本发明属于生物技术领域，具体涉及一种利用毕赤氏酵母发酵烟草的方法。
背景技术
烟叶收采后，需根据其特性及处理传统，进行不同方式的炮制，初步糖化、熟成，进一步处理。烟叶通过发酵处理使烟草的化学成份产生变化，风味变得更柔和，并降低其尼古丁的含量。烟草的新型加工工艺在已经从种植工艺改良转向到烟草风味的研究.添加米曲霉发酵制备口用型烟草制品烟丝；添加淀粉糖浆和促发酵肽等可以改良烟丝的品质；利用烟草表面的微生物进行自然发酵来提高烟草的风味，同时高效降解烟叶中淀粉和蛋白质均利用筛选自烟叶上的菌株通过扩大培养再接种到烟叶上进行发酵来提高烟丝质量；雪茄衣人工发酵是通过添加菊花，绿茶，米酒提高风味及品质。
近年来，市面上用明胶小球包裹白酒，或者在烟丝上喷洒白酒制成具有不同白酒风格特征的卷烟深受欢迎，但这种方法会使烟丝的酒香味不均匀，也会受酒品质的影响。
技术实现要素：
本发明的目的在于克服上述缺点而提供的一种烟草带玫瑰花香、粉香、蜂蜜样香气的利用毕赤氏酵母发酵烟草的方法。
本发明的一种利用毕赤氏酵母发酵烟草的方法，包括以下步骤：
(1)斜面培养：将毕赤氏酵母fbkl2.0008(pichiakudriavzeviifbkl2.0008)菌种接种于斜面培养基上，在28℃下培养24h-48h，待菌长满试管；
(2)菌种活化：将斜面培养的菌种在麦芽汁琼脂培养基上划线活化，在28℃下培养24h-48h；
(3)种子液制备：配制液体培养基(麦芽膏粉130g/l,氯霉0.1g/l,ph5.8-6.2)，三角瓶盛装，121℃灭菌20min，然后在超净工作台接入活化的菌种到液体培养基中，在28℃摇床上培养24h-48h；
(4)烟草发酵：向烟草中按0.4ml/g加入菌液，每隔3d补加无菌水0.2ml/g烟草，置于28℃-30℃环境培养15d-20d，低温40℃-60℃干燥15min-30min即得。
上述的一种利用毕赤氏酵母发酵烟草的方法，其中：步骤(4)的烟草发酵在烟草进行发酵前切丝，或在烟草切丝后再发酵。
上述的一种利用毕赤氏酵母发酵烟草的方法，其中：斜面培养基为麦芽汁琼脂培养基，成份为麦芽膏粉130g/l，氯霉素0.1g/l，琼脂15g/l，ph5.8-6.2。
上述的一种利用毕赤氏酵母发酵烟草的方法，其中：毕赤氏酵母fbkl2.0008(pichiakudriavzeviifbkl2.0008)已于2015年6月17日保藏到中国典型培养物保藏中心(地址：中国武汉武汉大学)，保藏号：cctccno：m2015380。
本发明与现有技术相比，具有明显的有益效果，从以上技术方案可知：本发明利用白酒发酵中毕赤式酵母拥有较强的产乙酸苯乙酯能力，乙酸苯乙酯带玫瑰花香、粉香、蜂蜜样香气，类似苹果样的果香，并带有可可和威士忌样的香韵，高度稀释、淡弱的乙酸苯乙酯香气有“安神”、“镇定”、催眠的作用，这些特征可以有明显的增香，改善吃味和掩盖杂气的作用，给人带来愉悦的感觉。另外酵母通过发酵还可以代谢出乙酸乙酯，α-姜烯异戊醇达，乙醇,α-花柏烯，棕榈酸乙酯等香味活性成分。本发明将从白酒酿造过程中分离到的毕赤氏酵母fbkl2.0008菌株为发酵菌株，以烟草为发酵培养基，采用固态发酵，所制成的发酵烟草经过gc-ms对成分分析具有安全性，且该菌株在发酵过程中高产芳香醇，香味突出，无明显刺激感，结合中国白酒中微生物利用与烟草加工的方法，制备具有带玫瑰花香、粉香、蜂蜜样香气的烟草。该方法操作简单，工艺清晰，且不易污染，对生产环境要求不高，得到的产品在香烟的燃烧过程中释放令人愉悦的气味，且产物来自天然发酵，具有无污染，无毒等特点。生产出的烟草除能加工成卷烟外，还可作为口用型烟草制品，鼻烟等。
具体实施方式
实施例1：
一种利用毕赤氏酵母发酵烟草的方法，包括以下步骤：
(1)斜面培养：将毕赤氏酵母fbkl2.0008(pichiakudriavzevii)菌种接种于斜面培养基上，在28℃下培养24h，待菌长满试管；
(2)菌种活化：将斜面培养的菌种在麦芽汁琼脂培养基上划线活化，在28℃下培养48h；
(3)种子液制备：配制液体培养基(麦芽膏粉130g/l,氯霉素0.1g/l,ph5.8-6.2)，三角瓶盛装，121℃灭菌20min，然后在超净工作台接入活化的菌种到液体培养基中，在28℃摇床上培养24h；
(4)称取烟丝50g于三角瓶中，并向其中加入菌液20ml，每隔3d补加无菌水10ml，置于30℃环境培养15d。低温60℃干燥15min。将发酵得到的烟丝制卷，包装得到产品。
实施例2
一种利用毕赤氏酵母发酵烟草的方法，包括以下步骤：
(1)斜面培养：将毕赤氏酵母fbkl2.0008(pichiakudriavzevii)菌种接种于斜面培养基上，在28℃下培养48h，待菌丝长满试管；
(2)菌种活化：将斜面培养的菌种在麦芽汁琼脂培养基上划线活化，在28℃下培养24h；
(3)种子液制备：配制液体培养基(麦芽膏粉130g/l,氯霉素0.1g/l,ph5.8-6.2)，三角瓶盛装，121℃灭菌20min，然后在超净工作台接入活化的菌种到液体培养基中，在28℃摇床上培养48h；
(4)称取烟丝500g于三角瓶中，并向其中加入菌液200ml，每隔2d补加无菌水100ml，置于26℃环境培养20d。40℃低温干燥30min。
(5)将发酵得到的烟草制卷，包装得到产品。
实施例3
一种利用毕赤氏酵母发酵烟草的方法，包括以下步骤：
(1)斜面培养：将毕赤氏酵母fbkl2.0008(pichiakudriavzevii)菌种接种于斜面培养基上，在28℃下培养48h，待菌丝长满试管；
(2)菌种活化：将斜面培养的菌种在麦芽汁琼脂培养基上划线活化，在28℃下培养24h；
(3)种子液制备：配制液体培养基(麦芽膏粉130g/l,氯霉素0.1g/l,ph5.8-6.2)，三角瓶盛装，121℃灭菌20min，然后在超净工作台接入活化的菌种到液体培养基中，在28℃摇床上培养48h；
(4)称取杀青后烟叶50kg，加种子液40ml/g均匀喷洒在叶片上，用塑料带密封，每隔3d补无菌水使烟叶保持湿润状态，置于30℃环境培养10d，即得发酵烟草。
(5)低温60℃干燥15min。进行后续切丝等进一步加工处理。
所得产品的尼古丁含量及发酵前后挥发成分：
单料烟感官质量各单项指标计分及定量描述参考表
灰色：7.0-9.0为白色，6.0-6.9为白灰，4.0-5.9为灰白，3.0-3.9为灰黑，0-2.9为黑。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，任何未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。