专利名称：检测用癌试剂的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种供实验检测用的癌试剂的制备方法。
红细胞有阻止癌细胞血行播散及抗肿瘤细胞的作用，因此近代医学研究中选用一种癌细胞作为靶细胞来测定肿瘤患者红细胞的免疫功能状态。我们查阅有关文献，见到中国免疫学杂志1991年第7期81页“红细胞免疫粘附肿瘤细胞的机理初探”试验采用的靶细胞都为新鲜的艾氏腹水癌细胞，必须是在使用当时从小鼠活体中采取新鲜的艾氏腹水癌细胞。因而不能长期保存，加上新鲜的艾氏腹水癌细胞特异形态多，大小不一，影响试验观察效果，因而从小鼠活体中现采新鲜艾氏腹水癌细胞无法作为检测用的试剂成品流通和普及推广使用。
本发明的目的是将现在还处于实验阶段的，用于检测肿瘤患者红细胞免疫功能状态的新鲜S180癌细胞，经过培养和处理制成一种能够长期保存并且具有明显观察效果的S180癌试剂，可以作为成品流通普及推广。
本发明的实施手段是用目前国际公认的小鼠肉瘤细胞传代，从小鼠腹水中取出的S180癌细胞，经生理盐水稀释后注入昆明小鼠腹腔内培养10天，然后抽出昆明小鼠的腹水，加入肝素抗凝剂，用离心法去掉腹水上清液，将培养成的S180癌细胞经进一步加工成供检测用的成品癌试剂。
实施例用目前国际公认的小鼠肉瘤细胞传代，从小鼠腹水中取出的S180癌细胞，经生理盐水稀释后注入昆明小鼠腹腔内培养10天，然后抽出昆明小鼠的腹水，加入肝素抗凝剂，用离心法去掉腹水上清液，将培养成的S180癌细胞用含5%的小牛血清Hank′s液洗涤3次，除去S180癌细胞表面的分泌物，然后加入抑癌药物每毫升生理盐水含5-15×106癌细胞中加丝裂霉素200μg，在37℃维持30分钟进行灭活，再用浓度5%的小牛血清Hank′s液洗涤2次，将得到的经灭活处理的S180癌细胞分别用下述三种方法制得供检测用的S180癌细胞试剂①将经灭活控制处理的S180癌细胞用140μ/ml肝素抗凝，再用含10%小牛血清Hank′s液配成1×107/ml，加等量1640细胞培养液和3倍保护剂及赋形剂脱脂牛乳，再加防腐剂，每毫升青霉素100单位，链霉素0.1mg，制成悬液试剂(补体未致敏)。
②将①制得的悬液试剂，经-40℃冷冻处理2小时，在0.03托真空状态下，37℃加热13～14小时，使水份小于1%，进行真空灌封，制得未致敏冻干试剂成品。
③也可将经灭活控制处理的S180癌细胞用140μ/ml肝素抗凝，再用含10%的小牛血清Hank′s液配成1×107浓度，加等量新鲜豚鼠血清，37℃孵育30′，2000rpm-5min洗3次，恢复原体积，加等量1640细胞培养液，8倍保护剂及赋形剂脱脂牛乳，制成致敏冻干试剂成品。
本发明的重要价值是制成了便于长期保存和流通使用的检测肿瘤患者红细胞免疫功能状态的S180癌细胞试剂成品，使用本方法制成的试剂具有敏感性高，粘附力强，结果稳定、观察效果明显等优点，并且使用时快速简便，易于临床使用和普及推广。
权利要求
1.一种检测用癌试剂的制备方法，其特征在于使用目前国际公认的小鼠肉瘤细胞传代小鼠腹水中取出的S180癌细胞，经生理盐水稀释后注入昆明小鼠腹腔内培养10天，然后抽出昆明小鼠的腹水，加入肝素抗凝剂，用离心法去掉腹水，将培养成的S180癌细胞用浓度5%的小牛血清Hank′s液洗涤3次，除去S180癌细胞表面的分泌物，然后加入抑癌药物丝裂霉素，在37℃维持30分钟进行灭活，再用浓度5%的小牛血清Hank′s液洗涤2次，将得到的经灭活处理的S180癌细胞分别用下述两种方法制得供检测用的S180癌细胞未致敏试剂①将经灭活控制处理的S180癌细胞用140μ/ml肝素抗凝，再用含10%小牛血清Hank′s液配成1×107/ml，加等量1640细胞培养液和8倍保护剂及赋形剂脱脂牛乳，再加防腐剂，每毫升青霉素100单位，链霉素0.1mg，制成未致敏悬液试剂，②将①制得的悬液试剂，经-40℃冷冻处理2小时，在0.03托真空状态下，37℃加热13～14小时，使水份小于1%，进行真空灌封，制得未致敏冻干试剂成品。
2.如权利要求1所述的检测用癌试剂的制备方法，其特征在于所述的经灭活控制处理的S180癌细胞可用140μ/ml肝素抗凝，再用含10%的小牛血清Hank′s液配成1×107浓度，加等量新鲜豚鼠血清，37℃孵育30′，2000rpm-5min洗3次，恢复原体积，加等量1640细胞培养液、8倍保护剂及赋形剂脱脂牛乳，制成致敏冻干试剂成品。
全文摘要
本发明公开了一种供检测肿瘤患者红细胞免疫功能状态用的S180癌细胞试剂的制备方法，是将从国际公认的肉瘤细胞传代小鼠腹水中取出的S180细胞经培养、抗凝处理、清洗处理、灭活处理和致敏处理制成S180癌细胞悬液试剂，也可以经冷冻干燥处理制成致敏性或非致敏性S180癌细胞冻干试剂，便于长期保存和流通使用。本发明具有敏感性高、粘附力强、结果稳定、观察效果明显等优点，使用时，快速简便，易于临床使用和普及推广。
文档编号C12N5/06GK1082611SQ93105929
公开日1994年2月23日 申请日期1993年5月17日 优先权日1993年5月17日
发明者刘景田 申请人:刘景田