本发明涉及烟叶标准品制备的
技术领域：
，具体涉及一种高含量的tsnas烟叶原料及标准品的制备方法。
背景技术：
烟草特有n-亚硝胺(tsnas，tobaccospecificn-nitrosamines)是烟草特有的n-亚硝基类化合物，其主要的有4种：4-(n-甲基-亚硝胺)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(nnk，4-(n-methyl-n-nitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone)、n-亚硝基去甲基烟碱(nnn，n’-nitrosonornicotine)、n-亚硝基新烟碱(nat，n’-nitrosoanatabine)、n-亚硝基假木贼烟碱(nab，n’-nitrosoanabasine)。tsnas被国际癌症研究署列为致癌物，对人体健康危害性极大，欧盟等部分国家将口含烟中tsnas含量作为市场准入的重要考核指标。因此，烟草中tsnas是烟草公司需要监控和批露的重要成分，也是烟草制品开发、测试和安全性评价的重要依据。烟草参比样品是产品开发、测试和安全性评价的重要参照物，由于tsnas的重要性，高含量tsnas的参比样品对烟草企业具有重要意义。烟叶原料中tsnas含量高低决定了烟草制品中tsnas含量，烟叶原料中tsnas含量范围为10-1～102ug/g，且4种tsnas含量差异较大,特别是nnn含量极高，nnn是nnk和nab含量的10-1000倍。另外，烟叶原料放置过程中，tsnas容易随时间的增加而升高。正是由于这种烟叶原料中tsnas的差异性和累积性，导致现有的天然烟叶原料在制作参比样品时，难以满足高含量tsnas的需求。再者，虽然可以通过在烟叶原料中施加tsnas标准品，进而提高样品中tsnas含量，但施加tsnas标准品成本高，对操作人员和环境的危害极大，且容易施加不均匀等，导致了该方法不具有可操作性。技术实现要素：本发明的目的首先是提供一种高tsnas含量烟叶原料的制作方法，其主要方案为，将烟叶原料置于充满no气体的环境中进行处理。本发明意外的发现，将烟叶原料置于充满no气体的环境中，可有效地提高烟叶原料中4种有害化合物4-(n-甲基-亚硝胺)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(nnk，4-(n-methyl-n-nitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone)、n-亚硝基去甲基烟碱(nnn，n’-nitrosonornicotine)、n-亚硝基新烟碱(nat，n’-nitrosoanatabine)和n-亚硝基假木贼烟碱(nab，n’-nitrosoanabasine)的含量，而且这种方法操作简便，安全性高，便于进行大规模地推广应用。优选的，所述环境中no气体的浓度为200～2000ppm。更优选的，所述环境中no气体的浓度为1800～2000ppm。no浓度越高，烟叶原料生成tsnas越快，效果越好，且出于安全因素考虑，控制no的浓度不超过2000ppm。优选的，所述环境中的no气体处于稳定流动的状态，其流速为90～110ml/min。no流速过大，不会增加物料吸收的速率，烟叶原料中tsnas的增加量也不够明显，还会造成气体的浪费。而流速过慢，不利于烟叶生成tsnas。优选的，处理的时间为1～5d。处理时间过短，烟叶原料中tsnas生成不够充分；处理时间过长，烟叶原料中tsnas的生成量不再增加。本发明在处理的过程中，烟叶原料的处理容器的前端接no气体，后端接废气吸收液。优选的，所述废气吸收液为5％的酸性高锰酸钾溶液优选的，处理过程中，所述no气体的温度为室温。作为优选的方案，本发明的方法包括如下步骤:将烟叶原料置于处理容器中，控制处理容器中no气体的浓度1800～2000ppm，no气体的流速为90～110ml/min，对所述烟叶原料处理1～5d。作为具体优选的操作方式，本发明的方法包括如下步骤：1)将所述烟叶原料置于处理容器中，所述处理容器的气体入口端连接no标准气体，所述处理容器的废气出口端连接废气吸收液；2)将浓度2000ppm的no气体所述气体入口通入所述处理容器，控制气体流速为100ml/min，对所述烟叶原料处理1～5d，即得所述高tsnas含量的烟叶原料。优选的，所述烟叶原料为片烟或烟丝。本发明所述的烟叶原料为本领域常用的烟叶原料，其中tsnas的含量较低。本发明还包括在高tsnas含量烟叶原料中添加其他烟草原料，以制备不同tsnas含量的参比样品的操作。本发明的另一目的是保护本发明的方法制备得到的高tsnas含量的烟叶原料。本发明的最后一个目的是保护本发明制备得到的高tsnas含量的烟叶原料制备得到的参比样品。本发明制备得到的高tsnas含量的烟叶原料和这种烟叶原料制备得到的参比样品在-20℃的条件下进行保存。本发明中所述ppm等同于mg/l。本发明具有如下有益效果：本发明的方法操作简便、安全性高，可快速高效地提高烟草原料中tsnas的含量，而且制备得到的烟叶原料中tsnas分布均匀。具体实施方式以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例中所涉及的处理容器的气体入口端连接no标准气体，所述处理容器的废气出口端连接废气吸收液，废气吸收液为酸性高锰酸钾溶液；如下实施例中采用试剂：no标准气体(压力10mpa，浓度2000ppm，购自南京江成气体有限公司)酸性高锰酸钾溶液(质量浓度5％，购自北京百灵威科技有限公司)4种tsnas标准品及其内标(纯度≥98％，购自torontoresearchchemicalsinc.)采用的仪器：高效液相-三重四极杆串联质谱联用仪(高效液相仪：symbiosis(pico)、购自sparkholland公司；三重四极杆质谱仪：api5500、购自美国应用生物系统公司。实施例1本实施例涉及本发明所述高tsnas含量烟叶原料的制作方法，包括如下步骤：取50kg打叶复烤后的白肋片烟，将其置于体积为1m3的处理容器中，通入no标准气体(压力10mpa，浓度2000ppm)，流速为100ml/min，处理1d，其结果见表1。实施例2本实施例涉及本发明所述高tsnas含量烟叶原料的制作方法，包括如下步骤：取50kg打叶复烤后的白肋片烟，将其置于体积为1m3的处理容器中，通入no标准气体(压力10mpa，浓度2000ppm)，流速为100ml/min，处理3d，其结果见表2。实施例3本实施例涉及本发明所述高tsnas含量烟叶原料的制作方法，包括如下步骤：取50kg打叶复烤后的白肋片烟，将其置于体积为1m3的处理容器中，通入no标准气体(压力10mpa，浓度2000ppm)，流速为100ml/min，处理5d，其结果见表3。实施例4本实施例涉及本发明所述高tsnas含量烟叶原料的制作方法，包括如下步骤：取50kg打叶复烤后的白肋片烟，将其置于体积为1m3的处理容器中，通入no标准气体(压力10mpa，浓度2000ppm)，流速为100ml/min，处理7d，其结果见表4。实施例5本实施例涉及本发明所述高tsnas含量烟叶原料的制作方法，包括如下步骤：取50kg经由白肋片烟切成的烟丝，将其置于体积为1m3的处理容器中，通入no标准气体(压力10mpa，浓度2000ppm)，流速为100ml/min，处理5d，即得所述高tsnas含量的烟丝原料，其结果见表5。实施例6本实施例涉及一种高tsnas含量的参比样品的制备方法，包括如下步骤：对实施例5白肋烟丝中tsnas含量进行测定，结果见表5，依据测定结果，将上述白肋烟丝与烤烟、梗丝、膨丝进行掺配，按照烟草制品制作程序，制成相应的高含量tsnas参比样品，并检测该参比样品中的最终tsnas含量，结果见表6。对比例1与实施例1相比，其区别在于，no气体的通入速度为200ml/min，处理的时间为1d，其结果见表7。对比例2与实施例1相比，其区别在于，所述no气体的浓度为200ppm，其结果见表8。实验例表1实施例1处理前后白肋片烟烟叶中tsnas含量处理前(μg/g)处理后(μg/g)增加倍数nnk0.1560.1721.1nnn7.804127.20516.3nat0.85250.35359.1nab0.0251.14045.6总tsnas8.838178.87020.2表2实施例2处理前后白肋片烟烟叶中tsnas含量处理前(μg/g)处理后(μg/g)增加倍数nnk0.1560.3902.5nnn7.804330.89042.4nat0.85282.04896.3nab0.0251.64565.8总tsnas8.838414.97247.0表3实施例3处理前后白肋片烟烟叶中tsnas含量表4实施例4处理前后白肋片烟烟叶中tsnas含量处理前(μg/g)处理后(μg/g)增加倍数nnk0.1561.0126.5nnn7.804645.25682.7nat0.852233.991274.6nab0.0253.215128.6总tsnas8.838885.647100.2表5实施例5处理前后白肋烟丝中tsnas含量处理前(μg/g)处理后(μg/g)增加倍数nnk0.1561.0086.4nnn7.804663.10685.0nat0.852246.451289.2nab0.0253.204127.5总tsnas8.838913.769103.4表6实施例6处理过的白肋烟丝与烤烟烟丝、梗丝及膨丝进行掺配后的tsnas含量表6中结果即可作为参比样品的tsnas含量标识。将上述高含量tsnas参比样品放置于-20℃环境中，储存备用。表7对比例1处理前后白肋片烟烟叶中tsnas含量表8对比例2处理前后白肋片烟烟叶中tsnas含量虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。当前第1页12