牛舌草及其提取物在抗抑郁医药领域中的应用的制作方法

本发明涉及中药领域，特别是一种牛舌草及其提取物在抗抑郁医药中的应用。

背景技术：

牛舌草作为维吾尔药常用药材之一，是紫草科植物意大利牛舌草(Anchusaitalica Retz.)或琉璃苣(Borage officinales L.)的地上部分，出产于欧洲南部、地中海一带、巴基斯坦及印度等地。牛舌草作为维吾尔医长期使用的传统药材，在民间有悠久的历史，广泛用于各种疾病的治疗，尤其是在用于治疗干寒性或黑胆质性疾病方便，因疗效显著而享有较好的声誉。据《中华本草》维吾尔药卷记载，牛舌草是常用药材之一，具有生湿生热、调节异常黑胆质、生湿补脑、祛寒补心、爽心悦智、润燥消炎、止咳平喘等功效。本品全草经预试有皂苷、黄酮类、氨基酸、挥发油、黏液质、糖类和微量生物碱反应。

木合塔尔·努尔买买提等人，对其牛舌草的总黄酮的提取工艺进行了研究。牛舌草(高孜班)作为异常黑胆质成熟剂和清除剂制剂中主要药味，在处方中起到治疗异常黑胆质混合的异常粘液质沉滞的作用。阿不都热依木·玉素甫、汗佐拉·吾普尔等人通过“异常黑胆质成熟剂对抑郁症和异常黑胆质证模型大鼠海马BDNF及5HT1A mRNA表达的影响”研究，在分子水平上揭示了异常黑胆质与抑郁症的内在联系。常文等人通过“意大利牛舌草化学成分的初步研究”研究，得到牛舌草药材中可能含有甾体、三萜类、挥发油、酚类、鞣质、黄酮类、香豆素、内酯类、生物碱、糖类、氨基酸、蛋白质、皂苷类化合物等化学成分。帕丽达·阿布力孜等人通过“响应面法优化牛舌草总黄酮的超声提取工艺”研究，得到最佳总黄酮的提取工艺研究。谢周建等人通过“维药牛舌草活性部位的抗氧化和美白作用”研究，得知牛舌草的乙酸乙酯萃取部位和正丁醇萃取部位为牛舌草的高活性部位并显示出良好的抗氧化剂和美白作用，今后可作为天然抗氧化剂和美白剂加以开发利用。徐晓娜等人，通过“牛舌草总黄酮抗大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及机制”，得知牛舌草总黄酮具有明显的抗心肌缺血再灌注损伤作用，其机制可能与上调PI3K/AKT信号通路而抑制细胞凋亡与炎症有关。总之，通过文献查新，牛舌草药材的研究主要集中在以总黄酮为物质基础的研究上，活性主要集中在心血管方向上，但牛舌草药材在抑郁及其他病症的应用国内外目前尚无有关研究报道。

1、抗抑郁药筛选模型的研究进展

随着社会节奏的加快，生活压力的加重，抑郁症正逐渐成为人类最严重的疾病之一，其所影响的人数约占世界总人口的21％。抑郁症发生率的增高孕育了一个巨大的抗抑郁药市场，据统计全球抗抑郁药产品年销售额高达170亿美元口。目前，抗抑郁药产品主要有盐酸文拉法辛缓释胶囊(怡诺思，惠氏公司产品)，盐酸度洛西汀肠溶胶囊(欣百达，礼来公司产品)和依地普仑(Lexapro，森林公司产品)等。新型抗抑郁药物占据了抗抑郁药的大部分市场，同时也面临着专利到期的问题。为了能继续垄断市场，研发公司纷纷加快了抗抑郁药开发，现已有一大批新型抗抑郁药进入II和III期临床研究。

2、体内筛选模型

在抗抑郁药的研究中，动物筛选模型是不可或缺的筛选工具，是抗抑郁药研究的一个常规又有效的方法。通过给予刺激，使动物产生类似抑郁状态，以此对不同的化合物进行筛选，观察是否能减轻动物的抑郁症状。现已有多种模拟抑郁症的动物模型，但其中最为经典和常用的是强迫游泳试验、悬尾试验和习得无助动物模型。对具有抗抑郁作用的化合物较敏感，同时能更客观和科学地采集和分析数据，因此筛选模型更加可靠和有效。在抗抑郁药的研究过程中，还有其他一些动物筛选模型，但应用尚不广泛。例如：①慢性轻度应激模型：是在一种长期而温和的环境中，对动物施加不同压力，如隔绝、黑暗、不提供食物等。这种通过对模型动物间歇、长期、温和地施加压力而获得的抑郁症状更可靠，但这类模型的可重复性较差。②早期生活应激模型：是对动物早期的生活环境进行操作，如产前刺激，出生后的早期处理等，施加的压力可从早期一直持续到成年。这种模型的重复性较理想，且能够应用于不同种类的动物。

3、体外筛选模型

体外模型主要包括分子模型筛选和细胞模型筛选。在抗抑郁药研究中主要的几个体外筛选模型为：1)单胺类神经递质转运蛋白：，抗抑郁药的作用靶点主要基于突触间单胺类神经递质(5-HT、NE、DA)的传递。通常采用的策略是抗抑郁药与这些单胺类神经递质的转运蛋白结合，使神经递质再摄取受阻，从而使突触间的神经递质浓度升高发挥抗抑郁作用；2)II组代谢型谷氨酸受体(mGLuRs)：谷氨酸受体主要分为离子型谷氨酸受体和代谢型谷氨酸受体(mGLuRs)。根据信号转导机制和药理学特性，mGLuRs分为I、II和III组。II组mGLuRs(包括mGLuR 2和mGLuR 3)主要分布在前脑和边缘结构，参与负调控腺苷酸环化酶(cAMP)。通过中国仓鼠卵巢细胞，将人mGLuR 2、mGLuR 3在HEK293细胞中稳定表达，通过cAMP酶联免疫法系统测定eAMP的水平，三磷酸肌醇(IP3)检测系统测定IP3的含量，放射性配基测定筛选化合物与受体的结合常数；3)促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)-l型受体：CRF主要通过调节下丘脑—垂体—肾上腺皮质(HPA)轴的活性应对各种压力。过度刺激HPA轴，通常会导致抑郁症状，在多数抑郁症患者身上均可发现HPA轴的过度活跃。

技术实现要素：

为了克服现有技术的不足，本发明提供了一种牛舌草及其提取物的用途，该牛舌草及提取物应用于制备具备抗抑郁作用的产品，该牛舌草提取物对抑郁患者有显著的疗效，在调节相关生化指标和神经递质方面，作用可与现有技术的氯丙咪嗪作用相当。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种牛舌草及其提取物应用于制备具有抗抑郁效果的食品、食品添加剂、保健品及药物制剂等产品。

进一步的，所述提取物包括牛舌草溶剂提取物或牛舌草萃取提取物。

进一步的，所述牛舌草溶剂提取物包括牛舌草醇提取物、牛舌草水提取物、牛舌草水蒸馏液，所述牛舌草醇提取物包括牛舌草乙醇提取物或牛舌草甲醇提取物。

进一步的，所述牛舌草萃取提取物包括牛舌草石油醚萃取物、牛舌草正丁醇萃取物、牛舌草乙酸乙酯萃取物及牛舌草三氯甲烷萃取物。

进一步的，所述牛舌草水提取物的制备方法为：

步骤1：断碎，将牛舌草段碎成条；

步骤2：水提取，将步骤1-1的牛舌草置于多功能提取罐内，按照水与牛舌草的质量比为4:1的比例加入水，先用水浸泡0.5h，再加热回流，提取2次，每次回流提取时间为3h，过滤，得到水提取滤液和水提取滤渣；

步骤3：浓缩，先将水提取滤液置于超低温浓缩机中，在温度为30℃、真空度为-0.1Mpa的条件下进行真空浓缩，回收水分，再继续在温度为30℃、真空度为-0.1Mpa的条件下进行真空浓缩，得到相对密度为1.01～1.40的浸膏。

进一步的，所述牛舌草乙醇提取物的制备方法为：

步骤1：粉碎，将牛舌草粉碎成粗粉，将牛舌草干燥叶置于粉碎机内，粉碎成粒度为20～40目的粗粉，两种粗粉混合得牛舌草混合粉；

步骤2：乙醇提取，将牛舌草混合粉置于多功能提取罐内，按照乙醇与牛舌草混合粉的质量比为10:1得比例加入体积分数为70％的乙醇，先用乙醇浸泡2h后，再加热回流，提取4次，每次回流提取时间为2h，过滤，得到乙醇提取滤液和乙醇提取滤渣；

步骤3：浓缩，先将乙醇提取滤液置于超低温浓缩机中，在温度为50℃、真空度为-0.1Mpa的条件下进行真空浓缩，回收乙醇，再继续在温度为50℃、真空度为-0.1Mpa的条件下进行真空浓缩，得到相对密度为1.01～1.40的浸膏。

进一步的，所述牛舌草甲醇提取物的制备方法为：

步骤1：粉碎，将牛舌草粉碎成粗粉，将牛舌草干燥叶置于粉碎机内，粉碎成粒度为40～60目的粗粉，两种粗粉混合得牛舌草混合粗粉；

步骤2：甲醇提取，将牛舌草粗粉置于多功能提取罐内，按照甲醇与牛舌草混合粗粉的质量比为14:1的比例，加入体积分数为70％的甲醇，先用甲醇浸泡6h后再加热回流，提取5次，每次回流提取时间为3h，过滤，得到甲醇提取滤液和甲醇提取滤渣；

步骤3：浓缩，先将甲醇提取滤液置于超低温浓缩机中，在温度为60℃、真空度为-0.1Mpa的条件下进行真空浓缩，回收甲醇，再继续在温度为60℃、真空度为-0.1Mpa的条件下进行真空浓缩，得到相对密度为1.01～1.40的浸膏。

进一步的，所述牛舌草萃取提取物的制备方法为：

将10kg的干燥牛舌草药材适当的断碎，用140L体积分数为60％的乙醇热回流提取3次，合并提取液，浓缩至无醇后得到浓缩液；对浓缩液依次用10L的石油醚萃取3次并合并萃取液、10L的三氯甲烷萃取3次并合并萃取液、10L的乙酸乙酯萃取3次并合并萃取液、10L水饱和的正丁醇萃取3次并合并萃取液，分别获得所述牛舌草石油醚萃取物、牛舌草三氯甲烷萃取物、牛舌草乙酸乙酯萃取物及舌草正丁醇萃取物。

进一步的，所述药物制剂含有牛舌草或其提取物，其余为药物学上可接受的、对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。

进一步的，所述药物制剂为口服剂或注射剂，所述口服剂为片剂、缓释片、控释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；所述注射剂为灭菌的水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。

本发明的积极效果：本发明所述牛舌草及其提取物可以用于治疗抑郁的药物用途，本发明的提取物对抑郁患者有显著的疗效，在调节相关生化指标和神经递质方面，作用可与现有技术的氯丙咪嗪作用相当。在从安全性、多靶点的治疗理念为主流研究思路主导的当下，在本发明的基础上有望开发一种新型中药制剂，且本发明在牛舌草的临床药效、物质基础研究中提供了科学的实验数据。

附图说明

图1是本发明所述意大利牛舌草的外形示意图；

图2是本发明所述琉璃苣的外形示意图；

图3是本发明所述意大利牛舌草主脉横切面简图；

图4是本发明所述意大利牛舌草粉末示意图。

图1中：11.基生叶，12.花枝，13.花纵剖，14.果实；

图2中：21花枝，22.基生叶，23.花纵剖，24.花图式；

图3中：31.角质层，32.上表皮，33.上栅栏组织，34.厚角组织，35海绵组织，36.维管束粒，37.下栅栏组织，38.下表皮，39.角质层，310.非腺毛，311.腺毛，312.气孔片；

图4中：41.气孔，42.非腺毛，43.腺毛，44.淀粉组织，45.导管，46.花粉粒，47.花柱碎。

具体实施方式

下面本发明的优选实施例进行详细说明。

牛舌草药材的鉴定

本品为紫草科植物意大利牛舌草Anchusaitalica Retz.和同科植物琉璃苣Borago officinalis L.干燥的地上部分。

原植物鉴别

1.意大利牛舌草Anchusaitalica Retz.：多年生草本。如图1所示，高40～100cm，全株具尖刺和糙毛。根粗壮，多分枝，茎直立有棱，通常伸展，呈圆锥状分枝，被疏黄色长糙毛。基生叶长10～30cm，宽5～6cm，长椭圆形，基部渐狭，被疏短尖硬的毛；基部卵状披针形或披针形，中部和上部叶无柄，具尖刺和糙毛。椭圆状花序，少叶，少数花序呈疏松的螺旋状聚伞形，花初期伸展，仅下部花具小苞片，花梗具糙毛，在果期可达0.5～1cm，甚至具白尖刺，并可达15mm。花冠大，深蓝色，筒部比萼短，冠檐直径10～15mm，微二唇形，具伸出的白长毛，先端具卵状半圆形裂片5，花柱萼伸出；雄蕊5；插生于花冠上，背着药，狭卵形，坚果长5～9mm，三角状卵形，腹面有明显隆起，侧面有大而深的皱褶，无喙，灰棕至黄棕色，常1～3，稀4。分布于伊朗、欧洲和苏联等。此种药材多由巴基斯坦进口。

2.琉璃苣Borago officinalisL.：如图2所示，一年生草本，高50～90cm，全株有糙毛。叶片长椭圆形或卵形，长5～15cm，宽2～8cm，全缘或微波状。花有柄，花冠管喉部的鳞片顶端微凹；花药顶端有小尖头，背面有细条状附属物。小坚果长圆形，表面有乳头状突起。花期7月。我国上海、江苏南京有栽培。原产欧洲、北非。

药材性状鉴别

意大利牛舌草性状：茎多断折，长短不一，具棱，有纵皱纹，表面淡绿色，具白硬刺和刺落后突起的白色斑点，质坚脆，断面黄白色，多中空，气微，味淡。叶多破碎，卷曲或皱缩，上表面黄绿色，下表面淡黄绿色微灰白，上下表面均具众多的白色尖硬刺，及刺落后的白色斑痕，柄三棱形，多扭曲，上具白刺和斑点，叶脉两边多向上表面趋卷。叶片湿润展开后，先端钝圆，叶片加厚，全缘，形似牛舌。气微芳香，味淡，具粘液性。

意大利牛舌草显微：叶的横切面(如图3所示)：表皮细胞1列，切线延长，外被角质层，并可见单细胞非腺毛和气孔。上下均有两层栅栏细胞，其栅栏次层细胞较短，海绵组织为薄壁细胞，整个叶片组织中充满大量的粘液质。主脉维管束双韧型，5～7个，其中1个最大。

意大利牛舌草粉末(如图4所示)：呈黄绿色。主要相正：单细胞腺毛众多，长150～1000um。气孔不定式，长径40～60um，短径20～40um；表皮细胞中有不溶于有机溶剂的棒状淡黄色物；淀粉粒呈类圆形，直径在6um之内。脐点不明显，粘液质众多，导管多为螺纹，具缘孔纹少见网纹，直径达80um。在花中的螺纹导管直径9～12um。花粉粒圆形或椭圆形，表面光滑，直径约20um，具3沟，稀有腺毛。

牛舌草药材前处理

下述实施例中采用的原料为牛舌草干燥全草，首先对牛舌草干燥叶片进行净选处理，具体为将牛舌草置于净选操作台上，拣净杂质、异物、虫蛀、霉变及非药用部位，得到净选合格的牛舌草原料。

实施例1

本发明优选实施例1提供一种牛舌草水提取物，其制备方法为：

步骤1-1：断碎，将牛舌草段碎成条；

步骤1-2：水提取，将步骤1-1的牛舌草置于多功能提取罐内，按照水与牛舌草的质量比为4:1的比例加入水，先用水浸泡0.5h，再加热回流，提取2次，每次回流提取时间为3h，过滤，得到水提取滤液和水提取滤渣；

步骤1-3：浓缩，先将水提取滤液置于超低温浓缩机中，在温度为30℃、真空度为-0.1Mpa的条件下进行真空浓缩，回收水分，再继续在温度为30℃、真空度为-0.1Mpa的条件下进行真空浓缩，得到相对密度为1.01～1.40的浸膏。

实施例2

本发明优选实施例2提供一种牛舌草乙醇提取物，其制备方法为：

步骤1：粉碎，将牛舌草粉碎成粗粉，将牛舌草干燥叶置于粉碎机内，粉碎成粒度为20～40目的粗粉，两种粗粉混合得牛舌草混合粉；

步骤2：乙醇提取，将牛舌草混合粉置于多功能提取罐内，按照乙醇与牛舌草混合粉的质量比为10:1得比例加入体积分数为70％的乙醇，先用乙醇浸泡2h后，再加热回流，提取4次，每次回流提取时间为2h，过滤，得到乙醇提取滤液和乙醇提取滤渣；

步骤3：浓缩，先将乙醇提取滤液置于超低温浓缩机中，在温度为50℃、真空度为-0.1Mpa的条件下进行真空浓缩，回收乙醇，再继续在温度为50℃、真空度为-0.1Mpa的条件下进行真空浓缩，得到相对密度为1.01～1.40的浸膏。

实施例3

本发明优选实施例3提供一种牛舌草甲醇提取物，其制备方法为：

步骤1：粉碎，将牛舌草粉碎成粗粉，将牛舌草干燥叶置于粉碎机内，粉碎成粒度为40～60目的粗粉，两种粗粉混合得牛舌草混合粗粉；

步骤2：甲醇提取，将牛舌草粗粉置于多功能提取罐内，按照甲醇与牛舌草混合粗粉的质量比为14:1的比例，加入体积分数为70％的甲醇，先用甲醇浸泡6h后再加热回流，提取5次，每次回流提取时间为3h，过滤，得到甲醇提取滤液和甲醇提取滤渣；

步骤3：浓缩，先将甲醇提取滤液置于超低温浓缩机中，在温度为60℃、真空度为-0.1Mpa的条件下进行真空浓缩，回收甲醇，再继续在温度为60℃、真空度为-0.1Mpa的条件下进行真空浓缩，得到相对密度为1.01～1.40的浸膏。

实施例4

本发明优选实施例4提供一种牛舌草萃取提取物，其制备方法为：

将10kg干燥的牛舌草药材适当的断碎，用体积分数为60％的乙醇热回流提取(140L×3次)，合并提取液，浓缩至无醇味得到浓缩液(10L)；对浓缩液依次用石油醚(10L×3次)、三氯甲烷(10L×3次)、乙酸乙酯(10L×3次)和水饱和的正丁醇(10L×3次)萃取，分别得到石油醚萃取物(a)、牛舌草三氯甲烷萃取物、乙酸乙酯萃取物(b)和正丁醇萃取物(c)。

实施例5

本发明优选实施例5提供一种牛舌草提取物的片剂，采用实施例2中制备出的牛舌草乙醇提取物浸膏来制备片剂，先将牛舌草乙醇提取物浸膏真空干燥至水分为4％，粉碎成15～25目的粗粉，再将粗粉作为主原料与相应的辅料混合，混合后进行造粒，造粒后进行压片，制成相应的含有牛舌草醇提取物的片剂。

牛舌草提取物活性成分药理实验

1.小鼠悬尾试验

实验动物：雄性ICR小鼠，体重22-26g，动物放在320×180×160cm的笼子里，每笼10只，小鼠适应环境一周；整个实验过程中给予小鼠自由进水进食，环境温度为22±2℃，相对湿度为55±5％，每天光照12小时(早上8点至晚上8点)。

1.1药物的配置

药物配制阳性药氯丙咪嗪，以0.1％吐温-80为溶剂配制成5mg/kg的药液；上述实施例1、2、3获得的浸膏样品配制成100mg/kg、400mg/kg两个剂量药液；实施例4中获得的样品a、b、c分别配制成100mg/kg、400mg/kg两个剂量药液。

1.2试验分组

取100只雄性小鼠，随机分成10组，每组10只，空白对照组灌胃给予生理盐水，氯丙咪嗪阳性对照组灌胃给予5mg/kg氯丙咪嗪；实施例4中获得的样品a、b、c分别配制成100mg/kg、400mg/kg两个剂量药液，均以0.5％CMC-Na溶解或混悬至所需给药浓度，模型组给予同等体积的0.5％CMC-Na，各组均连续灌胃给药7天，每天一次末次给药后lh进行试验。

1.3小鼠悬尾试验及不动时间的测定

在上午10:00～14:00进行试验，末次给药lh后，将小鼠尾部1cm的部位贴在一水平木板上，头离地5cm，使动物呈倒挂状态。用挡板隔开动物的视线，动物为克服不正常体位而挣扎活动，但活动一段时间后出现间歇不动状态，显示失望状态，以连续3s以上的不动时间为有效术动时间；小鼠共悬挂6分钟，统计小鼠后4分钟内保持不动的累计时间(不动状念即小鼠放弃挣扎呈倒立竖直状态)。

1.4、结果与分析

1.4.1小鼠悬尾试验：与生理盐水对照组比较，氯丙咪嗪和实例2样品提液高剂量组、实例4样品萃取物a高剂量组、实例4样品萃取物b低剂量组及高剂量组；实例4样品萃取物c低剂量组及高剂量组小鼠悬尾6min内的失望时间均显著缩短(P<0.05)，见表1。

表1牛舌草提取物在小鼠悬尾实验(TST)中的抗抑郁数据(n＝10，X±S)

注：与生理盐水组比较：**p<0.01，*p<0.05

1.4.2结果

试验结果表明，灌胃给药7天，除了实例4样品萃取物a以外，其他各实验剂量组均可不同程度的缩短小鼠悬尾不动时间(P＜0.05，与空白组比较)，其中实例2样品提液高剂量组、实例4样品萃取物b低剂量组和高剂量组、实例4样品萃取物c低剂量组和高剂量组，均可不同程度明显缩短小鼠悬尾不动时间(P＜0.01，与空白组比较)，其中实例4样品萃取物b高剂量组、实例4样品萃取物c高剂量组不动时间百分率分别为67.11％、62.08％，显示出了显著的抗抑郁活性。

2.小鼠强迫游泳试验

2.1试验分组。同“1.2”方法操作。

2.2小鼠强迫游泳试验及不动时间的测定

在上午8：00～12：00进行试验，末次给药后1h，将小鼠分别置于水温(25±1)℃、深度10cm的水中强迫游泳6min(先适应2min)，记录4min内的小鼠的累积不动时间(不动状态即小鼠头部露出水面，四肢放弃挣扎或者呈现出漂浮状态)。

表2牛舌草提取物在小鼠强迫性游泳实验(FST)中的抗抑郁数据(n＝10，X±S)

注：与生理盐水组比较：**p<0.01，*p<0.0

1.4.2结果

试验结果表明，灌胃给药7天，各实验剂量组均可不同程度的缩短小鼠悬尾不动时间(P＜0.05，与空白组比较)，其中实例24样品提液低、高剂量组；实例4样品萃取物b低、高剂量组；实例4样品萃取物c低、高剂量组，均可不同程度明显缩短小鼠悬尾不动时间(P＜0.01，与空白组比较)，其中实例4样品萃取物b高剂量组、实例4样品萃取物c高剂量组不动时间百分率分别为50.80％、53.79％，显示出了显著的抗抑郁活性。

3、利血平所致小鼠抑郁模型

3.1试验分组

将雄性昆明种小鼠132只，随机分成11组，即正常组、生理盐水组、氯丙咪嗪阳性对照组、实例样品2、3、4、5样品配制成100mg/kg、400mg/kg两个剂量药液，每组12只，正常组不给任何药物。

3.2利血平所致小鼠抑郁模型

以上各组均连续给药7天，末次给药30min后，每只小鼠按2.5mg/kg腹腔注射利血平，再灌胃给予药物或生理盐水(对照)。4小时后用肛表测量肛温，比较给药组及对照组动物肛温的差异。方法详见《现代药理实验方法》。

3.3统计学分析

用统计软件进行数据分析，试验数据均用“X±S”表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异显著。

表3牛舌草提取物对利血平所致小鼠体温下降的影响(n＝12，X±S)

注：与生理盐水组比较：**p<0.01，*p<0.05

由表3结果可以看出，实例4中a、b、c样品提液剂量组均能显著拮抗利血平诱导的体温降低(p<0.05)，其中实例4样品萃取物a高剂量组、实例4样品萃取物b高剂量组、实例4样品萃取物c高剂量组疗效均显著性较为明显(p<0.01)，表明牛舌草乙醇提取物、牛舌草石油醚部位、牛舌草乙酸乙酯部位、牛舌草正丁醇部位具有显著的防治动物抑郁症的作用。

4.对利血平所致小鼠抑郁模型的小鼠血清、脑组织中神经递质的影响

4.1试验方法

小鼠脑内NE，DA，5-HT含量的测定在末次给药后8h断头处死动物，在冰盘上剥离大脑，去掉小脑和嗅球，保留剩余的全脑组织。保留剩余的全脑组织，用锡箔纸包裹，-70℃保存。加入9倍PBS(pH7.4)匀浆，制成10％脑组织匀浆液，将匀浆液置入离心管中，于4℃条件下以3000r/min速度离心20min，静置后仔细收集上清液，置于2mlEP管中，-70℃保存待测。采用ELISA法检测小鼠血清中NE、DA，和脑组织5-HT的含量。结果见表4、表5。

4.2试验结果

4.2.1对利血平所致小鼠抑郁模型的小鼠血清中神经递质的影响结果

表4小鼠血清中神经递质的含量测定结果

注：与空白组比较，*表示P<0.05,**表示P<0.01

实验结果显示，生理盐水组小鼠血清内单胺类神经递质NE、5-HT、DA含量减少，与正常组比较均有显著性差异。与生理盐水对照组比较，实例样品低剂量与高剂量组能够升高小鼠血清中NE、5-HT的含量(P<0.01)。阳性对照组、实例4样品萃取物a高剂量组、实例4样品萃取物b高剂量组、实例4样品萃取物c低剂量组及高剂量组均对小鼠血清内DA的含量的升高具有显著性差异(P<0.05)，其中实例4样品萃取物b、c的高剂量组表现出明显的显著性差异(P<0.01)。

4.2.2对利血平所致小鼠抑郁模型的小鼠脑组织中神经递质的影响结果

表5小鼠脑组织中神经递质的含量测定结果

注：与空白组比较，*表示P<0.05,**表示P<0.01。

实验结果显示，生理盐水组小鼠脑组织中内单胺类神经递质NE、5-HT、DA含量减少，与正常组比较均有显著性差异。与生理盐水对照组比较，实例4样品萃取物a样品低剂量与高剂量组、实例4样品萃取物b高剂量组、实例6样品萃取物4样品高剂量组均能够升高小鼠脑组织中NE的含量(P<0.05)。与生理盐水对照组比较，实例4样品萃取物a、b、c高剂量组能够升高小鼠脑组织中5-HT的含量(P<0.05)，其中实例4样品萃取物b、c高剂量组具有明显的显著性(P<0.01)；与生理盐水对照组比较，实例4样品萃取物a、b、c高剂量组能够升高小鼠脑组织中DA的含量(P<0.05)，其中实例4样品萃取物a高剂量组具有明显的显著性(P<0.01)；

4.3讨论

利血平拮抗实验模型”是较为金典的抑郁动物模型，利血平为囊泡再摄取抑制剂，通过耗竭动物脑内单胺类递质，诱发动物出现行为和生理改变。利血平化动物出现眼睑下垂、体温下降及活动抑制。三环类和单胺氧化酶抑制药可不同程度预防和反转体温下降、眼睑下垂和活动抑制。本文研究表明，实例1、2、3、4样品100，400g·KG^-1组连续灌胃给药7d可显著对抗小鼠利血平腹腔注射所引起的体温下降，并可显著对抗腹腔注射利血平所引起的运动不能，有明显的量效关系，可见实例样品均可明显对抗利血平化效应，表现出一定的抗抑郁作用。

在抑郁症的发病机制研究中，脑内单胺递质，如NE、5-HT、DA等功能不足，早已得到普遍公认。抑郁症患者普遍存在5-HT、NE等功能低下，且在临床上抗抑郁治疗有效的药物几乎都能够增加细胞突触间隙5-HT和NE的水平，这些现象在一定程度上证明了抑郁症“单胺递质”假说的合理性。本研究显示，利血平诱导小鼠抑郁模型血清、脑组织内内NE、DA和5-HT等单胺递质含量明显下降，实例4样品萃取物a、b、c高剂量组均可可使利血平化小鼠脑内的NE和5-HT的含量明显升高，其中牛舌草石油醚萃取物(实例4样品萃取物a)在脑组织中的显著性较为明显。以上试验提示，牛舌草提取物具有一定增强单胺递质的作用，从而达到抗抑郁的医药用途。

总之，本发明提供了一种新的可以用于治疗抑郁的药物用途，原料即为牛舌草及牛舌草提取物。药效学试验表明，本发明的提取物对抑郁模型动物有显著的疗效，在调节相关生化指标和神经递质方面，作用可与现有技术的氯丙咪嗪作用相当。

以上所述的仅为本发明的优选实施例，所应理解的是，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的思想和原则之内所做的任何修改、等同替换等等，均应包含在本发明的保护范围之内。