本发明涉及一种抗疲劳保健制剂的制备方法。
背景技术：
疲劳是一种复杂的生理现象，可引起运动员运动能力降低，战士战斗力减退，对一般人群而言可导致工作效率降低、差错事故增多。疲劳发生后如果得不到及时的恢复，逐渐积累，还会导致“过劳”，出现“过度训练综合征”、“慢性疲劳综合征”等，使机体发生内分泌紊乱、免疫力下降，甚至出现器质性病变，成为威胁人类健康的重要因素。因而延缓疲劳的发生和促进疲劳的恢复一直是医学和食品等学科的研究重点，研究开发能有效抗疲劳的药剂或保健制剂刻不容缓。
技术实现要素：
要解决的技术问题：本发明的目的是提供一种抗疲劳保健制剂的制备方法，所制备的制剂能有效的提高运动耐力，运动耐力的提高是机体抗疲劳能力最直接、最客观的表现，同时本制剂还具有耐缺氧作用，能有效的抗疲劳。
技术方案：一种抗疲劳保健制剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）将500g秋刀鱼肌肉糜和500ml去离子水搅拌均匀，加入木瓜蛋白酶进行酶解，酶解液在转速5000rpm下离心25-30分钟，取上清液，真空冷冻干燥后得粉末a，其中，酶浓度为0.2×103-0.8×103u/g蛋白、酶解时间为2-5小时，酶解温度为45-60℃；
（2）将冷冻干燥后芦笋和杜仲叶分别粉碎，过50目筛，取10-20g芦笋粉、2-5g杜仲叶粉和120-200ml75%乙醇溶液混合，在温度60-70℃，超声功率150-180w下超声回流提取50-80分钟，过滤取滤液，浓缩、真空干燥得粉末b；
（3）将5-10g松针粉和100-200ml60%乙醇溶液混合，在温度90-95℃下搅拌提取90-120分钟，在转速5000-6000r/min下离心15-18分钟，取上清液，真空冷冻干燥后得粉末c；
（4）取20-30g苦瓜和10-15g黑豆，洗净后用高速组织捣碎机捣碎30-40秒，装入离心机中离心15-20分钟，取上清液d；
（5）将5-10ml上清液d、2-3g维生素b6、2-4g维生素b12、0.15-0.3g柠檬酸、10-20ml蜂蜜和200-300ml蒸馏水混合搅拌溶解；
（6）加入10-20g粉末a、2-3g粉末b、1-1.5g粉末c，用高压均质机进行均质，均质温度为60-70℃，均质压力为25mpa，均质后过滤，去除滤渣即得。
进一步的，松针为黑松、油松、思茅松、马尾松的针叶。
进一步的，所述的一种抗疲劳保健制剂的制备方法，所述的步骤（1）中酶浓度为0.5×103-0.7×103u/g蛋白、酶解时间为3-4小时，酶解温度为50-55℃。
进一步的，所述的一种抗疲劳保健制剂的制备方法，所述的步骤（2）中温度为65℃，超声功率为160-170w，提取时间为60-70分钟。
进一步的，所述的一种抗疲劳保健制剂的制备方法，所述的步骤（3）中提取时间为100-110分钟，转速为5500r/min，离心时间为16-17分钟。
进一步的，所述的一种抗疲劳保健制剂的制备方法，所述的步骤（4）中离心时间为17分钟。
进一步的，所述的一种抗疲劳保健制剂的制备方法，所述的步骤（6）中均质温度为65℃。
有益效果：本方法制备的抗疲劳保健制剂能有效增加小鼠游泳力竭的时间，提高运动耐力，运动耐力的提高是机体抗疲劳能力最直接、最客观的表现，同时本制剂还具有耐缺氧作用，能有效的抗疲劳。
具体实施方式
实施例1
一种抗疲劳保健制剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）将500g秋刀鱼肌肉糜和500ml去离子水搅拌均匀，加入木瓜蛋白酶进行酶解，酶解液在转速5000rpm下离心25分钟，取上清液，真空冷冻干燥后得粉末a，其中，酶浓度为0.2×103u/g蛋白、酶解时间为2小时，酶解温度为45℃；
（2）将冷冻干燥后芦笋和杜仲叶分别粉碎，过50目筛，取10g芦笋粉、2g杜仲叶粉和120ml75%乙醇溶液混合，在温度60℃，超声功率150w下超声回流提取50分钟，过滤取滤液，浓缩、真空干燥得粉末b；
（3）将5g松针粉和100ml60%乙醇溶液混合，在温度90℃下搅拌提取90分钟，在转速5000r/min下离心15分钟，取上清液，真空冷冻干燥后得粉末c；
（4）取20g苦瓜和10g黑豆，洗净后用高速组织捣碎机捣碎30秒，装入离心机中离心15分钟，取上清液d；
（5）将5ml上清液d、2g维生素b6、2g维生素b12、0.15g柠檬酸、10ml蜂蜜和200ml蒸馏水混合搅拌溶解；
（6）加入10g粉末a、2g粉末b、1g粉末c，用高压均质机进行均质，均质温度为60℃，均质压力为25mpa，均质后过滤，去除滤渣即得。
实施例2
一种抗疲劳保健制剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）将500g秋刀鱼肌肉糜和500ml去离子水搅拌均匀，加入木瓜蛋白酶进行酶解，酶解液在转速5000rpm下离心26分钟，取上清液，真空冷冻干燥后得粉末a，其中，酶浓度为0.5×103u/g蛋白、酶解时间为3小时，酶解温度为50℃；
（2）将冷冻干燥后芦笋和杜仲叶分别粉碎，过50目筛，取12g芦笋粉、3g杜仲叶粉和140ml75%乙醇溶液混合，在温度62℃，超声功率160w下超声回流提取60分钟，过滤取滤液，浓缩、真空干燥得粉末b；
（3）将7g松针粉和120ml60%乙醇溶液混合，在温度92℃下搅拌提取100分钟，在转速5300r/min下离心16分钟，取上清液，真空冷冻干燥后得粉末c；
（4）取22g苦瓜和12g黑豆，洗净后用高速组织捣碎机捣碎32秒，装入离心机中离心16分钟，取上清液d；
（5）将7ml上清液d、2.2g维生素b6、2.5g维生素b12、0.2g柠檬酸、12ml蜂蜜和220ml蒸馏水混合搅拌溶解；
（6）加入12g粉末a、2.2g粉末b、1.2g粉末c，用高压均质机进行均质，均质温度为62℃，均质压力为25mpa，均质后过滤，去除滤渣即得。
实施例3
一种抗疲劳保健制剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）将500g秋刀鱼肌肉糜和500ml去离子水搅拌均匀，加入木瓜蛋白酶进行酶解，酶解液在转速5000rpm下离心27分钟，取上清液，真空冷冻干燥后得粉末a，其中，酶浓度为0.55×103u/g蛋白、酶解时间为3.5小时，酶解温度为53℃；
（2）将冷冻干燥后芦笋和杜仲叶分别粉碎，过50目筛，取15g芦笋粉、3.5g杜仲叶粉和160ml75%乙醇溶液混合，在温度65℃，超声功率165w下超声回流提取65分钟，过滤取滤液，浓缩、真空干燥得粉末b；
（3）将7.5g松针粉和150ml60%乙醇溶液混合，在温度93℃下搅拌提取105分钟，在转速5500r/min下离心16分钟，取上清液，真空冷冻干燥后得粉末c；
（4）取25g苦瓜和12g黑豆，洗净后用高速组织捣碎机捣碎35秒，装入离心机中离心17分钟，取上清液d；
（5）将7.5ml上清液d、2.5g维生素b6、3g维生素b12、0.22g柠檬酸、15ml蜂蜜和250ml蒸馏水混合搅拌溶解；
（6）加入15g粉末a、2.5g粉末b、1.25g粉末c，用高压均质机进行均质，均质温度为65℃，均质压力为25mpa，均质后过滤，去除滤渣即得。
实施例4
一种抗疲劳保健制剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）将500g秋刀鱼肌肉糜和500ml去离子水搅拌均匀，加入木瓜蛋白酶进行酶解，酶解液在转速5000rpm下离心29分钟，取上清液，真空冷冻干燥后得粉末a，其中，酶浓度为0.6×103u/g蛋白、酶解时间为4小时，酶解温度为55℃；
（2）将冷冻干燥后芦笋和杜仲叶分别粉碎，过50目筛，取18g芦笋粉、4g杜仲叶粉和180ml75%乙醇溶液混合，在温度65℃，超声功率170w下超声回流提取70分钟，过滤取滤液，浓缩、真空干燥得粉末b；
（3）将5-10g松针粉和100-200ml60%乙醇溶液混合，在温度94℃下搅拌提取110分钟，在转速5800r/min下离心17分钟，取上清液，真空冷冻干燥后得粉末c；
（4）取28g苦瓜和14g黑豆，洗净后用高速组织捣碎机捣碎35秒，装入离心机中离心18分钟，取上清液d；
（5）将9ml上清液d、2.8g维生素b6、3.5g维生素b12、0.25g柠檬酸、18ml蜂蜜和280ml蒸馏水混合搅拌溶解；
（6）加入18g粉末a、2.8g粉末b、1.4g粉末c，用高压均质机进行均质，均质温度为65℃，均质压力为25mpa，均质后过滤，去除滤渣即得。
实施例5
一种抗疲劳保健制剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）将500g秋刀鱼肌肉糜和500ml去离子水搅拌均匀，加入木瓜蛋白酶进行酶解，酶解液在转速5000rpm下离心30分钟，取上清液，真空冷冻干燥后得粉末a，其中，酶浓度为0.8×103u/g蛋白、酶解时间为5小时，酶解温度为60℃；
（2）将冷冻干燥后芦笋和杜仲叶分别粉碎，过50目筛，取20g芦笋粉、5g杜仲叶粉和200ml75%乙醇溶液混合，在温度70℃，超声功率180w下超声回流提取80分钟，过滤取滤液，浓缩、真空干燥得粉末b；
（3）将10g松针粉和200ml60%乙醇溶液混合，在温度95℃下搅拌提取120分钟，在转速6000r/min下离心18分钟，取上清液，真空冷冻干燥后得粉末c；
（4）取30g苦瓜和15g黑豆，洗净后用高速组织捣碎机捣碎40秒，装入离心机中离心20分钟，取上清液d；
（5）将10ml上清液d、3g维生素b6、4g维生素b12、0.3g柠檬酸、20ml蜂蜜和300ml蒸馏水混合搅拌溶解；
（6）加入20g粉末a、3g粉末b、1.5g粉末c，用高压均质机进行均质，均质温度为70℃，均质压力为25mpa，均质后过滤，去除滤渣即得。
对比例1
一种抗疲劳保健制剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）将冷冻干燥后芦笋和杜仲叶分别粉碎，过50目筛，取10g芦笋粉、2g杜仲叶粉和120ml75%乙醇溶液混合，在温度60℃，超声功率150w下超声回流提取50分钟，过滤取滤液，浓缩、真空干燥得粉末b；
（2）将5g松针粉和100ml60%乙醇溶液混合，在温度90℃下搅拌提取90分钟，在转速5000r/min下离心15分钟，取上清液，真空冷冻干燥后得粉末c；
（3）取20g苦瓜和10g黑豆，洗净后用高速组织捣碎机捣碎30秒，装入离心机中离心15分钟，取上清液d；
（4）将5ml上清液d、2g维生素b6、2g维生素b12、0.15g柠檬酸、10ml蜂蜜和200ml蒸馏水混合搅拌溶解；
（5）加入2g粉末b、1g粉末c，用高压均质机进行均质，均质温度为60℃，均质压力为25mpa，均质后过滤，去除滤渣即得。
对比例2
一种抗疲劳保健制剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）将500g秋刀鱼肌肉糜和500ml去离子水搅拌均匀，加入木瓜蛋白酶进行酶解，酶解液在转速5000rpm下离心25分钟，取上清液，真空冷冻干燥后得粉末a，其中，酶浓度为0.2×103u/g蛋白、酶解时间为2小时，酶解温度为45℃；
（2）将5g松针粉和100ml60%乙醇溶液混合，在温度90℃下搅拌提取90分钟，在转速5000r/min下离心15分钟，取上清液，真空冷冻干燥后得粉末c；
（3）取20g苦瓜和10g黑豆，洗净后用高速组织捣碎机捣碎30秒，装入离心机中离心15分钟，取上清液d；
（4）将5ml上清液d、2g维生素b6、2g维生素b12、0.15g柠檬酸、10ml蜂蜜和200ml蒸馏水混合搅拌溶解；
（5）加入10g粉末a、1g粉末c，用高压均质机进行均质，均质温度为60℃，均质压力为25mpa，均质后过滤，去除滤渣即得。
取雄性昆明种小鼠80只，随机分为8组，每组10只，分为实验组（分别灌服实施例1-5和对比例1-2）和空白对照组（灌服生理盐水），剂量为10ml/kg，每日给药一次，连续30天。
第30天末次给药30min后进行负重游泳实验，小鼠尾根部负荷5%体重铅丝，置于游泳箱中游泳，游泳箱水深45cm，水温（25±1.0）℃，记录小鼠自游泳开始至力竭的时间（小鼠头部全部沉入水中8s不抬头），即小鼠负重游泳时间。
第30天末次给药30min后，小鼠腹腔注射盐酸异丙肾上腺素20mg/kg，20min后，记录死亡耗氧量。
第30天末次给药30min后，将小鼠放入装有10g钠石灰的250ml密封的广口瓶里，用凡士林封瓶口后，立即计时，以呼吸停止时间为指标，观察小鼠因缺氧而死亡的时间，记为常压缺氧存活时间。
运动耐力的提高是机体抗疲劳能力最直接、最客观的表现，小鼠负重游泳时间越长表明小鼠运动耐力越强。从表1中可以看到在服用本发明30天后的小鼠和空白对照组小鼠相比，游泳力竭时间明显变长，最长的可达到674s，同时其常压耐缺氧时间也得到了提高，具有耐缺氧作用，在注射盐酸异丙肾上腺素后服用本发明制剂的小鼠的耗氧量比空白对照组低，存活时间加长，本发明具有有效的抗疲劳、耐缺氧功能。
表1