本发明涉及榆耳通过富锌液体发酵生产功能性饲料添加剂的方法。
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：榆耳，学名肉红胶韧革菌，为我国传统的食药用野生真菌。我国传统医学对其早有记载，榆耳在民间常用于治疗红白痢疾、腹浑、肠炎等疾病。民间应用榆耳治病的偏方有如下几种：把榆耳子实体水煎后，治疗肠炎；将红専与榆耳子实体水煮食用，治疗赤痢。为了提高禽畜的抗病能力，现有的禽畜饲料添加剂及防治疾病普遍选用抗生素，其主要缺点是：一是禽畜产品中抗生素残留增加，食用后对人的身体健康有一定的危害；第二过度使用抗生素后，病原菌对抗生素产生耐药性，导致禽畜的免疫力降低，对今后的禽畜疾病防治会越来越困难。国内外目前没有关于榆耳富锌液体发酵生产功能性饲料添加剂的报道。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题是，提供一种榆耳富锌功能性饲料添加剂的生产方法，添加剂具有更好的抑菌活性，抗氧化性，抗炎性能和提高免疫力性能，并且具有生产成本低和生物活性强等特点。本发明的目的可以通过如下措施来达到。榆耳富锌功能性饲料添加剂的生产方法，其特征在于工艺步骤为：(1)、富锌培养基制备：培养基中含有培养基总质量10％-30％的硫酸锌；培养基经过灭菌、冷却后备用；(2)、接种与培养：在无菌条件下，将榆耳液体菌种接入富锌培养基中进行培养；(3)菌丝球称重：通过过滤方式挑选直径在1-2mm的菌丝球称重作为第(4)步酶用量的基数，称重完毕后将菌丝球倒回滤液中；(4)发酵产物提取：将第(3)步制备的滤液，在60-100℃下蒸煮90分钟以上，加入1-2mm的菌丝球质量0.5％-1.5％的木瓜蛋白酶、1-2mm的菌丝球质量0.1％-1.0％的纤维素酶，反应60-120min，然后过滤，滤液为发酵产物；(5)浓缩：将第(4)步制备的滤液进行浓缩；(6)干燥：将浓缩的滤液，在100-150℃下进行喷雾干燥，得到饲料添加剂。优选地，富锌培养基中含有培养基总质量20％-25％的硫酸锌。优选地，富锌培养基的配方为：玉米粉40质量份，豆粉10质量份，硫酸锌15质量份，磷酸二氢钾3质量份。优选地，木瓜蛋白酶用量为1-2mm的菌丝球质量的1.2％；纤维素酶用量为1-2mm的菌丝球质量的0.2％。优选地，步骤(1)灭菌在121℃条件下，灭菌时间30min；灭菌后冷却采用循环水冷却至22-25℃。优选地，步骤(2)培养的条件：在15-25℃下培养7天。本发明的积极效果在于：本发明是一种通过榆耳液体富锌发酵生产饲料添加剂的方法，在液体培养基中添加无机锌离子形成锌硫蛋白的有机锌物质，增强发酵产物的生物活性。榆耳液体深层发酵产物相比于传统的栽培方式具有快速、准确和规模化等特点，榆耳富锌液体发酵产物具有抑菌、抗氧化性、抗炎、抗肿瘤、增强免疫等多种生物学活性。具体实施方式下面对本发明的具体实施方式作详细说明：实施例1：(一)液体榆耳菌种准备：低温保藏榆耳菌种:榆耳菌种从长白山野生榆耳分离纯化获得，保藏于鲁东大学菌物科学与技术研究院菌种保藏中心。榆耳液体菌种：按下述工艺步骤培养：(1)试管斜面菌种培养(活化):配制培养基：豆粉200g，葡萄糖20g，硫酸镁0.5g，磷酸二氢钾1g，琼脂20g，自然ph值；分装于试管中；将低温保藏菌种在无菌条件下接入试管斜面，25℃暗培养12天。(2)液体榆耳菌种制备：玉米粉5g，豆粉2g，磷酸二氢钾0.1g，定容1l，自然ph值。分装到500ml的三角瓶中，自然ph值，121℃灭菌20min，自然冷却至25℃，接种，然后在摇床中进行培养，25℃，转速160转，培养7天。(二)液体培养基制备：玉米粉50g，豆粉20g，硫酸锌10g，磷酸二氢钾1g，自然ph值；(三)培养基分装，灭菌：将配制好的培养基用1l水溶解，装到60l发酵罐中，定容50l，封口，在121℃条件下，灭菌30min。(四)冷却，接种：灭完菌后取出培养基，自然冷却至25℃，将液体榆耳菌种(连带培养基)在无菌操作下转移到发酵罐中，每罐接入菌种1l液体菌种。(五)培养：在发酵罐中25℃下培养7天；(六)菌丝球称重：通过过滤方式挑选直径在1-2mm的菌丝球称重作为第(七)步酶用量的基数，称重完毕后将菌丝球倒回滤液中。(七)发酵产物提取:将发酵后的菌液，在60℃下蒸煮2h，加入1-2mm的菌丝球质量0.6％的木瓜蛋白酶、1-2mm的菌丝球质量0.3％的纤维素酶，反应60min，然后取出过滤，200mm低压过滤。(八)浓缩：过滤后滤液进行浓缩，浓缩至总体积的10％。(九)干燥浓缩的滤液，在150℃下进行喷雾干燥.实施例2：(一)液体榆耳菌种准备：低温保藏榆耳菌种:榆耳菌种从长白山野生榆耳分离纯化获得，保藏于鲁东大学菌物科学与技术研究院菌种保藏中心。榆耳液体菌种：按下述工艺步骤培养：(1)试管斜面菌种培养(活化):配制培养基：豆粉2g，葡萄糖20g，硫酸镁0.5g，磷酸二氢钾1g，琼脂20g，自然ph值；分装于试管中；将低温保藏菌种在无菌条件下接入试管斜面，25℃暗培养12天。(3)液体菌种制备玉米粉5g，豆粉2g，磷酸二氢钾0.1g，定容1l，自然ph值。分装到500ml的三角瓶中，自然ph值，121℃灭菌20min，自然冷却至22℃，接种，然后在摇床中进行培养，22℃，转速140转，培养7天。(二)液体培养基制备：其配方组分按重量份为：方案a:玉米粉40g，豆粉10g，硫酸锌7g，磷酸二氢钾3g，自然ph值；方案b:玉米粉40g，豆粉10g，硫酸锌15g，磷酸二氢钾3g，自然ph值；方案c:玉米粉40g，豆粉10g，硫酸锌20g，磷酸二氢钾3g，自然ph值。(三)培养基灭菌：将配制好的培养基用1l水溶解，装到60l发酵罐中，定容50l，封口，在121℃条件下，灭菌30min。(四)冷却，接种：灭完菌后采用循环水冷却至22℃，在无菌条件下接入液体榆耳菌种；(五)培养：在发酵罐中22℃下培养7天；(六)菌丝球称重：通过过滤方式挑选直径在1-2mm的菌丝球称重作为第(七)步酶用量的基数，称重完毕后将菌丝球倒回滤液中。(七)发酵产物提取将发酵后的菌液，在80℃下蒸煮2h，加入1-2mm的菌丝球质量1.2％的木瓜蛋白酶、1-2mm的菌丝球质量0.2％的纤维素，反应120min，然后取出过滤，200mm低压过滤。(八)浓缩：过滤后滤液进行浓缩，浓缩至总体积的10％。(九)干燥浓缩的滤液，在100℃下行喷雾干燥.以下通过对比试验数据进一步说明本发明的积极效果.表1是本发明实施例一制备的添加剂与单独榆耳提取物及单独使用正常饲料对肉仔鸡免疫器官指数(g/kg)的影响。表1正常饲料组榆耳提取物组富锌榆耳提取物组胸腺指数1.101.141.24法氏囊指数1.001.211.32脾脏指数2.092.122.48正常饲料组指未添加抗生素，也未添加其它添加剂的饲料；榆耳提取物组是在所述正常饲料组的基础上添加正常饲料质量0.5％的榆耳提取物；富锌榆耳提取物组是在所述正常饲料组的基础上添加正常饲料质量0.5％的实施例一制备的添加剂。表2是本发明实施例二制备的添加剂与单独榆耳提取物及单独使用正常饲料对肉仔鸡免疫器官指数(g/kg)的影响：表2正常饲料组指未添加抗生素，也未添加其它添加剂的饲料；榆耳提取物组是在所述正常饲料组的基础上添加正常饲料质量0.5％的榆耳提取物；富锌榆耳提取物组是在所述正常饲料组的基础上添加正常饲料质量0.5％的实施例二方案a-c制备的添加剂。从表1、表2可以看出，本发明添加剂能够明显提高家禽的非特异免疫功能，但不同的培养基配比、硫酸锌添加量对富锌榆耳提取物中的活性物质的产生量有明显的影响，从而影响该添加剂的使用性能。随着硫酸锌用量提高，添加剂免疫功能逐步提高，但超过峰值后免疫功能基本不会更好，甚至有所下降，这是因为过量加入硫酸锌会抑制榆耳的发酵，影响菌丝球的产率。当前第1页12