蛹虫草提取物的制备方法、功能性食品与流程

文档序号:17119992发布日期:2019-03-15 23:42阅读:477来源:国知局

本发明涉及农产品加工领域,具体而言,涉及一种蛹虫草提取物的制备方法、功能性食品。



背景技术:

蛹虫草(cordycepsmilitarisl.link)又称蛹草、北虫草、北冬虫夏草。其与冬虫夏草同属异种,是一种药食两用真菌具有丰富的营养价值和药用价值。现代药理学研究证实:蛹虫草具有抗菌、抗炎、抗肿瘤、抗疲劳、抗糖尿病和提高机体免疫力等多种药理活性。其药用和食用价值可与冬虫夏草相媲美,因此现在普遍采用人工栽培的蛹虫草来替代天然的冬虫夏草。

蛹虫草中含有腺苷、虫草素、虫草酸、多糖等多种生物活性成分。

其中,腺苷对心血管系统和肌体的许多其它系统及组织均有生理作用,也是2015版《中国药典》中检验冬虫夏草中的指标性成分。

虫草素又被称为虫草菌素、蛹虫草素、3'-脱氧腺苷。研究者对虫草素在抗炎及调节免疫、抗肿瘤、降糖降脂、抗病原微生物、抗衰老及神经保护等方面开展了大量研究,并取得了突破性进展。

虫草酸能抑制各种病菌的成长,可预防与治疗脑血栓、脑出血、心肌梗塞、长期衰竭。

因此,从蛹虫草中将各种物质进行高效提取是很有必要的。然而,目前的一些提取方法中多强调对单一组分的高提取率,而对于蛹虫草中多组分的同时提取手段却研究甚少。



技术实现要素:

基于现有技术的不足,本发明提供了一种蛹虫草提取物的制备方法、功能性食品,以部分或全部地改善、甚至解决以上问题。

本发明是这样实现的:

在第一方面,本发明的示例提供了一种蛹虫草提取物的制备方法。

示例中所提供的制备方法所针对的提取物包括由蛹虫草产生的第一目标物质和第二目标物质。换言之,提取方法用于从蛹虫草中提取目标物质。

制备方法包括:

提供待提取物,待提取物通过蛹虫草进行浸提获得,浸提包括水提蛹虫草以获得水提液;

采用微孔树脂对水提液执行第一洗脱操作、在第一洗脱操作之后进行的第二洗脱操作;其中,第一洗脱操作包括水洗并收集第一洗脱液,对第一洗脱液进行醇沉产生以沉淀物的形式析出并经固液分离获得的第一目标物质;其中,第二洗脱操作包括醇洗并收集具有第二目标物质的第二洗脱液;

通过液相色谱的方式对第二洗脱液执行分离操作以获得第二目标物质,可选地对第二目标物质进行结晶或重结晶。

通过利用水提法将蛹虫草中的代谢产物分离,然后再结合微孔树脂与液相色谱联用进行纯化,可将代谢产物中的多糖蛋白等大分子与小分了成分分离,起到为蛹虫草次生代谢产物除杂的作用。应用此方法可以有效锁定目标代谢产物,直接快速有效分离,提高分离效率,降低分离成本,得到高纯度蛹虫草代谢产物纯品。

结合第一方面,在本发明的第一方面的第一种可能的实施方式的一些可选示例中,水提蛹虫草以获得水提液的方法包括:

对被粉碎为颗粒物的蛹虫草且分散在水中得到的分散液进行加热。

水提是通过溶剂提取固体原料中某一或某类成分的提取分离操作,或称固液萃取。其中,溶剂被选择采用为水。即用水作溶剂,将药材(蛹虫草)加热一定的时间以提取其所含成分。水提具有溶剂价格成本可控,原料环保的优势。

通过将蛹虫草粉碎为颗粒物,更易于其浸透于水中,从而使目标中的物质更易于进入水中,有利于提高蛹虫草的利用率,减少目标物质的损失,提高目标物质的得率。

结合第一种可能的实施方式,在本发明的第一方面的第二种可能的实施方式的一些可选示例中,分散液的料液比为1千克/5~50升,通过加热分散液的温度达到50~85℃。

可选地,每次提取时间为1~3小时,提取次数为1~3次。

由于浸提过程中涉及到固液传质过程,主要是涉及目标物质从固体的蛹虫草中转移至液相水中的传质过程,且其包括湿润、渗透、解吸、溶解及扩散等阶段。而在示例中,温度和料液比能够在相对更大的程度上对目标物质的浸出起到相当的影响。

结合第一方面,在本发明的第一方面的第三种可能的实施方式的一些可选示例中,采用微孔树脂对水提液执行第一洗脱操作、在第一洗脱操作之后进行的第二洗脱操作的过程中,水提液的上样量是微孔树脂体积的3~6倍,上样吸附时间30~120分钟。

由于蛹虫草中含有多种代谢物质,通过微孔树脂可以较好(更彻底)地去除固体杂质。另外,为了排除其他的杂质,通过分步进行洗脱的方式,并对应收集相应的洗脱液,以便能够获得目标物质。进一步地,通过对上样量和吸附时间的控制,可以获得更好的洗脱效率,避免目标物质的损失。

结合第一方面,在本发明的第一方面的第四种可能的实施方式的一些可选示例中,第一洗脱操作包括:在对第一洗脱液进行醇沉之前,浓缩第一洗脱液;

可选地,浓缩第一洗脱液的方法包括:减压蒸馏;

可选地,加压蒸馏条件包括:真空度0.06~0.09mpa、温度45~65℃;

可选地,第一目标物质包括蛹虫草多糖。

可选地,第一目标物质是海藻糖。

浓缩后,第一洗脱液中的第一目标物质的浓度/含量提高,更易于随后通过醇沉而析出,且可以减少损失,降低醇用量等。

结合第四种可能的实施方式,在本发明的第一方面的第五种可能的实施方式的一些可选示例中,对第一洗脱液进行醇沉产生以沉淀物的形式析出并经固液分离获得的第一目标物质的步骤中,醇沉的条件包括:采用用量为浓缩后的第一洗脱液的体积2~4倍的乙醇作为沉淀剂,沉淀时间24~48小时;

可选地,固液分离的方法包括离心;

可选地,固液分离获得第一目标物质经过干燥处理;

可选地,干燥处理包括冷冻干燥。

通过醇沉处理,第一目标物质沉淀而从液体中析出、分层。如此可以通过分液的方式获得第一目标物质。为了获得更好的收率,避免损失,通过离心的方式来收集析出的第一目标物质。

考虑到第一目标物质中存在液体的可能对其干燥,并且进一步通过冷冻干燥,可以避免加热干燥对目标物质的可能导致的损坏。

结合第一方面,在本发明的第一方面的第六种可能的实施方式的一些可选示例中,第二洗脱操作步骤中,醇洗采用的洗脱剂包括甲醇水溶液;

可选地,甲醇水溶液中甲醇的体积浓度为60%,洗脱条件包括:甲醇水溶液的用量为微孔树脂体积的2~7倍,流速1~2bv/h。

在利用微孔树脂分离纯化操作中,通过控制以上的洗脱条件能够以更高的效率获得更高纯度的目标物质,并减小损失。

结合第一方面,在本发明的第一方面的第七种可能的实施方式的一些可选示例中,通过液相色谱的方式对第二洗脱液执行分离操作之前,对第二洗脱液进行浓缩;

可选地,在第一洗脱步骤中,通过固液分离获得第一目标物后剩余的液体部分被合并入第二洗脱液中,且是在对第二洗脱液进行浓缩之前进行的。

浓缩处理可以减少溶剂,提高目标物质浓度,从而有利于后续的分离纯化操作。同时,鉴于在第一洗脱步骤中固液分离产生的液体(上清夜)中可能存在一定量的目标物质,将其并入第二洗脱液以便进行后续的液相色谱可提高收率、减少损失。

结合第一方面,在本发明的第一方面的第八种可能的实施方式的一些可选示例中,通过液相色谱的方式对第二洗脱液执行分离操作的条件包括:

流动相包括乙腈水溶液,色谱柱为反相色谱柱,优选为c8反相色谱柱;

更优选地,乙腈水溶液的中乙腈体积含量为2~5%,流速30~100ml/min,检测波长254nm;

可选地,第二目标物质包括虫草素、腺苷、虫草酸。

以上述条件进行色谱分离,可以将各目标物质以更高效率和纯度提取。

在第二方面,本发明实施例提供了一种功能性食品。

功能性食品包括上述的蛹虫草提取物的制备方法获得第一目标物质和/或第二目标物质。

有益效果:

本发明实施例提供的提取方法能够将蛹虫草中的更多种类的代谢产物一并提取,且提取率可以被较好地提高。通过将微孔树脂和液相色谱连用,可以更准确和高效地将蛹虫草中的多糖、蛋白与其他的杂质分离开,提高分离的产物的纯度和得率。并且,由于蛹虫草代谢产物活性高,可以应用于医药食品等相关领域,也可以直接作为保健品和功能食品的功能性食品,具有广阔的市场发展前景。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述,但是本领域技术人员将会理解,下列实施例仅用于说明本发明,而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者,按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市售购买获得的常规产品。

以下针对本发明实施例的蛹虫草提取物的制备方法、功能性食品进行具体说明:

由于蛹虫草的众多药学和医学方面的应用潜力,关于蛹虫草的研究报道较多。而其关键在于获得蛹虫草中的各种活性物质。相关技术中,对蛹虫草中的各种活性物质的提取主要是从其代谢产物获得的。

发明人确信:当前,蛹虫草活性物质的提取研究主要集中于对某一特定组分的获得。由于蛹虫草中各种活性物质的多样性,在更理想的条件下获得纯度高、收率高的单一组分是期望达到的。然而,基于实际的需要,我们希望能够以更好的方式对蛹虫草活性物质进行提取。其中一个主要的任务和难点在于,对蛹虫草中多种活性物质的同步提取和分离。

目前,发明人已知的一些手段并不能较好地实现以上任务和期望。有鉴于此,本发明示例中给出了一种对蛹虫草中多种活性物质的提取方法。

提取方法所要操作的对象是蛹虫草的代谢产物。并且,该提取物包括由蛹虫草产生的第一目标物质和第二目标物质。鉴于,蛹虫草的代谢产物的组分/成分的复杂性,通常可以根据需要选择适当的条件来控制所期望获得的物质。例如,将在后文被提及的蛹虫草多糖、虫草素、腺苷、虫草酸。其中,蛹虫草多糖为第一目标物质。虫草素、腺苷、虫草酸为第二目标物质。

应当理解的是,前述的第一目标物质可以是单一物质(如海藻糖),也可以是多种物质(如海藻糖和多缩戊糖,该多种物质通常可以是具有相同或相似性能—如水溶性、油溶性、极性等—的物质)。第二目标物质可以是单一物质(如虫草素),也可以是多种物质(如腺苷和虫草酸)。换言之,第一目标物质和第二目标物质均可以是单组分的物质,可以是多组分的组合物的物质。

制备方法包括:

步骤s101、提供待提取物。

待提取物是一种粗产品,且是从蛹虫草中获得。该待提取物包括第一目标产物和第二目标产物。

另外,前述的待提取物可以是预先制作的,也可以是现场直接制作获得。换言之,待提取物可以被作为原料直接购得或作为预制原料。

考虑到,蛹虫草中各种活性物质的稳定性,以及保存的难度和复杂性等方面考虑,可以根据实际的生产需要选择对待提取物的使用方式。

示例中,待提取物可以通过蛹虫草进行浸提获得。

其中,浸提包括水提蛹虫草以获得水提液。水提蛹虫草以获得水提液的方法包括:对被粉碎为颗粒物的蛹虫草且分散在水中得到的分散液进行加热。

为了便于进行处理,蛹虫草可以选择新收集的。当然,蛹虫草也可以采集干燥品。进一步,基于后续处理需要,将蛹虫草进行粉碎处理可以获得好的水提效果。粉碎的方法可以是通过粉碎机械进行如研磨、切割等方式进行(基于粒径均匀分布的需要,可以进行筛分,其中筛的目数为40~120目)。或者,在另一些示例中,通过低温辅助粉碎。即将蛹虫草采用低温介质进行冷却至冻结状态,然后在冻结状态下进行粉碎。应当注意的是,冻结过程中的温度不宜过低(如零下摄氏一百度以内即可),否则会造成部分的活性物质结构的破坏。

另外,由于蛹虫草包括虫体部分(子实体)和草体部分(菌丝体)。而蛹虫草的代谢产物在两者中的成分和分布可能存在差异,因此,通过将两者分别处理可能取得更好的期望产品纯度和得率。并且,由于将两者进行分别独立的提取操作,可以减少更多种的杂质的干扰,从而有利于目标物质的获得。

考虑到水中杂质可能引起的对分离、纯化的不利影响,水以较高的纯度被使用。一些示例中,水提可选择使用去离子水、纯净水、蒸馏水、反渗水、超纯水。

进一步地,通过对水提的用水量及温度的选择可以实现适当的提取效果。分散液的料液比为1千克/5~50升,通过加热分散液的温度达到50~85℃。料液比即是指的蛹虫草颗粒物与水之间的比例。即1千克蛹虫草颗粒物采用5~50升的水。

在其他的一些示例中,分散液的料液比也可以是1千克/12升,或1千克/16升,或1千克/21升,或1千克/25升,或1千克/30升,或1千克/37升,或1千克/46升。相似地,分散液的温度也可以是53℃,或56℃,或62℃,或67℃,或72℃,或79℃,或83℃。分散液的料液比和温度可以进行自由的选择配合,本发明不对其做具体限定。例如,分散液可以是料液比为1千克/21升、温度为82℃;或者,料液比为1千克/10升、温度为51℃。分散液也可以是料液比为1千克/48升、温度为80℃;或者,料液比为1千克/49升、温度为50℃。一些研究中,尝试通过超声波辅助提取,但是,由于超声波萃取常常会要求特定的超声波频率和强度(如功率),且往往只能针对相对单一组分的物质。对于需要对多组分进行提取时,超声波具体的选择和控制是一个有待考虑的问题。

一般地,温度增加可以对所期望提取获得目标物质在水中的溶解度提高是有益的。然而,温度太高也可能导致目标物质的发生不可逆的非期望转变。相似地,通过调整料液比(如增加用水比例)可以使分散液能够溶解更多的目标物质。当用水比例太高时可能对后续的纯化步骤带来不利。例如水难易在相对简单、容易实施的温和条件下被去除。

可选地,在本发明的其他示例中,可以对提取时间进行控制以便平衡提取效率和提成的彻底程度。例如,每次提取时间为1~3小时,提取次数为1~3次。

通过以上水提处理后,期望获得目标物质(第一目标物质和第二目标物质)相对较易且彻底地分散在水提液中。

步骤s102、采用微孔树脂对水提液进行分离纯化。

采用微孔树脂对水提液进行分离纯化的方法包括第一洗脱操作、在第一洗脱操作之后进行的第二洗脱操作。实质上,第一洗脱操作和第二洗脱操作是先后进行了,且在第一洗脱操作完成后再进行第二洗脱操作。换言之,在微孔树脂吸附水提液后,填柱,然后进行洗脱处理。在第一次洗脱操作处理后,再进行第二洗脱操作。微孔树脂可选择使用如下型号:ns4205、dac-hb50、dac-hb80、dac-hb100、dac-hb150、dac-hb200。

由于水提液和微孔树脂吸附的程度,对后续进行洗脱分离的效率和得率等方面存在影响,因此,可以对上样方式进行选择。例如,水提液的上样量是微孔树脂体积的3~6倍(也可以是4倍、5倍等),上样吸附时间30~120分钟(也可以是36分钟、42分钟、51分钟、67分钟、79分钟、88分钟等)。上样时,将微孔树脂与水提液混合,水提液则会被微孔树脂所吸附。

在上样完成之后,进行洗脱处理以将期望获得物质分离,以便收集以及可选地进行后续的纯化处理(如后续提及的液相色谱处理)。示例中,洗脱处理包括在以下部分将被提及的第一洗脱操作和第二洗脱操作。

其中,采用微孔树脂对水提液进行分离纯化中的第一洗脱操作包括水洗并收集第一洗脱液,对所述第一洗脱液进行醇沉产生以沉淀物的形式析出并经固液分离获得的所述第一目标物质。

在该第一洗脱操作步骤中,以水作为洗脱液(流动相)。以水为洗脱液可将一部分物质以溶解于洗脱液的方式获得,即第一洗脱液。第一洗脱液包括水以及第一目标物质或其他能够存在的少量杂质。通常地,第一洗脱液可以直接进行后续的醇沉处理。但是,为了提高醇沉的效率/收率/得率,可以在进行醇沉之间对第一洗脱液进行适当程度的浓缩。

浓缩第一洗脱液的方式可以有多种,本发明示例中,浓缩方式为减压蒸馏。减压蒸馏可以减低液体的沸点,以便在相对更低的温度下通过加热将液体蒸发去除,而不至于高温破坏活性物质的结构。示例中,加压蒸馏条件包括:真空度0.06~0.09mpa、温度45~65℃。在另一些可替代的示例中,真空度可以是0.07~0.08mpa、温度为50~61℃。

经过浓缩后,第一洗脱液中的液体(水)含量减少,可以促进目标物质(第一目标物质,如蛹虫草多糖;更具体而言,第一目标物质可以是海藻糖)的析出。随后通过醇沉可以更大量地使第一目标物质析出。由于不同的蛹虫草中活性物质在水、醇中的溶解性差异,且水与醇(如乙醇)具有相对较好的相容性,因此,当将醇加入到第一洗脱液中时,不同物质之间的溶解性差异导致部分的活性物质以沉淀的形式析出,而另一部分的活性物质则可以继续存在与水层中。

作为一种可替代的示例,在浓缩后进行的醇沉操作所采用的醇(乙醇,95%酒精)用量为第一洗脱液经浓缩后的体积的2~4倍,也可以是3倍。相对应地,醇沉的时间可以是24~48小时。如正前述,通过醇沉之后,第一洗脱液在外观上大致呈现分层的情况。如此,分别收集水层和沉淀层可以实现活性物质的分离。其中,液体层作为上清液(或称清液),且其中可能存在少量的第二目标物质。沉淀层作为固相,且其中具有大部分的第一目标物质。

分层后,可以通过如分液漏斗的方式将沉淀层和液体层分开。进一步地,示例中,选择通过离心的方式来进行固液分离。离心操作能够具有较高的固液分离效果,可以更好地减少液体中固体物质的含量,同时更好地减少固体中液体物质的含量。

更进一步地,由于第一目标物质主要存在于沉淀层(固相中),而其中可能存在不等量的液体,因此,为获得更纯的第一目标物质,可以选择对其进行干燥,以便去除可能存在的水和醇(如乙醇)。示例中,选择冷冻干燥的方式来除去液体。可以对固相进行干燥或脱水处理(其中可能混杂的醇—如乙醇—也可同时被去除)。可选地,冷冻干燥的条件包括真空度为0.06~0.09mpa,温度为45~65℃。冷冻干燥通过将有待干燥的物质在低于自然条件的于气压下进行适当的加热来实现液体的去除。通过减压,液体的沸点降低(更易受热而气化),从而可以在相对更低的温度通过加热而去除。如此,可以避免高沸点液体通过加热蒸发时所需的高温,进而避免活性物质受损。

在以上处理获得更纯的第一目标物质的同时,也可以进行第二洗脱操作。其中,采用微孔树脂对水提液进行分离纯化中的第二洗脱操作包括醇洗并收集具有所述第二目标物质的第二洗脱液。在该步骤中,醇洗的处理方式可以是采用包括甲醇水溶液(可以选择的甲醇水溶液是甲醇的体积浓度为60%)的洗脱剂来对吸附前述水提液(并通过第一洗脱操作分离了绝大部分的第一目标物质)进行冲洗。一种可替代的方案中,洗脱条件包括:甲醇水溶液的用量为微孔树脂体积的2~7倍(或者3倍、4倍、5倍等),流速1~2bv/h(或者,1.1bv/h,1.3bv/h,1.7bv/h,1.9bv/h)。

通过甲醇水溶液的洗脱处理,第二目标物质(可以是多种单一组分的物质的组合)进入到第二洗脱液中。显然,第二洗脱液中包括水和甲醇以及第二目标物质,因此,为了获得纯的第二目标物质,可以进行分离处理。如前文提及的,通过浓缩的方式可以提高后续分离处理的效率和效果。因此,可选地,对第二洗脱液执行分离操作之前,对第二洗脱液进行浓缩。

另外,由于在第一洗脱操作中,获得固体的第一目标物质(通过对固液分离中的固体处理而获得),但是,在其过程中的液体部分可能存在部分第二目标物质,为避免浪费,对其进行再利用。示例中,在第一洗脱步骤中,通过固液分离获得第一目标物后剩余的液体部分被合并入第二洗脱液中,且是在对第二洗脱液进行浓缩之前进行的(当然也可以是在对第二洗脱液进行浓缩之前进行,但是这可能会需要增加在并入后的再次浓缩处理)。

根据蛹虫草代谢产物的分析可以知晓,第二洗脱液主要为第二目标物质,且主要包括虫草素、腺苷、虫草酸。显然地,由于第二目标物质中的而各种组分的性质和功能存在相当程度的差异,并且在时间中也通常以单一的组分被分别使用,因此可以选择进行分别的提取。当然,为了获得相对更纯,且成分更单一的组分,也可以进行再分离、纯化。

步骤s103、第二洗脱液的分离处理纯化处理。

承上述,为了获得第二目标物质(当为多种组分时)中各单一成分的物质时,需要按照其组分进行适当的分离处理。示例中通过液相色谱的方式对含多组分的第二目标物质的第二洗脱液进行组分分离操作。

由于考虑到第二洗脱液中的溶剂(洗脱剂)的含量过多,会导致第二目标物质的浓度低,也不利于进行后续的液相色谱处理,可以选择先进行浓缩处理。即通过液相色谱的方式对第二洗脱液执行分离操作之前,对第二洗脱液进行浓缩。

经过浓缩后的第二洗脱液(或称浓缩液)中第二目标物质的浓度增加,且溶剂(第二洗脱操作中的洗脱剂)减少。通过液相色谱的方式对第二洗脱液执行分离操作的条件包括:流动相包括乙腈水溶液,色谱柱为反相色谱柱(如c8反相色谱柱)。c18反相色谱柱(具体型号例如dubhec18、hederac18、megresc18、benetnachc18、phecdac18、xmidec18、xchargec18,odsc18等)。液相色谱的操作条件可以是:流动相的流速为30~100ml/min,检测波长为254nm,流动相为乙腈水溶液,且乙腈的体积含量为95~98%。

通过液相色谱可以将各中活性物质进行较清晰和明确的区分,以便获得各种纯度较高且组分相对单一(期望提取的目标物质的含量较高)的物至。在液相色谱中获得物质是不同的液体混合物。液体混合物包括流动相和溶解于流动相中的对应一种或多种物质。

其中,经液相色谱处理后,第二洗脱液(如前述的多个液体混合物)获得第二目标产物各种纯度较高的单一组分的物质(如虫草素、腺苷、虫草酸)。显然地,通过液相色谱处理获得前述各种单一组分的物质也是以液体的方式被获得的(即任意的单一组分溶解于液相色谱的流动相构成)。为了某一特定的物质从液体中被获得。可选地,使该期望获得的物质从液体中脱离。可选地,脱离组分和液体的方法包括结晶以及可选的重结晶或蒸发等。结晶可以通过对温度的选择来实现,由于不同物质在某一液体(可以是混合物)中的溶解度是与温度相关联的。因此,将第三液体部分物质置于不同的温度下使其通过溶解、结晶方式可以获得更高纯度的物质。

以上所提及的活性物质主要是指蛹虫草中各种具有生物医药学活性的物质,如腺苷、虫草素、虫草酸、多糖等。

经过实验验证,利用上述提供的提取方法,微孔树脂与高效液相制备色谱联用分离纯化后利用水提醇沉法可将提取液中的多糖蛋白等大分子与小分了成分分离,起到为蛹虫草次生代谢产物除杂的作用。应用此方法可以有效锁定目标代谢产物,直接快速有效分离,提高分离效率,降低分离成本,得到高纯度蛹虫草次生代谢产物纯品。产品蛹虫草次生代谢产物活性高,可以应用于医药食品等相关领域,也可以直接作为保健品和功能食品的添加剂,具有广阔的市场发展前景。

在一些可替代的具体示例中,制备方法具有以下优点:

1.采用水提法提取蛹虫草中有效代谢产物,最大限度地保持了蛹虫草中有效代谢产物的生物活性和提取率,总提取率达到90%以上。

2.利用微孔树脂分离纯化后可分离提取物中的多糖和蛋白成分,同时又对水洗脱部分进行了回收,提高了次生代谢产物的提取率。分离纯化后,蛹虫草多糖得率46.6%,含量可达50%,次生代谢产物得率14.8%,虫草素,腺苷,虫草酸,海藻糖的含量均可达到98%以上。

3.高效液相制备色谱锁定目标代谢产物准确,与传统分离技术相比,大幅度可以降低了分离难度,提高了分离效率,降低了分离成本,节省了分离时间。

4.本发明工艺简单、重复性好、质量稳定可控。

5.蛹虫草代谢产物可以应用于医药科研食品等相关领域,也可以直接作为保健品和功能食品的添加剂,具有广阔的市场发展前景。

据发明人所知,蛹虫草代谢产物具有多种药理活性,具有潜在和巨大的药用和食用价值。有鉴于此,现有的蛹虫草提取物通过直接服用的方式来使用,本发明的示例中,提供了基于上述的提取自蛹虫草的提取物主要包括代谢产物的功能性食品。这样的功能性食品的成分可根据需要调整。换言之,功能性食品包括第一目标物质。或者,功能性食品包括第二目标物质。或者,功能性食品包括第一目标物质和第二目标物质。

功能性食品可以作为粉剂或颗粒剂等方式被制备和使用。

以下结合实施例对本发明的蛹虫草提取物的制备方法、功能性食品作进一步的详细描述。

实施例1

(1)蛹虫草中代谢产物的提取:蛹虫草原料2kg粉碎,过40目筛,然后加入去离子水提取,再将提取液过滤,制得蛹虫草代谢产物提取液;提取条件为料液比为1kg:5l、温度为50℃、提取时间为1、提取次数为1次。

(2)蛹虫草中代谢产物的分离:

将蛹虫草代谢产物提取液上mci微孔树脂柱,上样液量为3倍树脂柱体积;吸附30分钟,然后用去离子水洗脱,收集洗脱液。用旋转蒸发器在温度60℃下减压浓缩洗脱液得水提浓缩液,将水为洗脱剂浓缩部分加入其3倍量95%的乙醇,沉淀24h,离心,收集上清液。将离心部分冷冻干燥,得蛹虫草多糖提取物。

再用60%甲醇水溶液为洗脱剂洗脱树脂柱,洗脱液为2倍树脂柱体积,流速1bv/h,收集洗脱液。洗脱液与水洗部分醇沉后的上清液合并,浓缩,得次生代谢产物浓缩液。减压干燥条件均是指真空度为0.06mpa,温度为45℃。

(3)蛹虫草中代谢产物的纯化:

将上述次生代谢产物浓缩液,上制备液相色谱(dac-hb50),收集各次生代谢产物馏分,结晶与重结晶。制备色相色谱条件是乙腈:水(2%:98%),流速30ml/min,检测波长254nm,色谱柱为c18反相色谱柱(megresc18)。结晶与重结晶溶剂为乙醇、水。

蛹虫草多糖得率46.6%,含量50.40%,次生代谢产物得率14.80%,虫草素,腺苷,虫草酸,海藻糖的含量均可达到98%以上。

实施例2

(1)蛹虫草中代谢产物的提取:蛹虫草原料4kg粉碎,过120目筛,然后加入去离子水提取,再将提取液过滤,制得蛹虫草代谢产物提取液;提取条件为料液比为1kg:50l、温度为85℃、提取时间为3h、提取次数为3次。

(2)蛹虫草中代谢产物的分离:

将蛹虫草代谢产物提取液上mci微孔树脂柱,上样液量为6倍树脂柱体积;吸附30-120分钟,然后用去离子水洗脱,收集洗脱液。用旋转蒸发器在温度60℃下减压浓缩洗脱液得水提浓缩液,将水为洗脱剂浓缩部分加入其3倍量95%的乙醇,沉淀48h,离心,收集上清液。将离心部分冷冻干燥,得蛹虫草多糖提取物。

再用60%甲醇水溶液为洗脱剂洗脱树脂柱,洗脱液为7倍树脂柱体积,流速2bv/h,收集洗脱液。洗脱液与水洗部分醇沉后的上清液合并,浓缩,得次生代谢产物浓缩液。减压干燥条件均是指真空度为0.09mpa,温度为45~65℃。

(3)蛹虫草中代谢产物的纯化:

将上述次生代谢产物浓缩液,上制备液相色谱(dac-hb80),收集各次生代谢产物馏分,结晶与重结晶。制备色相色谱条件是乙腈:水(5%:95%),流速100ml/min,检测波长254nm,色谱柱为c18反相色谱柱(dubhec18)。结晶与重结晶溶剂为乙醇,甲醇,水。

蛹虫草多糖得率45.9%,含量51.82%,次生代谢产物得率15.39%,虫草素,腺苷,虫草酸,海藻糖的含量均可达到98%以上。

实施例3

(1)蛹虫草中代谢产物的提取:蛹虫草原料10kg粉碎,过60目筛,然后加入去离子水提取,再将提取液过滤,制得蛹虫草代谢产物提取液;提取条件为料液比为1kg:20l、温度为75℃、提取时间为2h、提取次数为2次。

(2)蛹虫草中代谢产物的分离:

将蛹虫草代谢产物提取液上mci微孔树脂柱,上样液量为5倍树脂柱体积;吸附60分钟,然后用去离子水洗脱,收集洗脱液。用旋转蒸发器在温度60℃下减压浓缩洗脱液得水提浓缩液,将水为洗脱剂浓缩部分加入其3倍量95%的乙醇,沉淀36h离心,收集上清液。将离心部分冷冻干燥,得蛹虫草多糖提取物。

再用60%甲醇水溶液为洗脱剂洗脱树脂柱,洗脱液为5倍树脂柱体积,流速2bv/h,收集洗脱液。洗脱液与水洗部分醇沉后的上清液合并,浓缩,得次生代谢产物浓缩液。减压干燥条件均是指真空度为0.09mpa,温度为55℃。

(3)蛹虫草中代谢产物的纯化:

将上述次生代谢产物浓缩液,上制备液相色谱(dac-hb80),收集各次生代谢产物馏分,结晶与重结晶。制备色相色谱条件是乙腈:水(3%:97%),流速100ml/min,检测波长254nm,色谱柱为c18反相色谱柱(dubhec18)。结晶与重结晶溶剂为乙醇,甲醇,水。

蛹虫草多糖得率47.34%,含量50.67%,次生代谢产物得率17.22%,虫草素,腺苷,虫草酸,海藻糖的含量均可达到98%以上。

尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明,然而应意识到,在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此,这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。

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