改善哺乳动物的学习和记忆的方法_4

文档序号:9636524阅读:来源:国知局
肽。
[0079] 实施例2.
[0080] 本实施例说明了用于总唾液酸含量为约360毫克/升的特定的蛋白质源组合。表 3所列成分将用于替换表1所述的配方食品中的蛋白质组分。
[0081] 表3 :蛋白质源组成B
[0082]
[0083] 注經:a.表中的"SA"指唾液酸。
[0084] b. CGMP指酪蛋白糖巨肽。
[0085] 实施例3.
[0086] 本实施例说明了用于总唾液酸含量为约600毫克/升的特定的蛋白质源组合。表 4所列成分将用于替换表1所述的配方食品中的蛋白质组分。
[0087] 表4 :蛋白质源组成B
[0088]
[0089] 注經:a.表中的"SA"指唾液酸。
[0090] b.CGMP指酪蛋白糖巨肽。
[0091] 实施例4.
[0092] 表5说明了具有的总唾液酸含量为约250mg/L的婴儿配方食品的全面营养配方的 例子。
[0093] 表5 :示例性的含唾液酸的婴儿配方食品组成
[0094]
[00c/?jj

[0096]
[0097] 表6和表7表不在表5中所述的配方食品中的特定组分的含量,以1)重量对 重量百分比,2)重量对体积百分比,和3)卡路里百分比表示。该特定配方食品的比重为 1.0310986。
[0098] 表6:婴儿配方食品组成
[0099]
[0100] 表7 :婴儿配方食品热量分布
[0101]
[0102] 实施例5.
[0103] 表8说明实施例4表示的配方食品每100卡路里以及每100毫升配方食品的营养 含量。
[0104] 表8 :婴儿配方食品的营养含量
[0105]
[0106]

[0107] 注解:核苷酸和相应核苷的总数以核苷酸重量表示。
[0108] 参考例2.
[0109] 本参考例说明具有增高浓度的唾液酸的CGMP产品的生产。
[0110] 使用阴离子色谱法分级分离GMP富集的乳酪乳清级分,得到唾液酸增高的级分。 该产品的氨基酸组成类似于目前市售的GMP(购自TatuaCo-OperativeDairyCompany Limited,Tatuanui,Morrinsvilie,NewZealand)的氨基酸组成,但是含有的唾液酸含量是 目前可获得的GMP产品的1. 5-3倍。
[0111] 如果需要,唾液酸增高的级分可以通过例如电渗析进行脱盐处理,然后干燥,得到 干燥粉末产品,然后其可用于引入到液体或干燥的婴儿配方食品混合物。该产品是高唾液 酸CGMP并且从本申请的申请日起可购自TatuaCo-OperativeDairyCompanyLimited,产 品名称为X4738、X4739、X4740和X4741。这些物质的蛋白质含量、唾液酸含量和氨基酸组 成在表9中描述。
[0112] 表9 :四种高唾液酸CGMP产品例子的氨基酸组成和唾液酸含量。
[0113]
[0114]
[0115] 参考例3.
[0116] 本参考例说明具有增高浓度的唾液酸和降低浓度的苏氨酸的CGMP产品的生产。
[0117] 富集GMP的乳酪乳清级分经历部分蛋白水解然后使用阴离子色谱分离法进行分 级分离,得到的级分具有增高的唾液酸含量和降低的苏氨酸含量。该产品含有的唾液酸含 量是目前可获得的GMP产品的1. 5到3倍,但是苏氨酸含量减少到起始GMP物质的约四分 之一。
[0118] 如果需要,唾液酸增高的低苏氨酸级分可以通过例如电渗析进行脱盐处理,并 可进行干燥,得到干燥粉末产品,然后其用于引入到液体或干燥的婴儿配方混合物。该 产品为具有低苏氨酸含量的高唾液酸CGMP并且从本申请的申请日起可以获自Tatua Co-OperativeDairyCompanyLimited,Tatuanui,Morrisnville,NewZealand,产品名称 为W4733。该物质的蛋白质含量、唾液酸含量和氨基酸组成在表10中描述。
[0119] 表10 :具有低苏氨酸含量的高唾液酸CGMP的氨基酸组成和唾液酸含量
[0120] L0121」

[0122] 值得注意的是,该新产品的苏氨酸浓度是市售CGMP的约四分之一。因此,可以相 信,在婴儿配方食品中使用具有低苏氨酸含量的高唾液酸CGMP可以提供这样的配方食品, 该配方食品在约14克蛋白质/升的正常且可取的蛋白质浓度下具有高水平的唾液酸,还可 以提供合乎需要的氨基酸组成和低水平的苏氨酸。
[0123] 实施例6.
[0124] 本实施例说明在婴儿配方食品中使用具有增高浓度的唾液酸的CGMP级分。
[0125] 具有增高浓度的唾液酸的CGMP产品在婴儿配方食品中可与乳清粉末或常规的 CGMP粉末相同的方式用作蛋白质源。例如,表11表示其中蛋白质内容物由常规来源提供的 婴儿配方食品中可预期的唾液酸含量。为了避免出现蛋白质的氨基酸组成的不适当的偏差 (由合乎需要的婴儿用标准氨基酸组成造成),限制了CGMP粉末的使用量。
[0126] 表11 :具有由常规来源提供的蛋白质的婴儿配方食品的唾液酸含量:
[0127]
[0128] 在该配方食品中使用的CGMP粉末可以用上述参考例3所述的新型的具有增高浓 度的唾液酸的CGMP产品替代。表12表明,当这样作时,配方食品的唾液酸含量超过两倍并 且不进一步破坏蛋白质的氨基酸组成。
[0129] 表12 :具有由常规来源加上具有增高浓度的唾液酸的CGMP产品提供的蛋白质的 婴儿配方食品的唾液酸含量:
[0130]
[0131] 如果具有增高浓度的唾液酸的CGMP粉末以上述浓度的两倍使用并以牺牲脱脂奶 粉为代价时,配方食品的唾液酸含量可以增加到如表13所示的浓度。
[0132] 表13 :具有由常规来源加上具有增高浓度的唾液酸的CGMP产品提供的蛋白质的 婴儿配方食品的唾液酸含量:
[0133]
[0134] 实施例7.
[0135] 本实施例说明了含有酪蛋白糖巨肽的食物对小猪的学习行为和记忆行为的效力。
[0136] 方法
[0137] 动逾
[0138] 在为期20个月内,从商业猪场购买3日龄、重达1. 5到2. 4kg、来自14个不同窝 的雄性驯养小猪(Susscrofa)。他们根据重量分组并随机经历4种试验中的一种。在控 温室内,根据试验,将小猪成对圈养在具有混凝土地面的金属围栏内。圈养围栏内有"休息 处"(用毛巾覆盖的橡胶轮胎)、加热灯和相同的塑料玩具。鼓励小猪使用围栏的远端作为 厕所并且每天清洁围栏。灯保持12小时照明(8am到8pm)/黑暗(8pm到8am)的循环。 [0139]CGMP增补
[0140] 含有60mg/g唾液酸的酪蛋白糖巨肽(CGMP)由TatuaDairy Cooperative(Morrinsville,NewZealand)供应并以指定浓度被混入小猪的乳代用品 WombarooFoodProducts(GlenOsmond,Australia)中。最终乳中唾液酸的量根据组别有 所不同:77毫克/升(第一组,未添加CGMP的对照组),250毫克/升(第二组,低剂量), 600毫克/升(第三组,中等剂量)和842毫克/升(第四组,最高剂量)。这些水平分别 代表摄取量为25、71、171和240毫克/千克体重/天。代用品配制为使得无论CGMP的添 加量如何,总蛋白质摄取仍保持相同。为了保持正常的生长速率,小猪在研究的前两周内接 受285毫升乳/千克,在其余周内接受230毫升乳/千克。喂食时间为8 :00、13 :00、18 :00 和22 :30,夜间额外供应50毫升乳,每天记录乳摄取和给用情况。
[0141] 学习能力和iP,忆表现的评价
[0142] 使用8臂放射状迷宫(图1和图2)在23天龄时开始正式的学习测试。迷宫是与 圈养围栏相邻、学习面积为4. 2mX4. 4m、为特制的木结构。在高处安装摄影机记录学习和记 忆测试。为了减少压力,允许小猪成对在正式测试开始前的一天探查该迷宫。进行了两种 学习测试:任务1和任务2。两种测试都在1个臂内具有可接触的(accessible)乳,在其 余的7个臂内具有不能接触的(inaccessible)乳,因此迷宫的所有8个臂都给出相同的嗅 觉信号。在两种测试中,在臂内具有可接触乳的门上随机布置由三个黑点组成的目视标志 (图3)。在任务1(容易的任务)中,在其余的7个门上布置1个黑点。在任务2(较难的 任务)中,在其余的7个门上布置2个黑点。
[0143] 所有的小猪在迷宫逐一地经历测试。在5天内进行了任务1的40次试验(每天 8次试验),在6天内进行了任务2的40次试验。学习速度的评价通过成功地学习目视标 志的试验次数和在每次试验中在找到可接触乳臂的过程中错误(错误的门)和成功(正确 的门)的次数来确定。每一次小猪进入错误的门或将其整个头通过错误的门被记录为"错 误"。只有当小猪进入正确的门并找到可接触的乳时才记录为"成功"。学会目视标志的标 准是在3次连续试验中最大错误数是1。在完成任务1试验和任务2试验后两天,相同的任 务作为"记忆测试"仅进行一次试验。所有的测试由二名知晓唾液酸摄取量的经过训练的 工作人员进行,但是结果在以后通过独立的对录像材料的分析得以确证。
[0144] 压力评价
[0145] 因为压力可影响学习和记忆,使用市售的试剂盒(Coat-A-CountCortisol,诊断 产品,Doncaster,Australia)从第7天开始每隔一周测量早晨的血液氢化可的松浓度。试 验之间(Inter-assay)和试验之内(intra-assay)的变量分别为9%和12%。
[0146] 神经节苷脂结合唾液酸和蛋白质结合唾液酸的分析
[0147] 在第34或35天,小猪用硫喷妥钠注射(50毫克/千克)实施安乐死。从大脑额 皮层收集脑组织并在_80°C下储存直到分析之前。神经节苷脂结合唾液酸和蛋白质结合唾 液酸的确定分别使用公开的方法进行(参见Mahal,同处.)。所有的样品一式两份进行分 析并且在每份中的唾液酸的最终浓度用μg/g湿组织表示。
[0148] 统计学分析
[0149] 使用采用Cox回归的Kaplan-Meier存活分析法比较学习速度(学习目视标志 的试验次数)的差异,以检查可能影响学习速度的可能的协变量。使用一般线性模型
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