本发明属于生物产业
技术领域：
，具体涉及一种高抗氧化活性黄鳝鱼骨多肽制备方法。
背景技术：
：黄鳝，隶属硬骨鱼纲辐鳍亚纲、合鳃目合鳃科黄鳝属温热带淡水鱼类，俗称鳝鱼、田鳝或田鳗，亦名长鱼、血鱼、罗鱼、无鳞公子等。黄鳝肉嫩味鲜，营养价值较高。黄鳝作为众多菜品的主要原料，其肉、血、皮、骨也有一定的药用价值，是典型的药食同源食品。黄鳝是我国重要的烹饪食材，名菜“软兜长鱼”就是以黄鳝为主要制作原料，作为安徽省淡水养殖的主要品种之一，黄鳝每年的消费量巨大。据统计，安徽省每年黄鳝的消费量超过万吨，所产生的黄鳝鱼骨就有上千吨。这些黄鳝鱼骨通常作为废弃物直接扔掉，或以非常低廉的价格处理给养殖场或饲料厂，造成严重的资源浪费。因此，通过对黄鳝鱼骨进行系统的开发研究，生产出具有广阔市场前景的产品，可以有效减少黄鳝资源的浪费，显著增加黄鳝的附加值，将黄鳝鱼骨制成多肽能够更容易被吸收。技术实现要素：本发明的目的是针对现有的问题，提供了一种高抗氧化活性黄鳝鱼骨多肽制备方法。本发明是通过以下技术方案实现的：一种高抗氧化活性黄鳝鱼骨多肽制备方法，包括以下步骤：（1）原料收集：将剔除鱼肉的黄鳝鱼骨进行收集，表面清洗感觉，沥干；（2）黄鳝鱼骨处理：将步骤（1）中的黄鳝鱼骨放入水杨酸乙醇溶液中在常温想下浸泡10-15min，然后再采用超声波处理15-20s，然后进行过滤，采用清水对黄鳝鱼骨进行清洗，烘干至恒重，所述水杨酸乙醇溶液由水杨酸、乙醇和水按3.5-3.8：50：100质量比混合制成；（3）制粉：将步骤（2）中处理后的黄鳝鱼骨进行粉碎，得到黄鳝鱼骨粉；（4）配制黄鳝鱼骨粉悬浮液：向步骤（3）制备的黄鳝鱼骨粉中添加水，使得黄鳝鱼骨粉含水率至30-40%，然后采用微波处理30-35s，静置20min，然后再将处理后的黄鳝鱼骨粉添加到纯净水中，再添加纯净水质量3-5%的瓜尔胶，以2500r/min转速搅拌30min，配制成浓度为15-18mg/ml的黄鳝鱼骨粉悬浮液；（5）真空浸渍处理:将步骤（4）中制备的黄鳝鱼骨粉悬浮液在真空浸渍釜中处理30-40min，然后取出，冷却至30-35℃，保温；所述真空浸渍釜中真空度为0.05mpa，温度为88-95℃；（6）酶解:向步骤（5）中得到的黄鳝鱼骨粉悬浮液中添加其质量2.5-3%的复合蛋白酶，在温度38-44℃下酶解时间3.5小时，然后对复合蛋白酶进行灭活，再进行过滤，得到高抗氧化活性黄鳝鱼骨多肽。进一步的，所述步骤（2）中超声波功率为1000w，频率为50khz。进一步的，所述步骤（3）中黄鳝鱼骨粉粒度为120目。进一步的，所述步骤（4）中微波功率为800w。进一步的，所述步骤（6）中复合蛋白酶由木瓜蛋白酶与胰蛋白酶按3：1质量比例混合制成。进一步的，所述步骤（6）中灭活采用煮沸灭活。本发明相比现有技术具有以下优点：本发明的一种高抗氧化活性黄鳝鱼骨多肽制备方法简单高效，能够避免常规制备方法中未对黄鳝鱼骨进行处理导致的酶解过程中多肽得率较低，品质较差的问题，同时利用木瓜蛋白酶与胰蛋白酶组成的复合蛋白酶来酶解，提高酶解质量，得到的多肽，营养元素损失小，利于人体的吸收，可用于医药原料、药品、功能食品等，适合工业化生产；本发明方法得到的黄鳝鱼骨多肽dpph自由基清除率最高为93.21%。经过对本发明制备的高抗氧化活性黄鳝鱼骨多肽的dpph自由基清除率、螯合金属离子能力等体外抗氧化指标进行检测，能够表明本发明制备的黄鳝鱼骨多肽表现出良好的抗氧化活性，随着多肽质量浓度的升高，其抗氧化活性不断增强，表现出良好的量效关系，同时，更容易被人体吸收利用，利用率高。具体实施方式实施例1一种高抗氧化活性黄鳝鱼骨多肽制备方法，包括以下步骤：（1）原料收集：将剔除鱼肉的黄鳝鱼骨进行收集，表面清洗感觉，沥干；（2）黄鳝鱼骨处理：将步骤（1）中的黄鳝鱼骨放入水杨酸乙醇溶液中在常温想下浸泡10min，然后再采用超声波处理15s，然后进行过滤，采用清水对黄鳝鱼骨进行清洗，烘干至恒重，所述水杨酸乙醇溶液由水杨酸、乙醇和水按3.5：50：100质量比混合制成；（3）制粉：将步骤（2）中处理后的黄鳝鱼骨进行粉碎，得到黄鳝鱼骨粉；（4）配制黄鳝鱼骨粉悬浮液：向步骤（3）制备的黄鳝鱼骨粉中添加水，使得黄鳝鱼骨粉含水率至30%，然后采用微波处理30s，静置20min，然后再将处理后的黄鳝鱼骨粉添加到纯净水中，再添加纯净水质量3%的瓜尔胶，以2500r/min转速搅拌30min，配制成浓度为15mg/ml的黄鳝鱼骨粉悬浮液；（5）真空浸渍处理:将步骤（4）中制备的黄鳝鱼骨粉悬浮液在真空浸渍釜中处理30-40min，然后取出，冷却至30℃，保温；所述真空浸渍釜中真空度为0.05mpa，温度为88℃；（6）酶解:向步骤（5）中得到的黄鳝鱼骨粉悬浮液中添加其质量2.5%的复合蛋白酶，在温度38℃下酶解时间3.5小时，然后对复合蛋白酶进行灭活，再进行过滤，得到高抗氧化活性黄鳝鱼骨多肽。进一步的，所述步骤（2）中超声波功率为1000w，频率为50khz。进一步的，所述步骤（3）中黄鳝鱼骨粉粒度为120目。进一步的，所述步骤（4）中微波功率为800w。进一步的，所述步骤（6）中复合蛋白酶由木瓜蛋白酶与胰蛋白酶按3：1质量比例混合制成。进一步的，所述步骤（6）中灭活采用煮沸灭活。实施例2一种高抗氧化活性黄鳝鱼骨多肽制备方法，包括以下步骤：（1）原料收集：将剔除鱼肉的黄鳝鱼骨进行收集，表面清洗感觉，沥干；（2）黄鳝鱼骨处理：将步骤（1）中的黄鳝鱼骨放入水杨酸乙醇溶液中在常温想下浸泡15min，然后再采用超声波处理20s，然后进行过滤，采用清水对黄鳝鱼骨进行清洗，烘干至恒重，所述水杨酸乙醇溶液由水杨酸、乙醇和水按3.8：50：100质量比混合制成；（3）制粉：将步骤（2）中处理后的黄鳝鱼骨进行粉碎，得到黄鳝鱼骨粉；（4）配制黄鳝鱼骨粉悬浮液：向步骤（3）制备的黄鳝鱼骨粉中添加水，使得黄鳝鱼骨粉含水率至40%，然后采用微波处理35s，静置20min，然后再将处理后的黄鳝鱼骨粉添加到纯净水中，再添加纯净水质量5%的瓜尔胶，以2500r/min转速搅拌30min，配制成浓度为18mg/ml的黄鳝鱼骨粉悬浮液；（5）真空浸渍处理:将步骤（4）中制备的黄鳝鱼骨粉悬浮液在真空浸渍釜中处理40min，然后取出，冷却至35℃，保温；所述真空浸渍釜中真空度为0.05mpa，温度为95℃；（6）酶解:向步骤（5）中得到的黄鳝鱼骨粉悬浮液中添加其质量3%的复合蛋白酶，在温度44℃下酶解时间3.5小时，然后对复合蛋白酶进行灭活，再进行过滤，得到高抗氧化活性黄鳝鱼骨多肽。进一步的，所述步骤（2）中超声波功率为1000w，频率为50khz。进一步的，所述步骤（3）中黄鳝鱼骨粉粒度为120目。进一步的，所述步骤（4）中微波功率为800w。进一步的，所述步骤（6）中复合蛋白酶由木瓜蛋白酶与胰蛋白酶按3：1质量比例混合制成。进一步的，所述步骤（6）中灭活采用煮沸灭活。实施例3一种高抗氧化活性黄鳝鱼骨多肽制备方法，包括以下步骤：（1）原料收集：将剔除鱼肉的黄鳝鱼骨进行收集，表面清洗感觉，沥干；（2）黄鳝鱼骨处理：将步骤（1）中的黄鳝鱼骨放入水杨酸乙醇溶液中在常温想下浸泡12min，然后再采用超声波处理18s，然后进行过滤，采用清水对黄鳝鱼骨进行清洗，烘干至恒重，所述水杨酸乙醇溶液由水杨酸、乙醇和水按3.6：50：100质量比混合制成；（3）制粉：将步骤（2）中处理后的黄鳝鱼骨进行粉碎，得到黄鳝鱼骨粉；（4）配制黄鳝鱼骨粉悬浮液：向步骤（3）制备的黄鳝鱼骨粉中添加水，使得黄鳝鱼骨粉含水率至35%，然后采用微波处理32s，静置20min，然后再将处理后的黄鳝鱼骨粉添加到纯净水中，再添加纯净水质量4%的瓜尔胶，以2500r/min转速搅拌30min，配制成浓度为16mg/ml的黄鳝鱼骨粉悬浮液；（5）真空浸渍处理:将步骤（4）中制备的黄鳝鱼骨粉悬浮液在真空浸渍釜中处理38min，然后取出，冷却至32℃，保温；所述真空浸渍釜中真空度为0.05mpa，温度为92℃；（6）酶解:向步骤（5）中得到的黄鳝鱼骨粉悬浮液中添加其质量2.8%的复合蛋白酶，在温度42℃下酶解时间3.5小时，然后对复合蛋白酶进行灭活，再进行过滤，得到高抗氧化活性黄鳝鱼骨多肽。进一步的，所述步骤（2）中超声波功率为1000w，频率为50khz。进一步的，所述步骤（3）中黄鳝鱼骨粉粒度为120目。进一步的，所述步骤（4）中微波功率为800w。进一步的，所述步骤（6）中复合蛋白酶由木瓜蛋白酶与胰蛋白酶按3：1质量比例混合制成。进一步的，所述步骤（6）中灭活采用煮沸灭活。对比例1：与实施例1区别仅在于不经过步骤（2）处理。对比例2：与实施例1区别仅在于不经过步骤（5）处理。dpph自由基清除能力的测定配制0.1mmol/l的dpph溶液（以95%的乙醇溶解dpph）。称取等量的实施例与对比例制备的黄鳝鱼骨多肽制成干粉，用去离子水配成浓度为5%的样品溶液。取样品溶液1.8ml，加入dpph溶液2.5ml，混合均匀后，在常温下避光反应20min，高速离心机8000r/min离心8min，在517nm波长处测吸光度（a1），空白组为1.8ml95%的乙醇溶液代替dpph溶液加入2.5ml去离子水，在517nm波长处测定其吸光度（a2），对照组为2.5mldpph溶液加上1.8ml去离子水代替样品，在517nm波长处测定其吸光度（a3），并以等体积去离子水和95%乙醇混合液空白调零。按以下公式计算dpph自由基清除率：dpph自由基清除率/%=（a3-（a1-a2））/a3；表1dpph自由基清除率%实施例192.45实施例293.21实施例392.88对比例188.16对比例282.27由表1可以看出，本发明制备的黄鳝鱼骨多肽dpph自由基清除率更高，抗氧化性更好。当前第1页12