治疗消化道病症的方法与流程

本申请要求根据35u.s.c.§119(e)于2017年4月30日提交的美国系列号62/492,244的优先权，其全部内容通过引用并入本文。

背景技术：

许多疾病和病症涉及胃肠(gi)道的炎症或紊乱。实例包括肠易激综合征(ibs)、炎性肠病(ibd)、克罗恩病、结肠炎、溃疡性结肠炎(uc)和感染后结肠炎。这些病症可导致持续和反复的腹痛、不规则的肠运动和症状(诸如腹泻和在某些情况下会导致体重减轻)。胃肠道相关疾病和病症影响人类和其他哺乳动物。

结肠炎是大肠或结肠的疾病，其中大肠的内层变得发炎。在溃疡性结肠炎中，肠道会形成小疮或溃疡，其可能会产生脓液和粘液。炎症和溃疡的组合可导致腹部不适和经常排空肠。

结肠炎是一种慢性疾病，其特征在于急性时期的症状。在慢性期，症状可能会长时间缓和或消失，但这些缓解期会因疾病的急性发作而中断。在急性期，患者出现持续的血性腹泻并伴有腹痛。患有结肠炎的人经常会出现食欲不振并伴有体重减轻。患者还经常出现疲劳和精力丧失。

通常，结肠炎是免疫系统功能异常的结果。在结肠炎中，免疫系统将结肠的正常内容物视为“免疫外来”物质并且产生不适当的炎症反应。导致这种不适当反应的确切机制尚不清楚，使得开发有效治疗更加困难。遗传构成可能是一个因素，因为结肠炎倾向于在家庭中运行，大约20％的结肠炎患者也具有患该病症的亲属。环境因素也可能起到引发不适当免疫反应的作用。

结肠炎在美国可能影响多达100万人。尽管这种情况可能发生在任何年龄，男性和女性同样可能受到通常在三十年代中期首次观察到的症状的影响。老年人结肠炎的发病率在男性中比在女性中更常见。

影响胃肠道的疾病和病症的其他实例包括ibs和克罗恩病。患有ibs的个体经常出现持续和复发的腹痛和诸如腹泻和/或便秘的症状。ibd是另一种胃肠道疾病，受影响的个体可能遭受腹泻、疼痛、疲劳和体重减轻。克罗恩病通常以腹痛、腹泻、呕吐和体重减轻的症状为特征。由于产肠毒素的大肠杆菌(e.coli)引起的诸如腹泻的微生物感染也可能出现胃肠道相关症状。

技术实现要素：

本文提供了治疗有需要的哺乳动物的胃肠道疾病和病症的方法。这种哺乳动物是被诊断为患有胃肠道病症或疾病(诸如结肠炎、肠易激综合征、肠易激运动、炎性肠病(ibd)、肠易激综合征(ibs)、克罗恩病、溃疡性结肠炎、感染后结肠炎和产肠毒素的大肠杆菌感染)的哺乳动物。本文提供了治疗有需要的哺乳动物胃肠道疾病和病症的方法，其中哺乳动物患有一种或更多种症状(诸如腹泻、腹痛和/或体重减轻)。在一些实施方案中，哺乳动物被诊断为结肠炎或患有结肠炎。在一些实施方案中，哺乳动物被诊断为或患有产肠毒素的大肠杆菌引起的腹泻。该方法包括向哺乳动物施用有效量的藻类制剂，所述藻类制剂包括微藻和/或由微藻制成的提取物。在一些实施方案中，微藻是衣藻属(chlamydomonassp)。在一些实施方案中，微藻是莱茵衣藻(c.reinhardtii)。在一些实施方案中，藻类是野生型藻类。

在某些实施方案中，藻类制剂施用约1天至约90天。在一些实施方案中，施用发生约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、60或90天。在一些实施方案中，藻类制剂施用3天至约60天、3天至约30天、3天至约14天或3天至约7天。

在一些实施方案中，藻类制剂施用4天至约60天、4天至约30天、4天至约14天或4天至约7天。在特定的实施方案中，藻类制剂通过消化道施用于哺乳动物。在一些实施方案中，藻类制剂口服施用。在一些实施方案中，施用的藻类的量为基于干重的总膳食摄入量的约0.2％至约1.0％。在一些实施方案中，施用的藻类的量为6mg/kg体重至30mg/kg体重。

在一些实施方案中，藻类制剂由微藻的全细胞制备而来。在一些实施方案中，将藻类制剂掺入施用于哺乳动物的餐饭(meal)、日粮、饲料、食物(foodstuff)或食品产品(foodproduct)中。在其他实施方案中，将藻类制剂与液体混合以施用于哺乳动物。在其他实施方案中，藻类制剂以干粉形式施用，其可以包封或不包封(诸如胶囊、片剂或丸剂)。仍在其他实施方案中，藻类制剂以浆液形式施用。因此，实施方案提供了这种藻类制剂用于治疗哺乳动物胃肠道疾病和病症的用途。

在一些实施方案中，哺乳动物是人。在一些实施方案中，哺乳动物是家养动物(诸如家畜类)。仍在其他实施方案中，哺乳动物是伴侣动物(诸如狗、猫、兔、仓鼠、沙鼠、豚鼠、大鼠、小鼠等)。在其他实施方案中，哺乳动物是实验动物(例如，啮齿动物(如大鼠、小鼠、仓鼠或沙鼠)、兔、猴或猪)。

本文提供了治疗有需要的哺乳动物的胃肠道疾病和病症的方法，以引起疾病或病症的至少一种症状的发生率的降低或减轻。这些症状包括腹泻、腹痛、体重减轻及其组合。在一些实施方案中，该方法引起腹泻的发病率和/或严重程度的降低或减轻。在一些实施方案中，该方法引起体重减轻率的降低或减轻。在一些实施方案中，该方法引起体重稳定或体重增加。因此，实施方案提供这种藻类制剂用于治疗和/或减少与胃肠道疾病和病症相关的至少一种症状的用途。

本文还提供了一种衣藻微藻(chlamydomonasmicroalgae)的组合物，其以有效量配制用于施用于哺乳动物，以降低或减轻胃肠道疾病或病症的一种或更多种症状。这些症状包括腹泻、腹痛、体重减轻及其组合。在一些实施方案中，组合物的施用引起腹泻的发生率和/或严重程度的降低或减轻。在一些实施方案中，组合物的施用引起体重减轻率的降低或减轻。在一些实施方案中，组合物的施用引起哺乳动物体重稳定或体重增加。

在一些实施方案中，组合物含有微藻的藻类制剂，其中微藻是衣藻属(chlamydomonassp.)。在一些实施方案中，在组合物中的衣藻属(chlamydomonassp.)是莱茵衣藻(chlamydomonasreinhardtii)。在一些实施方案中，衣藻(chlamydomonas)是野生型藻类。

在一些实施方案中，将衣藻(chlamydomonas)组合物配制成干粉。在一些实施方案中，将衣藻(chlamydomonas)组合物配制成液体浆液。在一些实施方案中，将组合物配制成食物或营养补充剂。在一些实施方案中，配制衣藻(chlamydomonas)组合物以提供基于干重的膳食摄入量的约0.2％至约1.0％。在一些实施方案中，配制衣藻(chlamydomonas)组合物以提供有效剂量范围为约1mg/kg体重至约40mg/kg体重的微藻。在一些实施方案中，配制衣藻(chlamydomonas)组合物以提供约6mg/kg体重至约30mg/kg体重的有效剂量范围。

在一些实施方案中，配制衣藻(chlamydomonas)组合物以向哺乳动物提供营养补充剂。这种补充剂可以提供约40％、42％、44％、46％、48％或50％的总重量含量的蛋白质含量。在一些实施方案中，营养补充剂提供ω油，包括ω3、ω6、ω9及其组合。在一些实施方案中，营养补充剂提供维生素a。在一些实施方案中，营养补充剂提供矿物质(诸如铁、钙或其组合)。

在一些实施方案中，将组合物配制成胶囊。在一些实施方案中，将组合物配制成片剂。在一些实施方案中，组合物作为膳食方案提供。在一些实施方案中，组合物以试剂盒(kit)提供。试剂盒可以在一个或更多个容器中包括一种或更多种剂量的组合物。剂量可以作为单个多剂量的等分试样提供或分成单独的剂量提供。在一些实施方案中，所述试剂盒包括足以施用约1天、约3天、约4天、约7天、约10天、约14天、约30天、约60天或约90天的剂量。

本文还提供了通过在异养条件下生长衣藻属(chlamydomonassp.)并收获衣藻(chlamydomonas)生物质而生长和制备衣藻(chlamydomonas)生物质的方法，所述生物质用于施用于需要治疗胃肠病症或疾病的哺乳动物。在一些实施方案中，衣藻属(chlamydomonassp)是莱茵衣藻(chlamydomonasreinhardtii)。在一些实施方案中，生长步骤在没有光的情况下进行。

附图说明

参考以下描述、所附权利要求和附图，将更好地理解本发明的这些和其他特征、方面和优点，其中：

图1是显示响应dss诱发结肠炎时，与喂食对照饮食(图中的无)的小鼠相比，喂食含有莱茵衣藻(c.reinhardtii)(图中的wt)的饮食的小鼠体重减轻显著减少的图表。

图2a和2b是显示响应产肠毒素的大肠杆菌的感染时，与对照相比，喂食含有莱茵衣藻(c.reinhardtii)(图中的衣藻)的饮食的仔猪腹泻发生率降低(图2a)和恢复率增加(图2b)的图表。

图3是显示与未接受治疗的对照相比，喂食莱茵衣藻(c.reinhardtii)藻类的仔猪的腹泻发生率剂量依赖地、统计学上显著地降低的图解。此外，该图显示，与补充藻类的仔猪相比，在饮食中添加氧化锌或金霉素的仔猪腹泻的发生率没有显著差异。

具体实施方式

提供以下详细描述以帮助本领域技术人员实践所要求保护的发明。然而，该详细描述不应被解释为对所要求保护的发明进行不当限制，因为本领域普通技术人员可以在不脱离本发明要求保护的发明范围的情况下对本文所讨论的实施方案进行修改和变化。

本申请中引用的所有出版物、专利、专利申请、公共数据库、公共数据库条目和其他参考文献通过引用整体并入本文，如同每个单独的出版物、专利、专利申请、公共数据库、公共数据库条目或者其他参考文献被具体地和单独地指出通过引用并入一样。

如在本说明书和所附权利要求中使用的，除非上下文另有明确说明，单数形式“a”、“an”和“the”包括复数指代。因此，例如，提及“该方法”时包括在阅读本发明等后对于本领域技术人员而言变得显而易见的一种或更多种方法，和/或本文所述类型的步骤。

术语“包括(comprising)”其可与“包含(including)”、“含有(containing)”或“特征在于(characterizedby)”互换使用，是包含性或开放式语言，并且不排除另外的，未列举的要素或方法步骤。短语“由...组成”排除了权利要求中未指定的任何要素、步骤或成分。短语“基本上由......组成”将权利要求的范围限制于指定的材料或步骤以及不会实质上影响所要求保护的发明的基础和新颖特征的那些。本发明考虑了对应于这些短语中的每一个的范围的本发明组合物和方法的实施方案。因此，包含所列举的要素或步骤的组合物或方法考虑了其中所述组合物或方法基本上由这些要素或步骤组成的特定实施方案。

在提供数值范围的情况下，应当理解，除非上下文另有明确规定还具体公开了该范围的上限和下限之间的介于下限单位的十分之一的每个中间值。涵盖在规定范围内的任何规定值或中间值与规定范围内的任何其他规定值或中间值之间的每个较小范围。这些较小范围的上限和下限可以独立地包括或排除在该范围内，并且涵盖了在该较小范围中包括任一个端点、不包括端点或包括两个端点的每个范围，其在规定范围内的端点受任何特别的排除。如果规定的范围包括一个或两个端点，则还包括排除这些端点中的一个或两个的范围。

本文提供了用于治疗胃肠道疾病和病症以及用微藻衣藻属(chlamydomonassp)治疗、降低和减轻胃肠道疾病或病症的一种或更多种症状的方法。在一个实施方案中，衣藻是野生型微藻。野生型微藻是指通过使用重组dna技术未改变其遗传组成的藻类。野生型藻类可以是天然存在的藻类。如本文所用，野生型藻类还可以包括已经通过应用交配和定向选择而改变自然界中发现的遗传构成的藻类。

如本文所用，藻类是指无脉管藻类，并且可包括分类为微藻的生物。应注意，在本发明中，术语微藻和藻类可互换使用。可用于实施所述方法和/或制备本文公开的组合物的微藻的属的非限制性实例包括原绿藻门(prochlorophyta)、红藻门(rhodophyta)、绿藻门(chlorophyta)、不等鞭毛藻门(heterokontophyta)、tribophyta、灰藻门(glaucophyta)、丝足虫藻(chlorarachniophyte)、裸藻门(euglenophyta)、裸藻纲(euglenoids)、定鞭藻门(haptophyta)、金藻门(chrysophyta)、隐藻门(cryptophyta)、cryptomonads、甲藻门(dinophyta)、双鞭甲藻(dinoflagellata)、定鞭金藻(pyrmnesiophyta)、硅藻门(bacillariophyta)、黄藻门(xanthophyta)、真眼点藻门(eustigmatophyta)、(raphidophyta)和褐藻门(phaeophyta)。在一个实施方案中，本文使用的藻类属于衣藻(chlamydomonas)属。在一个特定的实施方案中，使用的藻类是莱茵衣藻(c.reinhardtii)。在一些实施方案中，通过与另一株藻类的交配、繁殖、杂交或原生质体融合改良现有的衣藻而产生藻类。在一个实施方案中，通过与另一种衣藻种交配、繁殖、杂交或原生质体融合来改良现有的衣藻种。

在一些实施方案中，衣藻种是不产生磷脂酰胆碱(pc)或显著减少磷脂酰胆碱(pc)产生的衣藻(chlamydomonas)。在一些实施方案中，选择的衣藻种是不包括德巴衣藻(chlamydomonasdebaryana)、扁平衣藻(chlamydomonasapplanate)、不对称衣藻(chlamydomonasasymmetrica)和球形衣藻(chlamydomonassphaeroides)的衣藻种。在一些实施方案中，选择的衣藻种是不包括德巴衣藻(chlamydomonasdebaryana)nies-2212、扁平衣藻(chlamydomonasapplanate)nies-2202、不对称衣藻(chlamydomonasasymmetrica)nies-2207和球形衣藻(chlamydomonassphaeroides)nies-2242的衣藻种。在一些实施方案中，所选择的衣藻种具有小于25％、20％、15％、10％、9％、8％和/或7％w/w的脂质含量。

可用于实施本文公开的方法和/或制备本文公开的组合物的微藻可以在陆地上生长，例如在池塘、沟渠中，或在封闭或部分封闭的生物反应器系统中生长。藻类也可以直接在水中生长，例如，在大洋、海、湖泊、河流、水库等中生长。因此，藻类可以在不同体积的培养系统中生长。在一个实施方案中，诸如衣藻(chlamydomonas)的藻类，可以例如在小规模实验室系统中生长。小规模实验室系统是指体积小于约6升的培养物。在各种实施方案中，小规模实验室培养物可以是1升、2升、3升、4升或5升。在另一个实施方案中，小规模实验室培养物可小于1升。还在另一个实施方案中，小规模实验室培养物可以是100毫升或更少。在一个实施方案中，培养物可以是10毫升或更少。在另一个实施方案中，培养物可以是5毫升或更少。还在另一个实施方案中，培养物可以是1毫升或更少。

或者，培养系统可以是大规模培养物(诸如衣藻(chlamydomonas)的大规模培养物)，其中大规模培养物是指培养物的体积大于约6升，或大于约10升，或大于约20升。大规模培养物也可以指50升或更多、100升或更多，或200升或更多的培养物的生长。因此，大规模培养物可以是在例如池塘、容器、器皿或其他区域中培养物的生长，其中包含培养物的池塘、容器、器皿或区域是面积是例如至少5平方米、至少10平方米、至少200平方米、至少500平方米、至少1500平方米、至少2500平方米或更大。

本发明进一步提供了在非常大规模的培养系统中产生藻类(包括衣藻(chlamydomonas))。非常大规模的液体培养系统可以是10,000至20,000升。在各种实施方案中，超大规模培养系统可以是10,000至40,000升或10,000至80,000升。在各种实施方案中，超大规模培养系统可以是10,000至100,000升或10,000至150,000升。还在其他实施方案中，培养系统可以是10,000至200,000升或10,000至250,000升。本发明还包括10,000至500,000升或10,000至600,000升的培养系统。本发明进一步提供10,000至1,000,000升的培养系统。

在本发明的一个方面，培养系统可以是天然或人工的池塘。在一个实施方案中，人造池塘可以是水沟池塘。在水沟池塘中，藻类、水和营养物环绕“水沟”循环。动力手段(诸如浆轮)为水沟中的液体提供恒定的运动，使得生物体能够以选定频率循环回到液体的表面。浆轮还提供搅拌源以给系统供氧。可以通过co2注入系统将co2添加到培养系统中作为进行光合作用的原料。这些水沟池塘可以封闭在例如建筑物或温室中，或者可以位于室外。在一个实施方案中，室外水沟养殖系统可以用盖子封闭或暴露于环境。

或者，诸如衣藻(chlamydomonas)的微藻可以生长在封闭结构(诸如生物反应器)中，其中环境受到比开放系统或半封闭系统更严格的控制。光生物反应器是结合了某种类型的光源以向反应器提供光子能量输入的生物反应器。术语生物反应器可以指与环境封闭并且不与环境直接交换气体和/或污染物的系统。生物反应器可描述为封闭的，并且在光生物反应器照射的情况下，设计用于控制液体细胞悬浮培养物的生物质产生的培养容器。生物反应器的实例包括但不限于玻璃容器、不锈钢容器、塑料管、罐、塑料套和袋。在光生物反应器的情况下，可以使用的光源的实例包括但不限于荧光灯泡、led和自然日光。因为这些系统是封闭的，所以生物体需要生长的所有东西(例如，二氧化碳、营养物、水和光)必须被引入生物反应器中。

尽管设置和维护成本较高，但生物反应器与开放系统相比具有若干优点。例如，它们可以防止或减少污染、允许单一培养物的无外来污染的培养(即，仅由一种生物组成的培养物)、可以更好地控制培养条件(例如，ph、光、二氧化碳和温度)、防止水蒸发、降低由于放气导致的二氧化碳损失，以及允许更高的细胞浓度。另一方面，生物反应器的某些要求(诸如冷却、混合、控制氧气积聚和生物淤积)，使得这些系统的建造和操作比开放系统或半封闭系统更昂贵。

可连续收获包括衣藻(chlamydomonas)的微藻(与大多数较大体积的培养系统一样)，或一次收获一批(例如，与聚乙烯袋培养一样)。批量收获例如营养物、生物(例如微藻)和水，并使得生物能够生长直至收获该批次。通过连续收获，可以例如连续地、每天地或以固定的时间间隔收获一部分藻类物质。

可以在允许光合作用的条件下生长藻类(诸如衣藻(chlamydomonas))，然而，这不是必需的(例如，生物体可以在没有光的情况下生长)。在本发明的实践中使用的衣藻(chlamydomonas)可以是光养的、混合营养的或异养的。光养或光合自养藻类是使用光子捕获作为能量来源并且可以固定无机碳的藻类。因此，光养藻类能够在光存在下使用无机碳作为代谢碳的来源。如本文所用，异养藻类是指不能使用光子捕获作为能源，而必须依赖于有机碳源的藻类。混合营养藻类是那些能够利用光子捕获和无机碳固定来支持生长，但在没有光的情况下可以使用有机碳作为能源的藻类。因此，混合营养藻类具有光养和异养藻类的代谢特征。

在微生物不能进行光合作用(天然地或由于选择)的生长条件下，将为生物体提供必要的营养物以在没有光合作用的情况下支持生长。例如，其中(或其上)生长有机体的培养基可补充有任何所需的营养物，包括有机碳源、氮源、磷源、维生素、金属、脂质、核酸、微量营养物和/或任何有机体特定的要求。有机碳源包括宿主生物能够代谢的任何碳源，包括但不限于乙酸盐、简单碳水化合物(例如葡萄糖、蔗糖、乳糖)、复合碳水化合物(例如淀粉、糖原)、蛋白质和脂类。本领域技术人员将认识到，并非所有生物体都能够充分代谢特定营养物，并且从一种生物体到另一种生物体可能需要将营养物混合物改良以提供适当的营养物混合物。

在一些实施方案中，衣藻(chlamydomonas)异养生长。在某些实施方案中，衣藻在没有光的情况下生长。在没有光的情况下生产高密度藻类培养物(包括衣藻(chlamydomonas))的方法可以在例如题为“用于生长藻类的改良方法”的国际公开号wo201203/038960中找到，其全部内容通过引用并入本文。在一些实施方案中，衣藻异养生长且无光。

在某些情况下，可能需要在施用于患者或掺入食品或饲料中之前减少微藻培养物(诸如衣藻(chlamydomonas))中所含的液体量。可以通过本领域普通技术人员已知的方法完成从液体中分离衣藻(chlamydomonas)生物质。在一个方面，可以使得微藻能够通过重力沉降并去除上覆的液体。在另一个方面，可以通过离心含有微藻的培养物来收获衣藻(chlamydomonas)生物质。在一个方面，液体培养物的离心可以使用固定体积离心机以批量模式进行。在不同的方面，可以使用连续流动离心机完成衣藻(chlamydomonas)的批量收获。在另一个方面，可以通过连续流动离心从生长培养物中连续收获衣藻(chlamydomonas)。在其他方面，液体去除可以通过过滤完成(例如切向流过滤)。在其他方面，液体含量的减少可以通过电泳技术(诸如电解凝结和电解絮凝)来完成。

在一些实施方案中，可能需要或期望甚至更大程度地降低衣藻(chlamydomonas)制剂的液体含量。因此，在一些实施方案中，藻类制剂的水分含量可小于15％水分、小于10％水分、小于9％水分、小于8％水分、小于7％水分、小于6％水分、水分小于5％、水分小于4％或小于3％水分。通过本领域已知的任何方法可以将水分含量降低至低于15％的水分，并且通常通过使用干燥设备来实现。可用于实施当前公开的方法的干燥器包括但不限于旋转真空干燥器、旋转隧道式干燥器、流化床干燥器、气动干燥器、板式干燥器、托盘干燥器、圆筒式干燥器、喷雾干燥器、闪蒸干燥器、冷冻干燥器、锅式干燥器、桨式干燥器、微波干燥器和太阳能干燥。

在旋转圆筒式干燥器中，水平的圆柱形夹套壳围绕以紧公差旋转的搅拌器。在真空下通过夹套供热完成干燥。在旋转隧道式干燥器中，材料行进通过倾斜的水平旋转圆筒，并且通过流过圆筒的已加热空气除去水分。在流化床干燥器中，借助向上流动的气流使材料悬浮在重力作用下。还可能存在水平气流以使材料移动通过干燥器。在气动干燥器中，通过在快速移动的已加热空气中输送材料来去除水分。气流的速度和湍流使材料保持悬浮并促进液体的去除。闪蒸干燥器是气动干燥器的一种形式，其中材料在干燥单元中具有短的停留时间，因此闪蒸掉水分。在圆筒式干燥机或滚筒式干燥机中，材料散布在已加热的旋转圆筒或滚筒的表面上。在干燥发生的选择期间，大部分情况下材料保留在的原筒的表面上。然后将干燥的材料从圆筒上刮下。在喷雾干燥器中，材料以细小液滴喷射到已加热气流中。空气和液滴以对流或并流方式移动。干燥器主体足够大以使所得颗粒能够在干燥时沉降而不接触并粘附在干燥器壁上。在托盘干燥器中，薄层材料铺展在托盘上，在托盘中进行干燥。通过已加热空气流过托盘、从已加热的托盘或保持托盘的架子传导、来自已加热表面的辐射或这些的组合来而完成待干燥材料的加热。在桨式干燥器中，通过已加热的旋转叶片或桨叶搅拌材料，使得新材料连续暴露于已加热表面以蒸发液体。在板式干燥器中，材料通过一系列堆叠的水平已加热板转移。微波干燥器，使用微波激发水分子以使其蒸发。在冷冻干燥中，将材料冷冻，通常冷冻至约-70℃至-100℃并暴露于真空，以便通过升华除去水分。在太阳能干燥中，材料以薄层放置在暴露于太阳，并使得水能够蒸发。另外的干燥方法对于本领域技术人员来说是显而易见的。

干燥藻类制剂的确切条件取决于所用干燥器的类型。通常，选择条件以使干燥过程中藻类材料的热损伤量最小化。更具体地，通常选择条件以使干燥过程中藻类蛋白质的变性最小化。选择方法和条件以使干燥过程中的热损伤最小化在本领域技术人员的能力范围内。

在一些情况下，衣藻(chlamydomonas)制剂将在收获后和施用受试者之前或在加工成对受试者施用的形式之前进行洗涤。可以使用本领域已知的任何方法洗涤衣藻(chlamydomonas)以除去例如培养基的盐或其他组分。在一个实施方案中，例如通过如本文所述的离心将衣藻(chlamydomonas)部分脱水，然后重悬于所期望的液体(诸如饮用水或用于摄取的其他液体)中。该洗涤过程可以进行不止一次，例如两次、三次或四次。

本文所述的衣藻(chlamydomonas)组合物可以施用于需要治疗的哺乳动物/受试者。需要治疗的哺乳动物被认为是患有或被诊断为胃肠道疾病或病症的动物(包括人)。在一些实施方案中，哺乳动物是人，而在其他实施方案中，哺乳动物不是人。在某些实施方案中，哺乳动物是伴侣动物。伴侣动物是一种被人作为“宠物”用于陪伴和乐趣的动物。伴侣动物的非限制性实例包括猫、狗、雪貂、兔、仓鼠、豚鼠、大鼠和沙鼠。在某些情况下，伴侣动物可以包括大型家养物种(诸如马、山羊、美洲驼、骆马、羊驼、猪和驴)。在一些实施方案中，哺乳动物是家畜类。牲畜是指在农业环境中培养或饲养以制造诸如食品或纤维等产品，或用于劳动的动物。在一些实施方案中，牲畜适合哺乳动物(例如人)食用。牲畜动物的实例包括牛、山羊、马、猪、绵羊、美洲驼、骆马、羊驼、家养水牛、麋鹿、鹿和兔子。在某些实施方案中，哺乳动物是实验动物(诸如啮齿动物、小鼠、大鼠、兔、灵长类动物、猴、仔猪或猪)。

衣藻(chlamydomonas)可以作为液体或半液体制剂的一部分施用。液体或半液体制剂是指含有至少约30％和至多约99％液体的制剂。在一些实施方案中，制剂含有约40％至约95％的液体。在其他制剂中，液体含量为约50％至约95％。在其他实施方案中，藻类制剂为99％、98％、97％、96％、95％、94％、93％、92％、91％、90％、89％、88％、87％、86％、85％、84％、83％、82％、81％或80％的液体含量。液体制剂通常口服施用(即通过口)。衣藻(chlamydomonas)可以与水或适合于待治疗的受试者摄取的任何其他液体混合。在哺乳动物的情况下，藻类可以掺入乳品或乳品替代品中或以其他方式与乳品或乳品替代品混合。液体衣藻(chlamydomonas)制剂可包括增加适口性的其他物质(诸如天然和人造甜味剂和调味剂)。在一些实施方案中，制剂可含有天然或人造甜味剂(诸如糖(甘蔗或甜菜)、高果糖玉米糖浆、糖蜜、蜂蜜、龙舌兰糖浆、枫糖浆、糙米糖浆、大麦麦芽糖浆或晶体、椰子糖、甜菊糖(甜菊苷)、果糖晶体、阿斯巴甜、甜蜜素、糖精、三氯蔗糖和纽甜)。在一些实施方案中，藻类可以与水果泥或蔬菜泥混合。在其他实施方案中，衣藻(chlamydomonas)可以与乳制品混合，特别是经培养的乳制品(诸如酸奶)。本领域技术人员将理解，也可以使用基于植物的乳制品替代品(诸如大豆乳品、大豆酸奶、杏仁乳品或杏仁酸奶)。尽管各种添加物已单独列出，但应理解它们可以任何组合混合，例如，藻类与蔗糖、果泥和酸奶混合以产生用于摄取的液体或半液体制剂。

在各种实施方案中，衣藻(chlamydomonas)可以以干燥形式配制或摄取，例如，含水量为15％或更低的制剂。因此，衣藻(chlamydomonas)可以以胶囊、片剂、丸剂、粉末或颗粒的形式施用于患者或受试者。在这些固体剂型中，衣藻(chlamydomonas)可以与一种或更多种佐剂(诸如乳糖、蔗糖、淀粉、链烷酸的纤维素酯、纤维素烷基酯、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、氧化镁、磷酸和硫酸钠和钙盐、明胶，阿拉伯树胶、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮和/或聚乙烯醇)组合，然后压片或包封以便于施用。在其他情况下，衣藻(chlamydomonas)可以被压缩成饼干、薄饼或小丸用于摄取。干燥的衣藻(chlamydomonas)也可以掺入其他饲料或食物中，以为患者提供额外的营养物和/或增加适口性。

在一些实施方案中，衣藻(chlamydomonas)制剂可以直接施用于待治疗的患者/受试者的结肠中。在这样的实施方案中，通过将常规栓剂基质(诸如可可脂或其他甘油酯)掺入组合物中，可以以栓剂的形式将藻类施用到结肠中。在其他实施方案中，液体衣藻(chlamydomonas)制剂可以通过灌肠剂(特别是保留灌肠剂)施用于结肠。

在一些实施方案中，可以配制衣藻(chlamydomonas)制剂用于营养补充剂。这种补充剂可以提供约40％、42％、44％、46％、48％或50％的总重量含量的藻类蛋白质含量。在一些实施方案中，营养补充剂提供一种或更多种ω油，包括ω3、ω6、ω9及其组合。在一些实施方案中，营养补充剂提供维生素a。在一些实施方案中，营养补充剂提供补充矿物质(包括铁、钙或其组合)。

在一些实施方案中，提供含有衣藻(chlamydomonas)的组合物作为膳食方案。在一些实施方案中，组合物以试剂盒提供。试剂盒可以在一个或更多个容器中包含一种或更多种剂量的组合物。剂量可以作为单个多剂量的等分试样提供或分成单独的剂量。在一些实施方案中，所述试剂盒提供足以施用持续约1天、约3天、约4天、约7天、约10天、约14天、约30天、约60天或约90天的剂量。

当饲喂动物(诸如牲畜或伴侣动物)时，可将衣藻(chlamydomonas)制剂掺入全混合日粮中。日粮可以是饲料成分的松散混合物的形式，或者可以形成为便于处理和喂食的形状(诸如小丸、立方体或粗磨食物)。在一些实施方案中，藻类制剂可以作为补充剂单独喂养，而在其他实施方案中，藻类制剂可以通过将藻类制剂应用于动物的正常饲料作为“追肥”喂养。

在另一个方面，将衣藻(chlamydomonas)制剂以有效减轻所治疗病症(例如，与结肠炎、肠易激综合征或产肠毒素的大肠杆菌引起的腹泻相关的体重减轻)的剂量施用于患者/受试者。如本领域技术人员所理解的，确切的剂量将随着所治疗的动物和病症的严重程度而变化。通常，有效剂量的藻类占基于干重的总膳食摄入量的约0.05％至约1.0％(w/w)。在一些实施方案中，剂量为占基于干重的总膳食摄入量的约0.05％、约0.06％、约0.07％、约0.08％、约0.09％、约0.1％、约0.2％、约0.3％、约0.4％、约0.5％、约0.6％、约0.7％、约0.8％、约0.9％、约1.0％、约1.1％、约1.2％、约1.3％、约1.4％、约1.5％、约1.6％、约1.7％、约1.8％、约1.9％或约2.0％。在一些实施方案中，剂量为约1mg/kg体重、约2mg/kg体重、约3mg/kg体重、约4mg/kg体重、约5mg/kg体重、约6mg/公斤体重、约7mg/kg体重、约8mg/kg体重、约9mg/kg体重、约10mg/kg体重、约11mg/kg体重、约12mg/kg体重、约13mg/kg体重、约14mg/kg体重、约15mg/kg体重、约16mg/kg体重、约17mg/kg体重、约18mg/kg体重、约19mg/kg体重、约20mg/kg体重、约21mg/kg体重、约22mg/kg体重、约23mg/kg体重、约24mg/kg体重、约25mg/kg体重、约26mg/kg体重、约27mg/kg体重、约28mg/kg体重、约29mg/kg体重、约30mg/kg体重、约31mg/kg体重、约32mg/kg体重、约33mg/kg体重、约34mg/kg体重、约35mg/kg体重、约36mg/kg体重、约37mg/kg体重、38mg/kg体重、39mg/kg体重、或约40mg/kg体重。

与精确剂量一样，治疗时间也可随病症的严重程度而变化。施用时间过程的调整在熟练的医疗保健提供者的能力范围内。通常，衣藻(chlamydomonas)制剂将在约1天至约90天的时间内施用。在一些实施方案中，施用衣藻(chlamydomonas)制剂约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、10天、14天、21天、30天、60天或90天。在一些实施方案中，藻类制剂在约4天至约60天、约4天至约30天、约4天至约14天、或4天至约7天内施用。在其他实施方案中，藻类制剂在约7天至约14天、约14天至约21天、约21天至约28天、约28天至约35天、约35天至约42天、约42天至约49天、约49天至约56天、约56至约63天、约63天至约70天、约70天至约77天、约77天至约84天、约84天至约90天内施用。仍在其他实施方案中，治疗期为4天到至多约7天、至多约14天、至多约21天、至多约28天、至多约35天、至多约42天、至多约49天、至多约56天、至多约63天、至多约70天、至多约77天、至多约84天或至多约90天。

实施例

实施例1、结肠炎小鼠模型中藻类对体重减轻的影响

将21日龄小鼠分成2组，每组4只小鼠。第1组喂食小鼠食用的正常日粮4天，而在第2组中，日粮补充有10mg/kg体重的莱茵衣藻(chlamydomonasreinhardtii)藻类。给小鼠分别喂食的饮食4天，然后在其水中施用3％葡聚糖硫酸钠(dss)。dss的施用是在实验条件下诱导结肠炎症状的既定方法chassaingb，aitkenjd，malleshappam，vijay-kumarm：dextransulfatesodium(dss)-inducedcolitisinmice.currprotocimmunol2014，104：unit1525。在dss处理后再给小鼠喂食一天，然后在15天试验期的剩余时间内给两组喂食正常的日粮。每天监测小鼠的体重以确定喂食藻类对体重减轻的影响。结果显示在图1中，其显示接受藻类的小鼠比未用藻类治疗的小鼠具有更低的体重减轻。

实施例2、新生仔猪中藻类对腹泻发生率的影响

将8只新生仔猪分成2组，每组4只仔猪。第1组作为对照。第1组中的仔猪饲喂标准的乳品替代品。在第2组中，每天将标准的乳品替代品补充2.5克(干重)莱茵衣藻(chlamydomonasreinhardtii)藻类。在出生48小时时用单剂量的大肠杆菌溶血菌株感染仔猪。单剂量包括3ml含有10¹⁰cfu大肠杆菌的溶液。饲喂仔猪并每天观察6次，直至7日龄。在每次观察时，都记录了腹泻的发生率。从图2a、2b和3中可以看出，向新生猪施用藻类减少了腹泻的发生率并缩短了新生仔猪腹泻的恢复时间。

实施例3、21日龄猪中藻类对腹泻发生率的影响

将21日龄猪分成5组，每组24只猪。第1组作为对照，未接受任何治疗。第2组在饮食中接受0.2％(2g/kg日粮干重)干燥的莱茵衣藻，而第3组在饮食中接受1.0％(10g/kg日粮干重)干燥的莱茵衣藻。第4组和第5组接受0.3％(3g/kg日粮干重)的氧化锌和0.04％(0.4g/kg日粮干重)的金霉素。在室外围栏中饲养猪以模拟真实世界的条件，并且每天记录腹泻的情况。

根据上面给出的详细描述和实施例，可以理解，实现了本发明的若干方面。

应该理解，已经通过说明和实施例的方式详细描述了要求保护的发明，以使本领域的其他技术人员熟悉要求保护的发明、其原理和实际应用。要求保护的发明的具体制剂和方法不限于所呈现的具体实施方案的描述，而是应当根据所附权利要求及其等同物来看待描述和实施例。虽然上面的一些实施例和描述包括关于所要求保护的发明可以起作用的方式的一些结论，但是发明人不打算受那些结论和功能的约束，而是仅将它们作为可能的解释来提出。

应进一步理解，上述具体实施方案并非旨在穷举或限制要求保护的发明，并且根据上述实施例和详细说明，许多替代、修改和变化对于本领域普通技术人员来说是显而易见的。因此，要求保护的发明旨在涵盖落入所附权利要求范围内的所有这些替代、修改和变化。