天进行检测）；
[0033] 即使生产的外界环境的温度发生改变，黑茶的发花数量改变波动小：固定原料，选 取环境温度25°C、3(TC、34°C进行茶砖发花实验，分别应用传统自然发花工艺和本发明工 艺，发花数量统计：传统工艺发花范围30*10 4-85*104菌数/g干茶，本发明工艺发花范围 82*104-101*10 4菌数/g干茶，本发明工艺制备的黑茶产品发花数量显著提高且稳定（均在 发花第12天进行检测）；
[0034] 即使操作环境改变，发花数量改变波动小：当在北京及广东实验室进行模拟压砖 实验，传统发花工艺由于几乎无外源环境微生物带入，发花失败，发花数量低于IO4菌数/g 干茶，本发明工艺发花范围61*104-66*104菌数/g干茶，本发明工艺制备的黑茶产品发花数 量显著稳定（均在发花第12天进行检测）；
[0035] 似具有稳定的发花参数的优势
[0036] 发花周期短，可W显著提高生产效率，节约了成本；经实验，共进行10个批次500 块巧砖茶实验，传统工艺发花周期12-13天，本发明工艺发花周期9-10天（周期指从烘房 开始控温发花到结束发花开始升温干燥的总时间，标准为达到金花满布，可W用于后续销 售）；
[0037] 黑茶发花数量显著增加；经实验，共进行10个批次500块巧砖茶实验，传统工艺 发花范围30*10 4-115*104菌数/g干茶，平均值52*104菌数/g干茶；本发明工艺发花范围 83*10 4-116*104菌数/g干茶，平均值94*104菌数/g干茶，本发明工艺制备的黑茶产品发花 稳定性及数量显著高于现有技术中的黑茶发花数量（均在发花第12天进行检测）；
[003引 （3)在产品品质方面得到保证的优势
[003引 n味；经实验，共进行10个批次500块巧砖茶实验，经品鉴传统工艺和本发明工艺 分别有80%和98%产品可达到湖南地方标准《安化黑茶巧砖茶》中超级巧砖茶审评标准， 汤色红黄、菌花香纯正、滋味醇厚；安全指标：经实验，共进行10个批次500块巧砖茶实验， 根据湖南地方标准《安化黑茶巧砖茶》水分、总灰分、茶梗含量、非茶类夹杂物、水浸出物、安 全卫生指标等全部指标检测，传统工艺和本发明工艺的达标率均超过99 % ;
[0040] 杂菌污染；经实验，共进行10个批次500块巧砖茶实验，按照新工艺流程检测标准 进行微生物检测，传统工艺和本发明工艺出现霉变概率分别为6%。和0,本发明工艺制备的 黑茶产品的霉变率概率显著降低。
[0041] (4)通过本发明工艺制备的种子质量高，有助于黑茶的生产
[004引上述（1)、似、做S点产品特性得益于接种过程的成功控制，即利用菌种制备得 到的生产种子质量高，且接种环节合理可行。
[0043] 本发明的工艺为纯种发酵，所用的种子为最适合安化黑茶巧砖茶生产的中茶冠突 散囊菌菌种，从优质中茶百年木仓仓库中分离选育得到，具有生长快、耐高温，抑制杂菌能 力强的特征，其他接种技术菌种多为直接从茶叶中分离，未经选育纯化，没有选育的过程；
[0044] 所使用的种子密度高，液体种和固体种种子密度验收合格标准分别达到3*107个 /ml培养基和1〇7个/g培养基，且进行杂菌微生物检测，确保种子密度和纯度，形成生产基 础；
[0045] 经过生产环节遽选，所选取的接种环节简单可行，且种子耐热性能够达到接种要 求。所使用的种子耐热性高，由于巧砖茶生产过程中经历了两次高温汽蒸，如果种子耐热性 差则无法生产，之前未见现有技术中对外源菌种的耐热性进行明确鉴定，经检测本发明工 艺制备的液体种和固体种子耐热性分别达到10%和30% W上，并根据推算计算了接种密 度，所有接种量均达到最终产品标准1%。^上，符合微生物学基本接种规律。新工艺既可W 提高黑茶产品品质，同时可W用于在非传统黑茶生产地区进行巧砖茶发花，及其他含冠突 散囊菌产品的生产。即实现选育好菌种，制备好种子，选择好环节，生产好黑茶。
[0046] 综上，通过本发明的工艺制备的黑茶不仅产品品质稳定、优良，且本发明提供了一 种标准化的黑茶发花工艺，通过在每一个环节都设置关键节点把控，实现了用数字化指标 进行检测，在菌种选育标准、种子制备标准和工艺合格标准等都能够具备量化指标，进一步 实现黑茶发花工艺的可控，并且本发明工艺制备的黑茶产品的效果评价方面比较完全，从 发花稳定性、发花周期、发花数量、成品率和产品品质五个方面同时对本发明工艺的效果进 行了评价，并且得到了阳性结果。相比现有的技术中从发花周期、发花数量和汤色等方某一 面对黑茶生产工艺进行评价，不能对大批量黑茶的发花稳定性进行检测来看，本发明的黑 茶生产工艺可实现在生产环节控制，实现黑茶发花数量的可控性，进一步的提高了黑茶产 品品质的稳定性。
【具体实施方式】
[0047] 本发明下述实施例中所述的PDA固体平板培养基、PDA试管斜面培养基W及PDA茄 形瓶的培养基均按照现有技术中常规方法制备，W本发明下述各实施例而言，所述PDA固 体平板培养基、PDA试管斜面培养基W及PDA茄形瓶的培养基组成分别为：
[0048] PDA固体平板培养基、试管斜面培养基；马铃墓300克、葡萄糖20克、琼脂15~20 克、自来水1000毫升，自然抑；
[004引 PDA茄形瓶的培养基冯铃墓300克、葡萄糖20克、自来水1000毫升，自然抑。
[0050] 下述实施例中所述的试剂与仪器的型号分别为：
[0051] KOD ：K0D-101 Toyobo ；
[005引 PCR产物回收试剂盒；D6492 Omega ;
[0053] 离必机；3K15, Si卵a ;
[0054] 电泳槽；JY-SPFT ;
[00巧]电泳仪；JY300C,生产厂家为北京君意东方电泳设备有限公司；
[0056] 凝胶成像系统；JY04S-3C，生产厂家为北京君意东方电泳设备有限公司；
[0057] PCR仪；Life Express,生产厂家为博日科技有限公司。
[0058] 实施例1菌株的分离纯化
[0059] 所述黑茶的优势"金花"菌的分离纯化步骤具体如下：
[0060] (1)选取茶样
[006。 选取湖南安化茶厂。口 水么货:'沐质仓库中茶叶中不同年份的巧砖茶产品W及 湖南益阳市生产、市售主流巧砖茶产品，作为原始菌株分离的材料。上述所选取产品的茶 样满足GH/T 1070对茶叶包装的规定，满足GH/T1071对茶叶胆存的规定，满足GB 2762- 2012对食品中污染物的限量，满足GB2763/GB26130中对农药最大残留的限量，满足GB/T 9833. 2- 2013对《紧压茶》部分的相关标准规定；同时，选取的茶样满足；包装无破损、无污 溃；茶叶外形平整、茶砖内部发花均匀；选取的同批次产品，"金花"生长茂盛、内部生长均 匀；
[0062] (2)对所选取的茶样进行编号
[006引对湖南安化茶厂呵下年水仓饭"木质仓库不同年份的产品分别编号为I、II、111、 IV、V，上述编号依次对应1985年、1997年、2002年、2010年、2013年生产的茶样产品；对选 取的市售主流巧砖茶产品编号为A、B、C、D、E ;
[0064] (3)预处理茶样
[0065] 茶样收集后，在无菌条件下，选取"金花"生长茂盛、内部生长均匀的茶样I，取所 述中必带菌的茶样25g，粉碎，过80-100目筛，然后将过筛的茶粉全部转移至225血的无菌 水中，充分震荡混合；
[0066] (4)涂布培养含菌茶样液体
[0067] 取无菌水将上述步骤获得的混合液进行梯度稀释，取ImL稀释梯度为IO6的含菌 液体涂布于PDA固体平板培养基中进行培养；
[0068] (5)培养并记录菌落生长情况
[0069] 将涂布后的PDA固体平板培养基置于恒温培养箱中进行培养，培养温度为 28-30°C，培养7天，在培养过程中，按照冠突散囊菌化rotium cristatum的形态学、生理生 化特征对所述菌落的形态特征进行菌落的识别并编号，每12 h量取菌落的直径并记录；
[0070] (6)挑取纯化单菌落
[0071] 取上述步骤中生长最快的5株菌的单菌落，挑取菌落并划线接种至所述PDA培养 基上，于28-3(TC条件下培养7天，每个菌落挑取H个样品进行纯化，传代培养的次数为两 次，最终选取纯化培养过程中菌落直径增长最快的5株菌株进行保存；
[007引（7)保存原始菌株
[0073] 按照常规方法制备PDA试管斜面，挑取上述选用的5株菌分别划线接种至所述PDA 试管斜面上，于28-3(TC条件下，培养7天后，将试管封存后冷冻备份。
[0074] 同样的，所述茶样II、III、IV、V、A、B、C、D、E的菌种分离纯化参照上述实验操作， 得到多株备选育样品。
[00巧]结果显示，选育的菌株其菌落平均直径生长的速度超过5mm/d。
[007引其中，不规则菌落直径的折算参考文献Serra J. Image analysis and mathematical mo;rphology[M]. Academic Press, Inc. ,1983.有关图像处理W及直径折算 内容所述方法。
[0077] 实施例2菌株的选育
[00