一种提高精子质量和精子活力的蛋白组合物及制备方法与流程

本发明属于食品及功能食品技术领域，尤其涉及一种提高精子质量和精子活力的蛋白组合物及制备方法。

背景技术：

不育症已成为一个世界性健康问题，其中，精液质量缺陷是造成不育的重要原因之一。目前已知的多种病理因素可影响精液质量，包括基因缺陷、生殖道感染、外科手术和药物干预等，然而，原发性的精液异常和精子活力低下的原因和分子机制尚不清楚。机体氧化应激是男性不育的重要诱发因素，而生精过程中旺盛的氧化代谢、生殖道中的免疫反应，以及其它有害因素均可诱发产生大量活性氧自由基，非特异性地氧化精子中的生物大分子，如核酸、蛋白和膜脂等，从而引起精细胞损伤和凋亡。人类精子浆膜上富含多聚不饱和脂肪酸，易受氧自由基攻击而损伤(adela.zalata,armandb.christophe,christophee.depuydt,frankschoonjans,frankh.comhaire,thefattyacidcompositionofphospholipidsofspermatozoafrominfertilepatient,molecularhumanreproduction,1998,4(2):111–118.)，因此，如何通过调节机体稳态，改善精液氧化应激水平，对提高精液质量和活力，具有重要的科学意义和商业价值。

植物蛋白一般为不完全蛋白，而大豆分离蛋白、花生蛋白是为数不多的完全蛋白。花生蛋白的功能性与大豆蛋白接近，在配方食品及功能食品中添加优质植物蛋白能起到改善产品品质、强化营养的作用。

牡蛎肉制备的牡蛎提取物具有多种功效，如具有抗疲劳作用的牡蛎生肽片，醒酒作用的胶囊和片剂，富含谷胱甘肽和牛磺酸的牡蛎提取物具有抗氧化，促进谷胱甘肽表达，增强免疫能力的作用(张晶晶，牡蛎蛋白的组成及其功能特性的研究，广东海洋大学，2014，硕士论文)。

可溶性膳食纤维是不能被人体消化酶所分解的碳水化物，但在肠道中可以被肠道菌群发酵利用，降低肠道ph，促进益生菌的增殖，抑制有害菌的生长，从而降低有害菌产生的脂多糖，减少机体的炎症水平。流行病学研究表明，可溶性膳食纤维与心血管疾病预防密切相关。膳食纤维摄入量与心脑血管病发生率呈负相关；经常摄入膳食纤维有助于降低体重，并具有降血压、载脂蛋白b、胆固醇、甘油三酯等作用。

γ-氨基丁酸是中枢神经系统中很重要的抑制性神经递质，它是一种天然存在的非蛋白组成氨基酸，在发芽糙米、豆芽等食物中含量较高。γ-氨基丁酸具有极其重要的生理功能，它能促进脑的活化性，健脑益智，抗癫痫，促进睡眠，美容润肤，延缓脑衰老机能，能补充人体抑制性神经递质，具有良好的降血压功效。此外，参与生殖的调节，参与精子生成、受精等多个过程，提高精子的体外能力(包华琼,王新庄.γ-氨基丁酸(gaba)的生殖生理作用[j].动物医学进展,2002.23:39-41)。

矿物质硒与体内硒蛋白的作用密切相关，其中谷胱甘肽还原酶是一种硒蛋白，参与调节机体氧化应激水平。锌与新陈代谢、生长发育以及其他多种生理功能的关系极为密切。男性精液中含有大量的锌，体内锌不足，对精子的数量及品质具有不良影响。

然而，现有技术中并不能有效提高精子质量和增加精子活力；目前国内市场上尚未有通过蛋白组合物来提高男性精子质量及增加精子活力的产品。

技术实现要素：

本发明的目的在于解决现有技术中存在的技术问题，提供一种提高精子质量和精子活力的蛋白组合物及制备方法。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种提高精子质量和精子活力的蛋白组合物，包括如下重量份数的原料：

进一步的，所述的一种提高精子质量和精子活力的蛋白组合物，包括如下重量份数的原料：

进一步的，所述植物蛋白为大豆分离蛋白或花生蛋白中的一种或两种。

进一步的，所述可溶性膳食纤维为菊粉或果胶中的一种或两种。

进一步的，所述有机硒为富硒食用菌粉、富硒酵母或富硒麦芽粉中的一种或几种。

进一步的，所述有机锌为葡萄糖酸锌或柠檬酸锌中的一种或两种。

一种提高精子质量和精子活力的蛋白组合物的制备方法，包括步骤：按照重量比例将植物蛋白、牡蛎提取物、可溶性膳食纤维、γ-氨基丁酸、有机硒和有机锌经过干法混匀后，制得蛋白组合物。

本发明相对于现有技术的有益效果是：本发明的一种提高精子质量和精子活力的蛋白组合物及制备方法，本发明的组合物具有风味清香，口感细腻，降低精子头部畸形率、增加精子数量、提高精子活力的特点；从而本发明的蛋白组合物有效提高了精子质量和精子活力；本发明的制备方法具有操作简便、成本低的优点。

附图说明

图1a各组小鼠的精子畸形率对比图。

图1b各组小鼠的主要畸形形态示意图。

图2a各组小鼠的精子活率百分比对比图。

图2b各组小鼠的精子活力百分比对比图。

图3各组小鼠的精子运动速度对比图。

其中，图1a-图1b中与正常组比较*p＜0.05；与活性氧组比较﹟p＜0.05；图2a-2b中与正常组比较*p＜0.05；与活性氧组比较﹟p＜0.05。

具体实施方式

以下列举具体实施例对本发明进行说明。需要指出的是，实施例只用于对本发明作进一步说明，不代表本发明的保护范围，根据本发明的提示做出的非本质的修改和调整，仍属于本发明的保护范围。

一种提高精子质量和精子活力的蛋白组合物，包括如下重量份数的原料：

本发明的蛋白组合物其中一个重要特点是具有干预精子畸形作用。在我们前期研究中，采用甲基磺酸乙酯60mg/kg(浓度5mg/ml)对小鼠进行腹腔注射染毒，诱导小鼠精子畸形，同时设立空白对照组及本发明的蛋白组合物干预组。5周后在光学显微镜下镜检，统计精子畸形率及精子畸形的构成，结果表明本发明的蛋白组合物具有干预精子畸形的作用。

本发明的蛋白组合物其中第二个特点是具有提高精子活力的作用。在我们前期研究中，制备小鼠精子悬液进行体外培养，设立正常组、次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶氧化组及本发明的蛋白组合物干预组，测试精子活率、精子活力、直线运动速度、平均路径速度及曲线运动速度。试验结果表明，本发明的蛋白组合物具有提高精子活率、精子活力、直线运动速度、平均路径速度及曲线运动速度的作用。

另外，本发明的产品原料简单易得，质量稳定，易于控制。本发明选用的原料组分少，口味清香，口感细腻，无副作用。

进一步的，所述的一种提高精子质量和精子活力的蛋白组合物，包括如下重量份数的原料：

进一步的，所述植物蛋白为大豆分离蛋白或花生蛋白中的一种或两种。

进一步的，所述可溶性膳食纤维为菊粉或果胶中的一种或两种。

进一步的，所述有机硒为富硒食用菌粉、富硒酵母或富硒麦芽粉中的一种或几种。

进一步的，所述有机锌为葡萄糖酸锌或柠檬酸锌中的一种或两种。

一种提高精子质量和精子活力的蛋白组合物的制备方法，包括步骤：按照重量比例将植物蛋白、牡蛎提取物、可溶性膳食纤维、γ-氨基丁酸、有机硒和有机锌经过干法混匀后，制得蛋白组合物。

实施例1

一种提高精子质量和精子活力的蛋白组合物，包括如下重量份数的原料：

上述提高精子质量和精子活力的蛋白组合物的制备方法，包括步骤按照重量比例将植物蛋白、牡蛎提取物、可溶性膳食纤维、γ-氨基丁酸、有机硒和有机锌经过干法混匀后，制得蛋白组合物。

本实施例中的植物蛋白可以为大豆分离蛋白或花生蛋白中的一种或两种；可溶性膳食纤维可以为菊粉或果胶中的一种或两种；有机硒可以为富硒食用菌粉、富硒酵母或富硒麦芽粉中的一种或几种；有机锌可以为葡萄糖酸锌或柠檬酸锌中的一种或两种。

实施例2

一种提高精子质量和精子活力的蛋白组合物，包括如下重量份数的原料：

上述提高精子质量和精子活力的蛋白组合物的制备方法，包括步骤按照重量比例将植物蛋白、牡蛎提取物、可溶性膳食纤维、γ-氨基丁酸、有机硒和有机锌经过干法混匀后，制得蛋白组合物。

本实施例的有机硒可用富硒食用菌粉和富硒酵母的混合物代替。

实施例3

一种提高精子质量和精子活力的蛋白组合物，包括如下重量份数的原料：

上述提高精子质量和精子活力的蛋白组合物的制备方法，包括步骤按照重量比例将植物蛋白、牡蛎提取物、可溶性膳食纤维、γ-氨基丁酸、有机硒和有机锌经过干法混匀后，制得蛋白组合物。

本实施例的有机硒可用富硒食用菌粉、富硒酵母和富硒麦芽粉的混合物代替。

实施例4

一种提高精子质量和精子活力的蛋白组合物，包括如下重量份数的原料：

上述提高精子质量和精子活力的蛋白组合物的制备方法，包括步骤按照重量比例将大豆分离蛋白、牡蛎提取物、菊粉、γ-氨基丁酸、富硒麦芽粉、葡萄糖酸锌经过干法混匀后，制得蛋白组合物。

本实施例的大豆分离蛋白可用花生蛋白代替或可用大豆分离蛋白和花生蛋白以等比例重量份数混合得到的混合物代替。

实施例5

一种提高精子质量和精子活力的蛋白组合物，包括如下重量份数的原料：

上述提高精子质量和精子活力的蛋白组合物的制备方法，包括步骤按照重量比例将大豆分离蛋白、牡蛎提取物、菊粉、γ-氨基丁酸、富硒麦芽粉、葡萄糖酸锌经过干法混匀后，制得蛋白组合物。

本实施例的菊粉可用果胶代替或可用菊粉和果胶以等比例重量份数混合得到的混合物代替。

本实施例的葡萄糖酸锌可用柠檬酸锌和葡萄糖酸锌的混合物代替。

实施例6

一种提高精子质量和精子活力的蛋白组合物，包括如下重量份数的原料：

上述提高精子质量和精子活力的蛋白组合物的制备方法，包括步骤按照重量比例将大豆分离蛋白、牡蛎提取物、菊粉、γ-氨基丁酸、富硒麦芽粉、葡萄糖酸锌经过干法混匀后，制得蛋白组合物。

实施例7

一种提高精子质量和精子活力的蛋白组合物，包括如下重量份数的原料：

上述提高精子质量和精子活力的蛋白组合物的制备方法，包括步骤按照重量比例将大豆分离蛋白、牡蛎提取物、菊粉、γ-氨基丁酸、富硒酵母和葡萄糖酸锌经过干法混匀后，制得蛋白组合物。

实施例8

一种提高精子质量和精子活力的蛋白组合物，包括如下重量份数的原料：

上述提高精子质量和精子活力的蛋白组合物的制备方法，包括步骤按照重量比例将大豆分离蛋白、牡蛎提取物、果胶、γ-氨基丁酸、富硒食用菌粉和柠檬酸锌经过干法混匀后，制得蛋白组合物。

验证实验

将实施例6-8通过小鼠实验来验证本发明的蛋白组合物所具有的效果。

验证实验1

按照实施例6的各原料的重量份数比例，选定各原料的质量份数比例。

一种提高精子质量和精子活力的蛋白组合物，由如下质量分数的原料组成：

上述提高精子质量和精子活力的蛋白组合物的制备方法，包括步骤按照重量百分数比例将大豆分离蛋白、牡蛎提取物、菊粉、γ-氨基丁酸、富硒麦芽粉、葡萄糖酸锌经过干法混匀后，制得蛋白组合物，将上述制备的蛋白组合物进行小鼠精子畸形及小鼠精子活力评价。

1.蛋白组合物(proteinmix,pm)干预小鼠精子畸形试验

50只雄性4周龄spf级昆明小鼠随机分为5组，每组10只，其中正常2组、正常+pm1组、致畸1组、致畸+pm1组。致畸组采用甲基磺酸乙酯60mg/kg(浓度5mg/ml)进行腹腔注射，每天1次，连续5天的方法进行染毒；染毒1小时后，正常+pm组及致畸+pm组小鼠分别灌胃pm水溶液0.2ml(100mg/ml)，而正常组(其中1组)及致畸灌胃等量生理盐水。染毒后采用正常饲料继续饲喂，35天后采用颈椎脱臼法处死小鼠，摘取双侧附睾置于约1ml磷酸缓冲生理盐水中，剪碎，静置3-5分钟，吸取精子悬液，滴于清洁玻片上做均匀推片，待拨片晾干后采用无水乙醇固定5分钟，干燥后用2％伊红水溶液染色，干燥后在光学显微镜下镜检，统计精子畸形率及精子畸形的构成。

各组小鼠精子畸形率如图1a所示，正常组小鼠精子畸形率为3.1％，灌胃pm后，小鼠精子畸形稍有下降(2.5％)；甲基磺酸乙酯成功诱导小鼠精子畸形，与正常组相比，具有显著性差异(p＜0.05)；畸形组经pm灌胃干预后，畸形精子数量显著下降(p＜0.05)。实验中观察到的小鼠精子畸形，表现在精子头部和尾部，主要为无定形头部、香蕉形头部、胖头及尾折叠形态。对比致畸组及致畸+pm组小鼠精子如图1b所示，致畸组精子涂片中出现大量头部畸形精子，而经过pm干预后，视野中畸形精子数量显著下降。

2.蛋白组合物提高小鼠精子活力试验

分别称取1.0g蛋白组合物，加入10、20、40ml磷酸盐缓冲液，充分溶解后，离心，取上层清液，分别记为pm-1，pm-2，pm-3。采用次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶活性氧发生体系，临用时调整次黄嘌呤终浓度为0.6mmol/l，黄嘌呤氧化酶终浓度为50u/l。

分别取10只正常昆明小鼠制备精子悬液。小鼠处死后，立即解剖取附睾，至于3mlm199培养基中，剪碎，放置5分钟后，取500ul精子悬液，加入1000μlm199培养基中，调整精子浓度为2×10¹⁰l^-1。每只小鼠精子悬液分为5组：正常组、氧化组、pm高剂量组(pm-1)、pm中剂量组(pm-2)、pm低剂量组(pm-3)。除正常组外，各组在25℃、有氧环境中与ros共孵育，其中pm高、中、低剂量组分别加入1.0μl相应的pm溶液。孵育30分钟后，采用精子全自动分析系统，将精子悬液涂于计数板上，选取5个视野，于3分钟内测试精子活率、精子活力、直线运动速度(straightlinevelocity，vsl)、平均路径速度(averagepathvelocity，vap)及曲线运动速度(curvilinearvelocity，vcl)。

各组小鼠精子活率、精子活力结果如图2a-图2b所示，活性氧诱发小鼠精子存活率显著下降(p＜0.05)，而给予pm干预后，小鼠精子活率呈现依赖性升高，给予高剂量pm(pm-3组)精子活率显著升高(p＜0.05)，回复到正常组水平。各组小鼠精子活力水平与精子活率结果类似，表明pm能有效提高小鼠精子数量与精子活力。

比较各组小鼠精子运动速度，结果如图3所示。经过活性氧处理，小鼠精子的vsl、vap、vcl等运动速度指标显著降低。采用不同剂量pm干预后，小鼠精子的运动速度均有所恢复，给予高剂量pm，小鼠精子运动速度恢复至正常水平。

验证实验2

按照实施例7的各原料的重量份数比例，选定各原料的质量份数比例。

一种提高精子质量和精子活力的蛋白组合物，包括如下重量份数的原料：

上述提高精子质量和精子活力的蛋白组合物的制备方法，包括步骤按照重量比例将大豆分离蛋白、牡蛎提取物、菊粉、γ-氨基丁酸、富硒酵母和葡萄糖酸锌经过干法混匀后，制得蛋白组合物，将得到的所述蛋白组合物进行小鼠精子畸形及小鼠精子活力评价。实验条件与过程与验证实验1相似，以下为实验结论。

试验结果表明，实施例蛋白组合物灌胃的致畸小鼠精子中的无定形头部、香蕉形头部、胖头及尾折叠形态精子数量较少，与正常组无显著差异。给予高剂量蛋白组合物，小鼠精子体外的精子活率、精子活力、直线运动速度、平均路径速度、曲线运动速度均有显著提高，达到正常组水平。试验结果证明实施例蛋白组合物具有预防小鼠精子畸形及提高小鼠精子活力的作用。

验证实验3

按照实施例8的各原料的重量份数比例，选定各原料的质量份数比例。

一种提高精子质量和精子活力的蛋白组合物，包括如下重量份数的原料：

上述提高精子质量和精子活力的蛋白组合物的制备方法，包括步骤按照重量比例将大豆分离蛋白、牡蛎提取物、果胶、γ-氨基丁酸、富硒食用菌粉和柠檬酸锌经过干法混匀后，制得蛋白组合物，将得到的所述蛋白组合物进行小鼠精子畸形及小鼠精子活力评价。实验条件与过程与验证实验1相似，以下为实验结论。

试验结果表明，实施例蛋白组合物灌胃的致畸小鼠精子中的无定形头部、香蕉形头部、胖头及尾折叠形态精子数量较少，与正常组无显著差异。给予高剂量蛋白组合物，小鼠精子体外的精子活率、精子活力、直线运动速度、平均路径速度、曲线运动速度均有显著提高，达到正常组水平。试验结果证明实施例蛋白组合物具有预防小鼠精子畸形及提高小鼠精子活力的作用。

根据本说明书的记载即可较好的实现本发明的技术方案。