高HA759秀丽线虫的回避率，表明相比于单一多糖，复合多糖能够改善毒性蛋白polyQ诱导的行为缺陷，与图2A和图2B结果相一致。
[0057]以上结果显示，复合多糖能够在神经元细胞和动物行为学水平上抑制Αβ和PolyQ毒性蛋白的胁迫损伤，表明其具有良好的防治神经退行性疾病的作用。
[0058]实施例8
[0059]由于Αβ 42和polyQ40分别是阿尔茨海默症和亨廷顿舞蹈病中的关键致病蛋白，其聚集能够产生显著的神经毒性，抑制其聚集无疑能够有效缓解其神经毒性。将实施例3制得的复合多糖，以lmg/mL、2mg/mL和4mg/mL浓度分别加入50 μ M Αβ 42和polyQ40单体溶液中，混匀后置于37°C下孵育。对照组同上处理，但用等体积的水代替多糖溶液。每隔一定时间取出混合液，加入硫磺素T溶液和Glycine-NaOH溶液，振荡均匀后利用荧光酶标仪检测样品的荧光强度，激发波长和发射波长分别为450nm和485nm。相对荧光强度以mean土SD表示，采用T检验比较多糖组和对照组的差异性。
[0060]如图3A和图3B所示，A β 42和polyQ40随着时间延长逐渐发生聚集，加入红景天和酸枣仁复合多糖后能够有效抑制蛋白聚集速度，表明该复合多糖具有抑制毒性蛋白聚集的作用。
[0061]实施例9
[0062]热休克蛋白(Heat Shock Proteins，HSPs)是一大类广泛存在和高度保守的分子伴侣家族，主要在蛋白质的折叠、装配、运输、定位以及降解过程中发挥重要作用，同时还参与了细胞内多种信号通路的调节。研宄表明，在蛋白质聚集相关神经退行性疾病中，细胞内蛋白质平衡呈现失衡状态，一些热休克蛋白的活性也有所下降，而通过提高热休克蛋白表达可以达到减少蛋白质异常聚集从而缓解神经退行性病症的作用。将实施例4制得的复合多糖，按照2mg/mL浓度与0P50混匀后涂布于NGM培养皿上，然后加入LI期CL2070线虫(体内表达hsp-16.2::GFP融合蛋白)。在20°C下培养至L4期后，收集线虫并用叠氮化钠麻痹固定，置于2%琼脂糖垫上。在荧光显微镜拍摄线虫咽部照片，使用Image J软件统计咽部荧光密度。每个处理组随机统计?10条线虫，数据以mean土SD表示，采用T检验比较多糖组和对照组的差异性。
[0063]结果如图4A所示，相比于对照组，采用复合多糖处理之后，CL2070线虫咽部荧光水平明显提高。图4B统计结果显示，采用lmg/mL、2mg/mL和4mg/mL复合多糖处理后的相对荧光密度由0.98分别显著上升至1.2,1.28和1.27 (p ( 0.05)。该结果表明，复合多糖能够促进热休克蛋白家族重要成员HSP16.2的表达，对缓解毒性蛋白胁迫有所贡献。
[0064]实施例10
[0065]由于异常聚集的毒性蛋白能够产生大量的活性氧自由基(reactive oxygenspecies, ROS)，从而产生氧化胁迫损伤，因此降低疾病模型体内的ROS水平将有助于减少氧化胁迫伤害，从而缓解神经退行性病症。将实施例5制得的复合多糖，以lmg/mL、2mg/mL和4mg/mL浓度分别加入LI期的CL2355和HA759幼虫中。对照组为加入等体积的S Medium。在15°C下培养3天后收集秀丽线虫，加入含I %吐温20的PBS，在冰上匀浆后加入DCFH-DA探针溶液(R0S水平指示剂)，在37°C下避光孵育，然后用荧光酶标仪检测荧光值，激发波长为485nm，发射波长为530nm。相对荧光强度以mean土SEM表示，采用T检验比较复合多糖组和对照组的差异性。
[0066]结果如图5所示，CL2355秀丽线虫的DCF相对荧光值为63.9，采用lmg/mL、2mg/mL和4mg/mL复合多糖处理后，DCF相对荧光值分别显著下降至50.8、45.2和42.4 (p彡0.05)；HA759秀丽线虫的DCF相对荧光值为49.2，lmg/mL、2mg/mL和4mg/mL复合多糖处理能够分别显著降低DCF相对荧光值至41.6,39.1和36.4 (p ( 0.05)。这些结果表明复合多糖能够显著降低秀丽线虫体内的ROS水平，具有潜在的神经保护活性。
[0067]经上述秀丽线虫模型实验结果证实，所制备的复合多糖能够有效够多聚谷氨酰胺和β -淀粉样蛋白聚集诱导的神经毒性(实施例6和实施例7)，其活性作用方式涉及到抑制毒性蛋白聚集(实施例8)、提高热休克蛋白表达(实施例9)和降低疾病模型体内的活性氧自由基水平(实施例10)。这些结果充分证明由红景天和酸枣仁制备的复合多糖具有良好的防治神经退行性疾病的作用。
[0068]实施例11
[0069]将实施例1制得的复合多糖，根据需要添加适量乳清蛋白、麦芽糊精制备成为具有神经保护功效的粉末状态健康食品或保健食品，还可以添加其它常规辅料制成常规剂型。
[0070]上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围。
【主权项】
1.红景天和酸枣仁复合多糖在制备抗神经退行性疾病保健食品中的应用。
2.根据权利要求1所述的红景天和酸枣仁复合多糖在制备抗神经退行性疾病保健食品中的应用，其特征是:所述红景天和酸枣仁复合多糖中红景天多糖与酸枣仁多糖的质量配比为1:4?4:1。
3.根据权利要求2所述的红景天和酸枣仁复合多糖在制备抗神经退行性疾病保健食品中的应用，其特征是:所述红景天和酸枣仁复合多糖中红景天多糖与酸枣仁多糖的质量配比为2:3?3:2。
4.根据权利要求1-3任一项所述的红景天和酸枣仁复合多糖在制备抗神经退行性疾病保健食品中的应用，其特征是:所述红景天和酸枣仁复合多糖通过以下方法制备获得:以红景天或酸枣仁为原料，经含水提、浓缩和醇沉工序制备获得红景天多糖或酸枣仁多糖，再将二者按计量比混合，制备获得红景天和酸枣仁复合多糖，或所述红景天和酸枣仁复合多糖通过以下方法制备获得:以红景天和酸枣仁为原料，经含水提、浓缩和醇沉工序制备获得红景天和酸枣仁复合多糖；所述的复合多糖具有神经保护作用，可用于制备抗神经退行性疾病保健食品。
5.根据权利要求4所述的红景天和酸枣仁复合多糖在制备抗神经退行性疾病保健食品中的应用，其特征是:以红景天或酸枣仁为原料时，所述红景天多糖和酸枣仁多糖的质量配比为1:4?4:1，以红景天和酸率仁为原料时，所述红景天和酸率仁的质量配比为1:4?4:1。
6.根据权利要求5所述的红景天和酸枣仁复合多糖在制备抗神经退行性疾病保健食品中的应用，其特征是:以红景天或酸枣仁为原料时，所述红景天多糖和酸枣仁多糖的质量配比为2:3?3:2，以红景天和酸率仁为原料时，所述红景天和酸率仁的质量配比为2:3?3:2。
7.根据权利要求4所述的红景天和酸枣仁复合多糖在制备抗神经退行性疾病保健食品中的应用，其特征是:水提时，红景天和/或酸枣仁药材与水的质量体积比为1:2?1:20，提取温度为50?100°C，提取时间为I?1h ;浓缩时，浓缩温度为40?100°C;醇沉时，乙醇和浓缩液的体积比为2:1?9:1。
8.根据权利要求1所述的红景天和酸枣仁复合多糖在制备抗神经退行性疾病保健食品中的应用，其特征是:所述的神经退行性疾病是指包括阿尔茨海默症和亨廷顿舞蹈病等以毒性蛋白质异常聚集为主要病理特征的神经系统疾病。
9.根据权利要求1所述的红景天和酸枣仁复合多糖在制备抗神经退行性疾病保健食品中的应用，其特征是:所述保健食品的剂型为胶囊、粉剂、颗粒剂、片剂或口服液。
【专利摘要】本发明公开了一种红景天和酸枣仁复合多糖在制备抗神经退行性疾病保健食品中的应用，所述复合多糖为红景天多糖和酸枣仁多糖的组合，该复合多糖以红景天和/或酸枣仁为原料，经水提、浓缩和醇沉工艺获得，制备方法简单稳定高效，适合工业化生产。本发明中的复合多糖经秀丽线虫模型实验证实，其能够有效抑制β-淀粉样蛋白和多聚谷氨酰胺的神经毒性，作用方式与抑制毒性蛋白质聚集、提高热休克蛋白表达和降低疾病模型的活性氧自由基水平有关，表明其具有良好的神经保护作用。
【IPC分类】A23L1-09
【公开号】CN104522459
【申请号】CN201410681857
【发明人】胡明华, 马方励, 梁明
【申请人】无限极（中国）有限公司
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2014年11月24日