降至8g/L时终止发酵得发酵液,60目筛网过滤,滤液采取真空低温浓缩获得浸膏;冷冻干燥,粉碎,与食用粉、粘结剂、糊精、微晶纤维素、硬脂酸镁混匀,制粒、压片即得黑枸杞压片;所述发酵液中GSH终浓度达到3298mg/L;经上述方法制备的黑枸杞压片酿酒酵母活菌含量为7x1012cfu/g。实施例5一种黑枸杞压片,主要由以下重量份数的原料制备:黑枸杞20份,食用粉10份,粘结剂2份,酿酒酵母种子液4份,糊精1份,微晶纤维素3份,硬脂酸镁0.2份;制备方法,包括如下步骤:将黑枸杞清洗后置烤箱中于70℃烘烤50min,加入其质量5倍的水,破碎得到混合物;向混合物中加入葡萄糖,使葡萄糖的含量为300g/L,灭菌、降温至28℃得发酵基质,保温,加入酿酒酵母种子液进行发酵,通气量6L/min,罐压0.01-0.03MPa,400rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养,发酵至30h时,一次性添加终浓度为24mmol/L的L-半胱氨酸,继续发酵,当发酵液残糖降至8g/L时终止发酵得发酵液,40目筛网过滤,滤液采取真空低温浓缩获得浸膏;冷冻干燥,粉碎,与食用粉、粘结剂、糊精、微晶纤维素、硬脂酸镁混匀,制粒、压片即得黑枸杞压片;所述发酵液中GSH终浓度达到3304mg/L;经上述方法制备的黑枸杞压片酿酒酵母活菌含量为7.5x1012cfu/g。实施例6一种黑枸杞压片,主要由以下重量份数的原料制备:黑枸杞40份,食用粉6份,粘结剂4份,酿酒酵母种子液2份,糊精3份,微晶纤维素1份,硬脂酸镁1份;制备方法,包括如下步骤:将黑枸杞清洗后置烤箱中于85℃烘烤30min,加入其质量6倍的水,破碎得到混合物;向混合物中加入葡萄糖,使葡萄糖的含量为200g/L,灭菌、降温至30℃得发酵基质,保温,加入酿酒酵母种子液进行发酵,通气量4L/min,罐压0.03MPa,400rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养,发酵至30h时,一次性添加终浓度为24mmol/L的L-半胱氨酸,继续发酵,当发酵液残糖降至8g/L时终止发酵得发酵液,40目筛网过滤,滤液采取真空低温浓缩获得浸膏;冷冻干燥,粉碎,与食用粉、粘结剂、糊精、微晶纤维素、硬脂酸镁混匀,制粒、压片即得黑枸杞压片;所述发酵液中GSH终浓度达到3306mg/L;经上述方法制备的黑枸杞压片酿酒酵母活菌含量为8.2x1012cfu/g。实施例7本发明黑枸杞压片的感官品评试验邀请24名人员对本发明实施例2制备的黑枸杞压片与市售两种同类相同生产日期的黑枸杞压片进行品评,感官打分,其中专业和非专业人员各12名,专业人员青年、中年、老年各4名,男女各半,非专业人员少年、青年、中年、老年各3名,男女各半;打分包括外观(20分)、质地(25分)、风味(30分)、口感(25分)四个方面,打分人员独立进行,互不影响,以保证品评结果准确。对品评结果进行了统计,均分值取近似值,保留整数,具体见表1:表1:感官品评统计结果注:同一行内标不同小写字母表示差异显著(P<0.05),标不同大写字母表示差异极显著(P<0.01),标有相同字母表示差异不显著(P>0.05)。以上结果表明,本发明制备的黑枸杞压片从外观、质地、风味和口感任何一方面都要明显优于市售黑枸杞压片,同时也适合不同年龄段、不同消费层次的消费者食用。需要说明的是:本发明实施例3-6制备的黑枸杞压片同样具有上述实验效果,各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。实施例8本发明黑枸杞压片对机体免疫力的影响1实验目的通过运动耐力测试(小鼠游泳试验),验证本发明黑枸杞压片的提高免疫力、抗疲劳作用。2实验材料与试剂2.1供试药物:市售黑枸杞压片(G1);市售黑枸杞压片(G2);本发明实施例2-6制备的黑枸杞压片(G3-G7)。2.2试剂:肝/肌糖原测试盒,购自南京建成生物制品研究所;浓硫酸(AR),南京化学试剂有限公司;生理盐水,山东长富洁晶药业有限公司。3.实验动物ICR小鼠,♂,清洁级,体重18-22g,由宁夏医科大学比较医学中心提供,实验期间小鼠自由饮食。4.主要仪器铝制游泳箱(50cm×50cm×40cm),铅丝,低温高速离心机:5804R型,Eppendrof公司;水浴锅:DK-S26型,上海精宏实验设备有限公司;电子称:BS224S型,Sartorius公司;秒表,温度计5.实验分组5.1剂量分组及受试样品给予时间随机将小鼠分为8组,每组10只,第1组至第7组分别给G1~G7的药物,第8组为空白对照组,给予等体积的双蒸水,每组每日均灌胃1次,灌胃体积为0.2ml/10g,连续给予受试样品30天。5.2样品配制第1组至第7组:称取2.25g药物样品,用蒸馏水配至150ml;空白对照组:双蒸水150ml。6.实验方法6.1负重游泳实验末次给药30min后,置小鼠于游泳箱中,水深不少于30cm,水温25±1℃,鼠尾根部负荷5%体重的铅皮,记录小鼠游泳开始至死亡的时间,作为小鼠游泳时间。6.2小鼠血清尿素测定末次给药30min后,在温度为30℃的水中不负重游泳90min,休息60min后摘眼球采血0.5mL(不加抗凝剂),置4℃冰箱3h,血凝固后2000r/min离心15min,取血清送宁夏医科大学附属医院检验科检测。6.3肝糖原的测定末次给药30min后,在温度为25±1℃的水中不负重游泳90min,颈椎脱臼处死小鼠,用生理盐水洗净,并用滤纸吸干水分后,准确称取肝脏100mg,肝糖原检测试剂盒检测小鼠肝糖原含量。6.4血乳酸的测定末次给药30min后采血,然后不负重在温度为30℃的水中游泳10min后停止。乳酸仪测定方法:分别在游泳前、游泳后、游泳后休息20min后各采血20μL加入40μL破膜液中,立即充分振荡破碎细胞用乳酸仪测定。(血乳酸曲线下面积=5×(游泳前血乳酸值+3×游泳后0min的血乳酸值+2×游泳后20min的血乳酸值)7.观察指标负重游泳时间,血乳酸、尿素、肝糖原值8.统计方法实验数据用表示,采用t检验进行组间比较9.实验结果9.1本发明黑枸杞压片对小鼠体重的影响各组小鼠在给予G1~G7药物后,前、中,后期体重分别见下表所示,各组小鼠的初始体重和增重体重与对照组比较均无统计学差异(P>0.05),表明G1~G7药物均无明显的毒性。实验结果详见表2。表2负重游泳实验小鼠的初始体重、中期体重和结束体重9.2本发明黑枸杞压片对小鼠负重游泳时间的影响经口给予小鼠G1~G7药物后,G1~G2药物与空白对照组比较,可以明显延长小鼠负重游泳时间,具有显著性差异(P<0.05),本发明黑枸杞压片G3~G7药物与空白对照组比较,可以显著延长小鼠负重游泳时间,具有极显著性差异(P<0.01),且明显优于G1~G2药物。结果详见表3。表3黑枸杞压片对小鼠负重游泳时间的影响“*”p<0.05vs空白对照;“**”p<0.01vs空白对照;9.3本发明黑枸杞压片对小鼠运动前后血乳酸的影响经口给予小鼠本发明的黑枸杞压片后,本发明黑枸杞压片G3~G7药物对小鼠运动后血乳酸曲线下面积与对照组比较有统计学差异(P<0.05),G1~G2药物组小鼠血乳酸曲线下面积与对照组比较虽有所降低,但并无统计学差异(P>0.05)。结果见表4。表4本发明黑枸杞压片对小鼠运动前后血乳酸水平的影响“*”p<0.05vs空白对照;9.4本发明黑枸杞压片对小鼠肝糖原的影响经口给予小鼠G1~G7药物后,G1~G2药物与空白对照组比较,小鼠肝糖原含量均有明显的升高,具有显著性差异(P<0.05),本发明黑枸杞压片G3~G7药物与与空白对照组比较,小鼠肝糖原含量均有明显的升高,具有极显著性差异(P<0.01),且明显优于G1~G2药物。结果详见表5。表5本发明黑枸杞压片对小鼠肝糖原含量的影响“*”p<0.05vs空白对照;“**”p<0.01vs空白对照;9.5本发明黑枸杞压片对小鼠血清尿素的影响经口给予小鼠G1~G7药物后,G1~G2药物组与空白对照组比较,小鼠运动后血清尿素含量均有明显的降低,具有显著性差异(P<0.05),本发明黑枸杞压片G3~G7药物与空白对照组比较,小鼠运动后血清尿素含量均有明显的降低,具有极显著性差异(P<0.01),且明显优于G1~G2药物。结果详见表6。表6本发明黑枸杞压片对小鼠血清尿素含量的影响“*”p<0.05vs空白对照;“**”p<0.01vs空白对照;10.实验结论本实验主要通过小鼠负重游泳实验,同时检测小鼠肝糖原的储备来观察本发明黑枸杞压片提高免疫力、抗疲劳的效果。初步研究结果显示如下:1、本发明G3~G7黑枸杞压片均能延长小鼠负重游泳时间(P<0.01),且效果明显优于其它G1~G2的黑枸杞压片。2、生化检测方面显示,本发明G3~G7黑枸杞压片各剂量组均能减少运动后小鼠血清中葡萄糖无氧酵解所产生的乳酸含量,与对照组比较有显著性差异(P<0.05),而其它G1~G2的黑枸杞压片虽然也能减少运动后小鼠血清中葡萄糖无氧酵解所产生的乳酸含量,但与对照组比较,无统计学差异(P>0.05);3、本发明G3~G7黑枸杞压片各剂量组均能显著提高小鼠肝脏中糖原的储备(P<0.01),且效果明显优于其它G1~G2的黑枸杞压片;4、高尿酸模型发现,本发明G3~G7黑枸杞压片能显著降低小鼠游泳后血清中尿素的含量(P<0.01),且效果明显优于其它G1~G2黑枸杞压片;11.结论上述实验证明本发明黑枸杞压片能显著提高机体免疫力,提高小鼠的体力和耐力,降低小鼠运动后血清中尿素及乳酸的含量,且能显著提高小鼠肝脏中糖原的储备,有助于缓解运动负荷引起的疲劳;能延长小鼠负重游泳至力竭的时间。实施例9本发明黑枸杞压片的抗氧化性能测试实验采用Fenton反应体系。在试管中加入6mmol/LFeSO42mL,不同浓度VC或待测溶液2mL,6mmol/LH2O2溶液2mL,摇匀,静置10min,再加入6mmol/L水杨酸-乙醇2mL反应,37℃温浴30min,于510nm测吸光值。清除率s=[A0-(Ai-AiO)]/A0×100%式中:A0为对照,不加黑枸杞压片;Ai为某浓度时的吸光值;AiO为无显色剂时的该浓度的本底值。表7为对照品VC,市售黑枸杞压片以及本发明实施例2制备的黑枸杞压片冲液对羟自由基的清除率的对照表表7羟自由基的清除率的对照表数据表明,本发明的黑枸杞压片对羟自由基的清除能力显著。且随着浓度的增加而增大。当浓度为16mg/mL时,清除率可达到99.65%,较市售的黑枸杞压片的清除率显著提高了56.34%,故本发明的黑枸杞压片具有很强的抗氧化功能。显著提高了黑枸杞压片的生化稳定性,提高了黑枸杞压片的储藏稳定性,延长了产品的保质期。需要说明的是:本发明实施例3-6制备的黑枸杞压片同样具有上述实验效果,各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。实施例10高糖条件下酿酒酵母tlj2016发酵产GSH能力实验(1)摇瓶培养取tlj2016斜面菌种一环,接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中150rpm,30℃培养30h得种子液;所述摇瓶培养基质量组成为:(NH4)2SO46g/L,葡萄糖35g/L,K2HPO4·3H2O3g/L,KH2PO40.5g/L,酵母粉11g/L,MnSO40.1g/L,KCL0.1g/L,FeSO40.1g/L,MgSO4·7H2O0.1g/L,余量为水,pH6.0;(2)5L发酵罐培养将种子液按10%接种量,接入装有3L发酵培养基的发酵罐中,30℃,通气量6L/min,罐压0.03MPa,500rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养,发酵至30h时,一次性添加终浓度为25mmol/L的L-半胱氨酸,总发酵时间为50h;所述发酵培养基质量组成为:(NH4)2SO410g/L,葡萄糖100g/L,K2HPO4·3H2O8g/L,KH2PO40.5g/L,酵母粉11g/L,MnSO40.1g/L,KCL0.1g/L,FeSO40.1g/L,MgSO4·7H2O0.1g/L,余量为水,pH6.0;发酵结束后,测定发酵液中GSH的含量为3308mg/L.实施例11酿酒酵母tlj2016L-半胱氨酸耐受力实验将出发菌株以及tlj2016斜面菌种各一环,分别接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中150rpm,30℃培养进行培养,在培养至12h时,向摇瓶中加入不同终浓度的L-半胱氨酸,再培养10h,测定细胞干重,结果表8、9;摇瓶培养基(g/L):(NH4)2SO46、葡萄糖20、K2HPO4·3H2O3、KH2PO40.5、酵母粉11、MnSO40.1、KCL0.1、FeSO40.1、MgSO4·7H2O0.1,pH6.0;表8:出发菌株L-半胱氨酸耐受力L-半胱氨酸浓度mmol/L0510152040出发菌株干重g/L22.615.710.24.32.20.8GSH浓度(mg/L)35.646.743.240.737.925.3表9tlj2016L-半胱氨酸耐受力L-半胱氨酸浓度mmol/L0510152040tlj2016干重g/L25.728.523.621.220.618.7GSH浓度(mg/L)73.298.3113.5121.7127.5135.8从表8、9的结果可以看出,对于出发菌株,培养基中添加L-半胱氨酸,细胞停止生长,并且开始自溶,导致GSH增长率随着L-半胱氨酸浓度的升高而降低;而低浓度L-半胱氨酸下,tlj2016仍能够缓慢生长,随着L-半胱氨酸浓度的提高,tlj2016菌株的细胞干重缓慢下降,而GSH浓度持续增长,这一结果将有利于GSH生产过程中通过添加前体氨基酸-L-半胱氨酸提促进GSH的生产。实施例12酿酒酵母tlj2016耐盐能力实验取tlj2016菌液1mL接种菌种于含有不同NaCl浓度的(含量梯度为0%、2%、5%、10%、15%、18%)的10mLYPD液体培养基(pH=6.5),置于30℃下分别培养24h,每个处理3个重复。各取1ml样品菌液于9ml生理盐水中混匀,制备稀释度溶液,取0.1ml稀释液于YPD固体平板中涂布,于30℃生化培养箱中倒置培养36小时(每个稀释度做3个平行)记录计算平板上的菌数个数。结果见表10,可知该菌的耐盐浓度为18%,说明酿酒酵母tlj2016不仅可以在常规环境中生存,在高盐条件下依然具有活力,可应用于酱油、腌制品等高盐食品加工过程中耗糖产谷胱甘肽。表10耐盐能力检测(×107cfu/ml)当前第1页1 2 3 
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