本发明涉及水产养殖领域，尤其是涉及一种用于太平洋纺锤水蚤无节幼体营养强化的饵料配方。技术背景桡足类，隶属于节肢动物门、甲壳纲、桡足亚纲，为小型甲壳动物，体长<3mm，营浮游与寄生生活，分布于海洋、淡水或半咸水中。因其是大多数鱼类幼体的开口饵料之一，故在水生态系统食物网和水产养殖中具有重要意义。太平洋纺锤水蚤隶属于桡足纲、哲水蚤目、纺锤水蚤科、纺锤水蚤属，广泛分布于我国沿海、日本沿海、太平洋和印度洋。桡足类作为极佳的鱼、虾幼苗开口的生物饵料，可使鱼虾的生长和存活率提高，也可以用于培养很多难以培养的经济水产生物，如红鲷、天使鱼、海马等。然而，桡足类在大规模世代培养上有诸多困难，尤其是桡足类的休眠卵能随时孵化出无节幼体供育苗使用，而太平洋纺锤水蚤实验室扩繁的瓶颈为无节幼体的成活率低下，使它们在海洋养殖业中受到了极大的限制，因此该无节幼体营养强化的饵料配方是一个亟待解决的难题。单胞藻是单细胞的浮游藻类，能够光合作用自行制造有机养料，藻类不仅大小合适能被摄食，更重要的能在幼虫体内被消化吸收，并含有丰富的营养，有助于幼虫的生长发育，由于种类繁多和其浮游特性成为浮游动物的觅食对象，经过营养搭配之后便是理想的浮游动物饵料。小球藻是球形单细胞淡水藻类，直径3～8微米，含有丰富的蛋白质、维生素、矿物质等丰富的生物活性物质，常作为浮游动物、鱼虾的开口饵料；球等鞭金藻是单细胞运动个体，呈椭圆形，含有丰富的dha、epa等不饱和脂肪酸、色素、海藻多糖和有益的微量元素等营养物质，且易消化吸收，安全无毒；三角褐指藻中含有大量的不饱和脂肪酸、亚麻酸、亚油酸、油酸等，还富含磷脂化合物，如磷脂酰胆碱等；亚心形扁藻，因其油脂和淀粉含量高，是水产动物育苗过程中常用的优质饵料。单胞藻的单细胞浮游特性和营养丰富的特点，使得它们成为太平洋纺锤水蚤尤其是无节幼体期的最主要的饵料，充分承担了无节幼体期的营养供应的任务。由于多种单胞藻混合投喂太平洋纺锤水蚤无节幼体，但是藻类的培养受温度、光照等因素影响显著，往往生长不充足，不能满足幼体对营养的需求，导致幼体变态率低下、发育畸形和死亡率高等，因此，可利用多种微藻配合酵母细胞的饵料配方模式来培养太平洋纺锤水蚤无节幼体。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种用于太平洋纺锤水蚤无节幼体营养强化的饵料配方，该饵料配方能满足水蚤无节幼体营养强化和高存活率的需要，能提高浮游动物的免疫力和抗应激能力，且具有更高活性的菌种和更多的增益性代谢产物。本发明针对
背景技术：
：中提到的问题，采取的技术方案为：本发明中所用菌种购自北海群林生物工程有限公司。一种用于太平洋纺锤水蚤无节幼体营养强化的饵料配方，该饵料配方中含有海洋红酵母母液，海洋红酵母母液是由海洋红酵母菌经活化培养、扩繁培养和发酵培养制得的。海洋酵母蛋白含量高，一般为细胞干重的30～50％，且含有贝类、甲壳类所需的10种必须氨基酸，还含有生长中产生的消化酶类、维生素、矿物质、促生长因子以及酵母多糖，这些成分能提高浮游生物的消化吸收率，增加其对饵料的利用率，还能刺激机体免疫应答，提高其免疫抗病能力，海洋红酵母还可以作为有机体的腐生菌，通过分泌消化酶类物质，对水体中的有机质进行腐化，达到净化水质、改善养殖环境的功能。作为优选，海洋红酵母培养母液的制备步骤如下：活化培养：将冷藏中的菌种接种在斜面培养基上，在25～35℃的条件下培养45～50h后，即可得活化菌种，备用，菌种的保存通常是在低温或冷冻的条件下，低温保存的菌种处于休眠或活跃度较低的状态，因此使用前就得先进行活化操作，才能获得活力旺盛的、接种数量足够的菌种进行扩大培养；扩繁培养：将活化菌种接种到液体培养基上，在温度为25～35℃、转速为150～200r/min的条件下培养45～50h，得到一级种子，然后将一级种子按7～11％的接种量接种到液体培养基上，在温度为25～35℃、转速为150～200r/min的条件下培养24～32h，培养过程中将无菌空气通入培养基进行深层充气，通气量为150～200m3/h，可得到二级种子，备用，进行菌种种子的多级培养可以获得更高的菌种底物浓度，使微生物更快的生长，而且也使菌种逐步接近和适应发酵培养的培养条件，便于菌种在发酵罐中的生长，有效减少生产成本；发酵培养：将二级种子按8～12％的接种量接种到发酵罐中，在温度为25～35℃、搅拌速率为150～200r/min的条件下培养36～48h，罐压为0.05～0.08mpa，并将无菌空气通入液体培养基进行深层充气，通气量为150～200m3/h，期间发别在发酵开始12h和24h后补加液体培养基，发酵完成即得海洋红酵母母液，海洋红酵母为椭圆形的红色单细胞，约为4～6μm，悬浮性好，在海水中分散均匀、不易沉淀，营养全面，适口性好，富含虾青素、葡聚糖和甘露寡糖等活性成分，安全无毒，能显著提高水产动物幼苗存活率，提高饲料利用率，增强动物体免疫力及肉质品质，并可减少抗生素用量，还能净化水体，不污染水体，是幼体培育中最佳的活性饵料。进一步优选，海洋红酵母母液制备所用培养基中包含以下重量份的原料：葡萄糖4～6份、蛋白胨3～5份、酵母粉2～3份、硫酸镁0.8～1.2份、磷酸二氢钾0.9～1.5份、洁净海水55～60份、透明质酸0.07～0.09份、β-环糊精0.13～0.18份。根据海洋酵母的生长繁殖特性，其培养基必须含有碳源、氮源、无机盐、生长因子和水等，上述透明质酸利用自身带有的负电荷和特殊的螺旋柱状结构，与培养基中的其他成分之间具有较强亲和力，待接种后能快速填充在菌种与培养基之间，并稳定菌种与培养基之间的结构，破坏掉发酵液中分子之间的黏度，使得菌种能更迅速地溶于培养基中，提高菌种的分散度，进而加快菌种的生长速率，而β-环糊精则将菌种生长过程中产生的疏水性的代谢产物如β-胡萝卜素等包裹在其内部疏水性空腔里，并利用自身筒状结构外侧羟基的亲水性，使得疏水性代谢产物快速分散于水中，从而减小了菌种周围的产物浓度，降低了产物对菌种生长的抑制作用，使得菌种生长活性增长，有效增加了菌种的生长繁殖的数量和浓度，并使菌种的代谢产物也增加，进而使得饵料的营养强化效果有进一步增益。作为优选，饵料配方中含有的原料及其重量份如下：小球藻母液1～3份、球等鞭金藻母液2～7份、三角褐指藻母液12～17份、亚心形扁藻母液3～6份、海洋红酵母母液1～3份。所制饵料营养丰富全面，能满足太平洋纺锤水蚤无节幼体营养强化的需要，且适口性好，诱食性优良，海洋红酵母的加入避免了藻类的营养不足和营养缺乏，使得无节幼体的生长加快，兼顾浮游动物的消化生理和营养生理，还能够提高浮游动物的免疫力和抗应激能力，提高其对病害的抵抗力，促进浮游动物的生长发育和新陈代谢，净化水质的效果显著而持久，从而提高浮游动物在无节幼体期的营养强化效果和成活率。进一步优选，海洋红酵母母液浓度为4.5×108～5.5×108cells/ml，小球藻母液、球等鞭金藻母液、三角褐指藻母液、亚心形扁藻母液的浓度均为1×108～2×108cells/ml。微藻中丰富而均衡的营养成分(蛋白、脂肪酸、碳水化合物)和各种生物活性物质(维生素、甾醇等)，可满足浮游动物在幼体期正常生长发育的营养需求，合理利用混合微藻比单一微藻效果更好，鲜活的微藻比非活性微藻饵料更适于幼体生长，具有促进幼体生长发育、提高生长速度及体长和体重等各项性状指标、提高免疫力等综合作用。作为优选，一种用于太平洋纺锤水蚤无节幼体营养强化的饵料配方，该饵料与含浮游幼虫的养殖海水的重量比为1:900～1100。进一步优选，含浮游幼虫的养殖海水中太平洋纺锤水蚤无节幼体的密度为80～120个/ml海水。与现有技术相比，本发明的优点在于：1)本发明中提供的饵料配方中添加的海洋红酵母，不但能提高浮游生物的消化吸收率和饵料利用率，促进新陈代谢，净化养殖水体，还能有效抑制其它有害微生物的生长，起到生物防治的作用，提高动物免疫机能，降低抗生素的使用量，从而提高水产动物的生产性能和经济效益；2)本发明中海洋红酵母母液的培养方法工艺简单，操作方便且具有连续性，原料消耗少，成本低廉，培养基营养供应稳定、持久，促进了微生物菌种数量和浓度持续、快速地增长，获得更高活性的菌种和代谢产物，使得饵料中营养物质更加富集，达到进一步强化增益的效果；3)本发明中提供的饵料配方营养全面，容易消化，且适口性好，诱食摄食效果优良，使得浮游幼虫生长发育和新陈代谢加快，还能够提高浮游动物的免疫力和抗应激能力，提高其对病害的抵抗力，且具有显著而持久的净化水质的效果。具体实施方式下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：实施例1：一种用于太平洋纺锤水蚤无节幼体营养强化的饵料配方，该饵料配方中含有海洋红酵母母液，海洋红酵母母液是由海洋红酵母菌经活化培养、扩繁培养和发酵培养制得的。海洋酵母蛋白含量高，一般为细胞干重的30～50％，且含有贝类、甲壳类所需的10种必须氨基酸，还含有生长中产生的消化酶类、维生素、矿物质、促生长因子以及酵母多糖，这些成分能提高浮游生物的消化吸收率，增加其对饵料的利用率，还能刺激机体免疫应答，提高其免疫抗病能力，海洋红酵母还可以作为有机体的腐生菌，通过分泌消化酶类物质，对水体中的有机质进行腐化，达到净化水质、改善养殖环境的功能。海洋红酵母培养母液的制备步骤如下：1)活化培养：将冷藏中的菌种接种在斜面培养基上，在28℃的条件下培养45h后，即可得活化菌种，备用，菌种的保存通常是在低温或冷冻的条件下，低温保存的菌种处于休眠或活跃度较低的状态，因此使用前就得先进行活化操作，才能获得活力旺盛的、接种数量足够的菌种进行扩大培养；2)扩繁培养：将活化菌种接种到液体培养基上，在温度为28℃、转速为150r/min的条件下培养45h，得到一级种子，然后将一级种子按8％的接种量接种到液体培养基上，在温度为28℃、转速为150r/min的条件下培养24h，培养过程中将无菌空气通入培养基进行深层充气，通气量为150m3/h，可得到二级种子，备用，进行菌种种子的多级培养可以获得更高的菌种底物浓度，使微生物更快的生长，而且也使菌种逐步接近和适应发酵培养的培养条件，便于菌种在发酵罐中的生长，有效减少生产成本；3)发酵培养：将二级种子按8％的接种量接种到发酵罐中，在温度为28℃、搅拌速率为150r/min的条件下培养36h，罐压为0.05mpa，并将无菌空气通入液体培养基进行深层充气，通气量为150m3/h，期间发别在发酵开始12h和24h后补加液体培养基，发酵完成即得海洋红酵母母液，海洋红酵母为椭圆形的红色单细胞，约为4～6μm，悬浮性好，在海水中分散均匀、不易沉淀，营养全面，适口性好，富含虾青素、葡聚糖和甘露寡糖等活性成分，安全无毒，能显著提高水产动物幼苗存活率，提高饲料利用率，增强动物体免疫力及肉质品质，并可减少抗生素用量，还能净化水体，不污染水体，是幼体培育中最佳的活性饵料。海洋红酵母母液制备所用培养基中包含以下重量份的原料：葡萄糖4份、蛋白胨3份、酵母粉2份、硫酸镁0.8份、磷酸二氢钾1.0份、洁净海水55份、透明质酸0.07份、β-环糊精0.13份。根据海洋酵母的生长繁殖特性，其培养基必须含有碳源、氮源、无机盐、生长因子和水等，上述透明质酸利用自身带有的负电荷和特殊的螺旋柱状结构，与培养基中的其他成分之间具有较强亲和力，待接种后能快速填充在菌种与培养基之间，并稳定菌种与培养基之间的结构，破坏掉发酵液中分子之间的黏度，使得菌种能更迅速地溶于培养基中，提高菌种的分散度，进而加快菌种的生长速率，而β-环糊精则将菌种生长过程中产生的疏水性的代谢产物如β-胡萝卜素等包裹在其内部疏水性空腔里，并利用自身筒状结构外侧羟基的亲水性，使得疏水性代谢产物快速分散于水中，从而减小了菌种周围的产物浓度，降低了产物对菌种生长的抑制作用，使得菌种生长活性增长，有效增加了菌种的生长繁殖的数量和浓度，并使菌种的代谢产物也增加，进而使得饵料的营养强化效果有进一步增益。饵料配方中含有的原料及其重量份如下：小球藻母液1份、球等鞭金藻母液3份、三角褐指藻母液12份、亚心形扁藻母液3份、海洋红酵母母液1份。所制饵料营养丰富全面，能满足太平洋纺锤水蚤无节幼体营养强化的需要，且适口性好，诱食性优良，海洋红酵母的加入避免了藻类的营养不足和营养缺乏，使得无节幼体的生长加快，兼顾浮游动物的消化生理和营养生理，还能够提高浮游动物的免疫力和抗应激能力，提高其对病害的抵抗力，促进浮游动物的生长发育和新陈代谢，净化水质的效果显著而持久，从而提高浮游动物在无节幼体期的营养强化效果和成活率。海洋红酵母母液浓度为4.5×108cells/ml，小球藻母液、球等鞭金藻母液、三角褐指藻母液、亚心形扁藻母液的浓度均为1.5×108cells/ml。微藻中丰富而均衡的营养成分(蛋白、脂肪酸、碳水化合物)和各种生物活性物质(维生素、甾醇等)，可满足浮游动物在幼体期正常生长发育的营养需求，合理利用混合微藻比单一微藻效果更好，鲜活的微藻比非活性微藻饵料更适于幼体生长，具有促进幼体生长发育、提高生长速度及体长和体重等各项性状指标、提高免疫力等综合作用。实施例2：一种用于太平洋纺锤水蚤无节幼体营养强化的饵料配方，该饵料配方中含有海洋红酵母母液，海洋红酵母母液是由海洋红酵母菌经活化培养、扩繁培养和发酵培养制得的。海洋红酵母培养母液的制备步骤如下：1)活化培养：将冷藏中的菌种接种在斜面培养基上，在33℃的条件下培养50h后，即可得活化菌种，备用；2)扩繁培养：将活化菌种接种到液体培养基上，在温度为33℃、转速为180r/min的条件下培养50h，得到一级种子，然后将一级种子按11％的接种量接种到液体培养基上，在温度为33℃、转速为180r/min的条件下培养28h，培养过程中将无菌空气通入培养基进行深层充气，通气量为200m3/h，可得到二级种子，备用；3)发酵培养：将二级种子按11％的接种量接种到发酵罐中，在温度为33℃、搅拌速率为180r/min的条件下培养42h，罐压为0.07mpa，并将无菌空气通入液体培养基进行深层充气，通气量为200m3/h，期间发别在发酵开始12h和24h后补加液体培养基，发酵完成即得海洋红酵母母液。海洋红酵母母液制备所用培养基中包含以下重量份的原料：葡萄糖6份、蛋白胨4份、酵母粉3份、硫酸镁1.0份、磷酸二氢钾1.2份、洁净海水58份、透明质酸0.09份、β-环糊精0.15份。饵料配方中含有的原料及其重量份如下：小球藻母液2份、球等鞭金藻母液5份、三角褐指藻母液16份、亚心形扁藻母液5份、海洋红酵母母液3份。上述海洋红酵母母液浓度为5.5×108cells/ml，小球藻母液、球等鞭金藻母液、三角褐指藻母液、亚心形扁藻母液的浓度均为2×108cells/ml。实施例3：一种用于太平洋纺锤水蚤无节幼体营养强化的饵料配方，该饵料配方中含有海洋红酵母母液，海洋红酵母母液是由海洋红酵母菌经活化培养、扩繁培养和发酵培养制得的。海洋红酵母培养母液的制备步骤如下：1)活化培养：将冷藏中的菌种接种在斜面培养基上，在30℃的条件下培养48h后，即可得活化菌种，备用；2)扩繁培养：将活化菌种接种到液体培养基上，在温度为30℃、转速为200r/min的条件下培养48h，得到一级种子，然后将一级种子按10％的接种量接种到液体培养基上，在温度为30℃、转速为200r/min的条件下培养30h，培养过程中将无菌空气通入培养基进行深层充气，通气量为180m3/h，可得到二级种子，备用；3)发酵培养：将二级种子按10％的接种量接种到发酵罐中，在温度为30℃、搅拌速率为200r/min的条件下培养48h，罐压为0.08mpa，并将无菌空气通入液体培养基进行深层充气，通气量为180m3/h，期间发别在发酵开始12h和24h后补加液体培养基，发酵完成即得海洋红酵母母液。海洋红酵母母液制备所用培养基中包含以下重量份的原料：葡萄糖5份、蛋白胨5份、酵母粉2份、硫酸镁1.1份、磷酸二氢钾1.4份、洁净海水60份、透明质酸0.08份、β-环糊精0.16份。饵料配方中含有的原料及其重量份如下：小球藻母液1份、球等鞭金藻母液6份、三角褐指藻母液15份、亚心形扁藻母液3份、海洋红酵母母液1份。上述海洋红酵母母液浓度为5×108cells/ml，小球藻母液、球等鞭金藻母液、三角褐指藻母液、亚心形扁藻母液的浓度均为1×108cells/ml。实施例4：一种用于太平洋纺锤水蚤无节幼体营养强化的饵料配方，该饵料配方中含有海洋红酵母母液，海洋红酵母母液是由海洋红酵母菌经活化培养、扩繁培养和发酵培养制得的。海洋红酵母培养母液的制备步骤如下：1)活化培养：将冷藏中的菌种接种在斜面培养基上，在30℃的条件下培养48h后，即可得活化菌种，备用；2)扩繁培养：将活化菌种接种到液体培养基上，在温度为30℃、转速为200r/min的条件下培养48h，得到一级种子，然后将一级种子按10％的接种量接种到液体培养基上，在温度为30℃、转速为200r/min的条件下培养30h，培养过程中将无菌空气通入培养基进行深层充气，通气量为180m3/h，可得到二级种子，备用；3)发酵培养：将二级种子按10％的接种量接种到发酵罐中，在温度为30℃、搅拌速率为200r/min的条件下培养48h，罐压为0.08mpa，并将无菌空气通入液体培养基进行深层充气，通气量为180m3/h，期间发别在发酵开始12h和24h后补加液体培养基，发酵完成即得海洋红酵母母液，上述发酵24h后进行培养基补充时，还添加有占酵母粉重量分别为0.06％的油酸甘油酯和0.07％的丁酸钠，此时菌种生长接近稳定期，加入油酸甘油酯和丁酸钠可以利用官能团的电子效应，以非离子的形态与发酵液中的多种含有正电荷的物质相粘合，降低了因菌种表面的负电荷而吸附在其周围的正离子浓度，破坏菌种表面形成的双电层结构，使得发酵液的粘度降低，富集的代谢产物在充气的辅助下，能在新添加的培养基中进一步扩散，从而降低发酵体系中二氧化碳、泡沫和代谢产物富集等对菌种生长的抑制作用，增加体系的稳定性和物质相容性，进而延长菌种的生长期和稳定期，获得更具活性的菌种和更多的高活性代谢产物，进而使饵料中的营养物质更加富集，达到强化增益效果。实施例5：一种用于太平洋纺锤水蚤无节幼体营养强化的饵料配方，该饵料配方中含有海洋红酵母母液，海洋红酵母母液是由海洋红酵母菌经活化培养、扩繁培养和发酵培养制得的。海洋红酵母培养母液的制备步骤如下：1)活化培养：将冷藏中的菌种接种在斜面培养基上，在30℃的条件下培养48h后，即可得活化菌种，备用；2)扩繁培养：将活化菌种接种到液体培养基上，在温度为30℃、转速为200r/min的条件下培养48h，得到一级种子，然后将一级种子按10％的接种量接种到液体培养基上，在温度为30℃、转速为200r/min的条件下培养30h，培养过程中将无菌空气通入培养基进行深层充气，通气量为180m3/h，可得到二级种子，备用；3)发酵培养：将二级种子按10％的接种量接种到发酵罐中，在温度为30℃、搅拌速率为200r/min的条件下培养48h，罐压为0.08mpa，并将无菌空气通入液体培养基进行深层充气，通气量为180m3/h，期间发别在发酵开始12h和24h后补加液体培养基，发酵完成即得海洋红酵母母液。海洋红酵母母液制备所用培养基中包含以下重量份的原料：葡萄糖5份、蛋白胨5份、酵母粉2份、硫酸镁1.1份、磷酸二氢钾1.4份、洁净海水60份。所制饵料配方与实施例3相同，以此培养浮游幼虫。实施例6：太平洋纺锤水蚤无节幼体生长性能测试统一选取刚孵化出的无节幼体，分别随机放置在6个培育池中，每个培育池中有1000重量份含浮游幼虫的养殖海水，初始投放于养殖海水中的太平洋纺锤水蚤无节幼体的密度为100个/ml海水。在培育期间，各培育池中水温、盐度保持一致，每日投饵2次，将实施例1～5所制饵料分别投喂1～5号培育池作为试验组，将某市售海洋红酵母浓缩液与小球藻母液、球等鞭金藻母液、三角褐指藻母液和亚心形扁藻母液配制而成的饵料投喂6号培育池作为对照组，期间不施用抗生素，待无节幼体经饵料强化15d后，试验结束，统计实验结果如下。表1不同饵料配方对纺锤水蚤无节幼体生长性能的影响存活率％种群密度培育池182.869培育池283.168培育池385.975培育池485.675培育池581.870培育池680.365由试验结果可知，试验组中培育池3和4号的存活率和种群密度都优于其他组，也明显优于对照组，培育池3和4号的存活率平均比培育池5号高出4.8％，比对照组高出6.8％，而种群密度则平均比培育池5号高出7.8％，比对照组高出15.3％，说明实施例中所制饵料，尤其是实施例3和4所制饵料，使得培育池3和4号中的纺锤水蚤无节幼体在发育期间摄入的营养更充足全面，饵料的吸收消化也明显优于其他组，因此在无节幼体发育过程中，营养得到强化，最终使得其生长发育良好，存活率大大增加，种群密度明显优于对照组。本发明操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12