一种绿色的桔梗人参发酵酸奶及其生产方法与流程

本发明属于营养食品加工技术领域，尤其是指一种绿色的桔梗人参发酵酸奶及其生产方法。

背景技术：

酸奶(酸乳，yoghurt)，是一种以牛奶为原料，经过巴氏杀菌后再向牛奶中添加有益乳酸菌，经发酵冷却灌装的牛奶制品。酸奶不但保留了牛奶的优点，而且口味酸甜细滑，含有活性乳酸菌，在某些方面经加工过程还扬长避短，成为更加适合于人类的营养保健食品。目前市场上酸奶制品多以凝固型、搅拌型和添加各种果汁果酱等辅料的果味型为多。酸奶中含有的乳酸菌是一种益生菌，经乳酸菌发酵后的酸奶有益人体健康，能够使牛奶中的糖、蛋白质等大分子物质被水解成乳糖、乳酸、小的肽链和氨基酸等，更容易被机体吸收；能够促进肠道蠕动，促进菌体大量生长改变渗透压，从而促进消化防止便秘；能够维持肠道菌群生态平衡，形成生物屏障，抑制有害菌对肠道的入侵，抑制腐生菌在肠道的生长，抑制腐败所产生的毒素，减少其代谢物中的氨、硫化氢及粪臭素等有害物质的生成，因此有抗衰老、防止色素沉积的作用，使肝脏和大脑免受危害；可以产生增强免疫功能的物质，提高人体免疫力；在发酵过程中乳酸菌还可产生人体营养所必须的多种维生素，如VB1、VB2、VB6、VB12等；发酵后产生的乳酸能够有效提高钙、磷等矿物质在人体的利用率，因此酸奶中的钙磷更容易被人体吸收；而且对乳糖消化不良的人群，吃酸奶也不会发生腹胀、气多或腹泻现象。随着人民生活水平的不断提高，保健意识的增强，人们更注重饮食的保健功能以及营养性，向酸奶中添加一些营养类或功能性的原料生产新型酸奶已成为一种发展趋势。

桔梗(Platycodon grandiflorus)为桔梗科(Campanulaceae)桔梗属(Platycodon)多年生草本植物，性味苦、辛、平，归肺经，具有宣肺利咽，祛痰排脓之功效。用于咳嗽痰多，胸闷不畅，咽痛，肺痈吐脓等症。桔梗是中国及其他亚洲国家重要的药食两用资源，不仅是一种传统中药，在中药复方中的应用较广，而且还是一种食品。桔梗营养丰富，迄今为止，从桔梗中分离得到的营养成分及功能因子主要以三萜皂苷类、黄酮类为主，还含有多糖、挥发油、甾体、多种氨基酸以及多种人体必需微量元素。现代药理学研究表明，桔梗具有抗炎、祛痰、抗溃疡、降血压、扩张血管、解热镇痛、镇静、降血糖、抗胆碱、促进胆汁分泌、抗过敏及增强人体免疫力等广泛的药理作用。人参(Panax ginseng C.A.Meyer)系五加科(Araliacede)人参属(Panax)植物，主要产于中国东北及朝鲜半岛，素有“百草之王”的美誉。我国最早的医药名著《神农本草经》记述：人参有“主补五脏，安精神，定魂魄，止惊悸，除邪气，明目益智，久服轻身延年”。具大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津安神等功能。2012年我国批准人参作为新资源食品成为了药食两用天然资源，为人参在食品中的广泛利用提供了保障。人参含有多种营养及保健成分，包括人参皂苷、多糖、蛋白质、氨基酸、黄酮(异黄酮)、无机元素、维生素、有机酸、生物碱、脂肪酸、甾醇、核苷、木质素及挥发油等。现代药理学研究表明，人参具有抗肿瘤、调节中枢神经系统、调节免疫系统、调节血糖、增加心肌功能、抗溶血、抗衰老、抗疲劳等多重药理活性作用。人参的主要活性成分是人参皂苷，主要分为原人参二醇，原人参三醇和齐墩果烷型人参皂苷。天然的人参皂苷中Rb1、Rg1、Re等含量较高，而Rd、Rh1、Rh2、Compound K等稀有皂苷含量较少或不存在。许多药理研究表明，稀有人参皂苷药效更为珍贵，对心脑血管、神经系统、抗福射、抗炎、抗肿瘤等作用独特。

超临界流体萃取(Supercritical Fluid Extraction，简称SPE)，是利用超临界流体的溶剂化效应溶解待分离的液体或固体混合物，然后通过减压或调温度来降低超临界流体的密度，从而降低其溶剂能力，使萃取物得到分离。据报道，采用超临界CO₂萃取技术提取人参中的人参皂苷等营养成分，具有分离工艺简单、环境友好、保护热敏性物质等优点。

β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase EC 3.2.1.21)，属于水解酶，又称β-D-葡萄糖苷水解酶、龙胆二糖酶、纤维二糖酶，是通过真菌菌种经液体深层发酵纯化提取制得而成。

技术实现要素：

本发明提供一种绿色的桔梗人参发酵酸奶及其生产方法，以解决目前发酵酸奶普遍存在的营养成分不足及生产工艺落后的问题。

本发明采取的技术方案是，是由下列步骤得到的：

(一)、桔梗人参发酵酸奶配方

制备1000kg酸奶，原料占重量比为：桔梗4～12％，人参8～16％，工作发酵剂5～10％，余量鲜牛奶，所述工作发酵剂为嗜热链球菌与保加利亚乳杆菌，两者的比例为1:2～2:1；

(二)、原料预处理

取桔梗，粉碎成粒度60-80目的桔梗粉末；取人参，粉碎成粒度80-100目的人参粉末；

(三)桔梗及人参有效成分的超临界流体萃取

取桔梗粉末，加入2～5倍夹带剂，置于超临界萃取设备中，室温下浸泡10～12h，萃取时间为3～5h，次数为2～4次，温度为30～50℃，压力为20～40MPa，CO₂流速保持12L/h不变，收集分离釜内产物得桔梗萃取粉；取人参粉末，加入2～5倍夹带剂，置于超临界萃取设备中，室温下浸泡20～24h，萃取时间为3～5h，次数为2～4次，温度为30～50℃，压力为20～40MPa，CO₂流速保持15L/h不变，收集分离釜内产物得人参萃取粉；

(四)人参萃取粉的微生物转化

采用β-葡萄糖苷酶，对步骤(三)得到的人参萃取粉进行发酵，所用的β-葡萄糖苷酶，执行Q/NXM010标准，符合GB25594-2009《食品安全国家标准食品工业用酶制剂》标准，将人参萃取粉，进行灭菌处理，加入1～3倍量纯净水，接入β-葡萄糖苷酶，放入恒温培养箱中，pH值4.0～5.0，温度50℃～60℃，培养3～5d，终止反应，将发酵液抽滤、萃取、回收，得到发酵后的人参萃取粉；

(五)鲜牛奶处理

将鲜牛奶经过验收及凝固性试验合格后，过滤除去杂质，预热到40℃进行脱脂处理；

(六)混合均质杀菌

将步骤(三)得到的桔梗萃取粉、步骤(四)得到的发酵后的人参萃取粉，以及鲜牛奶混合均匀，搅拌10～15min，预热到60℃进行均质，进行高温瞬时灭菌；

(七)接种、发酵

取步骤(六)得到的匀浆，加入配方中的工作发酵剂，置于35～45℃条件下发酵3～5h，看到乳的上层有少量乳清析出，然后迅速冷却到10℃，并且保持12h，得到纯植物性桔梗人参发酵酸奶，然后置于2-5℃条件下冷藏。

本发明所述步骤(三)中夹带剂为70％乙醇溶液。

目前超临界流体萃取作为一种具有广阔应用前景的新型“绿色”提取分离技术，是目前食品加工业的先进技术。该酸奶尤其适合中老年人，可以改善睡眠，增强心脏功能，改善胸闷气短的症状，祛痰止咳。

人参的主要活性成分是人参皂苷，主要分为原人参二醇，原人参三醇和齐墩果烷型人参皂苷。天然的人参皂苷中Rb1、Rg1、Re等含量较高，而Rd、Rh₁、Rh₂、PPD、Compound K等稀有皂苷含量较少或不存在。许多药理研究表明，稀有人参皂苷药效更为珍贵，对心脑血管、神经系统、抗福射、抗炎、抗肿瘤等作用独特。Rd具有抗心律失常、抗病毒、扩张血管、抗氧化、增强免疫力等功能；Rh2具有诱导癌细胞凋亡，抑制肿瘤细胞生长和转移，抗炎症，抗过敏，抗痴呆等；Rg3具有抗肿瘤活性，改善胰岛素信号，降血脂，抗血栓，抗焦虑等作用，与化疗药物共同使用可提高机体免疫力；PPD具有抗肿瘤，增强免疫力等作用。

本发明采用超临界流体萃取法得到桔梗和人参中的有效成分，环境友好无污染，且萃取率较高，采用β-葡萄糖苷酶对人参进行发酵，使桔梗人参酸奶中稀有人参皂苷Rd，PPD，Rg₃，Rh₂的含量明显增加。得到的桔梗人参酸奶，尤其适合中老年人，可以改善睡眠，增强心脏功能，改善胸闷气短的症状，祛痰止咳，且能显著增强机体免疫功能。

本发明不含防腐剂、甜味剂、增稠剂、色素等添加剂，采取超临界流体萃取这种“绿色化学技术”，高效，清洁，工艺简单，提取率较高，溶剂安全易回收，产品绿色无污染，是一种新型的纯植物性、环境友好型营养食品。

附图说明

图1是19种人参皂苷对照品HPLC谱图，图中：

1：Rg₁；2：Re；3：Rf；4：Rh₁；5：Rg₂；6：Rb₁；7：Rc；8：Ro；9：F₁；10：Rb₂；11：Rb₃；12：Rd；13：20(S)-Rg₃；14：20(R)-Rg₃；15：PPT；16：F₂；17：Rh₂；18：齐墩果酸；19：PPD；

图2是经β-葡萄糖苷酶发酵后的桔梗人参酸奶的HPLC谱图，图中：

1：Rd；2：20(R)-Rg₃；3：Rh₂；4：PPD；

图3是未经β-葡萄糖苷酶发酵后的桔梗人参酸奶的HPLC谱图，图中：

1：Rd；2：20(R)-Rg₃；3：Rh₂；4：PPD。

具体实施方式

实施例1

是由下列步骤得到的：

(一)、桔梗人参发酵酸奶配方

制备1000kg酸奶，原料占重量比为：桔梗4％，人参8％，工作发酵剂5％，余量鲜牛奶，所述工作发酵剂为嗜热链球菌与保加利亚乳杆菌，两者的比例为1:2；

(二)、原料预处理

取桔梗，粉碎成粒度60目的桔梗粉末；取人参，粉碎成粒度80目的人参粉末；

(三)桔梗及人参有效成分的超临界流体萃取

取桔梗粉末，加入2倍夹带剂，所述夹带剂为70％乙醇溶液，置于超临界萃取设备中，室温下浸泡10h，萃取时间为3h，次数为2次，温度为30℃，压力为20MPa，CO₂流速保持12L/h不变，收集分离釜内产物得桔梗萃取粉；取人参粉末，加入2倍夹带剂，置于超临界萃取设备中，室温下浸泡20h，萃取时间为3h，次数为2次，温度为30℃，压力为20MPa，CO₂流速保持15L/h不变，收集分离釜内产物得人参萃取粉；

(四)人参萃取粉的微生物转化

采用β-葡萄糖苷酶，对步骤(三)得到的人参萃取粉进行发酵，所用的β-葡萄糖苷酶，执行Q/NXM010标准，符合GB25594-2009《食品安全国家标准食品工业用酶制剂》标准，由苏州昆蓝生物科技有限公司提供，将人参萃取粉，进行灭菌处理，加入1倍量纯净水，接入β-葡萄糖苷酶，放入恒温培养箱中，pH值4.0，温度50℃，培养3d，终止反应，将发酵液抽滤、萃取、回收，得到发酵后的人参萃取粉；

(五)鲜牛奶处理

将鲜牛奶经过验收及凝固性试验合格后，过滤除去杂质，预热到40℃进行脱脂处理；

(六)混合均质杀菌

将步骤(三)得到的桔梗萃取粉、步骤(四)得到的发酵后的人参萃取粉，以及鲜牛奶混合均匀，搅拌10min，预热到60℃进行均质，进行高温瞬时灭菌；

(七)接种、发酵

取步骤(六)得到的匀浆，加入配方中的工作发酵剂，置于35℃条件下发酵3h，看到乳的上层有少量乳清析出，然后迅速冷却到10℃，并且保持12h，得到纯植物性桔梗人参发酵酸奶，然后置于2℃条件下冷藏。

实施例2

是由下列步骤得到的：

(一)、桔梗人参发酵酸奶配方

制备1000kg酸奶，原料占重量比为：桔梗8％，人参12％，工作发酵剂8％，余量鲜牛奶，所述工作发酵剂为嗜热链球菌与保加利亚乳杆菌，两者的比例为1:1；

(二)、原料预处理

取桔梗，粉碎成粒度80目的桔梗粉末；取人参，粉碎成粒度100目的人参粉末；

(三)桔梗及人参有效成分的超临界流体萃取

取桔梗粉末，加入3.5倍夹带剂，所述夹带剂为70％乙醇溶液，置于超临界萃取设备中，室温下浸泡11h，萃取时间为4h，次数为3次，温度为40℃，压力为30MPa，CO₂流速保持12L/h不变，收集分离釜内产物得桔梗萃取粉；取人参粉末，加入4倍夹带剂，置于超临界萃取设备中，室温下浸泡22h，萃取时间为4h，次数为3次，温度为40℃，压力为30MPa，CO2流速保持15L/h不变，收集分离釜内产物得人参萃取粉；

(四)人参萃取粉的微生物转化

采用β-葡萄糖苷酶，对步骤(三)得到的人参萃取粉进行发酵，所用的β-葡萄糖苷酶，执行Q/NXM010标准，符合GB25594-2009《食品安全国家标准食品工业用酶制剂》标准，由苏州昆蓝生物科技有限公司提供，将人参萃取粉，进行灭菌处理，加入2倍量纯净水，接入β-葡萄糖苷酶，放入恒温培养箱中，pH值4.5，温度55℃，培养4d，终止反应，将发酵液抽滤、萃取、回收，得到发酵后的人参萃取粉；

(五)鲜牛奶处理

将鲜牛奶经过验收及凝固性试验合格后，过滤除去杂质，预热到40℃进行脱脂处理；

(六)混合均质杀菌

将步骤(三)得到的桔梗萃取粉、步骤(四)得到的发酵后的人参萃取粉，以及鲜牛奶混合均匀，搅拌12.5min，预热到60℃进行均质，进行高温瞬时灭菌；

(七)接种、发酵

取步骤(六)得到的匀浆，加入配方中的工作发酵剂，置于40℃条件下发酵4h，看到乳的上层有少量乳清析出，然后迅速冷却到10℃，并且保持12h，得到纯植物性桔梗人参发酵酸奶，然后置于4℃条件下冷藏。

实施例3

是由下列步骤得到的：

(一)、桔梗人参发酵酸奶配方

制备1000kg酸奶，原料占重量比为：桔梗12％，人参16％，工作发酵剂10％，余量鲜牛奶，所述工作发酵剂为嗜热链球菌与保加利亚乳杆菌，两者的比例为2:1；

(二)、原料预处理

取桔梗，粉碎成粒度80目的桔梗粉末；取人参，粉碎成粒度80目的人参粉末；

(三)桔梗及人参有效成分的超临界流体萃取

取桔梗粉末，加入5倍夹带剂，所述夹带剂为70％乙醇溶液，置于超临界萃取设备中，室温下浸泡12h，萃取时间为5h，次数为4次，温度为50℃，压力为40MPa，CO₂流速保持12L/h不变，收集分离釜内产物得桔梗萃取粉；取人参粉末，加入5倍夹带剂，置于超临界萃取设备中，室温下浸泡24h，萃取时间为5h，次数为4次，温度为50℃，压力为40MPa，CO₂流速保持15L/h不变，收集分离釜内产物得人参萃取粉；；

(四)人参萃取粉的微生物转化

采用β-葡萄糖苷酶，对步骤(三)得到的人参萃取粉进行发酵，所用的β-葡萄糖苷酶，执行Q/NXM010标准，符合GB25594-2009《食品安全国家标准食品工业用酶制剂》标准，由苏州昆蓝生物科技有限公司提供，将人参萃取粉，进行灭菌处理，加入3倍量纯净水，接入β-葡萄糖苷酶，放入恒温培养箱中，pH值5.0，温度60℃，培养5d，终止反应，将发酵液抽滤、萃取、回收，得到发酵后的人参萃取粉；

(五)鲜牛奶处理

将鲜牛奶经过验收及凝固性试验合格后，过滤除去杂质，预热到40℃进行脱脂处理；

(六)混合均质杀菌

将步骤(三)得到的桔梗萃取粉、步骤(四)得到的发酵后的人参萃取粉，以及鲜牛奶混合均匀，搅拌15min，预热到60℃进行均质，进行高温瞬时灭菌；

(七)接种、发酵

取步骤(六)得到的匀浆，加入配方中的工作发酵剂，置于45℃条件下发酵5h，看到乳的上层有少量乳清析出，然后迅速冷却到10℃，并且保持12h，得到纯植物性桔梗人参发酵酸奶，然后置于5℃条件下冷藏。

本发明中稀有人参皂苷含量测定

1、对照品溶液的制备

人参皂苷Rg₁、Rf、Rh1(S)、Rb₁、Rc、F₁、Rb₂、Rb₃、F₂对照品，购自吉林大学化学学院，并检验合格；人参皂苷Re、Rg₂、Rd、20(S)-Rg₃、20(R)-Rg₃、Rh₂、PPT、PPD对照品，自制，并检验合格；齐墩果酸、人参皂苷Ro对照品，购自中国药品生物制品检定所，分别取对照品，用甲醇溶解并定容，配成19种人参皂苷对照品溶液；

2、供试品溶液的制备

取经过β-葡萄糖苷酶发酵后桔梗人参酸奶，6批，精密称定，记为A1、A2、A3、A4、A5、A6，取未经过β-葡萄糖苷酶发酵的桔梗人参酸奶，即经超临界流体萃取得到的桔梗萃取粉和人参萃取粉，不经过微生物转化，与处理过的鲜牛奶进行混合均质杀菌、接种、发酵，得到6批样品，记为B1、B2、B3、B4、B5、B6；

每个样品，分别加水煎煮两次，每次2h，合并滤液，过D101型大孔吸附树脂柱(2.9cm×20cm)，上样速度2mL/min，上样后吸附4h，用水洗脱至无色，再用80％乙醇洗脱至无皂苷反应，收集80％乙醇洗脱液，回收溶剂至近干，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm针式过滤器滤过，取续滤液，即得供试品；

3、色谱条件的选择

Waters 1525型高效液相色谱仪(美国Waters公司)；Waters 2998二极管阵列检测器(美国Waters公司)；色谱柱：Unitary C18(4.6mm×250mm,5μm)；柱温：30℃；检测波长203nm；流速：1.3mL/min；流动相：乙腈(A)-0.05％磷酸水溶液(B)梯度洗脱，梯度洗脱程序如下：0～14min(A：20→21％)，14～24min(21→22％)，24～36min(22→23％)，36～52min(23→25％)，55～78min(28→30％)，78～96min(30→35％)，96～112min(35→60％)，112～127min(60→90％)，127～134min(90→100％)，134～138min(100％)，所有组分均在135min内出峰，在此色谱条件下，皂苷类成分与其他成分色谱峰均达到基线分离，得Rd线性回归方程：y＝189484x–13213(r＝0.9996)，PPD线性回归方程：y＝445875x+32102(r＝0.9967)，Rh₂线性回归方程：y＝282995x-2520.4(r＝0.9997)。19种人参皂苷对照品HPLC谱图见图1；

4、稀有人参皂苷含量测定及结果分析

精密吸取供试品溶液15μL，注入液相色谱仪，得供试品HPLC色谱图，经β-葡萄糖苷酶发酵后的桔梗人参酸奶的HPLC谱图见图2，未经β-葡萄糖苷酶发酵后的桔梗人参酸奶的HPLC谱图见图3。供试品中人参皂苷色谱峰的峰面积均在标准曲线的线性范围内，对照单体人参皂苷峰面积‐含量线性回归方程，计算出桔梗人参酸奶样品中3种单体人参皂苷(元)的含量，结果见表1。由结果可知，经β-葡萄糖苷酶发酵后的桔梗人参酸奶中的总皂苷含量，明显高于未经β-葡萄糖苷酶发酵的总皂苷含量。其中，Rd的含量约为未发酵的20倍，PPD的含量约为未发酵的30倍，Rh₂的含量约为未发酵的9倍，Rg3的含量约为未发酵的5倍。由此可见，经β-葡萄糖苷酶发酵，能够显著提高桔梗人参酸奶中稀有人参皂苷Rd、PPD、Rh₂的含量。

表1桔梗人参酸奶中稀有人参皂苷的含量

下边参照《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)，来进一步说明本发明的效果。试验例1：Con A诱导淋巴细胞转化实验(MTT法)

以下各试验例的实验动物，均指雄性Balb/c健康小鼠，50只，随机分为5组，每组10只，设定低中高剂量组(经过β-葡萄糖苷酶发酵后的酸奶250、500、1000mg/kg)，一个阴性对照组，一个未经β-葡萄糖苷酶发酵的桔梗人参酸奶，记作未发酵组。对小鼠进行口服桔梗人参酸奶，每日1次，连续7天。

无菌取脾，制备脾细胞悬液，细胞浓度为3×10⁶个/ml。加入24孔培养板中，每孔1mL，加入70μL Con A液，置于5％CO₂、37℃的CO₂培养箱中培养。68h时加入不含小牛血清的RPMI 1640培养液0.7mL和MTT溶液50μL/孔，72h后测定OD_570nm。

结果：样品中、高剂量组小鼠淋转差值明显高于对照组相，经统计，差异有统计学意(＜0.05)，结果见表2。

表2.Con A诱导淋巴细胞转化结果

结论：通过与阴性对照和未发酵组对比，经β-葡萄糖苷酶发酵后的桔梗人参酸奶，诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力明显增强，能增强小鼠的机体免疫力。

试验例2：抗体生成细胞检测

小鼠腹腔注射3％绵羊红细胞(SRBC)，0.25mL/只。免疫4d后取脾，制成细胞悬液，将脾细胞悬液加入RPMI1640培养液中，浓度调至4×10⁶个/mL。制备琼脂糖玻片。温育1.5h，加入补体，温育1.5h，计数溶血空斑数。

结果：样品中、高剂量组能明显增加溶血空斑数，与对照组比，差异有统计学意义(＜0.05)，结果见表3。

表3.抗体生成细胞检测试验结果

结论：通过与阴性对照和未发酵组对比，经β-葡萄糖苷酶发酵后的桔梗人参酸奶，能明显促进小鼠抗体生成，增强小鼠机体免疫能力。

试验例3：半数溶血值(HC₅₀)的测定

腹腔注射3％SRBC，0.25mL/只。免疫5d后，离心取血清，稀释后按顺序加入5％SRBC，补体。温育20min，冰浴终止反应。离心取上清加都氏试剂，混匀，静置10min，测定OD_540nm，溶血素量以HC₅₀表示。

结果：样品中、高剂量组HC₅₀与对照组比，差异显著，有统计学意义(＜0.05)，结果见表4。

表4.半数溶血值的测定结果

结论：通过与阴性对照和未发酵组对比，经β-葡萄糖苷酶发酵后的桔梗人参酸奶，能明显提高实验小鼠体液免疫功能，增强机体免疫力。

试验例4：小鼠碳廓清实验

小鼠尾静脉注射印度墨汁(0.1mL/10g)，注入墨汁后2、10min，分别从内眦静脉丛取血25μL加到2ml 0.2％Na₂CO₃溶液中，测定OD_600nm。处死后取肝脏和脾脏，滤纸吸干血污后称重，计算吞噬指数。

结果：样品低、中、高剂量组H吞噬指数较高，与对照组比，差异显著，具有统计学意义(＜0.05)，结果见表5。

表5.小鼠碳廓清实验结果

结论：通过与阴性对照和未发酵组对比，经β-葡萄糖苷酶发酵后的桔梗人参酸奶，能提高小鼠单核巨噬细胞的吞噬机能，增强非特异性免疫功能，从而增强机体免疫力。

试验例5：NK细胞活性试验(乳酸脱氢酶法)

无菌取脾，制备脾细胞悬液，细胞浓度为2×10⁷个/ml。取靶细胞和效应细胞各100μL置于96孔培养板中，靶细胞最大释放孔加靶细胞和2.5％Triton各100μL；5％CO₂培养箱中培养4h，吸取上清100μL加入1mol/L的HC1 30μL，测定OD_490nm。

结果：样品高剂量组NK细胞活性与对照组比，差异显著，具有统计学意义(＜0.05)，结果见表6。

表6.NK细胞活性试验结果

结论：通过与阴性对照和未发酵组对比，经β-葡萄糖苷酶发酵后的桔梗人参酸奶，能提高小鼠NK细胞活性，增强机体免疫力。

试验例6：迟发型变态反应

绵羊红细胞(SRBC)进行腹腔免疫，0.25mL/只，免疫后4d测量足跖厚度，测量部位皮下注射20％SRBC，25μL/只，24h后测量左后足跖部厚度3次，取平均值。

结果：样品高、中剂量组诱导的小鼠迟发型变态反应，与对照组相比，差异显著，具有统计学意义(P＜0.05)，结果见表7。

表7.迟发型变态反应试验结果

结论：通过与阴性对照和未发酵组对比，经β-葡萄糖苷酶发酵后的桔梗人参酸奶，能增强小鼠迟发型变态反应，增强细胞免疫功能，从而增强机体免疫力。