赤酵母 菌培养液变浓稠，其中菌体含量高，约总体积的50-90%。所述毕赤酵母菌优选保藏编号为 CGMCC2. 1838的。PDA固体培养基的配置方法为将200g马铃薯在水中煮沸30min后过滤 取上清，向上清液中加入20g葡萄糖或蔗糖，再加入1. 5% (重量百分比）的琼脂，最后加水 定容至1000mL。PDA液体培养基的配置方法为将200g马铃薯在水中煮沸30min后过滤取 上清，向上清液中加入20g葡萄糖或蔗糖，最后加水定容至1000mL。
[0019] ②将步骤①所得的毕赤酵母菌培养液1000mL放入离心机，以转速12000rpm离心 l〇min，弃去上清后，向沉淀中加入1LpH为6. 8~7. 0、0. 2mol/L的磷酸盐缓冲液分散均匀得 分散液，对分散液进行细胞破碎，以考马斯亮蓝G-250染色结合分光光度计分析测定破碎 后溶液中的蛋白含量，并调整含量为〇. 5-3g/100mL，得NAC蛋白溶液；对分散液进行细胞 破碎的过程，本实施例采用超声波细胞破碎，每500ml毕赤酵母菌分散液破碎过程总耗时 间约30min，每两次超声间隔时间10s，每次超声持续时间10s;破碎菌体细胞壁使其释放胞 内蛋白，得到NAC蛋白溶液； ③按照实施例1所示配伍向NAC蛋白溶液中加入硅藻土、活性氧化铝和有机硅表面活 性剂，得含NAC蛋白的果蔬保鲜剂。
[0020] 为便于包装、运输及保存，本实施例将步骤③所得含NAC蛋白的果蔬保鲜剂在 180°C条件下进行喷雾干燥，得到含NAC蛋白的果蔬保鲜剂粉体。
[0021] 应用实施例1 进一步的，以上述实施例1配方所得的含NAC蛋白的果蔬保鲜剂粉体用于对果蔬保鲜 性能的研究，本实施例设置4个处理组，包括清水处理的对照组（标记CK)、实施例1所示保 鲜剂处理组（标记实施例1)、分别与实施例1的保鲜剂中NAC蛋白含量和活性氧化铝含量 相等的NAC蛋白组和活性氧化铝组，各组分别以1000倍质量的水稀释备用，随机采摘一串 新鲜红提分别浸入上述四种稀释液l-2min，然后观察其保鲜效果，处理10天后拍摄照片， 见图1，可见使用实施例1配伍的保鲜剂稀释剂处理的组较其它三组，无腐烂、干瘪、变黑等 迹象，新鲜度高，显著降低了病果率，同时观察可见，尤其是该组红提，果实表面光滑、果实 均匀，商品价值显著提高，说明本发明的果蔬保鲜剂中NAC蛋白和活性氧化铝两者相辅相 成，其保鲜效果比分别单独使用某一种成分的效果更好。
[0022] 应用实施例2 参照实施例1的方法考察本发明的含NAC蛋白的果蔬保鲜剂对草莓的保鲜性能，各随 机采摘40枚新鲜完好的草莓浸入四种稀释液l-2min，然后观察记录其保鲜效果，以本发明 的含NAC蛋白的果蔬保鲜剂稀释剂处理的组及清水处理组处理后7天拍摄照片分别见图 2A，2B，统计结果见下表2。
[0023] 表2草莓2015年4月5日处理后统计结果(室温下20度）
[0024] 上述结果可见，使用实施例1配伍的保鲜剂稀释剂处理的组，可延长草莓储存期 5-7天，降低了病果率，同时观察可见，该组草莓果实面光滑、果实均匀，商品价值显著提高， 本发明的果蔬保鲜剂的保鲜效果比分别单独使用某一种成分的效果更好。
[0025] 应用实施例3 参照应用实施例1所示方法，考察本发明的含NAC蛋白的果蔬保鲜剂对柑橘的保鲜性 能，不同的是，本实施例中各组粉体以800倍质量的水稀释得保鲜剂稀释剂，以本发明的含 NAC蛋白的果蔬保鲜剂稀释剂处理的组及清水处理组处理后14天拍摄照片分别见图3A、 3B，统计结果对比发现本发明的保鲜剂可降低柑橘烂果率达20-30%，具有延长货架期和保 鲜的功能。
[0026] 应用实施例4 参考应用实施例1的方法在葡萄、桃子果品上试验本发明的果蔬保鲜剂的保鲜效果， 结果分别见图4A、4B、5A、5B及下表3、表4,结果表明本发明的保鲜剂可降低葡萄的烂果率 达到20-30%，降低桃子的烂果率达到30-60%，具有延长货架期和保鲜的功能。
[0027] 表3葡萄2015年4月5日处理处理后统计结果(室温下20度）
表4桃子2015年6月25日处理处理后统计结果(室温25度）
[0028] 应用实施例5 试验本发明的果蔬保鲜剂对香蕉、芒果和苹果的保鲜效果，将实施例1所得含NAC蛋白 的果蔬保鲜剂粉体以1000倍质量的水稀释得保鲜剂稀释剂，以保鲜剂稀释剂喷雾处理采 摘下来的香蕉，隔10天再喷雾处理一次，共喷施2次，第二次喷施10天后调查发病情况，该 组实验中还设置有咪酰胺处理的阳性对照组（同样为以1000倍质量的水稀释)，发现喷施含 NAC蛋白的果蔬保鲜剂处理可显著抑制炭疽病菌斑的扩展，对香蕉的保鲜效果与咪酰胺处 理相当。
[0029] 在芒果采收前喷施保鲜剂稀释剂2次或者采摘后果实在保鲜剂稀释剂中浸泡 2-3min，晾干后保存，该组实验中还设置咪酰胺处理的阳性对照组（同样为以1000倍质量 的水稀释)，结果显示，其果实水分流失慢、发病率低，采后储存期可延长15天左右，效果与 咪酰胺处理相当。
[0030] 苹果的处理同应用实施例1中的方法，其统计结果见下表5， 表5苹果2015年4月5日处理后统计结果(室温下20度）
[0031] 应用实施例6 参考应用实施例1的方法试验本发明的果蔬保鲜剂对西红柿、黄瓜的保鲜效果，不同 的是保鲜剂稀释剂是以800倍质量的水稀释所得，对西红柿处理的结果见图6 (其中，CK为 清水处理组，处理1为实施例1的保鲜剂稀释液的处理组)，其中处理1标签组为以实施例 1稀释液处理的，CK标签组为清水处理组，统计结果见表6,黄瓜的结果见图7A、7B及表7， CK标签组为清水处理组。
[0032] 表6西红柿2015年4月5日处理后统计结果(室温下20度）
表7黄瓜2015年6月25日处理后统计结果(室温下25度）
[0033] 综上，本发明的含NAC蛋白的果蔬保鲜剂粉体以800-1000倍质量的水稀释后得到 的保鲜剂稀释剂，在室温或4度条件下，直接喷雾处理或浸粘处理l-2min的蔬菜和水果可 引起的局部和系统抗病性，可增强果蔬的防卫抗性，延长保鲜时间达50%及以上。且本发明 的含NAC蛋白的果蔬保鲜剂广泛适用于苹果、梨、桃、柑橘、荔枝、香蕉、芒果、草莓、葡萄、番 茄、辣椒、黄瓜、西瓜、香瓜等多种蔬菜和水果。
[0034] 值得一提的是，本发明提供的保鲜剂的制备方法简单、可靠，易于实现工业化，有 利于降低微生物源防腐保鲜剂的生产成本，实现其规模化应用，其应用的优势巨大，可减少 化学合成的杀菌剂及生长调节剂在生鲜农产品防腐保鲜中的使用，减少农药的残留，从而 满足人们对食品安全的需求；另一方面，生物源防腐保鲜剂可以提高生鲜农产品集中上市 后的保鲜储运能力，有效解决农产品"卖难"和价格季节性波动问题，确保农民增产也增收； 进一步的，生物源防腐保鲜剂的研究与产业化开发，对提高我国农产品国际竞争力具有十 分重要的意义。
【主权项】
1. 一种生物源果蔬保鲜剂，其特征在于，所述保鲜剂由包括以下的原料制备而成：3-8 体积份数的NAC蛋白溶液、0. 5-2质量份数的蛋白质载体、0. 05-2质量份数的活性氧化铝和 0. 01-1质量份数的表面活性剂，所述NAC蛋白溶液中NAC蛋白的含量为0. 5-3g/100mL。2. 根据权利要求1所述的一种生物源果蔬保鲜剂，其特征在于，所述果蔬保鲜剂为粉 剂、液体制剂或膏状制剂。3. 根据权利要求1所述的一种生物源果蔬保鲜剂，其特征在于，所述蛋白质载体为硅 藻土、高岭土、或滑石粉。4. 根据权利要求1所述的一种生物源果蔬保鲜剂，其特征在于，所述表面活性剂为有 机硅类或十二烷基苯磺酸钠。5. 权利要求1所述保鲜剂的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤： ① 菌体培养：挑取毕赤酵母菌菌体至固体PDA培养基上，28°C~37°C恒温培养24h以 上，再挑取固体PDA培养基上的菌体接种到PDA液体培养基中，在180rpm~200rpm、37°C的 条件下振荡培养24h以上，得毕赤酵母菌培养液； ② 将毕赤酵母菌培养液以10000rpm~13000rpm离心lOmin，弃上清，以pH值为6. 8的 磷酸盐缓冲液分散沉淀得分散液，对分散液进行细胞破碎，测定并调整蛋白浓度为〇. 5-3 g/100mL，得NAC蛋白溶液； ③ 按照NAC蛋白溶液体积：蛋白质载体质量：活性氧化铝质量：表面活性剂质量为 3-8: 0. 5-2 :0. 05-2 :0. 01-1，向NAC蛋白溶液中加入蛋白质载体、活性氧化铝和表面活性 剂，混合均匀，得含NAC蛋白的果蔬保鲜剂。6. 根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括步骤④，将步骤 ③所得的含NAC蛋白的果蔬保鲜剂进行喷雾干燥，得含NAC蛋白的果蔬保鲜剂粉剂。7. 根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述喷雾干燥的温度为180°C。8. 根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述毕赤酵母菌的保藏编号为CGMCC 2. 1838。9. 根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述细胞破碎为超声波细胞破碎，超 声间隔时间l〇s，超声持续时间10s，总时间20-40min。10. 权利要求1所述的一种生物源果蔬保鲜剂的应用，其特征在于，应用时加800-1200 倍质量的水得稀释剂，直接喷雾至果蔬，然后晾干；或者将果蔬浸入稀释剂l_2min后取出 晾干。
【专利摘要】本发明提供一种生物源果蔬保鲜剂及其制备方法和应用，属于食品保鲜技术领域，采用的技术方案是保鲜剂由包括以下的原料制备而成：3-8体积份数的NAC蛋白溶液、0.5-2质量份数的蛋白质载体、0.05-2质量份数的活性氧化铝和0.01-1质量份数的表面活性剂，所述NAC蛋白溶液中NAC蛋白的浓度为0.5-3g/100mL。有益效果是：本发明的生物源果蔬保鲜剂没有化学防腐剂保鲜剂所带来的健康危害、环境污染、农药残留及抗药性等问题，且有贮藏条件易控制、对人体无毒无害、符合“高效、安全、经济、便利”的发展趋势；制备方法简单，适用的果蔬品种多，加工制备及应用易于实现工业化，有很大的经济价值和广阔的应用前景。
【IPC分类】A23B7/154, A23B7/157, A23B7/155
【公开号】CN105360284
【申请号】CN201510821011
【发明人】邱德文, 符江华, 彭智超
【申请人】邱德文
【公开日】2016年3月2日
【申请日】2015年11月24日